用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂的制作方法

专利名称：用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂 。
背景技术：
近年来，光暴露如阳光照射对皮肤的影响正成为严重的世界问题。特别地，在美国、欧洲和澳大利亚，皮肤癌发病率的增加已成为严重的问题。皮肤癌增加的因素之一是由于臭氧层被氯氟烃破坏引起的日常生活中紫外线暴露的量日益增加。当今的世界中，不可能避免光暴露导致的形成异常皮肤细胞的风险，特别是光致癌的风险(即，光暴露如紫外线暴露诱导的皮肤癌)。
传统上，用手术治疗、化疗和放疗组合治疗皮肤癌。但是，取决于皮肤癌的检测时机和症状的程度，皮肤癌通常可能未被有效治疗，并且治疗可能产生相当的日常生活负担。 这些问题显著地降低了个体的生活质量(QOL)。因此，强烈需要建立预防皮肤癌发生的方法。
传统上，对紫外线导致的皮肤癌的预防通过已知方法来进行，其中，使用含有紫外线吸收剂(如甲氧基肉桂酸辛酯、丁基甲氧基二苯甲酰甲烷和二苯甲酮(benzophenone)) 和紫外线散射剂(如二氧化钛和氧化锌)的外用药来保护皮肤抵挡紫外线。
但是，虽然紫外线吸收剂和紫外线散射剂能预防紫外线暴露，有报道称这些试剂具有不利影响，例如皮肤刺激(irritation)。换句话说，虽然这些试剂能抑制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成，但这些试剂具有由于接触性刺激等而导致病症的潜势。
此外，含有上述成分的这些药物必须在紫外线暴露之前应用到皮肤上，因为目的是预防皮肤对紫外线的暴露。因此，在紫外线吸收剂和紫外线散射剂的情况下，如果使用者忘记将这些试剂应用至皮肤或者由于出汗等原因这些试剂从皮肤上被移除时，就不能预防皮肤的紫外线暴露，导致诱导DNA损伤。所以，不能避免光暴露导致的形成异常皮肤细胞的风险。
因此，如果可通过对皮肤没有不利影响的成分抑制皮肤组织中异常细胞的形成， 甚至当皮肤直接暴露给阳光例如紫外光时也可抑制的话，这将是抵挡异常皮肤细胞形成的有效预防性手段，其是用紫外光吸收剂或紫外光散射剂无法实现的。在这些情况下，存在对开发能遏制皮肤组织中光暴露导致的异常皮肤细胞的形成且不导致皮肤刺激等的预防性试剂的强烈需求。
同时，嘌呤核酸，例如磷酸腺苷具有下述效果保湿和预防或减轻皱纹(见专利文献I);预防或减轻色素沉着(见专利文献2);促进胶原产生(见专利文献3)等等，并且已经作为对皮肤具有化妆品和药物有益效果的成分引起关注。
此外，已知一些关于嘌呤核酸的抗癌效果的文献，其中调研了对化学物质诱导的癌细胞生长的遏制(见非专利文献I和2)。但是，这些调研没有实际验证嘌呤核酸对阳光例如紫外光导致的癌细胞的效果。仅通过腹腔给药研究了其效果，这并非使用者易于利用的。
如上文所述，对于光致癌和(皮肤)外用嘌呤核酸之间的关系还没有进行过研究， 嘌呤核酸外用时如何影响对光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的遏制、或对光致癌的预防或治疗是完全未知的。
引用列表
专利文献
PTL I :日本未审查的专利公开No. 2006-225271
PTL I :日本未审查的专利公开No. 2006-206575
PTL I W0 2005/34902
非专利文献
NPL I Cancer Letters 6(1979)pp. 291-300
NPL 2 Euro. J. Cancer Clin. Oncol. Vol. 24(1988)pp. 1491-1497发明内容
本发明的一个目的是提供用于遏制光暴露如紫外光暴露导致的异常皮肤细胞形成(特别地，皮肤癌的发展)的试剂。
本发明的发明人进行了深入的研究，力图实现上述目的，并且发现，嘌呤核酸，例如磷酸腺苷，可降低光暴露导致的皮肤细胞中的DNA突变，并且施加遏制由光暴露导致的异常皮肤细胞形成的效果，特别地，预防光致癌的效果，这通过诱导被突变的细胞的凋亡而实现；并且，嘌呤核酸当在光暴露之前和之后应用至皮肤时均可有效抑制或预防光暴露导致的异常皮肤细胞的形成，特别地，皮肤癌的发展。本发明通过进一步的研究基于上述发现而完成。
特别地，本发明提供了下文所述的发明。
第I项一种嘌呤核酸，用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成，其中所述嘌呤核酸是外用的。
