专利名称：用于治疗免疫病症的包含益生菌的组合物的制作方法
用于治疗免疫病症的包含益生菌的组合物本发明涉及用于治疗与免疫系统的改变有关的病症的含益生菌的组合物。特别是，本发明涉及使用选定的益生菌在制备用于治疗特应性皮炎等过敏症的组合物中的应用。众所周知，特应性皮炎(为简便起见以下称为AD)是一种慢性的复发性皮肤病症，该病始于新生儿时期或儿童期，并且可能持续到成年。因此，将AD的阶段划分为新生儿期、婴幼儿期和成人期。AD是一种炎性皮肤病，与哮喘和过敏性鼻炎类似，其与产生白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-5(IL-5)的T淋巴细胞的局部浸润有关。众所周知，IL-4调节辅助性T细胞2(Th2)的表型的发展，随后导致免疫球蛋白(Ig)超量产生和嗜酸性粒细胞增多。在80% 90%的患有特应性皮炎的患者中显示出血浆IgE水平升高，并且对食物和吸入性过敏原的皮肤测试呈阳性。AD是基于遗传因素和免疫因素的，尽管有大量的外部因素可以改变其表达。在60%的AD的情况中，可能表现出特应性过敏家族史；换言之，如果父母一方具有特应性过敏的体质，那么存在60%的可能性子女将具有特应性过敏症。特应性过敏症(atopy)是在接触、摄入、接种或吸入过敏原后发展局部过敏反应的遗传易感性。AD的病因学中要考虑的免疫因素是对食物过敏、接触过敏原和刺激物而诱发的过敏、气源性致敏原诱发的过敏以及免疫调节异常。在大量针对治疗和/或预防过敏症或皮肤炎症、特别是针对治疗特应性皮炎的治疗中，许多以药物为基础的治疗非常突出。以药物为基础的治疗存在一些限制其应用的禁忌症。此外，这些药物对于某些类别的患者来说看起来似乎没有良好的耐受性。然而，目前尚不存在具有绝对且明确的疗效的治疗。仅仅可能是针对过敏的发作采取一些预防措施，或是在必要时采取一些补救措施来减轻恼人的症状，例如皮肤瘙痒及发红。因而，仍然需要一种治疗，其不会表现出对以药物为基础的治疗的限制，而且能够应用于所有类别的患者。特别是，仍然需要一种治疗，其能够用于对抗过敏的发作和皮肤炎症的发展，和/或减轻恼人症状，例如皮肤组织的发红、瘙痒以及湿疹。申请人:在经过深入的研究工作之后已经成功地选定了特定的益生菌菌株，从而针对上述需求提供了答案。本发明的主题是包含至少一种益生菌培养物的组合物，正如在所附的独立权利要求中所要求。本发明的主题还涉及至少一种益生菌培养物的应用，正如在所附的独立权利要求中所要求。本发明的其他优选实施方式将从随后的详细描述中通过实例的方式被阐明，因而不会限制本发明的范围。
申请人将其目标设定为选定特定的细菌菌株以便于评估其对于患有中度或重度AD的患者的临床过程及生活质量的效果，并确定其对临床及免疫学参数的影响。另外，申请人将其目标设定为选定能被患者耐受并能肠道定殖的特定细菌菌株。使用特应性皮炎(以下表示为AD)的标准化严重性指数(SC0RAD指数=SCORingAtopic Dermatitis)来评估对中度/重度AD的诊断。所述指数是本领域中的技术人员已知的。已发现，本发明的细菌菌株具有很高的免疫调节效果，因而可用于治疗与免疫系统的改变有关的病症。在进行深入的研究工作之后，申请人从许多被测试的菌株中选定了以下的益生菌菌株I)唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775，由意大利诺瓦拉的益生菌股份公司保藏于2009年7月23日；2)短双歧杆菌(BR03)DSM 16604，由意大利诺瓦拉的益生菌股份公司保藏于2004年7月20日；
3)戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980，由意大利诺瓦拉的益生菌股份公司保藏于2008年11月14日；4)嗜热链球菌(FP4)DSM 18616，由意大利诺瓦拉的Mofin Srl股份公司保藏于2006年9月13日；5)干酪乳杆菌鼠李糖亚种(LR04)DSM 16605，由意大利诺瓦拉的益生菌股份公司保藏于2004年7月20日；和6)嗜酸乳杆菌(LA02)DSM 21717，由意大利诺瓦拉的益生菌股份公司保藏于2008年8月6日。以上所列的培养物均根据布达佩斯条约保藏在德国的德国微生物菌种保藏中心(DSMZ)。在本发明的上下文中，以上所列的益生菌的培养物可以是活细菌、死细菌或细胞成分、细胞提取物或其裂解物的形式。