专利名称：田基黄总黄酮粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及以田基黄总黄酮为主要活性成分的粉针剂型的药物制剂及其制备方法。
背景技术：
病毒性肝炎是目前常见病、多发病之一。田基黄总黄酮对病毒性肝炎具有良好的治疗作用，以田基黄作为配伍成分的中国专利有23件，且均为复方制剂，其中中国专利CN1322558一种抗肝癌药，剂型为口服液，由34味中药组成；中国专利CN1368379一种治疗胆囊结石的排石散，剂型为散剂，由超过34味中药组成；而中国专利CN1136186一种含天然药物成分的抗肿瘤功能及其制作方法，剂型为功能饮品，则是由58味中药构成。含有田基黄的中药注射液的中国专利申请只有CN1180559一件，专利名称为一种治疗肿瘤的中药注射液及其制造方法，且其中君药为鱼腥草。
据对中文科技资料进行检索，田基黄用于肝炎治疗的报道最早见于上海长征制药厂，田基黄治疗肝炎报道。中草药通讯。1972，(5)36；以后逐步改进，20世纪80年代形成了田基黄单味制剂，《中成药研究》1983(4)12报道了“田基黄注射液质量研究”，反映了田基黄制剂进展情况；2001年《江西中医学院学报》13卷第1期报道可“田基黄注射液采用吸附澄清法新工艺的研究”反应出田基黄注射液的质量在长达20年中仍在不断改进之中。
田基黄具有消炎、解毒作用，对各型肝炎均有显著疗效。田基黄注射液是目前临床上应用得较多的药物之一。在实际应用中，田基黄注射液对贮藏条件有特殊要求，氧和光对其质量的稳定均有较大影响。同时田基黄注射液为水针剂，在运输、贮存方面均属易碎品，而且在我国北方及寒冷地区易冻结，给使用带来不便。特别是田基黄注射液随贮存时间延长，患者使用时有刺痛感。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种运输方便、贮存期长、质量稳定的田基黄总黄酮粉针剂。
本发明所述的田基黄总黄酮粉针剂由田基黄总黄酮和注射用水溶性药用辅料组成。田基黄总黄酮的含量为50-99.5％(重量百分比)。药用辅料的含量为0.5-50％，余量为水。
田基黄总黄酮的提取制备参照[WS-10078(ZD-0078)-2002]方法进行。在经过最后一次活性炭吸附脱色后，过滤得滤液，即为田基总黄酮浓缩液。
本发明所述的注射用水溶性药用辅料为抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、葡萄糖、低分子右旋糖酐等有机或生化辅料，亦可为氯化钠、磷酸盐等无机盐类。
本发明所述药用辅料，其特征在于含有抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽等。
本发明所述的田基黄总黄酮粉针剂的制备方法包括以下步骤A取田基黄总黄酮浓缩液，加入适量注射用水溶性药用辅料，充分溶解后，调PH6.5-7.5，过滤得滤液。
B滤液经0.2um微孔滤膜超滤得澄明溶液。
C将澄明溶液经喷雾干燥，密闭24hr冷却后，无菌分装于西林瓶中，每瓶含田基黄总黄酮(以槲皮素计)0.3mg，轧盖，经检验合格，包装即得本发明的田基黄总黄酮粉针剂。
D调整澄明溶液中田基黄总黄酮浓度为0.6mg/ml，无菌灌装于安瓿中，每安瓿装量0.5ml，经冷冻干燥，熔封，即得本发明的田基黄总黄酮冻干粉针剂。
步骤A中，所述的注射用水溶性药用辅料，其特征在于含有抗氧化剂抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽中的一种或二种的混合物；抗氧化剂用量占药用辅料总量的20％。其它药用辅料为低分子右旋糖酐、葡萄糖、乳糖、氯化钠、磷酸盐中的一种或二种以上成分。