第2项如第I项所述的嘌呤核酸，其是选自单磷酸腺苷及其盐构成的组中的至少一个成员。
第3项如第I或2项所述的嘌呤核酸，其中对异常皮肤细胞的形成的遏制伴随DNA 修复或对DNA突变的遏制。
第4项如第I 3项中任一项所述的嘌呤核酸，其中对异常皮肤细胞的形成的遏制伴随诱导凋亡。
第5项如第I 4项中任一项所述的嘌呤核酸，其中对异常皮肤细胞的形成的遏制是对皮肤肿瘤的预防。
第6项如第5项所述的嘌呤核酸，其中对皮肤肿瘤的预防伴随对皮肤肿瘤的起始 (initiation)的遏制。
第7项如第5或6项所述的嘌呤核酸，其中对皮肤肿瘤的预防伴随对皮肤肿瘤的促进的遏制。
第8项如第5 7项中任一项所述的嘌呤核酸，其中对皮肤肿瘤的预防目的在于预防皮肤癌。
第9项如第I 8中任一项所述的嘌呤核酸，其中所述嘌呤核酸以每cm2皮肤面积O. 01至IOmg的量皮肤应用。
第10项如第I 9中任一项所述的嘌呤核酸，其以每天2至5次的频率皮肤应用。
第11项如第I 10中任一项所述的嘌呤核酸，其中所述光是UV-B0
第12项如第I 11中任一项所述的嘌呤核酸，其中所述嘌呤核酸通过在光照射之前或之后应用至皮肤而使用。
第13项一种用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的组合物，所述组合物包含作为活性成分的嘌呤核酸。
第14项如第13项所述的组合物，包含基于所述组合物总重而言为O. 5至20wt% 的量的选自由单磷酸腺苷及其盐组成的组中的至少一个成员。
第15项如第13或14项所述的组合物，作为外用药、准外用药或化妆品产品。
第16项一种遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的方法，所述方法包括向其中由于光暴露已发展出或者可能发展出DNA突变的皮肤区域皮肤应用有效量的嘌呤核酸。
第17项一种遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的方法，所述方法包括步骤
向已经或者可能暴露于光的皮肤区域皮肤应用有效量的嘌呤核酸；和
验证在已向其皮肤应用了所述嘌呤核酸的皮肤区域中异常皮肤细胞没有形成。
第18项嘌呤核酸用于制造用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂的用途。
根据本发明，可降低光暴露产生的皮肤细胞中DNA突变体的量，且有效抑制或预防光暴露导致的异常皮肤细胞的形成，特别是光致癌。因此，本发明提供了一种用于降低光暴露导致的形成异常皮肤细胞的风险、特别是发展出皮肤癌的风险的有效预防性手段。此外，因为本发明的用于遏制异常皮肤细胞形成的试剂具有DNA修复的作用和遏制突变的作用，因此当所述试剂在光暴露之前或之后应用至皮肤时，可以预料到对光暴露导致的异常皮肤细胞的形成、例如光致癌的遏制或预防。因此，所述试剂的常规使用允许遏制或预防光暴露导致的异常皮肤细胞的形成，而不必须在出外之前使用所述试剂，并且不导致皮肤刺激。
附图
简述
图Ia图Ia显示了实施例I中对单磷酸腺苷对正常人上皮角化细胞中半胱天冬酶 (caspase)活性的影响的评估结果。
图Ib图Ib显示了实施例I中对单磷酸腺苷对经紫外光照射的人上皮角化细胞中半胱天冬酶活性的影响的评估结果。
图2图2显示了实施例2中对单磷酸腺苷对经紫外光照射的小鼠上皮角化细胞中 DNA突变(CPD)的影响的评估结果。
图3图3显示了示出实施例3中每组小鼠背部的图的结果，其中在不同的组中喂饲用紫外光从背后照射过的小鼠应用测试溶液的组，向其应用含有单磷酸腺苷的乙醇水溶液；应用基质的组，向其应用乙醇水溶液；和无应用的组，对其没有应用。
图4图4显示了通过测量实施例3中每组中观察到肿瘤的小鼠的种群比例(肿瘤发病率％ )获得的结果，其中在不同的组中喂饲用紫外光从背后照射过的小鼠应用测试溶液的组，向其应用含有单磷酸腺苷的乙醇水溶液；应用基质的组，向其应用乙醇水溶液； 和无应用的组，对其没有应用。
具体实施方式
在本发明中，用嘌呤核酸来遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成。
换句话说，在本发明中，嘌呤核酸用作遏制光暴露导致的异常皮肤细胞形成的试剂。所述试剂有时在本文中被称为“本发明的试剂”。
此外，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的组合物含有作为活性成分的嘌呤核酸。