在优选的实施方式中，所述组合物包含至少一种细菌培养物以用作能够调节免疫系统的免疫调节组合物。表述“免疫调节组合物”是指在能够刺激/诱导免疫系统的若干响应的意义上能够调节免疫系统的组合物，例如，通过产生特定的细胞因子来干预使其更具反应性。有利的是，所述免疫调节组合物诱导免疫系统产生I型细胞因子。有利的是，细菌菌株和相应的细菌培养物已证明能够改善临床及免疫学参数。特别是，已经观察到其能够完成以下各项I)明显改善SCORAD指数和DLQI ；2)减少微生物移位(血浆LPS水平)并激活⑶8+T淋巴细胞；3)增大总调节性T淋巴细胞(Treg)的百分比及表达标记物TLR2-和TLR4的该淋巴细胞的百分比；4)改善 Thl/Th2 和 Thl7/Treg 的比率。因此，本发明的组合物(免疫调节组合物)能够预防、减轻和/或治疗与免疫系统的改变有关的病症，如过敏症、特应性过敏症、过敏性鼻炎、食物过敏、特应性皮炎、湿疹、哮喘或免疫缺陷。根据一个实施方式，本发明涉及包含至少一种益生菌培养物的组合物，或者作为另一种选择，由至少一种益生菌培养物构成的组合物，所述培养物选自包括唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775、短双歧杆菌(BR03) DSM 16604 和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980 的培养物的组、或作为另一种选择由它们构成的组。在优选的实施方式中，所述组合物包含唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775和短双歧杆菌(BR03)DSM 16604的培养物，或作为另一种选择，所述组合物由它们构成。在优选的实施方式中，所述组合物包含以下培养物或作为选择由以下培养物构成所述唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775的培养物和所述短双歧杆菌(BR03)DSM 16604的培养物并结合至少一种其他的培养物，该培养物选自包括以下菌株的组或作为选择由以下菌株构成的组戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980、嗜热链球菌(FP4)DSM 18616、干酪乳杆菌鼠李糖亚种(LR04)DSM 16605和嗜酸乳杆菌(LA02)DSM 21717。在优选的实施方式中，所述组合物包含以下菌株的培养物或作为选择由以下菌株的培养物构成唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775、短双歧杆菌(BR03)DSM 16604和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980。根据另一个优选的实施方式，本发明涉及使用至少一种益生菌的培养物来制备能够预防、减轻和/或治疗与免疫系统的改变有关的病症(例如过敏症、特应性过敏症、过敏性鼻炎、食物过敏、特应性皮炎、湿疹、哮喘或免疫缺陷)的组合物，所述培养物选自包括唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775、短双歧杆菌(BR03)DSM 16604和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM21980的培养物的组，或作为选择由其构成的组。
根据另一个优选的实施方式，本发明涉及包含唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775和短双歧杆菌(BR03)的所述培养物的组合物的应用、或作为另一种选择由所述培养物构成的组合物的应用。优选的是，本发明涉及所述唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775培养物和所述短双歧杆菌(BR03)DSM 16604培养物并结合至少一种其他培养物在制备用于预防和/或治疗特应性皮炎的组合物中的应用，所述至少一种其他培养物选自包括戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM21980、嗜热链球菌(FP4)DSM 18616、干酪乳杆菌鼠李糖亚种(LROH)DSM 16605和嗜酸乳杆菌(LA02)DSM 21717 的组。