步骤A中，所述的适量药用辅料，其特征在于药用辅料的总含量为0.5％-50％，优选含量为5％-10％。
本发明所述粉针剂较好地克服了现在临床中田基黄制剂的质量不稳定的问题，而导致质量不稳定的主要原因在于氧化作用和光分解作用。尽管田基黄制剂避光贮存，克服了光分解作用，但氧化作用仍未克服。我们经过实验发现，添加了抗氧辅料的制剂，能在较长时间保持制剂中有效成分含量稳定；而未添加的制剂，随着贮存时间的延长，有效成分含量有降低的趋势。本发明的田基黄总黄酮粉针剂通过添加有效抑制氧化作用的辅料，较好地克服了制剂中氧化作用发生，从而使制剂中田基黄总黄酮的含量保持稳定，使制剂质量保持稳定。采用粉针剂剂型较好地克服了现有制剂运输、贮存不方便，在寒冷地区使用不方便的弊端。
本发明粉针剂运输方便，贮存期长，较水针剂产品的稳定性好，质量高，可大规模生产，加入注射用水后所得注射液经检验，各项指标均符合要求。本粉针剂以田基黄总黄酮为活性成分，具有清热利湿、散瘀消肿的作用。用于病毒性肝炎的治疗。还可以用于内脏出血的治疗和癌症治疗。
通过比较实验表明，本发明制剂的稳定性优于现有田基黄制剂。
取本发明的田基黄总黄酮粉针剂，与商品田基黄注射液各20支，一起贮存在避光的室温条件下13周、6个月、12个月，测定前粉针剂用2ml注射用水溶解后，通过HPLC测定制剂中田基黄总黄酮的浓度，每个样品测定5支，计算平均值。结果表明粉针剂中有效成分含量较水针剂稳定，见附表。
附表田基黄不同制剂质量变化情况表
田基黄总黄酮粉针剂药效学试验情况一 田基黄制剂对大鼠全身免疫功能影响
1材料和方法1.1动物Wistar雄性大鼠，体重200-250g，由第一军医大学实验动物中心提供。
1.2主要药品和试剂田基黄注射液由江西众鑫药业有限公司生产，每ml含生药1g；每支2ml；田基黄总黄酮粉针剂、冻干粉针剂由广东天之骄药物开发有限公司研制。每支含生药2g，使用时以注射用水2ml溶解；植物凝血素、(PHA)，广州医药工业研究所生产；RPMI1640粉剂，日本日水制药株生产；灭活金黄色葡萄球菌(25亿/ml)由第一军医大学微生物教研室提供。
2试验方法及数据处理实验方法及免疫检测指标等均按文献[1]、[2]进行；各组数据处理采用两样本均数比较的t检验，并在Pems统计学软件包下进行计算。
3结果表1 不同药剂对实验动物全身免疫功能的影响(X±S)
PMN—外周血中性粒细胞吞噬功能，计算油镜下100个中性粒细胞中吞噬细菌的细胞数。
MIT—外周血白细胞移行抑制试验，反应机体T淋巴细胞的功能状态。
ANAE—外周血T淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶检测，油镜下计数100个淋巴细胞中呈ANAE阳性细胞数，计算其百分率，可反映机体的特异性细胞免疫。
注①为处理组与对照组比较P＜0.01 ②为处理组与对照组比较P＜0.05表1结果表明，田基黄注射液、田基黄总黄酮粉针剂、田基黄总黄酮冻干粉针剂均能明显提高大鼠外周血中ANAE阳性淋巴细胞百分率，(P1＜0.001)，说明三种田基黄制剂均能作用于机体的免疫器官和免疫细胞，促进T淋巴细胞分化与成熟，从而增强机体的特异性细胞免疫和免疫调节作用。
田基黄三种制剂还能提高外周血中性粒细胞吞噬率，(P1＜0.001)，说明田基黄三种制剂均能增强中性粒细胞的吞噬杀菌功能，从而提高机体抗细菌感染能力。
田基黄三种制剂对外周血白细胞移行抑制指数虽然比对照组低，但统计学上无显著意义，(P1＞0.05)，说明田基黄三种制剂均对T淋巴细胞分泌白细胞移行抑制因子作用不明显。
田基黄总黄酮粉针剂和冻干粉针剂对大鼠全身免疫指标PMA、ANAE的影响与田基黄注射液对上述指标的影响略优，但统计学上无显著意义(P2＞0.05)，说明三种制剂活性成分相同；粉针剂和冻干粉针剂在总黄酮制备工艺上与田基黄注射液的制备工艺相同，因而表现出活性成分相同是合理的。但粉针剂和冻干粉针剂对PMA、ANAE的影响略优于田基黄注射液对PMA、ANAE的影响，反映出粉针剂和冻干粉针剂的质量稳定性优于田基黄注射液。
