用于气味控制的真菌的制作方法【专利摘要】本发明针对用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的组合物及其方法，其包含有效量的一种或多种昆虫病原性真菌。由于诱捕器和化学杀虫剂被经常性地用于控制餐厅、商业酒店、汽车旅馆和住宅中的虫害和虫害相关疾病，本发明提供了消除由虫害控制方法所产生的恶臭的新方法。【专利说明】用于气味控制的真菌[0001]对相关申请的交叉引用[0002]本申请要求35U.S.C.119下2010年10月29日提交的美国临时申请号61/408，155的权益，其内容通过提述完整并入本文。[0003]对生物材料保藏的引用[0004]本申请含有对生物材料保藏的引用，该保藏通过提述并入本文中。对于完整信息，參见本发明的详细描述。发明领域[0005]本发明涉及包含昆虫病原性真菌的杀昆虫组合物，以及这类组合物用于降低或消除由死亡昆虫散发的气味的用途。[0006]发明背景[0007]害虫传染是家庭和エ业环境中的一种常见问题。有很多产品可用于控制节肢动物害虫例如昆虫以及用于阻止新侵染。然而，ー个与害虫控制相关的常见问题是，在虫体死后和进ー步腐烂时所留存的令人不悦的气味。这些令人不悦的气味可以是由包括蟑螂(cockroach)和毛虫在内的很多害虫在死亡时最初释放的称为“坏死素(necromone)”的物质或脂肪酸物质造成的。其它气味可以是由死亡昆虫在自然腐烂中通过自体分解(autolysis)和腐败而释放气体所造成的。[0008]控制害虫群体的解决办法是众所周知的。常用的方法单独地或彼此组合地使用化学杀虫剂或天然杀虫剂靶向害虫。例如，美国专利号5，888，989公开了氟硅菊酯(Silafluofen)和至少ー种昆虫病原性真菌的杀虫和杀螨虫组合物，其用于保护免于害虫，尤其是农业害虫。[0009]美国专利号5，057，315公开了昆虫病原性真菌作为ー种用于控制蟑螂群体的无毒备选物的用途。[0010]美国专利号5，679，362针对ー种昆虫感染盒/室(chamber)，其能吸引昆虫并用活的致病性绿僵菌属(Metarhizium)孢子感染它们。[0011]虽然经常使用解决办法如诱捕器和化学杀虫剂来控制餐厅、商业酒店、汽车旅馆和住宅中的虫害和虫害相关疾病，但是还期望消除由虫害控制所造成的气味。简而言之，存在着对摆脱与昆虫尸体腐烂有关的恶臭的需求。[0012]发明概述[0013]本发明提供了包含ー种或多种昆虫病原性真菌的组合物，所述组合物能够单独地，或与商品化的化学杀虫剂组合降低或消除由死去害虫的腐烂所导致的恶臭。[0014]而本发明的另ー个目的是提供ー种用于在已知的表现出半社会性行为的节肢动物群体中水平传播ー种或多种昆虫病原性真菌的方法，其通过将化学杀虫剂偶联至昆虫病原性真菌，从而使得化学杀虫剂会快速的杀死节肢动物，而允许尸体产生的孢子感染存活的节肢动物群体。[0015]在一个实施方案中，本发明的目标是提供用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体所产生的恶臭的组合物，其包含有效量的ー种或多种昆虫病原性真菌。所述组合物可以含有ー种或任意种数的昆虫病原性真菌，既可以是单独的真菌，也可以与其它真菌组合。所述昆虫病原性真菌的属可以包括，但不限于来自以下属的真菌:绿僵菌属菌种(Metarhiziumspp.)、白僵菌属菌种(Beauveriaspp.)、拟青霉属菌种(Paecilomycesspp.)、阶霉属菌种(Lecanicilliumspp.)和被毛孢属菌种(Hirsutellaspp.)。具体地，所述组合物中的昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)。更具体地，所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。[0016]所述用于降低或消除由死亡的节肢动物产生的恶臭的组合物可以进一歩包含有效量的化学杀虫剂。所述化学杀虫剂可以是，但不限于:馆配制物(baitformulation),喷雾配制物(sprayableformulation)和粉末配制物(dustableformulation)?