一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳及其制备方法

专利名称：一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳及其制备方法
技术领域：
本发明属于美容保健和医药生物技术领域，涉及一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳，具体涉及一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳及其制备方法。
背景技术：
微创美容医学技术是微创外科或外科微创化与本世纪美容外科相结合的新兴技术，是通过精巧微小的仪器和微创美容技术达到美容的目的。一般可用于人体体表预防或消除皱纹，凹陷的充填，松垂部位的提升，使其形态发生改变产生美容效果而不留手术痕迹。无创、无痛、不出血、不留痕迹正是微创美容所追求的，但事实上，尽管是微创美容，但仍有小的创伤，出血，感染现象，严重影响术后的效果；而且在微创美容实施前，要进行局部麻醉，微创美容实施后要进行止血、抗感染处理，从而使得整个过程繁琐且很难达到无创、无痛的理想效果。因此，随着外用止血药在临床领域应用规模日益扩大，特别是在微创美容疗法中，如美容填充材料的注射、自体血清美容疗法的注射等各种微创手术过程中，其需求量也相当巨大。而目前已有的局部止血制剂，其非生物相容性差、功能比较单一、止血、抗炎效率不高，且止血剂局部应用后的炎性反应及其对临床术后副反应的问题仍不容忽视。为了真正体现微创美容医学技术的特点，真正达到无创、无痛、不感染的理想效果，市场急需开发一种起效快、效果好、功能多样化、副作用小且能维持手术时间的局部止血制剂，用以满足微创美容术等各种医疗手段所引起的皮肤浅表创伤性止血、镇痛、消炎的需要，以填补这方面技术及产品空白，满足市场需求。一、止血材料背景血液中的血小板、血浆中的各种凝血因子与抗凝因子以及毛细血管壁的完整性， 其中任何一项发生异常，均可造成临床上的出血倾向，另外，各种外科创伤或手术可能导致严重的出血。止血是临床治疗的一个重要环节，止血药或促凝血药是能使出血停止的药物， 目前国内临床常用药物有20多种，根据凝血机制不同可分为四类，分别是(1)促凝血因子活性药，代表药物有凝血酶、去氨加压素、维生素K1、维生素K3，双乙酞氨乙酸乙二胺、凝血质及醋酸去氨加压素等，能促进肝脏合成凝血酶原和其他凝血因子或提高它们的活性， 或能促进凝血因子从贮存部位释放，因而加速血液凝固。主要用于手术前后的预防出血和止血；( 降低毛细血管的通透性，增强毛细血管对损伤的抵抗力，促进受损毛血管端收缩而止血，代表药物卡巴克洛、卡络磺钠，这类药直接作用于血管平滑肌，增强小动脉、小静脉和毛细血管收缩力，降低毛细血管通透性，从而产生止血效果；C3)抑制纤维蛋白溶解药， 代表药物有氨基己酸、氨甲苯酸、氨甲环酸、抑肽酶，这类药物抑制纤溶酶原各种激活因子， 使纤溶酶原不能转变为纤溶酶，或直接抑制纤维蛋白溶解，达到止血作用；(4)局部止血药物，代表药物有云南白药、氧化纤维素、醛基纤维素、明胶海绵等。二、外用常用止血材料
1.凝血酶止血材料凝血酶(thrombin)是一种由凝血酶前体形成的蛋白质水解酶，催化纤维蛋白原变成纤维蛋白而促使血液凝固，是常用的局部止血药，具有直接作用于出血病灶，部位准确；无副作用，无局部刺激，作用安全；同时凝血酶形成的凝固膜对创面有保护作用，并有促进上皮细胞分裂，促进创面愈合等优点。凝血酶的药理作用有(1)在凝血过程中不需要经过凝血第一、二阶段，直接激活凝血第三阶段，不需用其他众多凝血因子参与；( 促使纤维蛋白原转化为纤维蛋白，加速血液快速凝固；C3)具有激活凝血因子的作用，可使可溶性纤维蛋白转为难溶性纤维蛋白而形成凝血块，达到止血的目的；(4)可以促进血小板发生不可逆的聚集和血小板释放反应，加速血液的凝固；( 可促进上皮细胞生长，减少创面渗出，加快创面的愈合，使愈合时间缩短。但使用凝血酶时应该注意的是(1)该药仅有止血作用，无预防出血作用，主要适合伤口毛细血管的出、渗血，必须直接与创面接触才能起止血作用，对较大的动静脉出血仍需结扎、电凝等外科方法处理；( 该药仅能局部外用或口服，严禁注射，如误入血管可导致血栓形成、局部坏死，甚至危及生命；(3)溶解状态的凝血酶很快失去活性，因此在临床外用时应新鲜配制使用；(4)偶可致过敏反应，应及时停药。使用牛凝血酶后会在人体内产生相应抗体。大多数制造商制备的牛凝血酶都混有牛凝血因子V，进入人体后可发生交叉免疫反应，所产生的免疫复合物经血循环被清除，由此可导致人凝血因子V的缺乏，并可能引起严重出血倾向。牛凝血酶引发交叉免疫反应所产生的抗体，可能会因其削弱抗凝血酶 III(AT-III)的正常抑制作用而导致血栓形成。为此许多制造商已考虑用人凝血酶替代牛凝血酶。凝血酶除直接作为止血药物，还可以与其他药剂配伍，制成新的剂型。它具有传统止血药剂不可比拟的优点止血迅速快，疗效确切；应用范围广，临床各科发生的毛细血管、小血管及实质性脏器出血均可应用；用药方便、安全，可口服或局部喷洒、涂布、直接作用于出血部位，不干扰体内抗凝血功能，有助于组织修复，加速创面愈合。2.胶原止血材料胶原(collagen)是细胞外基质(extracellular matrix)的主要结构蛋白，它的超微结构及稳定性在细胞-细胞、细胞-基质交互作用中起着极其重要的作用。