专利名称：一种红车轴草提取物及制备方法
技术领域：
本发明涉及中药领域。具体涉及红车轴草提取物及制备方法。
背景技术：
红车轴草(Trifolium.Pratense.L)为豆科(Leguminosae)多年生草本植物，又名红三叶、红花苜蓿和合三叶草，属车轴草属(Trifolium.L)。我国南北各地均有栽培，是优良饲料和牧草。红车轴草含有黄酮类物质、蛋白质、氨基酸、糖类和维生素等成分。其中异黄酮因有植物雌激素样作用和黄酮类物质的抗癌作用而格外受人关注。红车轴草中含有的异黄酮主要有鹰嘴豆芽素A(biochaninA)和B(formonetin)、染料木素(genistein)、大豆素(daidzein)等4种，这些成分是目前研究较深入的植物雌激素，对于预防乳腺癌、前列腺癌、结肠癌，改善骨质疏松和更年期症状等有一定作用并越来越广泛地应用于临床，也使之成为一种极有前途的天然保健食品。
现代药理学研究证明红车轴草的主要药理作用有(1)选择性抗痉挛、消炎和杀菌作用红车轴草在体外有抑制草履虫的作用(0.2％醇浸剂可使草履虫于30分钟内停止活动)。大豆素具有类似罂粟碱样的解除平滑肌痉挛作用，大豆苷及大豆素可以缓解高血压患者的头痛等症状。故国外民间有用其做抗疟药，亦有用于祛痰、解痉挛。治百日咳及支气管炎。其花粉对某些革兰氏阴性杆菌有抗菌作用，利用其消炎杀菌作用治疗皮肤病，如湿疹、烧伤、溃疡和牛皮癣。
(2)雌激素样作用染料木素、鹰嘴豆芽素A和B及大豆素均有雌性激素样作用，这可能是由于它们于己烯雌酚和雌二醇结构相似的缘故，而它们的活性约为己烯雌酚(diethylatilbestrol)的1/10万，为雌二醇(estradilo)的1/2万～1/50(以重量计)。以小鼠子宫重量作指标，将药粉混于饲料中喂食，比较它们的活性强度，认为大豆素的作用最强，染料木素与鹰嘴豆芽素A，而鹰嘴豆芽素B为最差。红车轴草作为一植物雌激素有其独到之处它们几乎能分布到人体每个细胞中发挥作用，当人体雌激素水平高时，可抑制激素分泌，因它能与雌激素受体结合，从而阻止了人体自身激素的结合。反之，当人体雌激素水平低时，它们能提供额外的雌激素样作用。正因如此，红车轴草在临床上即被用来治疗妇女体内雌激素水平升高的经前期综合症，又被用于治疗雌激素降低时的更年期综合症和绝经。另外，红车轴草也能治疗雌激素病如子宫肌瘤。子宫内膜异位及骨质疏松症等。
(3)抗癌作用红车轴草含高浓度异黄酮等黄酮类物质，它被认为是一种潜在抗癌物质。美国国家癌症中心于1996年将燃料木素列入肿瘤预防药物临床发展计划中，主要预防目标是前列腺癌和乳腺癌。乳腺癌病人血浆中雌激素偏高，植物雌激素对其有拮抗作用。从而抑制乳腺癌。实验表明异黄酮类物质为抗氧化剂，是自由基的强清除剂，故具抗癌效用。
目前国内外对红车轴草的研究越来越多。中国专利申请03118845.1公开了一种红车轴草提取物及制剂，该提取物采用红车轴全草醇提浓缩后的沉淀部分用酯提取获得，尽管该专利申请公开的提取物总异黄酮量可达到10～85％，但未对具体活性成分加以控制，且该提取物方法繁琐，不适合工业化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种质量稳定可靠，提取方法简便，疗效确切的红车轴草提取物。
本发明公开的红车轴草提取物是以红车轴全草为原料，经醇提、纯化后获得，采用HPLC法检测，该提取物中异黄酮苷以刺芒柄化素和染料木素的含量之和计不小于12.0％。
本发明所要解决的另以技术问题在于公开上述提取物的制备方法。
本发明红车轴草提取物的制备方法包括下列步骤取红车轴全草，粉碎，用乙醇加热回流提取，合并提取液，浓缩回收乙醇，浓缩液上大孔吸附树脂柱，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，干燥，即得。
其中所述用于提取和洗脱的乙醇浓度为5～95％v/v，纯化使用的大孔吸附树脂选自苯乙烯型或2-甲基丙烯酸酯型的大孔吸附树脂。
红车轴草含有黄酮类物质、蛋白质、氨基酸、糖类和维生素等成分，其中含有的异黄酮主要有鹰嘴豆芽素A(biochaninA)和B(formonetin)、染料木素(genistein)、大豆素(daidzein)等4种，根据红车轴草提取物中活性成分的特性，本发明确定了红车轴草质量标准标准及控制方法。
本发明确定的红车轴草提取物的质量控制方法内容包括1.采用薄层层析法定性鉴别异黄酮苷；2.采用此外分光光度法测定刺芒柄化素含量，总异黄酮以刺芒柄化素C16H12O4计，不少于19.8％；3.采用高压液相法测定刺芒柄化素和染料木素的含量，异黄酮苷以刺芒柄化素C16H12O4和染料木素C15H10O5的含量之和计，不少于12.0％。
本发明所要解决的再一技术问题在于公开上述红车轴草提取物在制备治疗骨质疏松药物中的应用。
本发明红车轴草提取物可与药用辅料制成各种医学上可接受的药物制剂，特别适用于治疗和预防由于雌激素水平低下引起的骨质疏松。