仍进ー步地，所述化学杀虫剂的活性成分可以是，但不限于硼酸(boricacid)，阿巴克丁(abamectin),氟虫臆(fipronil),氟蚁腙(hydramethylnon),却虫威(indoxacarb),和批虫啉(imidacloprid)。[0017]在另ー个实施方案中，本发明的目标是提供用于降低或消除腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的方法，其包括制备具有有效量的ー种或多种昆虫病原性真菌的组合物以及使所述组合物暴露于目标节肢动物害虫。所述组合物可以包含ー种或任意种数的昆虫病原性真菌，既可以是单独的真菌，也可以与其它真菌組合。所述昆虫病原性真菌的属包括，但不限于来自以下属的真菌:绿僵菌属菌种、白僵菌属菌种、拟青霉属菌种、蚧霉属菌种、和被毛孢属菌种。具体地，所述组合物中的昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌。更具体地，所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。[0018]涵盖的是，所述节肢动物害虫会通过某些方法暴露于所述昆虫病原性组合物，所述方法包括，但不限干:将所述组合物放置于诱捕器中，将所述组合物与食物源组合，将所述组合物与化学杀虫剂组合，以及其中任意可行的组合。还涵盖的是，所述的化学杀虫剂可以是，但不限于:饵配制物，喷雾配制物和粉末配制物。还涵盖的是，所述化学杀虫剂的活性成分可以是，但不限于硼酸`，阿巴克丁，氟虫臆，氟蚁腙，茚虫威，和吡虫啉。[0019]涵盖了本文中描述的组合物及方法意图靶向所有的节肢动物害虫，而且还涵盖了本发明会在阻止腐烂中的蟑螂尸体所伴随的恶臭中尤其有用。更具体地，涵盖了本文中描述的组合物及方法会在阻止德国蟑螂德国小蠊、褐带蟑螂长须皮蠊、东方蟑螂东方蜚蠊、烟褐蟑螂烟色大蠊,美洲蟑螂美洲大蠊、土耳其斯坦蟑螂Blattalateralis,和田野蟑螂Blattavaga尸体的腐烂所伴随的恶臭中尤其有用。[0020]附图简述[0021]图1是例示受到各种处理的蟑螂随时间的死亡百分比的图示。[0022]图2是没有蟑螂尸体的空白样品的气相色谱-质谱仪(GC-MS)的读数。[0023]图3是由商业可得的化学蟑螂饵杀死的蟑螂尸体产生的挥发物的GC-MS读数。[0024]图4是由商业可得的化学蟑螂饵杀死并用Met52产生孢子的蟑螂尸体中产生的挥发物的GC-MS读数。[0025]图5A和5B是例示受到各种处理的不同蟑螂物种随时间的孢子形成百分数和死亡百分数的图示。[0026]图6A和6B是例示德国小蠊在有食物和没有食物时孢子形成百分数和死亡百分数之间的相关性随时间的柱状图示。[0027]图7A和7B是例示东方蜚蠊在有食物和没有食物时孢子形成百分数和死亡百分数之间的相关性随时间的柱状图示。[0028]图8是例示德国小蠊蟑螂在进行水平传播测定法时孢子形成百分数和死亡百分数之间的相关性的柱状图示。[0029]发明详述[0030]本发明涉及用于降低和/或消除昆虫和节肢动物害虫的化学和自然死亡有关的气味的组合物及其方法。[0031]生物材料的保藏[0032]根据《国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条約》的条款，以下生物材料已经保藏于德意志微生物保藏中心(DSM),Grisebachstra^e,D-3400Gottingen,BundersrepublikDeutschlang,并给予下述的登录号:[0033]保藏物登录号保藏日期[0034]金龟子绿僵菌DSM38841986年10月24日[0035]金龟子绿僵菌DSM38851986年10月24日[0036]所述菌株于下述条件下保藏:确保在本专利申请未决期间，依据该外国专利法律的授权的人能够获得所述培养物。所述保藏物代表所保藏菌株的基本上纯的培养物。在提交了该申请的副本，或其后续文本的国家，依据该外国专利法律可以获得所述保藏物。然而，应当理解，保藏物的获得并不构成对实施本发明的许可，实施本发明是对政府行为所授予的专利权的侵犯。