是生物体内含量最高的蛋白质，占人体总蛋白量得1/3，它广泛存在于人体及动物体内。胶原具有良好的止血作用。胶原的止血机理主要是其对血小板的作用，缩短血栓形成的时间。血管受损时，胶原能引起血小板聚集，并能刺激血小板释放一些亚细胞颗粒和分泌物，包括各种凝血因子。凝血因子粘附在受损血管上，以填塞受伤血管，达到止血的目的。另外，胶原还能直接激活内源性凝血，最终产生凝血酶，凝血酶再催化纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血液凝固。尽管在临床上，胶原海绵取得一定的良好效果，但是单纯胶原蛋白海绵仍存在一定的问题。例如，力学能力差，急促的出血会冲破胶原体本身和溶解速度太快，影响止血效果和使用的安全性等缺点。赵士海等采用胶原蛋白复合止血贴与胶原蛋白海绵分别对兔失血模型进行止血，研究结果发现前者使用后，体表创面伤口恢复良好，体内吸收速度快，具有一定的抗炎作用，止血效果明显优于胶原蛋白海绵。胶原/纤维蛋白复合止血贴是一种以猪、 牛或马腿肌腱为原料生产的胶原海绵，再在其表面涂敷纤维蛋白原和凝血酶而制成的可用于内脏及体表创伤止血的可吸收医用敷料。另外，微丝纤维胶原止血纤维素是由牛真皮胶原提纯制备的一种不溶于水的纤维素。在出血表面直接应用时，可诱导血小板在微丝纤维上发生粘附和聚集，促进血小板血栓形成而发挥止血作用。3.纤维蛋白粘胶纤维蛋白粘胶(Fibrin Glue)又称纤维蛋白粘合剂(Fibrin Sealant, FS)，是一种从血浆中提取的生物制品，主要由纤维蛋白原、凝血酶、抑肽酶和氯化钙组成。止血作用主要是凝血酶激活纤维蛋白原复制机体的凝血第三阶段。曾有试验性地使用含有纤维蛋白原和凝血酶的粗制品处理战伤创面的报道，通过系列动物试验研究，证实纤维蛋白胶具有五个主要的药理作用①止血作用；②粘合加固作用，并促进缝合伤口的愈合；③封闭体内空腔及促进神经修复；④粘附作用，提高皮肤移植成功率；⑤减少渗出液，抗粘连作用。而且大量临床研究资料表明，总之，纤维蛋白胶在快速控制手术过程中术野渗血及进行静脉性出血的局部止血，封闭组织缺损，促进组织创伤愈合，防止组织粘连具有显著特点。关于纤维胶原蛋白胶引起的不良反应，首先有病毒传播的可能性，但是目前至今尚未见使用纤维蛋白胶而被病毒感染的报道其次，由于操作疏忽使纤维蛋白胶进入血管，从而产生血栓的可能性是存在的，但实际操作中很罕见。4.氧化纤维素和氧化再生纤维素ii it ^f M (oxycellulose, OC)禾口 fi # t 千会佳 i (oxidized regenerated cellulose, ORC)均为可吸收性止血剂，是由纤维素单元为C_6位的伯羟基选择性氧化为羧基，处理成为纤维素酸，制成薄纱状或棉布状，其止血机制是酸性羧基与血红蛋白中狗3+ 结合，使血液产生酸性正铁血红素，形成红棕色胶块，封闭毛细血管末端而止血。两者均具有良好的组织相容性，柔软而菲薄，易于操作，且在2-8min可完成止血。临床上常用于手术创面止血和持续渗血部位。后者对革兰氏阳性和阴性细菌、需氧菌及厌氧菌均有杀灭作用， 其应用范围几乎遍及所有外科领域。应用方法有覆盖轻压法、填塞压迫法、缠绕法、填塞留置体内法。氧化纤维素和氧化再生纤维素被机体吸收较快，例如后者多在2-7天被机体吸收，故可能会引起再出血，另外，应用时应避免同时使用，这是由于两种纤维材料的酸性聚能破坏凝血酶的止血作用。MNagamatsu的实验结果提示氧化纤维素的酸性可能引起神经纤维变性，应避免对外围神经直接使用大量氧化纤维素。5.化学胶化学胶是一类α -氰基丙烯酸酯类物质，亦称α -氰基丙烯酸酯类组织胶，常见得有ZT胶、PW胶、OB胶等，多在数秒钟内即可固化形成柔软而富有弹性的聚合体粘合组织。 由于α-氰基丙烯酸酯类组织胶的分子结构CNCH2CCOOR中α -碳原子上结合_CN、-C00R 基团，使得β位置的碳原子产生较强的吸电性，因此，只要遇到极微量的阴离子(-οη、-ΝΗ2) 即会瞬间聚合。生物体组织的基本结构是蛋白质物质，而蛋白质是由氨基酸组成的线性大分子化合物，大分子两端含有-NH2及-C00H基团，因此，它可以迅速粘合生物体组织，发挥强有力的止血作用。Nakayama等采用含明胶、聚乙基乙二醇二丙烯酸酯、抗坏血酸等成分的混合物，在可见光作用下，经几十分之一秒即可聚合，成功应用于腹腔镜外科治疗肝损伤。6.可吸收性明胶海绵明胶海绵的止血机制是由于其多孔结构可吸收重于本身45倍的血液而膨大后破坏血小板，促进凝血块形成，从而达到止血的目的。与凝血酶合用可提高其止血效果，所以临床上在使用前先用lOOu/ml的凝血酶浸透，排除过多的凝血酶液，干纱布压迫30s即可获得更好的止血效果。在脊柱手术时可较未用凝血酶浸渍的明胶海绵减少出血61% 75%。但由于明胶是一种异物可能增加伤口的感染率，尤其是污染的伤口 ；另外，明胶海绵贴附粘度差较易脱落，用于内脏止血最好用线缝合固定。由于明胶海绵需要机体的凝血因子参与才能获得最后的止血，故在合并有凝血机制障碍时，其止血效果往往不理想。7.藻酸钙藻酸钙是从海草分离提取的一种多糖，呈纤维绒状。将本品贴附于出血创面可以吸收自重15 20倍血液形成藻酸油凝胶发挥止血作用。Blair在兔肝3cm2损伤模型上证明藻酸钙纤维平均止血时间3min，猪胶原5. 7min，氧化再生纤维素12. 5min，与其它两种有显著差异。而且没有纤维增生异物反应。在取皮部位覆盖藻酸钙纤维不仅能止血而且有促进上皮生长，减轻疼痛的作用。