在本申请文件中，光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的例子包括皮肤肿瘤。
在本申请文件中，如对光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的遏制和预防中，术语 “遏制”和“预防”可被解释为具有相似的含义。
“对光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的遏制”的例子包括“对皮肤癌的预防”。
在本申请文件中，术语“伴随”表示“与另外的事件相关的事件的发生”。哪个事件是起因或结果并不重要，这些事件无须同时发生。
在本发明中，嘌呤核酸是嘌呤、具有嘌呤核作为骨架的多种衍生物及其盐的合称术语。在本发明中用作为活性成分的嘌呤和具有嘌呤核作为骨架的多种衍生物的例子没有特别限制，只要它们是药物可接受的或化妆品可接受的即可。其特定例子包括腺嘌呤、 鸟嘌呤、其脱氨化合物(次黄嘌呤和黄嘌呤)、腺苷、鸟苷、肌苷、磷酸腺苷(单磷酸腺苷，例如2’ -单磷酸腺苷、3’ -单磷酸腺苷和5’ -单磷酸腺苷；二磷酸腺苷，例如5’ - 二磷酸腺苷；和三磷酸腺苷，例如5’ -三磷酸腺苷)、磷酸鸟苷(单磷酸鸟苷，例如3’ -单磷酸鸟苷和5’ -单磷酸鸟苷；二磷酸鸟苷，例如5’ - 二磷酸鸟苷；和三磷酸鸟苷，例如5’ -三磷酸鸟苷)、腺苷酸基琥拍酸(adenylosuccinate)、黄嘌呤核苷酸、肌苷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)等等。这些中，具有优秀的遏制或预防光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的作用的那些的例子包括，优选磷酸腺苷；更优选单磷酸腺苷；尤其优选5’ -单磷酸腺苷(AMP)。
此外，嘌呤核酸的盐形式没有特别限制，只要其是药物可接受或化妆品可接受的即可。其特定例子包括碱金属盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如镁盐、钙盐和钡盐；碱性氨基酸盐，例如精氨酸和赖氨酸；铵和铵盐，例如，三环己基铵盐；和多种烷醇胺盐，例如单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、单异丙醇胺、二异丙醇胺和三异丙醇胺。这些中，优选碱金属盐，进一步优选钠盐。
这些嘌呤核酸可单独使用，或者以作为用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂的活性成分的两种或多种的任意组合而使用。
包含嘌呤核酸作为活性成分并且用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的本发明的组合物中，嘌呤核酸的含量可根据嘌呤核酸的类型、制剂形式、想要的效果等等而合适地确定。特别地，组合物中嘌呤核酸的含量为基于组合物总重而言O. 5至20wt%，优选O. 5至IOwt %,更优选I至IOwt %,进一步优选I至7wt %,及尤其优选2至5wt %。通过满足上述含量范围，可更有效地抑制或预防异常皮肤细胞的形成。
可通过除了嘌呤核酸之外还组合药物可接受的或化妆品可接受的基质或载体，以多种形式制备本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂。传统用于针对皮肤的外用制备物的任何已知基质或载体可用作为药物可接受的或化妆品可接受的基质和载体。
此外，如果需要的话，可用于针对皮肤的外用制备物的多种添加剂可添加至本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂中。此类添加剂的例子包括表面活性剂、着色材料(染料和色素)、调味材料、防腐剂、杀菌剂(抗细菌剂)、增稠剂、抗氧化剂、 螯合剂、冷却剂、除臭剂、保湿剂、紫光线吸收剂、紫外线散射剂、维生素、植物提取物、收敛剂、抗炎剂(消炎剂)、增白剂、细胞活化剂、血管舒张剂、血循环促进剂、皮肤功能促进剂等坐寸ο
本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂外用于已经或可能暴露于光例如紫外线的皮肤区域时，施加抵挡光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的预防性作用。因此，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂作为针对皮肤的外用制备物制备，其可每日使用，例如外用药，准外用药或化妆品产品(例如护肤产品)。
