专利名称：追风伞有效部位及其提取方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种植物追风伞的提取物及其提取方法和其在制备降糖药物方面的应用。
背景技术：
i^j^^j) {Lysimachia paridiformis Franch. var. stenophylla Franch.)另U名惊风伞、一把伞、公接骨丹、破凉伞、背花草、灯台草、伞叶排草，是报春花科珍珠菜属植物狭叶落地梅的全草或根，分布于贵州、湖北、湖南、广东、广西、四川、云南等地。其味辛、辣、苦、 性热。入冷经。主要功效为祛风通络，活血止痛；主治风湿痹通，四肢拘挛，半身不遂，小儿惊风，跌仆，骨折等症。糖尿病是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。其以高血糖为特征、以代谢紊乱为表现，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等，即“三多一少”症状，血糖一旦控制不好会引发并发症， 导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈，严重威胁着人类的健康。根据世界卫生组织的报道，1995年全球已确诊的糖尿病患者约1. 35亿，而近期IDF 2006年报道全球糖尿病患者已达2. 46亿，预测到2025年糖尿病患者将达到3. 88亿。我国在2003年时已经成为糖尿病第二大国，糖尿病患者约6000万。因此，预防和治疗糖尿病已成为我国乃至全世界关注的保健问题。多年来糖尿病的治疗主要以控制空腹血糖为目标，治疗药物长期以来主要集中于磺脲类与双胍类药物。近年来研究发现，糖尿病病发过程中往往先出现餐后高血糖， 而后逐渐发展成糖尿病，即前者是后者的先期征兆。对于糖尿病患者，特别是II型病人，餐后高血糖对机体的危害远远超过空腹高血糖，餐后高血糖不仅极易诱发各种并发症，还会极大地提高糖尿病的死亡率。所以，降低餐后血糖是预防糖尿病、减少并发症和降低死亡率的重要措施之一。也就是说，控制餐后血糖是控制高血糖、防治糖尿病的重要举措。现有治疗糖尿病的药物中，磺脲类药物是通过刺激胰岛素的分泌而降低血糖；双胍类药物则是通过增加外周组织对葡萄糖的利用而降低血糖，两者对降低II型糖尿病病人空腹血糖均有较好疗效，但对降低餐后血糖的作用却非常有限。α -葡萄糖苷酶抑制剂是七十年代后期研发出的一类新型口服降血糖药物，其作用机理在于通过竞争性抑制α -葡萄糖苷酶的活性，阻滞双糖水解成单糖，延缓糖的吸收，使血糖平稳并缓慢地维持在一定水平。α -葡萄糖苷酶抑制剂能够有效控制餐后血糖的升高，预防糖尿病的发生，减少糖尿病并发症，降低死亡率。α -葡萄糖苷酶抑制剂不仅对糖尿病有确切的疗效，对肥胖症、慢性乙肝、艾滋病及肿瘤等也都有一定的治疗作用。目前，用于临床的此类药物有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇，而天然产物中的 α-葡萄糖苷酶抑制剂是近年来研究的热点。研究发现，α-葡萄糖苷酶抑制剂的主要结构类型为黄酮类、生物碱类和皂苷类，此外还有茶多酚类。黄酮类化合物主要是通过多羟基结构发挥抑制作用，并且羟基组的糖化作用会减弱化合物对〃-葡萄糖苷酶的抑制作用。生物碱类也是多羟基生物碱具有抑制作用。一些中草药的提取物也具有很好的抑制〃-葡萄糖苷酶作用，如绿茶提取物和大黄、山茱萸、赤芍、五倍子水煮醇沉提取物，以及广西血竭全粉和分步提取物、五味子和虎杖的水提取物等。然而现有的此类上述药物成本较高，生产厂家很少，同时伴随有肠道副作用。植物追风伞含有丰富的化学成分，但是国内外有关该植物药理学研究和临床应用方面的报道却很少，仅见齐柳规等人提出追风伞总黄酮具有显著的镇痛抗炎作用。国内外尚未见关于追风伞有效部位对α -葡萄糖苷酶有抑制作用、可用于制备降糖药物的报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种追风伞有效部位，该提取物具有降血糖作用，可以用来制备降血糖药物。本发明还提供了该提取物的提取方法。为实现上述目的，本发明采取如下技术方案
一种追风伞有效部位，其选自追风伞醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合。所述追风伞有效部位的提取方法，包括如下步骤取干燥的追风伞粉末用甲醇或乙醇水溶液进行浸提，浸液浓缩得浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。较好的，所述干燥的追风伞粉末用60 - 80V%的甲醇或乙醇水溶液在室温下浸泡浸泡2 — 4次，每次3天，合并三次所得浸液并浓缩成浸膏。上述追风伞有效部位在制备降血糖药物和a -葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。本发明提取物来自植物追风伞，且提取方法简便。以阿卡波糖(Acarbose)为阳性对照药进行体外试验，观察追风伞的石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位(LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)对〃-葡萄糖苷酶的抑制作用。试验结果表明，上述的追风伞有效部位对 α-葡萄糖苷酶均有明显的抑制作用，追风伞在质量浓度为1500 yg/mL时各有效部位对 α-葡萄糖苷酶的抑制活性均较高(抑制率均在95%以上)，远高于阳性对照Acarbose (抑制率为57. 26% )，而各有效部位的半数抑制浓度IC5tl值均小于50 μ g/mL,远小于阳性对照药 Acarbose (IC5tl 值为 1103. 01 μ g/mL)。进一步的，以阿卡波糖为阳性对照药进行体内试验，观察追风伞的石油醚部位 (LPFPE)、乙酸乙酯部位(LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的治疗作用。由体内糖尿病小鼠实验表明，乙酸乙酯部位高、中剂量组(1000,500 mg/kg)能显著降低空腹血糖，正丁醇部位高、中剂量组(800，400mg/kg)具有一定的降低餐后血糖作用， 乙酸乙酯部位中、低剂量组(500，250 mg/kg)和正丁醇部位高、中剂量组(800，400 mg/kg) 能显著升高肝糖原和显著降低血清中TG、TC的含量，乙酸乙酯部位高、中剂量组(1000，500 mg/kg)和正丁醇部位低剂量组QOO mg/kg)能显著降低MDA含量，升高血清中SOD的含量， 但无显著性差别。