根据另一个优选的实施方式，本发明涉及包含唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775、短双歧杆菌(BR03)和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980的所述培养物的组合物(或作为另一种选择由所述培养物构成的组合物)的应用。有利的是，所述组合物包含重量比为1:3 3:1、优选1:1的唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775和短双歧杆菌(BR03)DSM 16604的组合物(或作为另一种选择，由其构成的组合物)。有利的是，所述组合物包含重量比优选为1:1:1的唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775、短双歧杆菌(BR03)DSM 16604和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980的组合物(或作为另一种选择，由其构成的组合物)。本发明的细菌培养物可以被视为“活性组分”，其可以以预定的比例与生理学和/或药学上可接受的赋形剂共混。为了增强其活性，该活性组分可以以根据本领域中的技术人员已知的技术制备的固体状态的组合物的形式系统施用，有利的是将其口服施用。在优选的实施方式中，所述组合物是冻干剂、粉剂、粒剂、片剂、软凝胶胶囊剂或悬浮剂的形式。 本发明的组合物可以是药物组合物、膳食组合物、营养组合物或保健组合物。本发明的组合物还可以包含具有益菌素活性的食物纤维，例如低聚果糖(FOS)、菊粉和部分水解的瓜尔胶(PHGG)。本发明的药物组合物、膳食组合物、营养组合物或保健组合物包含至少一种上述益生菌培养物。该成分的最终浓度为I X 107CFU/g组合物 I X 10nCFU/g组合物，优选为
IX 108CFU/g 组合物 I X 1010CFU/g 组合物。包含选定的益生菌的本发明的组合物可用作能够调节免疫系统的免疫调节组合物。所述组合物能够治疗和/或预防与下列细胞因子的功能的改变有关的病症Thl (IFN- Y 和 IL-12)和 Th2 (IL-4、IL-5 和 IL-10)。此外，所述组合物能够诱导免疫系统，诱导免疫系统产生I型细胞因子。因此，本发明的组合物可有效应用于预防和/或治疗与免疫系统的改变有关的病症，特别是用于预防和/或治疗过敏症、特应性过敏症、过敏性鼻炎、食物过敏、特应性皮炎、湿疹、 哮喘或免疫缺陷。有利的是，本发明的组合物可有效应用于预防和/或治疗特应性皮炎。有利的是，受到特应性皮炎AD影响的患者摄入包含唾液乳杆菌(LSOl) DSM22775的培养物和短双歧杆菌(BR03) DSM 16604的培养物(浓度为I X 107CFU/g I X 10nCFU/g,优选I X 109CFU/g)的益生菌组合物后，确定其SCORAD值减小(较低的SCORAD值表明生活
质量更佳)。此外，施用所述益生菌组合物12至24周、优选16周则能够减少/阻断细胞因子IL-4的分泌。实验部分(I)申请人:测试了全部六种上文所述的菌株。进行第一个临床研究来测试包含唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775的培养物和短双歧杆菌(BR03)DSM 16604的培养物的组合物。一组40个患有中度/重度AD的患者(男性和女性，年龄为18至55岁)被随机(1:1)分成两组。使用标准化严重性指数(SC0RAD指数=SCORing Atopic Dermatitis)来评估中度/重度AD的诊断。所述指数是本领域的技术人员已知的。TO表示作为治疗起始点的时间O点，而T16表示16周的治疗周期。在T16时进行检验，进行SCORAD并取样。A组用包含浓度为IX IO9CFU(相当于O. Olg)的唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775的培养物和短双歧杆菌(BR03)DSM 16604的培养物的组合物治疗。将两种培养物与Ig玉米淀粉混合以得到在袋中的1. Olg最终组合物。A组的20名患者每天接受2小袋，持续16周。