用本发明红车轴草提取物对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用进行研究1.受试药物1.1.名称红车轴草提取物1.2.提供单位上海市中药研究所植化室1.3.配制方法按5∶3的比例(重量比)，称取一定量的红车轴草提取物和药用淀粉，然后把两者放在研钵内研匀，再用0.5％的CMC配制成所需浓度的混悬液。
1.4.溶剂0.5％的CMC2.对照品阴性对照0.5％CMC阳性对照尼尔雌醇3.动物3.1.来源、种属SD雄性大鼠，由上海西普尔—必凯实验动物有限公司提供，合格证号沪动合证字152号。
3.2.体重240～260g4.剂量4.1.剂量设置按异黄酮计 低剂量200mg/kg中剂量400mg/kg高剂量800mg/kg4.2.每只动物的给药体积1ml/100g体重(每周按体重变化调整)5.给药途径灌胃6.实验方法6.1.分组及给药60只雌性大鼠，其中50只乙醚麻醉后，按常规方法切除双侧卵巢，剩下的10只大鼠做相同的手术操作，但不切除卵巢，作为假手术组(Sham)。将切除卵巢的大鼠分为模型对照组(OXV)、尼尔雌醇组(E3)和红车轴草提取物(RC，高、中、低)等5组，在手术后第10天开始灌胃给药，给药体积均为1ml/100g体重，每周按体重调整给药量，高、中、低剂量组分别每天给予200、400和800mg/kg的RC提取物，Sham和OVX组每天给予0.5％CMC，E3组给予2mg/kg的尼尔雌醇，每周一次，连续给药三个月。
6.2.骨密度测定和股骨相对体积质量测定给药结束后，处死大鼠，分离双侧股骨，剔净附着的肌肉和结缔组织，称取左侧股骨的湿重，并在自制的排水法体积测定装置上测定其体积，计算相对体积质量值；测定右侧股骨的骨密度。
6.3.子宫重量系数测定取出子宫，轻挤出子宫腔内的液体，然后称取重量，它和自身的体重之比即为子宫重量系数。
6.4.统计方法所有计量结果均以平均值±标准误表示，并进行组间t检验。
7.实验结果见表1、2。
雌性大鼠切除卵巢后，体重增加长加快，子宫重量减轻，骨密度降低，与模型对照组相比，尼尔雌醇组和红车轴草提取物组的体重增加值减小，子宫重量系数值升高，骨密度增加，但股骨相对体积质量值变化不明显。
表1 RC对去卵巢大鼠体重增长百分率和子宫重量的影响
与OVX组比较*P＜0.05***P＜0.001；与Sham组比较###P＜0.001表2 RC对去卵巢大鼠骨密度的影响
与OVX组比较*P＜0.05；与Sham组比较###P＜0.0018.讨论卵巢是产生雌激素的重要器官，女性到了更年期以后，由于卵巢功能的减退，导致体内雌激素水平急剧下降，从而产生一些包括肥胖、盗汗、心烦、失眠和骨质疏松等在内的综合症，针对这一情况，临床上主要以补充雌激素为主的方法。目前临床上使用的雌激素大多通过合成而来，文献报道，长期应用此类雌激素，具有产生子宫癌和乳腺癌的危险，而应用从天然植物中提取的雌激素类产物，能减少这一危险性的发生，这引起了人们的极大关注，越来越多的人开始从事这方面的研究。
红车轴草是豆科车轴草属植物，文献报道它富含异黄酮类化合物，这是一类植物雌激素类成分，近年来，对植物雌激素的研究报道很多，表明它具有弱雌激素样的生物活性，对绝经后骨质疏松具有一定的预防作用。本发明采用切除雌性大鼠卵巢的方法模拟女性更年期后的情况，研究了红车轴草提取物对大鼠骨密度和子宫重量的影响作用；结果发现红车轴草提取物对雌激素水平低下引起的肥胖、子宫萎缩和骨密度降低有一定对抗作用，这种作用可能和它的雌激素样活性有关，详细作用机理有待于作进一步的研究。
9.结论综上所述，可以得出以下结论红车轴草提取物具有弱雌激素样作用，对去卵巢引起的大鼠骨质疏松症具有一定的防治作用。
本发明红车轴草提取物制备简单且质量控制方法完善，保证了提取物所制备的制剂剂量准确，疗效可靠，特别适用于大规模工业化生产。
图1 红车轴草提取物薄层色谱图样品1.供试品20030529-1
2.供试品20030529-23.供试品20030529-34.刺芒柄花素、染料木素混和对照品5.刺芒柄花素对照品6.染料木素对照品图2刺芒柄花素标准曲线y＝5194.6x+25.788R＝0.999914图3染料木素标准曲线y＝5440x+48.709R＝0.999具体实施方式
实施例1 红车轴草质量检测方法的建立一.鉴别参照黄酮苷元的鉴别方法，取本品25mg，加70％乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液和正文[含量测定]项下的异黄铜苷对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(10∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；硅胶G薄层板上，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点，见图1。