减少手术出血量，缩短手术时间，对手术愈后有着重要的影响，局部止血药在某些方面能起到这一重要角色。医院规模越大需要局部止血剂品种也越多，所以对外科医师来说，选好适应症，掌握正确使用方法，才能充分发挥止血效果。8.壳聚糖及其衍生物壳聚糖(chitosans)是甲壳素的脱乙酰化产物，是一种多聚糖物质，化学名称为 B (1-4)-2-氨基-脱氧-D-葡萄糖。它是来源于海洋的天然高分子化合物，无毒性。早在 1983年就有关于壳聚糖止血功能的研究。Yin G等证实壳聚糖及相关制剂具有良好的止血功能，其止血机理在于它能吸引带负电荷的血小板和红细胞，还能促进纤维蛋白原吸附的数量，从而增加血小板粘附和血栓形成。另外，壳聚糖对烧伤病人伤口感染产生绿脓杆菌、 金黄色葡萄球菌和酿脓链球菌、人体表皮存在的皮肤细菌(如表皮葡萄球菌)、肠细菌(如大肠杆菌)和人体真菌(如热带白色念球菌)都具有显著的抑菌作用，其作用机制可能是带正电荷的壳聚糖吸附带负电的细胞壁，使壳聚糖吸附在细胞膜表面形成一层高分子膜， 改变了细胞膜的选择透过性，扰乱了细菌正常的新陈代谢，导致细胞质壁分离，从而起到抑菌杀菌作用。9.淀粉止血材料淀粉是一种天然高分子化合物，其分子中含有大量的醇羟基，可由生物合成的、可经多种化学方法改性的最为丰富的可再生资源，生物相容性好，不含动物源或人源性成分， 因此过敏风险小；而且，淀粉是天然高分子物质，可被人体自然吸收，因而不会在止血后遗留引起并发症。特别是淀粉多聚糖颗粒具有亲水性分子滤网作用，通过聚集血液中的固体成分，可在颗粒周围形成一种胶状混合物，从而加速自然凝血过程；同时，淀粉颗粒可通过让血液缩水产生快速和有力的血凝块，极大的缩短止血时间，从而发挥良好的止血作用。10.碘伏(0.5% )应用液碘伏为碘与聚醇醚复合而成的广谱消毒剂，能杀死病毒、细菌、芽孢、真菌、原虫。 用于皮肤、黏膜消毒、手术前皮肤消毒，也可用于皮肤、黏膜细菌感染以及器械、环境消毒。 碘伏用于创面止血的作用机制是其中碘具有凝固蛋白质作用，外伤后创面的一些相关蛋白受碘作用而凝固，有利于止血；碘伏的表面活性物具有收缩血管，尤其是收缩小血管和毛细血管作用，创面裸露的血管直接与碘伏接触后，其收缩小血管作用更为明显。碘伏用于创面止血适用范围主要是体表不同部位、不同程度摩擦伤、或者微创美容手术中部分无需缝合或不宜缝合的外伤等。结果说明，0.5%碘伏的止血功能完全彻底，止血时间为3-8min显效。11.中药止血剂
局部止血药物的研究一直是个焦点，尤其是随着对传统中药和药用植物的深入研究以及其毒性较低、来源广泛等特点，在止血方面具有独特的优势。传统中药和药用植物的止血特点是由于其含有大量的止血活性成分，例如生物碱类、黄酮类、有机酸类、氨基酸、香豆索类、酚类、脂类、萜类和留体、鞣质等物质。止血中药根据中药的药性分为凉血止血、收敛止血、化瘀止血、温经止血四类。主要针对临床表现，产生收涩、化瘀、凉血、温经等不间作用，加速血凝，或消除导致血不循环的原因，从而达到迅速止血，免除血液耗损，以及失血过多引起机体衰竭的目的。据统计，具有止血功能的中药大约有70多种。临床上常见的有云南白药，它的主要成分是三七，有研究表明三七能使血小板因子III、血小板释放ADP、钙离子和槲皮苷等止血活性物质表现出来，从而产生促凝血作用仙鹤草及其复方可用于血小板减少性紫癜和过敏性紫癜的治疗，胃热出血、支气管扩张咯血、眼底出血、痔瘘便血、上消化道出血除此之外，它还可用于止血及妇科疾病的治疗，如崩漏出血、功能性子宫出血等，而蔚蓄水及醇提取物可用作流产及分娩后子宫出血的止血剂。从中药的药性来说，野艾的挥发油具有温经止血的作用。紫珠由于能使小鼠血小板数明显增高，而明显缩短小鼠的凝血时间和出血时间，具有同样功效的中药还有紫草、血竭町、独一味、鲜地黄汁、白鲜皮水煎剂、裸花紫珠片、 金银花等。三、目前止血材料及方法的不足和发展趋势正确使用局部止血材料对于控制出血十分关键，而局部止血材料的不断研发和问世的确给微创美容过程中的止血提供帮助。然而，目前采用的止血材料最普遍的形态仍然多为纱布、薄片、海绵和毛磨布等。纱布和絮凝物的应用虽然方便、也便于操作，但毛磨布和粉状止血剂带有高静电荷，易于粘附在手术器械和手套上，给微创美容手术及其操作带来困难。纤维状和棉花状胶原虽在可操作性和止血效果等方面均有了很大提高，且当纤维直径在20 50 μ m时效果最佳，但如果纤维的厚度太小，止血效果也会降低。还有一些止血材料在局部止血效果上虽然不错，但其非生物相容、以及体内体表不可吸收性，只能在发挥止血作用的同时控制止血材料的用量，以减少麻烦或副作用，或者必须在微创美容手术过程中清除多余的止血材料，但减少用量又可使得其止血效果受到影响。而且，止血剂局部应用后的炎性反应及其对临床术后副反应的问题仍不容忽视。而现有的医用可吸收止血材料虽种类繁多，但止血效率不高、功能也比较单一；虽然，止血材料在抗菌消炎方面的改性具有积极意义、且改性具后具有一些优点，但抗菌改性主要是浸渍负载一些具有抗菌性能的药物，这些负载的药物无疑对一些过敏者使用有一定的局限性；有些抗菌剂使用银作为抗菌剂负载在止血材料上，其副作用和蓄积毒性较大。复合或涂覆中药的止血剂，如云南白药，其成分中的三七和白芨具有良好的止血凉血功能，但中药粉末或颗粒制剂不易渗透、操作也多有不便、且需要后续清除或清洗。