本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂的剂型没有特别限制，只要其可应用至皮肤即可。其例子包括糊剂、摩丝(mousses)、软凝胶、液体、乳液、混悬剂、乳膏、油膏、凝胶、片层剂(sheets)、气溶胶、喷雾、擦剂等等。这些剂型中,优选液体、乳液和凝胶。这些剂型根据相关商业领域中的常用方法制备。
特别地，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂用于预防光暴露诱导的皮肤肿瘤或皮肤癌的目的。在本发明中，诱导将被本发明抑制或预防的异常皮肤细胞形成的光的类型没有特别限制。其例子包括自然阳光、紫外线和放射线，优选为紫外线，更优选为UV-B。特别地，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂尤其适用于预防暴露于阳光中含有的紫外线(尤其是UV-B)诱导的光致癌。
此外，当本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂用于预防光致癌时，将被本发明预防的皮肤癌的种类没有特别限制，只要其是与光暴露相关而被诱导的即可。其特定例子包括黑色素瘤、基底细胞癌和鳞状细胞癌。
本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂应用至已经或可能暴露于光的皮肤区域。换句话说，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂可应用至已经暴露于光的皮肤区域、或在实际暴露于光之前应用至可能暴露于光的皮肤区域。
当本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂应用至皮肤时，可根据嘌呤核酸的类型和浓度、受试者的年龄和性别、应用的皮肤区域、皮肤被暴露于或可能暴露于的光的量等等来确定其剂量和频率，使得每日一次或者以每日2至5次的频率对皮肤应用合适的量。此外，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂可被设置为使得每cm2皮肤面积的嘌呤核酸的量为大约O. 01至IOmg,优选O. I至5mg。
如从上文清楚可知的，嘌呤核酸可预防光致癌。因此，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂可用作为预防光致癌的试剂。当嘌呤核酸用作为预防光致癌的试剂时，嘌呤核酸的类型和浓度、其它成分、剂型、应用位点、应用方法等等与针对用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂所描述的相同。
嘌呤核酸可在由于光暴露已成为异常的皮肤细胞中诱导凋亡。因此，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂可用作为在由于光暴露已成为异常的皮肤细胞中诱导凋亡的试剂。当嘌呤核酸用作为在由于光暴露已成为异常的皮肤细胞中诱导凋亡的试剂时，嘌呤核酸的类型和浓度、其它成分、剂型、应用位点、应用方法等等与针对用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂所描述的相同。
嘌呤核酸可抑制皮肤癌的起始。因此，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂可用作为用于遏制皮肤癌的起始的试剂。当嘌呤核酸用作为遏制皮肤癌的起始的试剂时，嘌呤核酸的类型和浓度、其它成分、剂型、应用位点、应用方法等等与针对用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂所描述的相同。
嘌呤核酸可抑制对皮肤癌的促进。因此，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂可用作为用于遏制对皮肤癌的促进的试剂。当嘌呤核酸用作为遏制对皮肤癌的促进的试剂时，嘌呤核酸的类型和浓度、其它成分、剂型、应用位点、应用方法等等与针对用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂所描述的相同。
