专利名称：一种预防金鲳鱼溃疡病的疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种鱼用疫苗，特别涉及一种预防金鲳鱼溃疡病的疫苗。
背景技术：
金鲳鱼学名卵形鲳鰺，地方名称黄蜡鲳，金鲳，属硬骨鱼纲，鲈形目，鰺科，鱼昌鰺属。 金鲳鱼具有肉质鲜美，营养丰富等特点，深受消费者欢迎。因此，金鲳鱼的养殖在全国范围内得到了迅速发展，其养殖规模与养殖产量都逐年增加。但近年来在海南金鲳鱼养殖区发生了一种以体表皮肤溃疡，眼球突出，眼内有出血点，解剖观察发现肝、肾等明显肿大、充血为病变特征的“溃疡病”，具有传染性强，死亡率高等特点，给养殖户带来了巨大的经济损失。同时，由于药物的滥用，导致了耐药性的产生， 给该病的治疗带来了很大的困难，并且，由于过度用药，导致鱼体内抗生素残留超标，给水产品品质造成影响，由此导致的经济损失，严重阻碍了金鲳鱼养殖在我国的健康发展。为避免盲目用药带来的损失，提供一种特异性预防金鲳鱼溃疡病的疫苗是一个亟待解决的问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种新的疫苗。本发明提供了粪肠球菌(Enterococcus faecalis)在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。根据现有文献报道，引起金鲳鱼溃疡病的致病菌是弧菌属的溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌和假单胞杆菌，粪肠球菌引起该病尚属首次发现。本发明又提供了一种疫苗，它是由粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。优选地，上述疫苗包含致免疫有效量的灭活的粪肠球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。所述的粪肠球菌是保藏号为CGMCC1. 2135粪肠球菌菌株。进一步优选地，所述的粪肠球菌是保藏号为CCTCC NO =M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌JC-I :Tff-YYS-17菌株；所述的致免疫有效量为不低于lX105CFU/ml，优选为 1 X IO5-I X 108CFU/ml ；所述的辅料或者载体为水或吸附剂，所述的水为生理盐水或蒸馏水， 所述的吸附剂是沸石或硅藻土。本发明还提供了一种联合用药物，其包含前述疫苗以及透皮吸收促进剂且任选一种或多种药学上可接受的辅料或载体。优选地，所述透皮吸收剂为氮酮，或莨菪碱。本发明还提供了上述的疫苗在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。优选地，所述的预防金鲳鱼溃疡病的药物是通过注射或者浸泡的方式给药的。本发明最后提供了一种粪肠球菌(Enterococcus faecalis)菌株，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号为CCTCC NO =M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌JC-I Tff-YYS-17 菌株。本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生抗溃疡的免疫力，有效的预防金鲳鱼溃疡 病。
图116S rDNA扩增結果，1道为阳性对照；2 5道为鉴定样品；6道为空白对照； M 道为 DNAmaker I。
具体实施例方式以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容作进ー步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内 容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例1菌株的分离鉴定1、实验材料与方法1.1实验材料金鲳鱼病原菌的分离纯化菌株来源于海南临高县深海网箱养殖基地自然发病的 金鲳鱼病灶处，并命名为JC-I :Tff-YYS-17,简称JC-1，使用TSA培养基培养，并用細菌基因 组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，-20°C保存备用。培养的細菌保存于4°C冰箱备用。试剂耗材16SrDNA Bacterial Identification PCR Kit (TAKARA)、细菌基 因组DNA提取试剂盒(Tiangen)、测序引物(TAKARA)、蔗糖等生化鉴定管(杭州微生物 试剂公司)、血琼脂平板及麦康凯平板(杭州微生物试剂公司)、琼脂糖(TianGen)、DNA Maker (TianGen)。2、实验方法(1)革兰氏染色剂观察取过夜培养的新鮮斜面一支，用接种环挑取少量菌体，涂在滴有少量无菌生理盐 水的载玻片上，进行革兰氏染色，于显微镜下观察染色結果。(2) 16S rDNA的扩增与分析以提取的細菌基因组DNA作为模板，使用宝生物的16S rDNA Bacterial Identification PCR试剂盒扩增细菌的16S rDNA全长，16S_free H2O作为阴性对照，试剂 盒中的DNA作为阳性对照。PCR体系及扩增程序如下PCR 体系
模板 DNA50~100ng
PCR Premix25 ドL
Forward Primer0.5 jxL
Reverse Pnm er2O.djxL
16S-free H2Oup to 5OpL阴性对照使用1 P L的16S-free H2O替代模板DNA，阳性对照取1 yl的Positive Control DNA作为模板。
PCR扩增程序
权利要求
1.粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。
2.一种疫苗，其特征在于它是由粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。
3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于所述疫苗包含致免疫有效量的灭活的粪肠球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。
4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于所述的粪肠球菌是保藏号为CGMCC1.2135 粪肠球菌菌株。
5.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于所述的粪肠球菌是保藏号为CCTCCNO =M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌JC-I =TW-YYS-17菌株。
6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征在于所述的致免疫有效量为不低于 lX105CFU/ml。
7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于所述的致免疫有效量为 lX105-lX108CFU/ml。
8.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于所述的辅料或者载体为水或吸附剂。
9.根据权利要求8所述的疫苗，其特征在于所述的水为生理盐水或蒸馏水，所述的吸附剂是沸石或硅藻土。
10.一种联合用药物，其特征在于它包含权利要求2-9任意一项所述的疫苗以及透皮吸收促进剂。
11.根据权利要求10所述的联合用药物，其特征在于所述透皮吸收剂为氮酮，或莨菪碱。
12.权利要求2-9任意一项所述的疫苗在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于所述的预防金鲳鱼溃疡病的药物是通过注射或者浸泡的方式给药。
14.一种粪肠球菌(Enterococcus faecalis)菌株，其特征在于它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号为CCTCC NO =M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌JC-I :TW-YYS-17菌株。
全文摘要
一种预防金鲳鱼溃疡病的疫苗，本发明涉及一种疫苗。本发明提供了粪肠球菌(Enterococcus faecalis)在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途；还提供了一种疫苗，它是由粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成，还提供了该疫苗在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生抗溃疡的免疫力，能有效的预防金鲳鱼溃疡病。
文档编号A61P17/02GK102389568SQ20111037812
公开日2012年3月28日 申请日期2011年11月24日 优先权日2011年4月25日
发明者刘天强, 康琦, 肖丹, 阳涛, 黄冠军 申请人:通威股份有限公司