因此，在研发局部止血剂的同时，我们还需要更多地考虑如何通过止血材料的智能化改性及止血材料的纳米化改性等以提高止血效果；如何根据促凝血形成的综合作用机制，将现有止血材料、以及中药现代化提取的功效成分和一些促凝血的物质复合组方，如将凝血酶、钙离子、血管收缩制剂、中药消炎、镇痛及修复的挥发油等复合，使之易于喷射或喷晒，迅速覆盖伤口，在伤口表面能快速形成屏障，阻止血液从血管中流出，达到快速止血的目的；同时，应该充分考虑到在进行伤口止血过程中如何对损伤部位进行同步镇痛、消炎、修复及促进伤口愈合、预防结缔组织增生所引起的疤痕等损容性后遗症。总之，随着对止血材料止血性能要求的不断提高，尤其是微创美容医学的需求，开发出止血效果更佳的制剂势在必行。对于用于微创美容医学领域的止血制剂还应该具有有效抑制创伤处的细菌作用和促进伤口愈合，防止伤口被感染；另外，这些外用制剂我们不单纯依赖于一种止血材料或一种作用机制的止血能力，我们还可以通过添加特殊止血药物 (比如一些中药活性止血成分或西药止血酶、凝血因子等)，加速止血制剂的止血速度和效果；而对于外用制剂的作用效果，其渗透能力也是影响止血能力的一个关键因素。尤其是对于非脂溶性物质和中药成分的止血材料，它们的渗透能力很低，很难最大限度发挥出应有的止血能力。尽管目前促渗剂有了很大的发展，也在功效成分渗透吸收方面发挥了一定的作用，但由于成分的来源不同，其理化特性也各不相同，有些是水溶性，有些是脂溶性，还有些是水油双溶或双不溶性；因此，要解决渗透剂与功效成分之间的溶解性和稳定性都非常困难；而且，有些功效成分的分子量小，有些功效成分的分子量大，分子结构和形态也差异明显，单靠渗透剂的被动透皮效应，仍不足于使止血功效成分顺利地渗透吸收并发挥最大的生物学作用，有些功效成分甚至仍无法透皮吸收和发挥其应有的生物学作用。特别是有些渗透剂大多数是化学合成或半合成制剂，如使用浓度的加大或使用过于频繁，将会增加止血剂的毒副作用，这需要我们去寻找更好的方法来解决这个问题。而当前，有很多的新型制剂载体，可以提高功效成分的渗透能力，且可以兼容不同理化性质成分，大大提高功效成分的生物利用度，最大限度地发挥功效成分的作用。例如纳米乳(miCr0emulsi0n，ME)载体，也称微乳，是粒径为10 IOOnm的乳滴分散在另一种液体中形成的胶体分散系统，是水，油，表面活性剂和助表面活性剂按适当的比例混合，自发形成的各向同性，透明，经热压灭菌或离心也不能使之分层，热力学稳定的分散体系。纳米乳增加角质层脂质双层流动性、破坏角质层水性通道、经毛囊吸收等途径有效克服角质层对药物的屏障作用，从而将功效成分送入真皮内；纳米乳结构的独特性使其对脂溶性和水溶性药物均能产生显著的增溶效应，从而形成药物过饱和系统，大大增加局部功效成分的浓度梯度，从而提高药物的透过量；另外，纳米乳可以通过强有力的水合作用扩大局部细胞间的连接从而产生一个透皮渗透的快速通道。我们相信，通过不同功效成分的协同作用，止血制剂一定可以多方面，多层次地达到止血作用，再加上合适的制剂载体，定能进一步最大化地发挥止血功效成分的止血能力。

发明内容
本发明的目的是针对现有技术的缺陷和不足，提供以一种更为合理，疗效更为确切，吸收效果更好，既可以用于止血，又可以用于消炎和镇痛的外用制剂及其制备方法。此可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛产品，其组方原则主要是通过经皮药物载体纳米乳体系独特的理化性质及生物学作用，将具有止血、消炎、镇痛的功效成分融为一体，功效共济协同、优势互补、联合增效，从而最大限度发挥止血、消炎、镇痛等功效。另外，组方选用的成分对皮肤刺激小，且不含乙醇、防腐剂、香料等，减少了产品对皮肤发生刺激反应及过敏反应的可能性，提高了产品的安全性。本发明的产品可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛，其作用原理主要是通过经皮药物载体纳米乳体系独特的理化性质及生物学作用，将具有止血、消炎、镇痛的功效成分融为一体，功效共济协同、优势互补、联合增效，从而最大限度发挥止血、消炎、镇痛等功效。1、本发明的技术方案(1)本发明的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳是由下述重量份的原料组成凝血酶冻干粉0. 001 0. 1份，肾上腺素0. 0001 0. 002份，氯化钙5 10份，
氯化钠0. 85 2. 0份，薏苡仁精油3 10份，细辛挥发油3 10份，利多卡因盐酸盐3 10份，肉豆蔻酸异丙酯12-15份，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯27-30份，聚甘油-3- 二油酸酯 9-10份，蒸馏水20-42份。(2)本发明的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳各原料优选重量份是凝血酶冻干粉0. 0055份，肾上腺素0. 0005份，氯化钙5份，氯化钠1份，薏苡仁精油6份，细辛挥发油6份，利多卡因盐酸盐5份，肉豆蔻酸异丙酯13. 6份，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯27. 6份，聚甘油-3- 二油酸酯9. 2份，蒸馏水26. 594份。(3)本发明的另一目的是提供一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳的制备方法，包括以下步骤①水相的配制精密称定配方量的凝血酶冻干粉于合适的容器中，用适量的蒸馏水溶解，再依次溶解加入肾上腺素，氯化钙，氯化钠，利多卡因盐酸盐，最后加入配方量的蒸馏水，混合均勻，将此溶液作为水相。