[0037]定义[0038]一般而言，本文中使用的术语和短语具有它们在领域内公认的含意，它们的含意可以通过參考标准教材、期刊文献和本领域技术人员已知的背景而找到。提供下列定义以阐明它们在本公开的背景中的特定使用。[0039]应该理解，依照本发明的方法使用的真菌菌株可以是金龟子绿僵菌DM3884或是金龟子绿僵菌DM3885;然而，所述真菌菌株也可是与上述分离并保藏的菌株具有基本类似特性的菌株培养物。优选的特性包括昆虫病原性真菌的那些特性，即有作为节肢动物病原体感染和消耗节肢动物尸体的能力。[0040]如本文中使用的，“害虫”可以指可以期望控制其存在的任意节肢动物。[0041]为了简便的目的，本申请使用了术语“昆虫”;然而，应该理解术语“昆虫”不仅指代科学分类(类)昆虫纲(insecta)的昆虫如蟑螂和蚂蚁,还指螨虫(mite)、蜘蛛(spider)和其它蛛型纲动物(arachnid)，以及类似的无脊椎动物。[0042]如本文中使用的，术语“有效量”、“有效浓度”或“有效剂量”的定义是足以造成昆虫感染然后会降低或消除死亡昆虫散发的气味或在昆虫群落中水平传播的昆虫病原性真菌的量、浓度或剂量。实际有效剂量的绝对值取决于某些因素，包括但并不限干:目标昆虫的死亡速率相对于排除其它微生物时金龟子绿僵菌能够感染昆虫并在尸体中繁殖的速率、其它可以増加或降低金龟子绿僵菌活力的活性或惰性成分之间的协同性或拮抗性相互作用、昆虫的生命期(Iifestage)和物种的固有易感性(inherentsusceptibility)以及金龟子绿僵菌在配制物中的稳定性。[0043]本发明的组合物可以进ー步包含ー种或多种能够杀死昆虫的药剂(agent)。这样的药剂包括但不限于包含以下活性成分的饵、喷雾和粉末配制物:硼酸，阿巴克丁，氟虫臆，氟蚁腙，茚虫威，和吡虫啉。[0044]虽然所述组合物可以作为原材料使用，但是在一个实施方案中所述组合物是放置于适于家庭和/或エ业应用的容器(container)或诱捕器中的。这样的容器包括但不限干，金属和塑料罐、盒、诱捕器、塑料容器、大桶和其它封闭容器，其含有ー个或多个为害虫进入及可能的脱离而设的开ロ(orifice)但或另外一般含有组合物以免于暴露于人或其它动物。[0045]在另ー个实施方案中，所述组合物进ー步包含害虫引诱剂(pestattractant)。这样的引诱剂可以包括但不限于:食物、食物气味和信息素(pheromones)。[0046]在另ー个实施方案中，所述组合物可以加入至ー种或多种能杀灭害虫的商业可得的产品。这样的商业产品的例子可以包括但不限干:[0047]RoachPlllfe?;HotShotMaxAttrax?；RoachPowderAvert?；Niban?；Stapleton‘sMagneticRoachFood?；Maxforce?;Combat?;MaxforceSiege?;HotShotMaxattrax?;UltraBrandNestDestroyerRoachBait?；andPre-EmptProfessionalcockroachGelBait⑧。实施例[0048]提供以下的实施例以用于例示性的目的，而并非意图限定如本文中所要求保护的本发明的范围。本领域技术人员所想到的对例示实施例的任何变化都意图落入本发明的范围内。[0049]实施例1:[0050]实验材料和方法[0051]从BenzonResearch获得德国蟑螂(德国小蠊)的若虫(nymph)并在冷室中存放直至递送至实验场合。递送时，将所述蟑螂若虫保留在冷室中直到实施生物測定法。当生物测定法开始时，将单只德国蟑螂若虫放入一个预先确定的(predetermined)膳食杯(dietcup)中，并且提供给所有的蟑螂水分(moisture)和作为食物源的碾碎的狗粮(crusheddogfood)。通过放置花商的泡沫环(florist’sfoamcircle)在膳食杯的底部并且用去离子水(diH20)使其饱和使所述蟑螂暴露于水分。放置食物源于2.0mL微离心帽(microcentrifugecap)中以防止其被花商的泡沫环中的diH20所饱和。