二.紫外分光光度法测定红车轴草提取物中总异黄酮的含量1.材料与仪器岛津UV-2401紫外分光光度仪、刺芒柄化素对照品(陕西慧科植物开发有限公司提供，纯度90％)，样品红车轴草提取物(批号20021213、20030529-1、20030529-2、20030529-3)、试剂均为AR级。
2.标准曲线根据异黄酮的性质，选用刺芒柄化素作为测定总异黄酮的对照品。
精密称取刺芒柄化素对照品5.2mg，置50ml量瓶中，用水饱和的正丁醇溶解并稀释至刻度，精密吸取上述溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml，分别置25ml量瓶中，各加70％乙醇至刻度，摇匀。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，分别在249.5nm的波长处依法测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程y＝0.0053+1.9524x(r＝0.9999)，样品在0mg～0.52mg之间有良好的线性关系。
3.供试品纯化方法考察选择批号为20021213的样品作为方法学研究；参考异黄酮的提取、分离方法，选用氧化铝层析作为纯化方法。
氧化铝用量取供试品45mg，精密称定，加5ml水饱和的正丁醇使溶解，加于不同用量的中性氧化铝柱(100～120目，内径15mm)上，用水饱和正丁醇洗脱，收集正丁醇洗脱液至50ml，精密吸取该溶液1ml，置25ml量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀，在249.5nm处测定紫外吸收值，结果(表4)表明，氧化铝用量14g，供试品即达到纯化。根据实际操作，氧化铝用量定为15g。
表4氧化铝用量
4.重复性试验取样品，一式5份，依正文方法测定总异黄酮，结果见表5。
表5重复性试验(n＝5)
5.回收率试验取样品适量，加入一定量的刺芒柄化素对照品，依法测定，结果见表6。
表6刺芒柄化素加样回收率
6.样品测定取样品，批号(1)20030529-1、(2)20030529-2、(3)20030529-3，依法测定总异黄酮含量，结果见表7。
表7样品测定
7.含量限度现根据三批样品的含量数据，按平均值(28.28％)的70％，暂定本品按干燥品计算，含总异黄酮以刺芒柄化素(C16H12O4)计，不得少于19.8％。
三.高效液相色谱法测定红车轴草中异黄酮苷的含量1.仪器与试药安捷伦HP1100高效液相色谱仪；刺芒柄化素对照品(陕西慧科植物开发有限公司提供，纯度90％)，染料木素对照品(陕西慧科植物开发有限公司提供，纯度98％)；样品红车轴草提取物(批号20030529-1、20030529-2、20030529-3)、；试剂甲醇、乙腈(色谱级)，磷酸、盐酸(分析纯)，水(重蒸去离子)。
2.色谱条件与系统适用性试验色谱柱Kromasil C18 4.6×150mm，5um填料；柱温25℃；流动相乙腈-0.1％磷酸(35∶65)，流速1.0ml/min，检测波长为254nm。理论板数按刺芒柄化素峰计算应不低于2500。
3.线性关系分别精密称取刺芒柄化素、染料木素对照品适量，加甲醇-乙腈(1∶1)制成每1ml各含0.25mg、0.13mg的对照品混合溶液。分别精密吸取对照品溶液1μl，2μl，5μl，8μl，10μl，12μl，15μl进样(n＝3)，分别以刺芒柄化素和染料木素进样量浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，结果(图2、图3)表明，刺芒柄化素在0.25～3.75μg，染料木素在0.13～1.95μg范围内线性关系良好。
4.样品测定取样品批号(1)20030529-1、(2)20030529-2、(3)20030529-3，依法测定异黄酮苷含量，结果见表8。
表8样品测定
5.含量限度现根据三批样品的含量数据，按平均值(17.27％)的70％，暂定本品按干燥品计算，含总异黄酮以刺芒柄化素(C16H12O4)和染料木素(C15H10O5)的含量之和计，不得少于12.0％。
四.水分测定取样品批号(1)20030529-1、(2)20030529-2、(3)20030529-3，按中国药典2000年版一部附录ⅨH第一法测定，结果见表9。
表9水分测定
根据三批样品的水分数据，按最高值(6.52％)计，暂定水分不得大于7.0％。
实施例2红车轴草质量控制方法本品为豆科植物红车轴草Trifolium pratense L.的花序及带花枝叶经加工制成的提取物。
制法取红车轴草，粉碎，用70％～80％的乙醇加热回流提取，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量，加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，喷雾干燥；或回收乙醇，浓缩成稠膏，真空干燥，粉碎，即得。
性状本品为浅棕褐色至棕褐色的粉末；味微甘。