②油相的配制用分析天平准确称取肉豆蔻酸异丙酯，置于另一个经过洗消过的合适容器中；依次溶解加入薏苡仁精油，细辛挥发油，充分混合溶解后，将此溶液作为油相。③乳化剂和助乳化剂混合物的配制准确称取配方量的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯，并将这两者原料置于第三个经过洗消过的合适容器中；加盖，并将此三角烧瓶迅速置于液体快速混合器上，充分混合均勻，使之形成乳化剂和助乳化剂混合物。④按照油相乳化剂和助乳化剂混合物水相=25.6% 36.8% 37. 6%的比例，先分别取水相、乳化剂和助乳化剂混合物置于第四个经过洗消过的合适中。⑤将上述水相、乳化剂和助乳化剂混合物两液相充分混合后，再在此容器中直接加入油相，并将整个体系在超声振荡器中超声5min左右，充分混勻后，其外观如是无色、流体性和分散性好、有明显可见乳光者，即为一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳。⑥将此一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳迅速分装于不同规格的避光玻璃容器之中，迅速加盖，包装，并置于4°C密闭保存即可。(4) 一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳功效成分的作用机制及其理论依据凝血酶(thrombin)是从牛血或猪血浆中提取凝血酶原，然后经激活、精制得到的凝血酶无菌冻干品，它是一种外用止血酶，无需凝血过程前阶段的诸多凝血因子参与，便可直接作用于血液中的纤维蛋白原，迅速生成纤维蛋白，网罗红细胞、白细胞和血小板等从而堵塞出血点。同时，凝血酶还能促进血小板聚积，加固止血，并可促进血管平滑肌收缩，降低毛细血管通透性，减轻局部炎性水肿，收敛创面，达到局部迅速止血目的。凝血酶的止血作用快，用于局部止血时，1 anin即可使出血停止。
肾上腺素(adrenalin)是肾上腺髓质的主要神经递质，其生物合成主要是在髓质嗜铬细胞中首先形成去甲肾上腺素，然后进一步经苯乙胺-N-甲基转移酶的作用，使去甲肾上腺素甲基化形成肾上腺素。肾上腺素皮肤外用具有收缩血管(以皮肤黏膜血管收缩最为强烈)和创面之作用。通常肾上腺素使用后可使局部血管收缩，周围组织肿胀压迫血管及血小板聚集和血栓形成，起到暂时止血作用。而且，在局麻药中加入肾上腺素，还可以达到减慢局麻药的吸收以及延长其作用时间和增强其阻滞程度的目的。氯化钙中的钙离子参与凝血过程中的多个环节，也是参与血液凝固的重要因子之一，它不仅能促进纤维蛋白原直接转化为纤维蛋白，而且，还能激活凝血酶活性，并加速凝血酶促血凝反应过程，有利于血小板黏附，聚集和释放反应，从而发挥其促凝血功能。氯化钠具有一定的清洁和消炎作用，而高渗盐水不仅可起到表皮清洁和消毒作用，而且，也可使局部组织轻度水肿，局部压迫止血。薏苡仁油是薏苡仁中的主要生物活性成分。薏苡仁性凉，味甘、淡，归脾、胃、肺、大肠经，有健脾渗湿，除癖止泻，补气益阳，清新养神，清热排脓之功效。薏苡仁含有多种活性成分，如薏苡仁油、薏苡仁多糖、薏苡仁酯等。薏苡仁油主要成分为不饱和脂肪酸，其中亚油酸和油酸的含量占薏苡仁油不饱和脂肪酸的75%以上。动物试验研究发现，薏苡仁汤(水煎剂)有抗炎镇痛作用，而薏苡仁油的镇痛和止血作用主要表现在它使小鼠的扭体潜伏期延长，扭体次数减少，缩短小鼠的凝血时间等。细辛挥发油中含丁香油酚甲醚、优藏茴香酮、大黄樟醚、β-菔烯、细辛醚、细辛酮等，另含N-异丁基十二碳四烯胺及消旋去甲乌药碱等，具有一定的镇痛、镇静、中枢抑制、 局部麻醉等多种药理作用。细辛挥发油的镇痛作用可能与抑制NO释放、抑制PGE2合成以及清除氧自由基有关。因为，PGE2是一种重要的疼痛介质，PGE2外周致痛作用早已明确。研究表明，细辛挥发油提取物可降低脑组织及血清中PGE2的含量，如此可抑制前列腺素(PGs) 环氧化酶(Cox)，阻止花生四烯酸转化为Pk而发挥镇痛、消炎和解热作用，这也提示细辛的镇痛作用与抑制PGE2的合成有一定的关系。NO在炎性疼痛的形成和维持中发挥着重要作用，在外周和中枢的不同水平上参与痛觉的调控。细辛挥发油提取物可显著地降低乙酸致痛小鼠脑组织和血清中NO的含量并降低tNOS和iNOS的活性，提示细辛的镇痛与降低NO 含量和抑制NOS活性有关。氧自由基在外周和中枢均有致痛作用。细辛挥发油提取物可使乙酸致痛小鼠脑组织和血清中SOD活性明显升高，同时降低MDA的含量，提示细辛的镇痛作用可能与清除氧自由基有关。2、本发明的分析鉴定及稳定性考察①肉眼外观观察一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳外观无色或微微淡黄色、澄清透明、可见乳光、具有一定的流动性。经透射电子显微镜检测，液滴直径分布在10 IOOnm之间。②电镜形态观察先将2-3%的磷钨酸钠溶液滴加到蜡板上，另将一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳滴加到铜网正面，用滤纸吸去过多的样品液，将铜网正面朝下盖到染液滴上，负染30min，取出铜网，用滤纸吸取过多染液，将铜网正面朝上置于玻璃皿中自然晾干2小时后，在透射电子显微镜下进行形态观测并照相。纳米乳的电镜普通形态通常黑色物质为纳米乳小滴，而纳米乳负染形态白色物质则为纳米乳小滴，背景为黑色