[0052]实验步骤[0053]具体地，所述生物測定法包括对蟑螂若虫进行ー组处理。所述处理包括对照、用IxlO5个分生抱子(conidia)/mLMet52处理、用IxlO6个分生抱子/mLMet52处理、用IxlO7个分生孢子/mLMet52处理、用IxlO8个分生孢子/mLMet52处理、仅用蟑螂馆处理、用蟑螂馆组合IxlO7个分生孢子/mLMet52处理、用蟑螂馆组合10%(w/w)Met52孢子粉末(sporepowder)(USEPA注册号:70127-7)处理、用蟑螂饵组合l%(w/w)Met52孢子粉末处理、用经过l%(w/w)Met52孢子粉末处理的狗粮处理、用经过3%(w/w)Met52孢子粉末处理的狗粮处理以及用经过10%(W/W)Met52孢子粉末处理的狗粮处理。对于每种处理，一式三份地使用10只分开笼居的蟑螂若虫。[0054]在其中仅用到真菌孢子的处理中，直接把分生孢子的溶液加入到泡沫环上直至达到饱和。在用蟑螂饵组合IxlO7个分生孢子/mLMet52的处理中也使用这ー步骤。对于剩下的处理，用diH20来饱和花商的(florists’)湿泡沫盘。[0055]对于其中使用Met52孢子粉末与商业可得的馆站(baitstation)组合的处理,切开饵站并取出饵，碾碎并放置于2.0mL微离心帽中。接下来组合孢子粉末与碾碎的饵。具体地，加入0.6g孢子粉末到6.17g碾碎的饵中以制作所述10%孢子粉末饵。为制作所述1%孢子粉末，将0.48gl0%孢子粉末饵加入4.86g饵中。[0056]对于其中孢子粉末组合狗粮的处理，直接用孢子粉末处理食物源。准备了3种处理。具体地，将大约0.1g孢子粉末与大约9.9g碾碎的狗粮组合，将大约0.3g孢子粉末与大约9.7g碾碎的狗粮组合，将大约1.0g孢子粉末与大约9g碾碎的狗粮组合，分别为大约1%，3%和10%的孢子粉末对总重量。[0057]用纸板(paperboard)盖子盖上姆个膳食杯以允许足够的通风(ventilation)并阻止过度的水分流失。在室温于14天的时段内在膳食杯中孵育蟑螂若虫，并每天评估死亡率。在整个生物測定法的过程中提供给所有若虫充足的水分和狗粮饮食。表面消毒在14天生物測定法期间死亡的昆虫并将其转移到含有1.5%水琼脂的96孔板中。用石蜡膜(parafilm)封住孔板来维持高湿度以观察真菌菌株的孢子形成。[0058]结果[0059]參照图1，在14天后，指定为对照的若虫只有大约20%死亡。与之形成对比的，在大约3天后，受到仅饵处理、饵组合10%(w/w)Met52孢子粉末处理、饵组合l%(w/w)Met52孢子粉末处理以及饵组合IxlO7个分生孢子/mLMet52处理的若虫为100%死亡。[0060]在大约12天后，受到以10%孢子粉末处理的狗粮处理的若虫显示出范围在0%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约14天后，受到以3%孢子粉末处理的狗粮处理的若虫显示出范围在0%至约82%死亡率的死亡率百分数。在大约14天后，受到以IxlO7个分生孢子/mLMet52处理的若虫显示出范围在0%至约70%死亡率的死亡率百分数。在大约14天后，受到以IxlO6个分生孢子/mLMet52处理的若虫显示出范围在0%至约56%死亡率的死亡率百分数。在大约14天后，受到以IxlO8个分生孢子/mLMet52处理的若虫显示出范围在0%至约50%死亡率的死亡率百分数。在大约14天后，受到以1%孢子粉末处理的狗粮处理的若虫显示出范围在0%至约50%的死亡率百分比。最后，在大约14天后，受到以IxlO5个分生孢子/mLMet52处理的若虫显示出范围在0%至约33%死亡率的死亡率百分数。[0061]在显示明显由金龟子绿僵菌(M.anisopliae)处理造成的真菌病(mycosis)的形成孢子的若虫尸体和仅用蟑螂饵进行处理的尸体之间进行二选项气味盲试(blindtwochoicessmelltest)。对上述尸体组上方的顶部空间取样并使用气相色谱-质谱仪(GC-MS)进行评估。