鉴别取本品25mg，加70％乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液和[含量测定]项下的异黄酮苷对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(10∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查
分水不得过7.0％(中国药典2000年版附录一部IXH第一法)。
重金属不得过百万分之二十(中国药典2000年版附录一部IXE)。
炽灼残渣不得过0.8％(中国药典2000年版附录一部IXJ)。
含量测定总异黄酮对照品溶液的制备精密称取刺芒柄化素对照品5mg，置50ml量瓶中，加水饱和的正丁醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含刺芒柄化素0.1mg)。
标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml的量瓶中，各加70％乙醇至刻度，摇匀。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，分别在249.5nm的波长处依法测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本品45mg，精密称定，加5ml水饱和的正丁醇使溶解，加于中性氧化铝柱(100～120目，15g，内径15mm)上，用水饱和的正丁醇洗脱，收集洗脱液50ml，摇匀。精密量取1ml，置25ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，在249.5nm的波长处依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中刺芒柄化素的重量(mg/ml)，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总异黄酮以刺芒柄化素(C16H12O4)计，不得少于19.8％。
异黄酮苷照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(35∶65)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按刺芒柄化素峰计算应不低于2500。
对照品溶液的制备分别精密称取刺芒柄化素、染料木素对照品适量，加甲醇-乙腈(1∶1)制成每1ml各含0.2mg、0.1mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品25mg，精密称定，置平底烧瓶中，加甲醇20％盐酸(1∶3)混合液40ml，置水浴中加热回流2小时，静置冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含异黄酮苷以刺芒柄化素(C16H12O4)和染料木素(C15H10O5)的含量之和计，不得少于12.0％。
贮藏密封，闭光。
实施例3取红车轴草100g，粉碎，用20％的乙醇加热回流提取3次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量加于已处理好的大孔吸附树脂柱(D101型大孔树脂)上，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，喷雾干燥，即得，总异黄酮含量20.3％，异黄酮苷以刺芒柄化素(C16H12O4)和染料木素(C15H10O5)的含量之和计为13.1％，收率6.5％。
实施例4取红车轴草100g，粉碎，用80％的乙醇加热回流提取3次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量加于已处理好的大孔吸附树脂柱(D101型大孔树脂)上，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，喷雾干燥，即得，总异黄酮含量28.3％，异黄酮苷以刺芒柄化素(C16H12O4)和染料木素(C15H10O5)的含量之和计为16.8％，收率2.2％
权利要求
1.一种红车轴草提取物，其特征在于该提取物是以红车轴全草为原料，经醇提、纯化后获得，采用HPLC法检测，该提取物中异黄酮苷以刺芒柄化素和染料木素的含量之和计不小于12.0％。
2.一种权利要求1所述的红车轴草提取物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤取红车轴全草，粉碎，用乙醇加热回流提取，合并提取液，浓缩回收乙醇，浓缩液上大孔吸附树脂柱，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，干燥，即得。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于其中所述用于提取和洗脱的乙醇浓度为5～95％v/v。