③纳米乳类型的鉴定采用染色法鉴定纳米乳的类型的主要原理是通过苏丹红 (油性染料)和亚甲蓝(水溶性染料)在纳米乳中红色或蓝色的扩散快慢来判断纳米乳的类型水溶性染料在0/W纳米乳扩散快，因为0/W纳米乳连续相为水相，水溶性染料在水相比在油相扩散快，同样道理，油溶性染料在W/0纳米乳扩散快。通过鉴定一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳为水包油型纳米乳。④常温留样考察将市售包装在常温(25°C 士2°C /RH75% )条件下进行，按一定时间间隔(0、1、3、6、12、24、36个月)，测定稳定性考察项目(有无分层)。结果发现一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳外观依旧透明，未发现浑浊或沉淀，说明稳定性好。⑤强光照射试验在2000 40001x的光照下放置，于第5天、第十天测定，结果同放置前比较没有差异。结果发现一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳外观依旧透明，未发现浑浊或沉淀，说明稳定性好。⑥低温抗冻考察将市售包装在冰箱中_4°C条件下进行，按一定时间间隔(0、1、 3、6、12个月)取出恢复至室温，测定稳定性考察项目(是否透明、有无分层)。结果发现一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳外观依旧透明，未发现浑浊或沉淀，说明本产品抗冻性好，产品稳定。⑦高温试验考察在密闭器皿中于40°C、60°C、8(rC分别放置，于第五天、第十天测定，结果发现一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳外观依旧透明，未发现浑浊或沉淀，说明稳定性好。⑧加速稳定性考察取一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳，置于高速离心机所配套的离心管中，以IOOOOrpm ^irT1的速度离心30min，没有分层，依旧透明， 说明本产品稳定性好。3、本发明的有益效果本发明的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳与现有的技术相比，具有以下有益效果①本发明的止血消炎镇痛复合纳米乳止血效率高、功能多样化，在伤口止血过程中可对损伤部位进行同步镇痛、消炎、修复及促进伤口愈合、预防结缔组织增生所引起的疤痕等损容性后遗症。为微创美容疗法提供了一种具备镇痛、消炎功能的止血制剂，同时大大降低了使用单个制剂的繁琐程序，大大降低了微创美容疗法的时间。②本制剂可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛，其组方原则主要是通过经皮药物载体纳米乳体系独特的理化性质及生物学作用，将具有止血、消炎、镇痛的功效成分融为一体，功效共济协同、优势互补、联合增效，从而最大限度发挥止血、消炎、镇痛等功效。③本发明组方运用纳米乳技术将功效成分高度分散于纳米乳制剂中，提高了功效成分(尤其是天然植物提取物)的溶解度和单位体积功效成分浓度，促进功效成分透皮吸收，使功效成分作用强度加大，局部止血效果好，提高了功效成分的疗效，能达到快速止血， 促进伤口愈合，不留疤痕等特点。④作为外用制剂，要求尽量对皮肤刺激小，感观度好，但是，从理论上讲，无论哪种功效成分、在超过其使用剂量或多次反复时，均有可能引起皮肤的异常反应；特别是一些化学合成物质或异源性的生物大分子物质更是如此。因此，这些功效成分在应用时，如果不采用相关的制剂或载体处理，其产品自然无法保证其安全性，甚至出现严重的皮肤刺激或过敏甚至是皮肤损伤。因为纳米乳体系独特的特点，使得纳米乳制剂不需要添加防腐剂，而且在同等疗效的情况下，功效成分在纳米乳制剂中所需的量更低，也降低高剂量功效成分对皮肤的刺激，同时，本发明中需要的功效成分大部分为天然提取物，大大降低了化学成分对皮肤的刺激性；另外，本发明制备出的纳米乳制剂为透明液体，不油不腻，感观度、舒适度极好。⑤常用的一些外用止血药物，虽然也具有一定的止血和消炎等作用，但存在着药材来源不丰富，成本较高等不足。而本发明选用来源方便、丰富的材料，且本发明而采用纳米乳载体处理后，本发明产品中的功效成分添加量可大大降低，另外本发明制备简单，不需特殊设备，从而大大地降低了产品的成本。⑥当前的一些外用止血镇痛药物作用弱且没有缓释效果，微创美容疗法还没有做完，就失去了止血镇痛的作用，所以往往要反复涂抹才能达到临床的要求。而本产品中止血抗炎镇痛功效成分通过纳米乳中的成分组成界面膜，从而，使其在面部皮肤上应用时，迅速形成功效成分储库，并使之按照梯度渗透规则，形成由高到低、由外向内的缓释控释效应， 达到高效且缓释的疗效。⑦纳米乳制剂作为一种透皮传递给药系统(TDDS)属热力学稳定系统，在皮肤外用止血方面应用尚属首创。并且通过本发明在外用止血抗炎镇痛方面的应用，对微创美容疗法具有积极的作用，同时可带动纳米乳载体在其它学科的应用。4、本发明的制备注意事项①产品配制时所用的容器必须按照规定严格清洗和消毒，最好采用强酸浸泡后水冲，再清水洗涤干净，后用蒸馏水浸泡晾干，再置于烘箱高温消毒干燥后备用。另外，在进行产品配制时，所用容器均要特别注意防止含有杂质或金属离子及微生物等污染，以免影响产品质量和稳定性。