具体地，使用CombiPalA0C5000自动取样器(CTCAnalytics)在小瓶(vial)(在50°C预平衡5分钟)的顶部空间引入50/30ym二乙烯基苯/Carboxen/聚二甲基硅氧烷(divinylbenzene/Carboxen/polydimethylsiloxane)(DVB/CAR/PDMS)固相微萃取(solidphasemicro-extraction)(SPME)纤维(fiber)(Supelco)。在50°C进行萃取30分钟。萃取之后，将纤维立即引入Shimadzu2010-S气相色谱，其装备有Siltek分流/不分流入口衬管(Silteksplit/splitlessinletliner)(Restek)以及连接在电子轰击四极质谱仪系统(electronimpactquadropolemassspectrometer(MS)system)上的Equity-5溶融石英柱(Equity_5fusedsilicacolumn)(30mx0.25mmx0.25iim膜厚度;Sigma-Aldrich)。将注射ロ温度设定为250°C。在50°C运行柱I分钟然后以10°C/分钟升温直至270°C，总共运行23分钟。在第一样品之前进行了两个空白脱附以释放分析物纤维。以5mL/min分流(split)和0.5mL/min吹洗(purge)操作GC。使用5级氦气作为载体气体(lmL/min柱流动)并且设定质谱离子源温度为180°C。设定接ロ(interface)温度为200°C并使用扫描模式(m/z40-400)。以GC/MS解决方案软件(Shimadzu)计算峰面积并且通过将获得的谱与标准文库(NISTMassSpectralSearchProgram)相比较来鉴定化合物。[0062]參照图2-4，GC_MS结果显示当蟑螂尸体表现出由与金龟子绿僵菌(Met52)组合放置以金龟子绿僵菌处理的饵而造成的真菌病时，伴随腐烂中的蟑螂尸体的气味定量減少。具体的，图2例示了空白样品产生的挥发物的GC-MS测试。正如所料，其中没有目标峰。图3例示了含有蟑螂尸体的样品产生的挥发物的GC-MS。图3包括了总计29个峰，其中最强的是峰7和15。鉴定峰7和15分别为化合物二甲基硫化物(dimethylsulfide)和酹(phenol)。一般认为，与峰7和15相关的化合物是闻起来令人讨厌和不悦的。图4例示了含有形成了Met52孢子的蟑螂尸体的样品中产生的挥发物。与图3形成鲜明对比的是，图4显示的结果展示出，以Met52处理不但大大的降低了蟑螂尸体散发的挥发物总种类数，而且也大大降低了挥发物的总强度。具体的，当Met52与蟑螂饵组合放置时总共只观察到了15个峰，其中最强的分别是峰4和8。简而言之，这些处理造成的结果之间有很明显的差别:与仅使用蟑螂饵相比，形成Met52孢子的昆虫造成明显更小的气味，非常不同的挥发化合物谱，以及低10倍的总峰面积。在由无孢子形成的尸体产生的挥发物中鉴定出的29个峰中，只有9个是和形成孢子的尸体产生的挥发物是共同的。[0063]除了图2-4中通过GC-MS获得的结果之外，还进行了进ー步的测试，其中要求13名个体參与者判断是否以Met52处理的蟑螂尸体比仅以饵处理的蟑螂尸体散发更少的气味。13名个体中有12名鉴别出形成孢子的尸体比无孢子形成的尸体气味更少，从而确认了GC-MS实验中获得的結果。[0064]实施例2:[0065]实验材料和方法[0066]使用两种蟑螂物种，德国小蠊和东方蜚蠊，来实施水平传播测定法。以7种不同的处理来处理来自前述各个物种的形成孢子的蟑螂尸体以研究可乳化浓缩物(emulsifiableconcentrate)配制物(EC)(USEPA注册号:70127-10)和エ业级粉末(technicalgradepowder,TGP)(USEPA注册号:70127-7)与CombatRoachTraps'"'的活性成分，0.03%氟虫腈(Fipronil)之间的相容性。EC是金龟子绿僵菌孢子悬浮在含有乳化剂的油中的组合，这样EC可以分散在水中。TGP是单独的金龟子绿僵菌孢子。[0067]获得来自CombatFastActingRoachFormula'(0.03%氟虫腈)的大型和小型蟑螂诱捕器(largeandsmallroachtraps)以和EC(大约4xl07个有活力的分生孢子/mL悬浮液)和TGP组合并测试。