此外，嘌呤核酸可降低光暴露导致的皮肤细胞中突变DNA的量以及促进DNA修复。 因此，本发明的用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂可以以上文所述的方式发挥作用，且可用作为用于修复DNA损伤、遏制DNA突变或降低DNA突变的试剂。当嘌呤核酸用作为修复DNA损伤、遏制DNA突变或降低DNA突变的试剂时，嘌呤核酸的类型和浓度、 其它成分、剂型、应用位点、应用方法等等与针对用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的试剂所描述的相同。
实施例
下面将参照测试实施例和实施例来描述本发明。但是，本发明不限于这些实施例。 应当注意，除非另有指明，下述实施例等等中，以“ ”表示的指示含量的数字是重量百分比。
实施例I :在紫外光照射导致的突变体细胞中诱导凋亡的作用
本实施例检测了用紫外线照射经5’ -单磷酸腺苷二钠(AMP2Na)处理过的人上皮细胞时半胱天冬酶活性的改变。
<测试方法>
使用EpiLife_KG2 培养基(由 Kurabo Industries Ltd.生产),在 IOcm 涂布有胶原的培养皿(由Asahi Glass Co. ,Ltd.生产)中预培养人上皮角化细胞(购自Kurabo Industries Ltd.)，并将其以30，000个细胞/孔的密度接种进涂布有胶原的96孔微孔板中。在EpiLIfe-KG2培养基中培养8小时后，培养基被EpiLife培养基(由Kurabo Industries Ltd.生产)替换，接着再培养16小时。随后，培养基被调节至多种浓度的含 AMP2Na的培养基替换。经培养基处理2小时后，用PBS (磷酸盐缓冲液)洗涤细胞，使用紫外光照射设备(HN-400，由ABE RIK0SHA生产)，以30mJ/cm2的UV-B照射洗涤过的细胞。再次加入EpiLife培养基，接着培养6小时。随后，使用SensoLyte RhllO半胱天冬酶3检验试剂盒(由AnaSpec，Inc.生产)测量细胞中表达的半胱天冬酶3的活性。没有用UV—B 照射过也没有用AMP2Na处理过的细胞被用作为对照组。此外，为检测AMP2Na影响正常细胞的半胱天冬酶活性的影响，测定没有经UV-B照射过但是用AMP2Na处理过的细胞的半胱天冬酶活性。
< 结果 >
图Ia和Ib显示了获得的结果。结果清楚显示，虽然未经紫外光照射的细胞显示与AMP2Na是否处理无关、半胱天冬酶活性基本没有增加，但用AMP2Na处理时经紫外光照射的细胞显示出半胱天冬酶活性的显著增加。
半胱天冬酶是在细胞中导致凋亡的半胱氨酸蛋白酶的成员。半胱天冬酶活性通常被认为是测量凋亡活性的水平的指数。
细胞自身具有触发凋亡杀死它们自身的机制，如针对损伤DNA的多种刺激(如X 射线和紫外光)的生物防御机制那样。本测试还显示在未经紫外光照射的细胞中半胱天冬酶活性没有改变，而无论是否用AMP2Na处理过细胞。这表明，AMP2Na不增加半胱天冬酶活性，且不诱导正常细胞中的凋亡。相反，从半胱天冬酶活性的增加清楚可知，在经紫外光照射的细胞中诱导了凋亡。此外，本测试显示出在紫外光照射之前用AMP2Na处理的细胞中活性进一步增加，这表明在突变的细胞中诱导了凋亡。
实施例2 :对降低紫外光照射诱导的DNA突变的作用的评估
在该实施例中，正常小鼠上皮细胞被用紫外线照射，然后被培养于含AMP2Na的培养基中。使用环丁烷嘧啶二聚体(CPD)的量作为指数，检测AMP2Na降低DNA突变的作用。
<测试方法>
在含FBS的MEM培养基中培养源于正常小鼠上皮细胞的JB6细胞(购自ATCC)直至汇合。随后，将4X IO5个培养的细胞接种进具有含FBS(胎牛血清)的MEM(最小必需培养基)的3. 5cm皿中。接种之后的第二天，培养基被不含血清的MEM培养基替换，以进行血清饥饿。随后，培养基被PBS替换，接着以15mJ/cm2的UV-B照射。紫外光照射后，培养基被含有O. 01mM、0. ImM或ImM AMP2Na的不含血清的MEM培养基或不含AMP2Na的培养基(对照)替换。培养基替换后，于37°C以5% CO2培养细胞48小时，然后收集细胞。
使用FastPure (商标)DNA试剂盒(Takara Bio Inc.)从收集的细胞提取基因组 DNA。按照试剂盒手册来进行提取。