②因目前同种功效成分和原料的质量标准不完全相同，特别是含量和纯度存在一定差异，因此，在进行产品配制时，务必高度注意原料的质量和来源。在最后确定配方原料和制备方法后，原则上不要再更换原料来源和品质，以免影响产品质量、稳定性和使用效^ ο③严格按照上述剂量和方法进行配制。在进行该产品配制时，应根据上述流程顺序添加，其添加剂量务必要求准确无误，而且，在其它原料的添加上，一定要等上一种加入的原料充分溶解后才能再加入下一种原料，以免出现浑浊，影响整个纳米乳体系的配制。④在配制本发明复合纳米乳时需要选择和确定乳化剂/助乳化剂(S/C)质量比 (km值)，而确定乳化剂/助乳化剂质量比(km值)1、2、3、4，是需要进行滴定水油两相的二元液试验并通过伪三元相图分析后才能最后确定，只有在确定并计算出得到最大的纳米乳区域的km值，才是较为理想的km值。上述制备方法已通过试验确定Km值为3，但在实际进行产品配制时，乳化剂( 和助乳化剂(C)按此比例仍须在进行混合后还要再充分混勻，以免影响配制效果和质量。⑤一些功效成分的溶解速度可能较慢，为提高工作效率或溶解速度，在有条件的情况下，可采用超声进行震荡并稍加热的方式以加速功效成分或添加剂的溶解，切记不要用高温溶解的方法，以免破坏功效成分。
⑥由于液态溶液的比重或密度不同的关系，在进行产品配制时，所选配制容器的容量一定要稍大于实际配制的产品量，如配制IOOg产品，需要选择150-200mL的配制容器， 这样既便于各成分充分混合和溶解，也便于超声震荡或者搅拌混勻，而不至于往外溢出。⑦由于纳米乳木身具有一定的抑制细菌生长的特点，所以本产品配方中未有另外添加防腐剂，故在进行产品配制时，除配制容器必须进行严格清洗和消毒外，具体配制时也应严格按照操作规程，尽可能在无菌条件下并按照无菌操作要求进行操作，避免该纳米乳样品受到污染，影响产品质量。⑧油相、水相、乳化剂、助乳化剂的比例非常关键，本发明设计的油相、水相、乳化剂、助乳化剂的比例仅针对某一种或两种功效成分而定，实际配制其它功效纳米乳时，可根据配制过程中出现的具体情况适当调整油相、水相、乳化剂、助乳化剂的比例，通常调整3% 左右的比例即可。⑨配制完成的样品务必用避光包装，并尽可能置于阴凉干燥通风避光处保存，要远离火源或热源。另外，产品平时使用后，务必加盖密封严实，放置于自然室温避光保存即可。


图1. 一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳的制备工艺流程及技术路线。
具体实施例方式实施例1 一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳的具体制备方法一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳各原料优选重量份是: 凝血酶冻干粉0. 0055份，肾上腺素0. 0005份，氯化钙5份，氯化钠1份，薏苡仁精油6份， 细辛挥发油6份，利多卡因盐酸盐5份，肉豆蔻酸异丙酯13. 6份，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 27. 6份，聚甘油-3- 二油酸酯9. 2份，蒸馏水26. 594份。一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳的具体制备方法(以配制IOOg为例):①水相的配制精密称定0. 0055g的凝血酶冻干粉于合适的容器中，用Iml的蒸馏水溶解，再依次溶解加入0. 0005g肾上腺素，5g氯化钙，Ig氯化钠，5g利多卡因盐酸盐，最后加入26. 594g的蒸馏水，混合均勻，将此溶液作为水相。②油相的配制用分析天平准确称取肉豆蔻酸异丙酯13. 6g，置于另一个经过洗消过的合适容器中；依次溶解加入薏苡仁精油6g，细辛挥发油6g，充分混合溶解后，将此溶液作为油相。③乳化剂和助乳化剂混合物的配制准确称取配方量的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯 27. 6和聚甘油-3- 二油酸酯9. 2g，并将这两者原料置于第三个经过洗消过的合适容器中； 加盖，并将此三角烧瓶迅速置于液体快速混合器上，充分混合均勻，使之形成乳化剂和助乳化剂混合物。④按照油相乳化剂和助乳化剂混合物水相=25.6% 36.8% 37. 8%的比例，先分别取水相、乳化剂和助乳化剂混合物置于第四个经过洗消过的合适中。⑤将上述水相、乳化剂和助乳化剂混合物两液相充分混合后，再在此容器中直接加入油相，并将整个体系在超声振荡器中超声5min左右，充分混勻后，其外观如是无色、流体性和分散性好、有明显可见乳光者，即为一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳。⑥将此一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳迅速分装于不同规格的避光玻璃容器之中，迅速加盖，包装，并置于4°C密闭保存即可。⑦按照国际或国内或企业相关标准和要求，从上述分装产品中随机抽样，首先采用马尔文仪器检测该纳米乳样品的颗粒分布及粒径大小，在符合纳米乳的质量标准后，再按照国家有关部门的具体要求，进行相关指标的系统检测；待判断或评价其完全符合国家相关规定和标准及批准文号后，即可作为产品上市销售或在美容院内专用。*备注所有实施步骤和操作过程均在洁净而无菌的环境中进行，且操作人员应严格按照无菌操作规程进行。本发明所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行的描述，并非对本发明构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计思想的前题下，本领域中工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。
