专利名称：一种鹰嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种鹰嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的药物的用途，特别涉及一种鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防和治疗雌激素缺失的更年期综合症以及骨质疏松症中药物的用途。
背景技术：
更年期综合症是中老年妇女由于卵巢功能逐渐衰退、雌激素水平逐渐下降后伴之而来的包括潮热、心悸、皮肤干燥、尿频尿急、腰酸背痛等症状，与雌激素水平骤降密切相关。骨质疏松症则是中老年妇女体内雌激素水平下降所引发的另一个常见疾病，主要是由于雌激素水平下降导致骨组织中存在的雌激素受体的激动作用减弱，引发骨代谢活跃和不平衡，成骨细胞活动被抑制而破骨细胞活动增强，造成骨形成不足，骨吸收亢进，表现为骨密度下降，骨生物量降低等症状。近年对中老年妇女健康状况调查发现，更年期综合症以及骨质疏松症已经成为影响更年期妇女身体健康和生活质量的首要因素。如何通过调整更年期妇女体内雌激素水平来改善更年期妇女健康状态和生活质量，是社会及中老年妇女自身的迫切要求。植物雌激素是一类天然来源的、能够与雌激素受体结合、发挥弱雌激素作用的植物提取物，具有雌激素样的双向调节功能。植物雌激素主要分为异黄酮类、香豆雌酚和木质素三大类。异黄酮作为其中重要的一类，近年来发现其对于雌激素相关癌症、妇女更年期综合症、心血管病、骨质疏松症、早老年痴呆症有较好的预防和治疗作用，可有效避免人工合成雌激素如雷诺西芬、他莫西芬引发的子宫内膜癌及乳腺癌。目前国内报道几种植物如葛根、人参等异黄酮提取物具有植物雌激素功能。鹰嘴豆(Semen Ciceris Ari ni)为豆科植物，因其籽实尖如鹰嘴，故名鹰嘴豆。在新疆广泛栽培种植。在中亚地区，鹰嘴豆不仅是一种重要的食品，同时也是一种传统的维吾尔医常用药材，具有补中益气、温肾壮阳、主消渴、解面毒、养颜、强骨、健胃、润肺止咳等功效。用于体倦阳痿、腰膝酸痛、食欲不振、病后体虚、糖尿病及肺痈肿等病症的预防和治疗。 现代药理研究证明，鹰嘴豆含有特殊的化学成分和显著的生物活性，是一种具有广泛药理活性的中药材，已报道的活性有降血糖鹰嘴豆70 %乙醇提取物和水提物分低(5g/kg)、中(10g/kg)、高(20g/ kg)3个剂量组给小鼠灌胃14天，可明显降低小鼠血糖活性。推测跟其皂苷化学成分相关。抗疲劳采用水浸提法提取鹰嘴豆多糖后，按照照组及鹰嘴豆多糖低、中、高三个不同浓度剂量组灌胃25d，分别进行负重游泳试验，并对其血清与肝脏的超氧化歧化酶 (Superoxide Dismutase SOD)活性、丙二醛(Maleic Dialdehyde MDA)含量及肌糖原、肝糖原、血清尿素氮、血乳酸水平等进行测试。研究结果显示鹰嘴豆多糖能延长小鼠的负重游泳时间，增强小鼠血清和肝脏的SOD活性，降低MDA含量，提高肝糖原、肌糖原储备量，降低小鼠运动后血清尿素和血乳酸水平。结果表明鹰嘴豆多糖具明显的抗疲劳功能。抗癌研究发现，鹰嘴豆中提取的粗黄酮物质可显著抑制胃癌细胞MGC-9增殖能力。此外，将鹰嘴豆肽以低50mg/kg · d、中100mg/kg · d、高剂量组200mg/kg · d组分别给皮下接种肝癌H22细胞的小鼠灌胃给药，研究结果表明三个剂量均可抑制H22肿瘤的生长， 且没有阻碍小鼠体重和免疫器官的增长。与肿瘤对照组相比，鹰嘴豆高剂量组可以显著提高小鼠迟发型超敏反应(DTH)的能力、淋巴细胞和巨噬细胞吞噬能力(P <0.05)，鹰嘴豆低、中剂量组对其也有一定的改善作用，但是没有表现出剂量依赖效应。降血脂将鹰嘴豆低剂量组(10g/kg/d)，鹰嘴豆高剂量组O0g/kg/d)，将鹰嘴豆粉与普通饲料混合，喂养小鼠12天后，测定其空腹血糖、血清胆固醇(Tc)、甘油三酯(TG)含量，结果表明鹰嘴豆对高血糖小鼠具有很好的降糖和降血脂作用，对预防糖尿病及其并发症具有积极意义。预防老年痴呆鹰嘴豆异黄酮提取物低25mg/kg · d、中50mg/kg · d、高剂量组 100mg/kg · d可显著提高D-半乳糖致衰老模型小鼠模型的脑组织的SOD活性，降低MDA水平，提高衰老小鼠脑组织清除自由基的能力，减少过氧化产物对脑组织的损伤，进而改善脑老化的程度，发挥其抗衰老作用。抗病毒鹰嘴豆芽素A对艾滋病毒Hiv-I活性及CD淋巴细胞早期活化作用影响的研究表明鹰嘴豆芽素A具有抗HIV-I介导的细胞融合和HIV-I复制的活性及抑制CD淋巴细胞早期活化作用。到目前为止，还未见到国内外有关鹰嘴豆芽异黄酮提取物的雌激素样活性和作为雌激素受体调节剂在治疗中老年妇女更年期综合症或预防骨质疏松的报道。
发明内容
本发明目的在于，提供一种鹰嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的药物的用途，该鹰嘴豆芽异黄酮提取物作为雌激素受体调节剂在制备预防或治疗更年期综合症及骨质疏松症中的药物及保健品的用途，为鹰嘴豆功能因子的产业开发奠定基础。本发明所述的一种鹰嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的药物的用途，该鹰嘴豆芽提取物为鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防和治疗雌激素缺失的更年期综合症中的药物的用途。该鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防雌激素缺失的更年期综合症中的保健品的用途。该鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防和治疗雌激素缺失的骨质疏松症药物中的用途。该鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防雌激素缺失的骨质疏松症保健品中的用途。本发明所述的一种鹰嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的药物的用途，其中鹰嘴豆芽提取物为鹰嘴豆异黄酮提取物，是通过发明专利201010614623. X鹰嘴豆豆芽有效部位及其制备方法和应用中获得的。该有效部位采用溶剂提取法即醇提法或水提法制备，具体操作按下列步骤进行a、将鹰嘴豆用常规方法发芽并干燥，研磨成粉，过25目筛；b、将干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积浓度为10-100%的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物，其中超声波提取温度为20-40°C，回流提取温度为60-80°C ；
C、或将新鲜鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物，其中超声波提取温度为20-60°C，回流提取温度为60-100°C ；d、将步骤b的醇提物或步骤c的水提取物用含生药量0.04g/mL，作为上柱供试液，将上柱供试液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脱，将水洗脱后的聚酰胺置于FL-3大孔树脂上部，再以浓度10% -100%乙醇洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，即可得到鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类、异黄酮类；e、再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。本发明将发明专利201010614623. X获得的鹰嘴豆芽异黄酮提取物进行了预防和治疗更年期综合症以及骨质疏松症中药物或保健品的用途的研究，是基于实验及临床研究而完成的。观察鹰嘴豆芽异黄酮提取物对卵巢切除的SD成年雌性大鼠子宫发育、血清中雌性激素及骨相关指标。结果表明鹰嘴豆芽异黄酮提取物中、高剂量明显提高了子宫湿重，增加了子宫内膜厚度以及内膜基层内腺体数量，表现出对子宫雌激素样作用。另外，鹰嘴豆芽异黄酮提取物能显著改善血清中性激素的分泌状况，提高了血清中17-β雌二醇的浓度， 同时降低了 FSH和LH分泌水平，表明鹰嘴豆芽异黄酮提取物可能对下丘脑-垂体-神经内分泌系统具有一定的调控作用，提示鹰嘴豆芽异黄酮提取物对于调节中老年妇女绝经后的内分泌状况以及改善与FSH、LH有关的潮热、心悸、皮肤干燥等更年期症状具有重要的意义。对骨代谢的影响的研究发现，中高剂量的鹰嘴豆芽异黄酮提取物显著增加骨密度和相对骨体积，增加了骨小梁厚度，降低了骨小梁之间间隙度，并且降低了破骨细胞数量，减少了骨吸，提示鹰嘴豆芽异黄酮提取物能够缓解去卵巢引起的大鼠骨损失，增加骨承载力，减少破骨细胞的骨吸收，对预防骨质疏松发生具有积极作用。
图1为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(假手术组)，黑色箭头所指内膜特异标记蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，图为100倍放大倍数。图2为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(模型组)，黑色箭头所指内膜特异标记蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，图为100倍放大倍数。图3为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(雌二醇组)，，黑色箭头所指内膜特异标记蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，图为100倍放大倍数。图4为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(鹰嘴豆芽提取物高剂量组)， 黑色箭头所指内膜特异标记蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)表达，图为100倍放大倍数。图5为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(假手术组)，棕色区域为孕激素受体(PR)的表达，图为100倍放大倍数。图6为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(模型组)，棕色区域为孕激素受体(PR)的表达，图为100倍放大倍数。图7为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(雌二醇组)，棕色区域为孕激素受体(PR)的表达，图为100倍放大倍数。图8为本发明大鼠子宫免疫组化分析组织形态学图(鹰嘴豆芽提取物高剂量组)，棕色区域为孕激素受体(PR)的表达，图为100倍放大倍数。