通过将2mL4xl09个活分生孢子/mL悬浮液加入198mL无菌ddH20以获得大约1:100的稀释，从而将所述EC从大约4xl09个活分生孢子/mL悬浮液稀释为大约4xl07个活分生孢子/mL悬浮液。其它的材料包括CMseo、H'、Vaseline+、去尚子水(d;LH20)、培养皿、和花商的湿泡沫。测试的蟑螂的种是从BenzonResearch获得的。[0068]实验步骤[0069]将每种前述蟑螂物种暴露于7种可能的处理之一。具体地，所述处理包括使所述蟑螂物种暴露于:diH20的对照、2mL/L(大约IO7个分生孢子/mL)饱和湿泡沫(SaturatedWetFoam)(SWF)、仅饵诱捕器、与SWF组合的饵(2mLEC/LdiH20)、直接放置在饵诱捕器入口内的EC药签(2mLEC/LdiH20)、与Criseo?组合的11%(按重量)的孢子粉末(大约2.75g的孢子粉末加入大约22.40g的Crisco?)以及与Vaseline?组合的11%(按重量)的孢子粉末(大约2.75g的孢子粉末加入大约22.24g的Vaseline#')。[0070]对于德国小蠊，以花商的湿泡沫做培养皿的村里。依照前述的实验材料和方法处理所述花商的湿泡沫。具体的，对于对照，将每个培养皿中的花商的湿泡沫以大约8.5mL到9mL的diH20饱和，且对于处理过的培养皿，以大约8.5mL到9.0mL的4xl07个分生孢子/mL饱和。在处理后所述培养皿中没有积滞的水(standingwater)或溶液。在需要诱捕器的培养皿处理中加入小型蟑螂诱捕器。在培养皿的盖子上打3个小孔以提供给昆虫足够的通风和气体交換。任何培养皿中都没有加入食物源。在培养皿的适当准备后，用CO2使德国小蠊窒息(asphyxiated),接下来在姆个培养皿中加入大约10只成虫(adult)和若虫蟑螂；同样的实验重复三次。在16天的时间段里监控德国小蠊的死亡与孢子形成。[0071]对于东方蜚蠊，以花商的湿泡沫做sterlite塑料的Tupperware"容器的衬里。依照前述的实验材料和方法处理所述花商的湿泡沫。具体的，以diH20或4xl07个分生孢子/mL(2mLEC/LdiH20)饱和所述花商的湿泡沫。对于没有蟑螂诱捕器的处理，需要50到52mL以饱和湿泡沫；而对于有诱捕器的容器，由于诱捕器覆盖了容器底层的一部分，只需要大约20mL以饱和湿泡沫。在处理后所述培养皿中没有积滞的水或溶液。每个容器的盖子上没有打孔，且任何容器里都没有加入食物源。在容器的适当准备后，用CO2使东方蜚蠊窒息并在每个容器中加入大约7只成虫(adult)和若虫蟑螂。测试重复一次。在16天的时间段里监控东方蜚蠊的死亡与孢子形成。[0072]实验结果[0073]參见图5A与5B，对于德国小蠊和东方蜚蠊中的每ー种，以死亡百分数随时间的函数观察与蟑螂诱捕器组合放置的Met52的功效。图5A与5B还例示了孢子形成的百分数。[0074]图5A例示了在大约16天后，指定为对照的德国小蠊显示了范围在0%至大约62%死亡率的死亡率百分数。与之形成对比的是，在大约I天半之后，仅受到饵诱捕器处理的德国小蠊蟑螂显示了范围在大约80%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约6天后，受到与SWF组合的饵处理的德国小蠊蟑螂显示了范围在大约38%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约6天后，受到直接放置在饵诱捕器入口中的EC药签处理的德国小蠊蟑螂显示了范围在0%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约6天后，受到与VaseHnex组合的孢子粉末处理的德国小蠊蟑螂显示了范围在大约8%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约12天后，受到与Criso/组合的孢子粉末处理的德国小蠊蟑螂显示了范围在大约21%至100%死亡率的死亡率百分数。