权利要求
1.一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳，其特征在于它是由下述重量份的原料组成凝血酶冻干粉0. 001 0. 1份，肾上腺素0. 0001 0. 002份，氯化钙5 10份，氯化钠 0. 85 2.0份，薏苡仁精油3 10份，细辛挥发油3 10份，利多卡因盐酸盐3 10份， 肉豆蔻酸异丙酯12-15份，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯27-30份，聚甘油-3- 二油酸酯9_10 份，蒸馏水20-42份。
2.根据权利要求1所述的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳， 其中各原料的优选重量份是凝血酶冻干粉0. 0055份，肾上腺素0. 0005份，氯化钙5份，氯化钠1份，薏苡仁精油6 份，细辛挥发油6份，利多卡因盐酸盐5份，肉豆蔻酸异丙酯13. 6份，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯27. 6份，聚甘油-3- 二油酸酯9. 2份，蒸馏水26. 594份。
3.根据权利要求2所述的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳， 其特征在于所述的肉豆蔻酸异丙酯和薏苡仁精油以及细辛挥发油作为油相。
4.根据权利要求2所述的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳， 其特征在于所述的凝血酶冻干粉，氯化钠，肾上腺素，氯化钙，利多卡因盐酸盐和蒸馏水作为水相。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳，其特征在于其制备方法包括以下步骤①水相的配制精密称定配方量的凝血酶冻干粉于合适的容器中，用适量的蒸馏水溶解，再依次溶解加入肾上腺素，氯化钙，氯化钠，利多卡因盐酸盐，最后加入配方量的蒸馏水，混合均勻，将此溶液作为水相；②油相的配制用分析天平准确称取肉豆蔻酸异丙酯，置于另一个经过洗消过的合适容器中，依次溶解加入薏苡仁精油，细辛挥发油，充分混合溶解后，将此溶液作为油相；③乳化剂和助乳化剂混合物的配制准确称取配方量的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚甘油脂肪酸酯，并将这两者原料置于第三个经过洗消过的合适容器中；加盖，并将此三角烧瓶迅速置于液体快速混合器上，充分混合均勻，使之形成乳化剂和助乳化剂混合物；④按照油相乳化剂和助乳化剂混合物水相=25.6% 36.8% 37. 6%的比例， 先分别取水相、乳化剂和助乳化剂混合物置于第四个经过洗消过的合适中；⑤将上述水相、乳化剂和助乳化剂混合物两液相充分混合后，再在此容器中直接加入油相，并将整个体系在超声振荡器中超声5min左右，充分混勻后，其外观如是无色、流体性和分散性好、有明显可见乳光者，即为一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳；⑥将此一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳迅速分装于不同规格的避光玻璃容器之中，迅速加盖，包装，并置于4°C密闭保存即可。
6.根据权利要求5所述的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳， 其特征在于所述的一种可用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合功效纳米乳的平均液滴直径在IOnm到IOOnm的范围内。
全文摘要
本发明涉及一种用于微创美容疗法的止血消炎镇痛复合纳米乳及其制备方法，它由下述各原料的优选重量份组成凝血酶冻干粉0.0055份，肾上腺素0.0005份，氯化钙5份，氯化钠1份，薏苡仁精油6份，细辛挥发油6份，利多卡因盐酸盐5份，肉豆蔻酸异丙酯13.6份，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯27.6份，聚甘油-3-二油酸酯9.2份，蒸馏水26.594。本产品功能多样化，具有止血，消炎，镇痛作用，从而简化了微创美容疗法的繁琐过程。另外，本发明采用纳米透皮技术，使得功效成分更加有效地、恒定地、可控地进入皮肤，从而达到良好的止血，消炎，镇痛作用，同时还可以大大降低产品的毒副作用。
文档编号A61K31/137GK102274493SQ201110253618
公开日2011年12月14日 申请日期2011年8月30日 优先权日2011年8月30日
发明者丁克祥, 丁宇, 左夏林, 朱晓亮, 杨永鹏, 罗迎霞, 董萍 申请人:丁克祥, 董萍