使用ELISA测量提取自每个细胞的基因组DNA中CPD的量。特别地，在100°C对提取的基因组DNA加热10分钟，并在冰上冷却。随后，将基因组DNA分配(50 μ L/孔)至涂布有硫酸鱼精蛋白的96孔微孔板并干燥。第二天，用PBS-T (具有Tween 20的PBS)洗涤每个孔，将含FBS的PBS分配进每个孔。然后孔在37°C保持30分钟。接着，用PBS-T洗涤之后，将小鼠抗CPD抗体(购自Cosmo Bio Co.，Ltd.)分配进每个孔，然后孔在37°C保持 30分钟。用PBS-T洗漆之后,将经生物素标记的抗小鼠IgG(购自Southern Biotech)分配进每个孔，并且孔在37°C保持30分钟。洗涤孔之后，将经链亲和素标记的辣根过氧化物酶分配进每个孔，然后孔在室温下保持30分钟。随后，用PBS-T和柠檬酸盐磷酸盐缓冲液洗涤孔，然后将含有过氧化氢和邻苯二胺的柠檬酸盐磷酸盐缓冲液分配进每个孔。孔在37°C 下保持30分钟用于颜色发展。随后，向孔中加入2M硫酸水溶液，以终止颜色发展反应。随后，测量492nm处的吸光度值，计算基因组DNA中CPD的量，以测定每种条件下CPD的改变率(CPD的相对量的变化；％ )，其中在不含AMP2Na的培养基中培养的情况下CPD的量被指定为100%的值。
< 结果 >
图2显示了获得的结果。结果显示，在紫外光照射后向其中加入AMP2Na的细胞中 CPD的相对量较之对照组减少。这些结果因此证实了 AMP2Na减少紫外光照射导致的DNA突变。结果显示，当细胞被培养于含有O. ImM和ImM AMP2Na的培养基中时，CPD的相对量较之对照组的减少显著，紫外光照射导致的DNA损伤显著被遏制。基于上述结果，上述成分预计具有预防特别是癌发生的起始的效果。
应当注意，实施例I是使用细胞进行的体外测试。在一种特别的应用中，考虑到个体差异、皮肤可透过性和细胞可穿透性，必须要考虑调节AMP2Na的浓度至上文所述的体外使用的AMP2Na的浓度的大约10至1000倍。
实施例3 :对经紫外线照射的小鼠中皮肤癌的预防性效果的评估
在本实施例中，用紫外线照射无毛小鼠，检测了 AMP2Na抵挡小鼠的光致癌的预防性效果。
<测试方法>
5周龄雌性Hos = HR-I小鼠购自Japan SLC, Inc.，并且从7周龄开始在它们的背部进行紫外线(UV-B)照射。紫外光照射(每次的照射量60mJ/cm2)以每日一次、一周五天进行12周。
然后，制备含有溶解于其中的3% AMP2Na的20%乙醇水溶液(测试溶液)和不含 AMP2Na的20%乙醇水溶液(基质)。
在正常条件下喂饲经紫外线照射的小鼠I周之后，在表I所示的条件下将小鼠分入3组(每组6只小鼠)并喂饲12周。
表I
权利要求
1.一种嘌呤核酸，用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成，其中所述嘌呤核酸是外用的。
2.如权利要求I所述的嘌呤核酸，其是选自单磷酸腺苷及其盐构成的组中的至少一个成员。
3.如权利要求I或2所述的嘌呤核酸，其中对异常皮肤细胞的形成的遏制伴随DNA修复或对DNA突变的遏制。
4.如权利要求I 3中任一项所述的嘌呤核酸，其中对异常皮肤细胞的形成的遏制伴随诱导凋亡。
5.如权利要求I 4中任一项所述的嘌呤核酸，其中对异常皮肤细胞的形成的遏制是对皮肤肿瘤的预防。
6.如权利要求5所述的嘌呤核酸，其中所述对皮肤肿瘤的预防伴随对肿瘤的起始的遏制。
7.如权利要求5或6所述的嘌呤核酸，其中所述对皮肤肿瘤的预防目的在于预防皮肤癌。
8.一种用于遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的组合物，所述组合物包含作为活性成分的嘌呤核酸。
9.如权利要求8所述的组合物，包含基于所述组合物总重而言为0.5至20wt%的量的选自由单磷酸腺苷及其盐组成的组中的至少一个成员。
10.一种遏制光暴露导致的异常皮肤细胞的形成的方法，所述方法包括向其中可能由光暴露诱导DNA损伤的皮肤区域皮肤应用有效量的嘌呤核酸。
全文摘要
本发明的目的是提供用于遏制光暴露如紫外线暴露诱导的皮肤细胞形成的试剂。该目的通过使用嘌呤核酸来遏制光暴露导致的异常皮肤细胞形成而实现。
文档编号A61P35/00GK102985093SQ201180031370
公开日2013年3月20日 申请日期2011年6月24日 优先权日2010年6月25日
发明者河村光章, 筱原茂生, 原野史树, 青木彰宽, 上野绘理 申请人:大塚制药株式会社