B组用(仅)Ig玉米淀粉代表的安慰剂进行治疗。B组的20个患者每天接受2小袋安慰剂，持续16周。测试以下细胞因子Thl(IFN-y和 IL-12)和 Th2 (IL-4、IL-5 和 IL-10)。仔细收集并分析40个患者的所有数据。
图1显示了 TO和T16时的SCORAD指数的直方图。得到的结果表明组A的20个患者摄入包含浓度为lX109CFU/g的唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775的培养物和短双歧杆菌(BR03)DSM 16604的培养物的益生菌组合物后确定在受到AD侵袭的患者中其SCORAD值减小(较低的SCORAD值表明生活质量更佳)。 此外，施用所述益生菌组合物16周能够阻断所考虑的细胞因子IL-4的分泌，其平均值与(患者)招募时获得的值相当。不过，相反的是，施用安慰剂不能阻断细胞因子IL-4的分泌，在16周的治疗后其明显增多(疾病进展)。对其中包括唾液乳杆菌(LS01) DSM 22775的培养物和短双歧杆菌(BR03) DSM16604的培养物等的细菌组进行一系列的临床前体外研究。对比受测试细菌菌株的免疫调节能力的临床前体外研究证明，唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775的培养物和短双歧杆菌(BR03)DSM 16604的培养物显示出优异的诱导I型细胞因子的产生的能力。还测试了细菌戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980、嗜热链球菌(FP4)DSM 18616、干酪乳杆菌鼠李糖亚种(LR04)DSM 16605和嗜酸乳杆菌(LA02)DSM 21717。菌株唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775的培养物在体外展现出诱导了极强的前Thl细胞因子的分布。此外，在体内研究中测试了菌株戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980、嗜热链球菌(FP4)DSM 18616、干酪乳杆菌鼠李糖亚种(LR04)DSM 16605和嗜酸乳杆菌(LA02)DSM21717的全部培养物对PBMC的IL-12合成的诱导的能力。IL-12是Thl型细胞因子，其代表在治疗过敏症和其他过敏性病症时的关键要素。举例来说，在PBMC上测试的戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980的数据据报道如下Th-l(pg/ml)=l. 754 ;Th_2 (pg/ml) =326 ；Thl/Th2=5. 38。实验部分(II)申请人:使用包含培养物唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775和短双歧杆菌(BR03)的组合物进行了第一次临床研究，并使用包含培养物唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775、短双歧杆菌(BR03)和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980的组合物进行了第二次临床研究。因为所述第二次临床研究以相同的方法进行，为简便起见，仅报道所述第一次临床研究的细节。两次临床研究(第一次和第二次)给出了类似的结果。申请人:进行了所述第一次临床研究(随机、双盲，针对受到重度或中度特应性皮炎影响的患者)，从而评估施用两种益生菌菌株(即，保藏在DSMZ的保藏号为DSM 22775的唾液乳杆菌(LSOl)和保藏在DSMZ的保藏号为DSM 16604的短双歧杆菌(BR03))的临床功效。材料和方法招募48个受到特应性皮炎(以下称为AD)影响的患者进行研究。他们的特征显示在表I中。
表I
权利要求