图1为实施例1所得追风伞有效部位不同质量浓度对〃-葡萄糖苷酶活性的影响；
图2为实施例2所得追风伞有效部位不同质量浓度对a-葡萄糖苷酶活性的影响。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。实施例1
一种追风伞有效部位，其选自追风伞醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合；具体的提取方法为追风伞全草阴干、粉碎，取1000 g干燥的追风伞粉末，用体积分数70%的甲醇水溶液(甲醇水溶液的添加量为追风伞粉末重量的3 -5倍)，室温下浸泡3次，每次3天，合并3次所得浸液并浓缩成浸膏；将浸膏分散于IOOOml 蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚(3000ml)、乙酸乙酯(3000ml)和正丁醇(3000ml)进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到固态的石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位 (LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)，提取率分别为1. 8%、6· 2%和2. 4%。具体的萃取过程为先用石油醚萃取三次，萃取液分层，取上层石油醚部分(挥干后即为石油醚部位)，下层为水层；水层再用乙酸乙酯萃取三次，萃取液分层，取上层乙酸乙酯部分(挥干后即为乙酸乙酯部位)，下层为水层；水层最后用正丁醇萃取三次，萃取液分层，取上层正丁醇部分(挥干后即为正丁醇部位)。这样操作的目的在于将浸膏中的有效成分按极性从小到大的顺序依次萃取出来，因溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的极性是递增的。实施例2
用体积分数70%的乙醇水溶液替换体积分数70%的甲醇水溶液，其它同实施例1，得到石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位(LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)，提取率分别为1.5%、 5. 8% 和 2. 2%ο效果试验
以下分别给出了实施例1选用70%甲醇水溶液和实施例2选用70%乙醇水溶液醇提最后得到的石油醚部位(LPFPE)、乙酸乙酯部位(LPFEA)和正丁醇部位(LPFBU)进行降血糖试验的结果。试验一、追风伞有效部位的体外抑酶活性试验 1. 1试验方法微孔板法
1. 1. 1原理a -D-葡萄糖苷酶催化水解4-硝基苯-O· -D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)，产生硝基苯酚(PNP，黄色物质，在400 nm左右有最大吸收)，α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制α-葡萄糖苷酶与底物结合从而降低PNP的释放量。以一定时间内反应体系中PNP的含量变化来计算不同追风伞有效部位对〃-葡萄糖苷酶的抑制活性。仪器MultiskanMK3 酶标仪(Thermo Electron) ;LRH_150 恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)；DELTA 320 型 PH 计(Mettler-I^oledo);电子天平(Mettler-I^oledo);旋转蒸发仪(Heidolph)。试剂葡萄糖苷酶(Sigma公司，EC 3. 2. 1. 20, from baker's yeast，批号 105K1313)，4-硝基苯- ο·-々-吡喃葡萄糖苷(PNPG，Sigma公司，批号026K1516)，磷酸盐缓冲液(PH 6. 8)，阿卡波糖(拜糖平，Sigma公司，批号16869)，其他试剂均为分析纯。检测方法及数据处理
在112 μ L、pH为6. 8的磷酸钾缓冲液中，加入20 μ L浓度0. 2 U/mL的σ -葡萄糖苷酶，8 μ L样品溶液(样品溶液用DMSO溶解而得)，37°C恒温15 min，加入20 μ L浓度2. 5 mmol/L的底物PNPG，37°C恒温反应15 min;再加入80 μ L浓度0.2 mo 1/L的终止剂Nei2CO3 水溶液，于405 nm波长下测OD值。实验共设4个组，每组三孔，阴性对照组(缓冲液+酶液+底物)、空白对照组(缓冲液)、样品组(样品+缓冲液+酶液+底物)、样品对照组(样品+缓冲液)，按下述方法计算抑制率，并用Origin软件求出相应IC5tl值。
权利要求
1.一种追风伞有效部位，其特征在于，选自追风伞醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合。
2.权利要求1所述追风伞有效部位的提取方法，其特征在于，包括如下步骤取干燥的追风伞粉末用甲醇或乙醇水溶液进行浸提，浸液浓缩得浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
3.如权利要求2所述追风伞有效部位的提取方法，其特征在于，所述干燥的追风伞粉末用60 - 80V%的甲醇或乙醇水溶液在室温下浸泡2 — 4次，每次浸泡3天，合并三次所得浸液并浓缩成浸膏。
4.权利要求1所述追风伞有效部位在制备降血糖药物方面的应用。
5.权利要求1所述追风伞有效部位在制备〃-葡萄糖苷酶抑制剂类药物方面的应用。
全文摘要
本发明涉及一种追风伞有效部位，其选自追风伞醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一种或任意组合；具体的提取方法为取干燥的追风伞粉末用甲醇或乙醇水溶液进行浸提，浸液浓缩得浸膏；将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。该追风伞有效部位对α-葡萄糖苷酶具有较好的抑制活性；对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠有较好的治疗效果，可以被用来制备降血糖药物。
文档编号A61K36/185GK102293796SQ201110253810
公开日2011年12月28日 申请日期2011年8月31日 优先权日2011年8月31日
发明者尹震花, 康文艺, 李园园, 魏金凤 申请人:河南大学