具体实施例方式实施例1 (鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防和治疗妇女雌激素缺失的更年期综合症的药物中的用途)鹰嘴豆芽异黄酮提取物对雌性SD大鼠子宫以及雌激素水平的影响受试药物戊酸雌二醇(Estradiol Valerate)，先灵(广州)药业有限公司出品， 批号(J20080036)，用玉米油制成悬浮液。鹰嘴豆异黄酮提取物由本实验室通过下列步骤完成a、将鹰嘴豆用常规方法发芽并干燥，研磨成粉，过25目筛；b、将干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积浓度为10-100%的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物，其中超声波提取温度为20-40°C，回流提取温度为60-80°C ；C、或将新鲜鹰嘴豆豆芽或干燥的鹰嘴豆豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物，其中超声波提取温度为20-60°C，回流提取温度为60-100°C ；d、将步骤b的醇提物或步骤c的水提取物用含生药量0. 04g/mL,作为上柱供试液，将上柱供试液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脱，将水洗脱后的聚酰胺置于FL-3大孔树脂上部，再以浓度10% -100%乙醇洗脱，收集洗脱液，合并，浓缩，即可得到鹰嘴豆豆芽有效部位总皂苷类、异黄酮类；e、再将有效部位总皂苷和异黄酮的含量分别以齐墩果酸和鹰嘴豆芽素A为标准品，用紫外分光光度法测定。通过该方法获得的异黄酮含量73. 36%，按其中所含天然植物雌激素的量进行计算和使用，分别配成不同浓度溶液，所有药物由玉米油配制，温度4°C储存备用。受试动物十周龄雌性SD 二级大鼠，购于新疆地方病防治研究所实验动物中心 (合格证号20110222)，体重220(士 IOg)。分假手术组、模型组、雌二醇组、鹰嘴豆芽异黄酮提取物低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组8只。造模除假手术组外，其余各组从大鼠腹中线剖开腹部，摘除双侧卵巢，然后手术缝合，假手术组的大鼠重复手术步骤，但不摘除卵巢。给药方法手术后，各组大鼠正常饮食2周，手术后第3周开始给药，持续5周，正常组、模型组和假手术组每日以给药组相同体积的玉米油灌胃，雌二醇组，每日灌胃给予雌二醇0.25mg/(kg.day)；鹰嘴豆芽异黄酮提取物低剂量组，灌胃200mg/(kg. day)；鹰嘴豆芽异黄酮提取物中剂量组，灌胃500mg/(kg.day)；鹰嘴豆芽异黄酮提取物高剂量组，灌胃 IOOOmg/ (kg. day)。指标观察1)子宫湿重观察各组给药5周后麻醉，剪开腹正中线，将子宫与周围完全剥离， 称重。2)免疫组化分析新鲜子宫组织用10%的PBS配制的福尔马林溶液固定后制备石蜡切片，用HE染色及免疫组化法观察组织形态及特异蛋白pS2和冊的表达情况。
3)激素测定各组给药5周后麻醉，腹腔注射，腹主动脉取血，分离血清，一 20°C贮存，采用放免方法测血清中雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)及促黄体生成素(LH)含量。数据统计学处理数据均以均值士标准差(means士s)表示，统计学处理用t检验，P < 0. 05为差异显著，P <0.01为差异极显著。实验结果鹰嘴豆芽异黄酮提取物对SD大鼠子宫重量的影响表1鹰嘴豆芽异黄酮提取物对去卵巢大鼠子宫发育的影响(means士s，η = 8)
权利要求
1.一种鹰嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的药物的用途，其特征在于该鹰嘴豆芽提取物为鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防和治疗雌激素缺失的更年期综合症中的药物的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于该鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防雌激素缺失的更年期综合症中的保健品的用途。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于该鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防和治疗雌激素缺失的骨质疏松症药物中的用途。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于该鹰嘴豆芽异黄酮提取物在制备预防雌激素缺失的骨质疏松症保健品中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种鹰嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的药物的用途，该鹰嘴豆芽提取物为鹰嘴豆芽异黄酮提取物作为雌激素受体调节剂在制备预防或治疗更年期综合症及骨质疏松症中的药物及保健品的用途，本发明经试验表明鹰嘴豆芽异黄酮提取物能直接作用于子宫，显著提高血清中雌二醇水平，能对下丘脑-垂体-神经内分泌系统具有调控作用，显著增加了卵巢切除的SD大鼠的股骨密度和相对骨体积，增加了骨小梁厚度，降低了骨小梁之间分离度，并且降低了破骨细胞数量，能够缓解去卵巢引起的大鼠股骨的骨丢失，增加了股骨的承载力，对于调节中老年妇女绝经后的内分泌状况以及改善潮热、心悸、皮肤干燥等更年期症状及骨质疏松症发生具有重要的意义，为鹰嘴豆功能因子的产业开发奠定基础。
文档编号A61K36/48GK102488740SQ201110414349
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月13日 优先权日2011年12月13日
发明者王洁, 阿吉艾克拜尔·艾萨, 阿布力米提·伊力, 陈花, 马海蓉, 高彦华 申请人:中国科学院新疆理化技术研究所