最后，在16天后，受到SWF与2mLEC/LdiH20处理的德国小蠊蟑螂显示了范围在0%至大约88%死亡率的死亡率百分数。[0075]对于德国小蠊蟑螂，无论是对照还是仅暴露于饵都未造成孢子形成。与之形成对比的是，大约73%暴露于与SWF组合的饵的德国小蠊蟑螂形成孢子，大约63%暴露于与Crisco?组合的孢子粉末的德国小蠊蟑螂形成孢子，大约50%暴露于与Vaseline?组合的孢子粉末的德国小蠊蟑螂形成孢子，大约17%暴露于直接放置在饵诱捕器入口中的EC药签的德国小蠊蟑螂形成孢子，并且大约10%暴露于SWF和2mLEC/LdiH20的德国小蠊蟑螂形成孢子。[0076]图5B例示了在大约16天后，指定为对照的东方蜚蠊显示了0%的死亡率。与之形成对比的是，在大约I天半后，仅受到饵诱捕器处理的东方蜚蠊蟑螂显示了范围在大约85%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约I天半后，受到SWF与2mLEC/LdiH20组合的饵处理的东方蜚蠊蟑螂显示了范围在大约71%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约I天半后，受到直接放置在饵诱捕器入口中的EC药签处理的东方蜚蠊蟑螂显示了范围在大约42%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约6天半后，受到与Cdseo'R组合的孢子粉末处理的东方蜚蠊蟑螂显示了范围在大约42%至100%死亡率的死亡率百分数。在大约6天半后，受到与Vaseiinel且合的孢子粉末处理的东方蜚蠊蟑螂显示了范围在大约28%至100%死亡率的死亡率百分数。最后，在大约11天半后，受到SWF与2mLEC/LdiH20处理的东方蜚蠊蟑螂显示了范围在0%至约100%死亡率的死亡率百分数。[0077]对于东方蜚蠊蟑螂，无论是对照还是仅暴露于饵都未造成孢子形成。形成对比的是，大约86%暴露于与SWF组合的饵的东方蜚蠊蟑螂形成孢子，大约57%暴露于与Criseo?组合的孢子粉末的东方蜚蠊蟑螂形成孢子，大约57%暴露干与VaSeline〃/&合的孢子粉末的东方蜚蠊蟑螂形成孢子，大约26%暴露于直接放置在饵诱捕器入口中的EC药签的东方蜚蠊蟑螂形成孢子，并且大约14%暴露于SWF的东方蜚蠊蟑螂形成孢子。[0078]实施例3:[0079]实验材料和方法[0080]实施水平传播测定法以确认可以利用蟑螂的半社会性行为(sem1-socialbehavior),从而使形成孢子的尸体可以有效的向有代表性的蟑螂群体(representativepopulationofcockroaches)传播Met52真菌孢子。在所述测定法中，使大约10只德国小蠊蟑螂和大约10只东方蜚蠊蟑螂彼此共居(cohabitate)以模拟小规模群落。[0081]实验步骤[0082]对于德国小蠊蟑螂，将培养皿的底部衬以花商的湿泡沫并用去离子水(diH20)饱和。用CO2使10到12只德国小蠊蟑螂窒息并将其放置于有单只蟑螂尸体的培养皿中，所述蟑螂尸体是实施例1中的气味控制测定法/GC-MS留出的。将这一歩骤重复6次。所有的尸体都没有在GC/MS实验中用过。用石蜡膜封住每个培养皿，在有和没有碾碎的狗粮时各进行3次測定。该测定法没有使用対照。[0083]对于东方蜚蠊蟑螂,将sterliteTupperware'容器的底部衬以花商的湿泡沫并以diH20饱和。用CO2使10只东方蜚蠊蟑螂窒息并与形成孢子的蟑螂尸体一起放置于容器中。使用盖子封闭每个容器，在有和没有碾碎的狗粮的情况下各进行3次測定。该测定法没有使用対照。[0084]实验结果[0085]图6A和6B是在存在和不存在作为食物源的狗粮时，要在德国小蠊蟑螂之间水平传播的Met52的有效性的柱状图示。更具体的，图6A和6B以死亡率百分数随时间的函数，显示了要在德国小蠊蟑螂群体中水平传播的Met52的功效。[0086]參照图6A和6B，死亡率百分数和孢子形成百分数之间存在正相关性。特别的，当在一个德国小蠊蟑螂群体中形成Met52孢子的尸体百分数升高时，该蟑螂群体中总死亡率百分数也升高了。