1.一种含有至少一种益生菌培养物的组合物，所述组合物用于治疗与免疫系统的改变有关的病症，所述培养物选自包括以下的保藏在德国微生物菌种保藏中心(DSMZ)的细菌培养物的组唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775，保藏于2009年7月23日；短双歧杆菌(BR03)DSM 16604，保藏于2004年7月20日；戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980，保藏于2008年11月14日；嗜酸链球菌(FP4)DSM 18616，保藏于2006年9月13日；干酪乳杆菌鼠李糖亚种(LR04)DSM 16605，保藏于2004年7月20日；和嗜酸乳杆菌(LA02)DSM 21717，保藏于2008年8月6日。
2.如权利要求1所述的应用的组合物，所述组合物用于预防性和/或救治性治疗与免疫系统的改变有关的病症，所述病症选自包括过敏症、特应性过敏症、过敏性鼻炎、食物过敏、特应性皮炎、湿疹、哮喘或免疫缺陷的组。
3.如权利要求1或2所述的应用的组合物，所述组合物用于预防性和/或救治性治疗特应性皮炎。
4.如权利要求1 3中任一项所述的应用的组合物，其中，所述组合物包含至少一种益生菌培养物，所述益生菌选自包括唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775、短双歧杆菌(BR03)DSM16604和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980的组。
5.如权利要求4所述的应用的组合物，其中，所述组合物由唾液乳杆菌(LSOl)DSM22775、短双歧杆菌(BR03)DSM 16604和戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980构成。
6.如权利要求4所述的应用的组合物，其中，所述组合物由唾液乳杆菌(LSOl)DSM22775和短双歧杆菌(BR03)DSM 16604构成。
7.如权利要求1 6中任一项所述的应用的组合物，其中，所述细菌培养物以活细菌、死细菌或细胞成分、细胞提取物或其裂解物的形式存在于所述组合物中。
8.如权利要求1 7中任一项所述的应用的组合物，其中，所述组合物是用于口服施用的固体形式。
9.如权利要求1 8中任一项所述的应用的组合物，其中，所述益生菌的培养物以包含I X 107CFU/g组合物 I X 10nCFU/g组合物、优选为I X 108CFU/g组合物 I X 1010CFU/g组合物的浓度存在。
10.如权利要求1 9中任一项所述的应用的组合物，其中，所述组合物还包含具有益菌素活性的食物纤维，其选自低聚果糖(FOS)、菊粉和部分水解的瓜尔胶(PHGG)。
11.如权利要求1 10中任一项所述的应用的组合物，其中，所述组合物是药物组合物、膳食组合物、营养组合物或保健组合物。
12.至少一种益生菌培养物在治疗与免疫系统的改变有关的病症中的应用，所述培养物选自包括以下的保藏在德国微生物菌种保藏中心(DSMZ)的细菌培养物的组唾液乳杆菌(LSOl)DSM 22775，保藏于2009年7月23日；短双歧杆菌(BR03)DSM 16604，保藏于2004年7月20日；戊糖乳杆菌(LPSOl)DSM 21980，保藏于2008年11月14日；嗜酸链球菌(FP4)DSM 18616，保藏于2006年9月13日；干酪乳杆菌鼠李糖亚种(LR04)DSM 16605，保藏于2004年7月20日；和嗜酸乳杆菌(LA02)DSM 21717，保藏于2008年8月6日。
13.如权利要求12所述的应用，其中，所述组合物用于预防性和/或救治性治疗与免疫系统的改变有关的病症，所述病症选自包括过敏症、特应性过敏症、过敏性鼻炎、食物过敏、特应性皮炎、湿疹、哮喘或免疫缺陷的组。
14.如权利要求13所述的应用，其中，所述组合物用于预防性和/或救治性治疗特应性皮炎。
15.如权利要求12 14中任一项所述的应用，其中，所述组合物如权利要求4 11中任一项所述。
全文摘要
本发明涉及用于治疗与免疫系统的改变有关的病症的含益生菌的组合物。特别是，本发明涉及选定的益生菌在制备用于治疗如特应性皮炎等过敏症的组合物中的应用。
文档编号A61K35/74GK103037876SQ201180019385
公开日2013年4月10日 申请日期2011年3月7日 优先权日2010年3月8日
发明者G·莫格纳, G·P·斯特罗齐, L·莫格纳, L·德拉格 申请人:益生菌股份公司