4.据权利要求2所述的制备方法，其特征在于其中所述纯化使用的大孔吸附树脂选自苯乙烯型或2-甲基丙烯酸酯型的大孔吸附树脂。
5.一种权利要求1所述的红车轴草提取物的质量控制方法，其特征在于其中所述的质量控制方法包括1)采用薄层层析法定性鉴别异黄酮苷；2)采用紫外分光光度法测定刺芒柄化素含量，总异黄酮以刺芒柄化素C16H12O4计，不少于19.8％；3)采用高压液相法测定刺芒柄化素和染料木素的含量，异黄酮苷以刺芒柄化素C16H12O4和染料木素C15H10O5的含量之和计，不少于12.0％。
6.根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于其中所述的薄层层析法定性鉴别异黄酮苷的方法为取按权利要求2制得的红车轴草提取物25mg，加70％乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法，吸取上述供试品溶液和异黄酮苷对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸＝10∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；其中对照品溶液的制备为分别精密称取刺芒柄化素、染料木素对照品适量，加甲醇-乙腈(1∶1)制成每1ml各含0.2mg、0.1mg的混合溶液，即得。
7.根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于其中所述的紫外分光光度法测定总异黄酮含量方法包括对照品溶液的制备精密称取刺芒柄化素对照品5mg，置50ml量瓶中，加水饱和的正丁醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含刺芒柄化素0.1mg；标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml的量瓶中，各加70％乙醇至刻度，摇匀。照中国药典2000年版一部附录V B分光光度法，分别在249.5nm的波长处依法测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法取红车轴草提取物45mg，精密称定，加5ml水饱和的正丁醇使溶解，加于内径为15mm的100～120目15g的中性氧化铝柱中，用水饱和的正丁醇洗脱，收集洗脱液50ml，摇匀；精密量取1ml，置25ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，在249.5nm的波长处依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中刺芒柄化素的重量mg/ml，计算，即得；按干燥品计算，含总异黄酮以刺芒柄化素C16H12O4计，不得少于19.8％。
8.根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于其中所述的采用高压液相法测定异黄酮苷含量的方法包括色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸＝35∶65为流动相；检测波长为254nm。理论板数按刺芒柄化素峰计算应不低于2500；对照品溶液的制备分别精密称取刺芒柄化素、染料木素对照品适量，加甲醇-乙腈＝1∶1制成每1ml各含0.2mg、0.1mg的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取红车轴草提取物25mg，精密称定，置平底烧瓶中，加甲醇∶20％盐酸＝1∶3混合液40ml，置水浴中加热回流2小时，静置冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用孔径为0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；按干燥品计算，含异黄酮苷以刺芒柄化素C16H12O4和染料木素C15H10O5的含量之和计，不得少于12.0％。
9.根据权利要求1所述红车轴草提取物在制备治疗骨质疏松药物中的应用，其特征在于其中所述的药物用于治疗和预防由于雌激素水平低下引起的骨质疏松。
全文摘要
本发明涉及红车轴草提取物及制备方法。本发明公开的红车轴草提取物是以红车轴全草为原料，经醇提、纯化后获得，采用HPLC法检测，该提取物中异黄酮苷以刺芒柄化素和染料木素的含量之和计不小于12.0％。本发明还公开了红车轴草质量控制方法。本发明红车轴草提取物制备简单且质量控制方法完善，保证了提取物所制备的制剂剂量准确，疗效可靠，特别适用于大规模工业化生产。
文档编号A61K31/7048GK1683381SQ20041001774
公开日2005年10月19日 申请日期2004年4月16日 优先权日2004年4月16日
发明者王玉芹, 周健, 法洋, 奚静芳 申请人:上海市中药研究所