二 田基黄制剂对CCl4肝损伤和HBV抗原作用1材料1.1受试动物Wistar大鼠，体重200-240g，雌雄兼用，由第一军医大学实验动物中心提供，Balb/C系小鼠，体重20-22g，雌雄兼用，由第一军医大学实验动物中心提供。
1.2试验药物田基黄注射液，由江西众鑫药业有限公司生产，每支2ml，每ml含生药1g；田基黄总黄酮粉针剂、冻干粉针剂由广东天之骄药物开发有限公司研制，每支含生药2g；使用时用注射用水配制成所需浓度。联苯双酯滴丸，每丸1.5mg，北京协和药厂生产。
1.3试剂乙型肝炎两对半诊断试剂(酶免疫吸附试验，ELISA)，由上海科华生化试剂实验所提供。
1.4仪器日立7170型自动生化分析仪，试剂由日立公司提供。
1.5统计方法数据处理采用两样本均数比较的t检验，并在Pems统计学软件包下进行计算。
2实验方法2.1田基黄制剂对CCl4急性肝损伤的保护作用将小鼠随机分为正常对照、CCl4、联苯双酯(200mg/kg)，田基黄注射液、田基黄总黄酮粉针剂、冻干粉针剂剂量相同(20g生药/kg)组，正常对照组和CCl4组给予生理盐水。动物每天灌胃(i.g)给药1次，连续4天。于给药第三天除正常对照组外，每组均腹腔注射(i.p)CCl4(20ul/kg)，16小时后血测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)，并肝组织作常规组织病理学检查。结果表明，注射CCl416小时后，肝组织和肝功能明显受损，血清ALT和AST显著升高，田基黄制剂具有明显的保护肝作用，能降低血清ALT和AST水平。(见表1)，减轻肝组织的变化和坏死。
表1 田基黄制剂对CCl4肝损伤ATL和AST的影响(X±S，U/L)
注与CCl4组比较①P＜0.05 ②P＜0.012.2田基黄制剂对CCl4(20ul/kg)肝纤维化的保护作用。
取Wistar大鼠48只，分别正常组、CCl4组、田基黄注射液组、田基黄总黄酮粉针剂和田基黄总黄酮冻干粉针剂组，每天i.g给药1次，给药第1天起皮下注射(s.c.)CCl4(300ul/kg)，每周2次，正常对照组s.c.等容量的生理盐水，连续给予田基黄制剂和CCl48周。末次注射CCl424h后，取血测定ALT，AST，血清总蛋白，白蛋白和球蛋白含量，同时取肝组织作病理组织学检查。结果表明，给予CCl4的大鼠血清ALT和AST活性明显升高，田基黄制剂三组能明显降低血清ALT和AST的水平(见表2)。病理学检查发现实验大鼠有比较典型肝纤维化，血浆总蛋白和白蛋白降低，球蛋白升高。田基黄能提高肝纤维化大鼠血浆总蛋白和白蛋白水平和降低球蛋白含量(见表3)，减轻肝纤维化程度和纤维化发生率，田基黄注射液组、田基黄总黄酮粉针剂、田基黄总黄酮冻干粉针剂组和CCl4组的肝纤维化率分别为40％、30％、25％和73％，其中冻干粉针剂、粉针剂组与CCl4组比较具有显著性差异(P＜0.05)。
表2 田基黄制剂对大鼠肝纤维化ALT和AST的影响(X±S，U/L)
注与CCl4组比较①P＜0.05②P＜0.01表3田基黄制剂对大鼠肝纤维化血浆蛋白的影响(X±S，g/L)
注与CCl4组比较①P＜0.05 ②P＜0.013结果分析田基黄制剂对CCl4所致大鼠肝纤维化的程度和纤维化的发生率均有明显减轻，改善肝功能，减轻慢性肝损伤引起的血浆总蛋白的白蛋白降低及球蛋白升高。
据文献报道，田基黄对CCl4引起的肝细胞超微结构和肝微粒体药物代谢酶细胞色素P450损伤有保护作用，它通过对抗CCl3对肝细胞的损害而实现其保护肝作用。
试验结果还表明，田基黄总黄酮的两个制剂对保护肝的作用优于田基黄注射液，反应出尽管三者成分相同，但由于制备工艺不同，保留的有效成分有差异，反映在药理效果上有一定差异是正常的，合理的。
以下通过实施例对本发明作进一步说明。
实施例1参照[WS-10078(ZD-0078)-2002]方法制备田基总黄酮浓缩液，在100级以下车间内，向上述浓缩液中加入抗坏血酸或半胱氨酸和低分子右旋糖酐或葡萄糖或氯化钠中的一种或两种，药用辅料总用量为溶液中总黄酮量的10％，在40-80℃条件下充分溶解，调节PH为6.5-7.0，溶液经无菌超滤，得澄明药液，喷雾干燥，密闭24小时，冷却即得所需粉针剂原料，无菌分装于5ml西林瓶，0.3mg/瓶(以田基黄总黄酮计)，轧盖，经检验合格后，包装即得成品。
实施例2参照[WS-10078(ZD-0078)-2002]方法制备田基总黄酮浓缩液，在100级以下车间内，向上述浓缩液中加入计量的注射用水溶性药用辅料，其中半胱氨酸或谷胱甘肽含量占辅料用量的20％，在40-80℃条件下，充分溶解，调节PH为6.5-7.5，溶液经无菌超滤，补充注射用水调节溶液中田基黄总黄酮浓度为0.6mg/ml，无菌灌装于3ml安瓿瓶中，每支0.5ml，冷冻干燥，每支安瓿瓶中含田基黄总黄酮(以槲皮素计)≥0.3mg，熔封，经检验合格后，包装即得成品。
权利要求
1.一种治疗病毒性肝炎的田基黄总黄酮粉针剂，其特征在于由田基黄总黄酮和注射用水溶性药用辅料组成，田基黄总黄酮的含量为50-99.5％，注射用药用辅料的含量为0.5-50％，余量为水。
2.根据权利要求1所述的田基黄总黄酮粉针剂，包括粉针剂和冻干粉针剂两种剂型。
3.根据权利要求1所述的田基黄总黄酮粉针剂，其注射用水溶性药用辅料是由抗氧化剂和其他辅料组成的；药用辅料用量优选为5％-10％。
4.根据权利要求3所述的抗氧化剂为抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽中的一种或两种的混合物，其含量占辅料用量的20％。
5.根据权利要求3所述的其他辅料为低分子右旋糖酐、葡萄糖、乳糖、氯化钠、磷酸盐中的一种或两种以上成分。
6.根据权利要求1或2所述的田基黄总黄酮粉针剂制备方法包括以下步骤A田基黄总黄酮的提取参照[WS-10078(ZD-0078)-2002]方法进行，在经过最后一次活性炭吸附脱色后，过滤得田基黄总黄酮浓缩液；B取田基黄总黄酮浓缩液，加入适量注射用水溶性药用辅料，充分溶解后，调PH 6.5-7.5，过滤的滤液；C滤液经0.2um微孔滤膜超滤，得澄明溶液；D澄明溶液经喷雾干燥，密闭24小时冷却后，无菌分装于西林瓶中，每瓶含田基黄总黄酮(以槲皮素计)0.3mg，轧盖，经检验合格包装即得本发明之粉针剂；E澄明溶液补充注射用水，调整溶液中田基黄总黄酮浓度为0.6mg/ml，无菌灌装于安瓿中，每支0.5ml，经冷冻干燥，熔封，经检验合格后，包装即得本发明之冻干粉针剂。
全文摘要
本发明涉及到一种用于治疗病毒性肝炎的特殊剂型的药物及其制备方法。其特征在于所述的田基黄总黄酮粉针剂由田基黄总黄酮和注射用水溶性药物辅料组成，田基黄总黄酮的含量为50－99.5％(重量百分比)，余量为药用辅料或水分。其特征在于所述的粉针剂包括喷雾干燥粉针剂和冻干粉针剂。本发明所述粉针剂具有运输方便，贮存期长，较水针剂产品的稳定性好，质量高，可大规模生产。加入注射用水后所得的注射液经检验，各项指标均符合要求。本粉针剂以田基黄总黄酮为活性成分，具有清热利湿，散瘀消肿的作用，适用于病毒性肝炎的治疗。
文档编号A61P1/00GK1528288SQ20031010450
公开日2004年9月15日 申请日期2003年10月21日 优先权日2003年10月21日
发明者张晴龙 申请人:张晴龙