具体的，如图6A所展示的，当存在狗粮时，大约5天后的死亡率百分数是大约70%并且在大约17天时达到100%死亡率。如图6B所例示的，当不存在狗粮时，大约5天后的死亡率百分数是大约40%并且在大约17天时达到100%死亡率。[0087]对比图6A和6B的結果，明显看出当蟑螂除了暴露于形成Met52孢子的尸体外还暴露于狗粮吋，该统计相关性更強。不管相关性的強度如何，图6A和6B清楚地显示，当一个德国小蠊蟑螂的群体中形成Met52孢子的尸体的百分比上升时，该蟑螂群体中的死亡率百分比也上升。图6A-6B还显示可以利用蟑螂的半社会性行为，在德国小蠊蟑螂的群体中水平传播Met52孢子。图6A-6B中展示的数据会支持在蟑螂诱捕器应用中使用Met52以降低腐烂中的蟑螂尸体所伴随的气味。蟑螂对正在形成孢子的尸体并无明显的躲避行为，并且经常可以看到活蟑螂与正在形成孢子的尸体紧密接触。值得提到的是，鉴于蟑螂的快速死亡速率和高形成孢子速率，相较于之前其中分生孢子来源是孢子粉末或EC的实验，来自这些尸体的分生孢子的病原性明显很高，。文献中充分记载了体内产生的分生孢子经常比体外产生的更具病原性，一旦蟑螂被化学杀虫剂最初杀死时，体内产生的分生孢子会倾向于利于在群落中水平传播。[0088]图7A和7B是在存在和不存在作为食物源的狗粮的情况下，要在东方蜚蠊蟑螂之间水平传播的Met52的有效性的柱状图示。更具体的，图7A和7B以死亡率百分数随时间的函数，显示了要在东方蜚蠊蟑螂群体中水平传播的Met52的功效。[0089]參照图7A和7B，死亡率百分数和孢子形成百分数之间存在正相关性。特别的，当在ー个东方蜚蠊蟑螂群体中形成Met52孢子的尸体百分数升高时，该蟑螂群体中总死亡率百分数也升高了。具体的，如图7A所展示的，当存在狗粮时，大约5天后的死亡率百分数是大约21%并且在第17天或大约17天时达到100%死亡率。如图7B所例示的，当不存在狗粮时，大约5天后的死亡率百分数是大约40%并且在第17天或大约17天时达到100%死亡率。[0090]对比图7A和7B的结果可见，当蟑螂除了暴露于形成Met52孢子的尸体外还暴露于狗粮时，相关性更強。除了相关性的強度外，图7A和7B还显示当ー个东方蜚蠊蟑螂的群体中形成Met52孢子的尸体百分比上升吋，该蟑螂群体中的死亡率百分比也将上升。图7A-7B还显示可以利用蟑螂的半社会性行为，在东方蜚蠊蟑螂的群体中水平传播Met52孢子。图7A-7B中展示的数据会支持在蟑螂诱捕器的应用中使用Met52以降低腐烂中的蟑螂尸体所伴随的气味。[0091]实施例4:[0092]实验材料和方法[0093]进行了第二水平传播测定法来确认可以利用蟑螂的半社会性行为，从而使得形成孢子的尸体能在Met52真菌的最优生长条件下，即在高湿度的条件下，向有代表性的蟑螂群体有效传播Met52真菌孢子。在本測定法中，使大约10到15只德国小蠊蟑螂若虫彼此共居以模拟小規模群落。[0094]实验步骤[0095]从BenzonResearch获得250只德国小蠊蟑螂若虫。培养皿底部衬有花商的湿泡沫并用去离子水(diH20)饱和。用CO2使10到15只德国小蠊蟑螂若虫窒息，并将其与单只形成孢子的蟑螂尸体共同放置于培养皿中，所述形成孢子的蟑螂尸来自实施例3所公开并描述的水平传播研究。在一个培养皿中，共同放置40只蟑螂与单只形成孢子的蟑螂尸体。使用石蜡膜封住每个培养皿，将碾碎的狗粮放置在小瓶盖中作为食物源，进行该測定法20次。本測定法没有使用対照。[0096]结果[0097]图8是在最优生长条件下，在存在作为食物源的狗粮的情况下，要在德国小蠊蟑螂中水平传播的Met52的有效性的柱状图示。更具体的，图8以死亡率百分数随时间的函数显示了要在德国小蠊蟑螂群体中水平传播的Met52的功效。[0098]參照图8，死亡率百分数和形成孢子百分数之间存在正相关。特别的，当在德国小蠊蟑螂群体中形成Met52孢子的尸体的百分数增加时，该蟑螂群体中总死亡率百分数也增加了。具体的，如图8所表现的，在大约5天后死亡率百分数是大约20%，在第14天或大约14天时死亡率百分数是大约95%。[0099]在最优条件下，对德国小蠊蟑螂及其从正在形成孢子的尸体水平传播Met52孢子到其它群体成员的能力的更大研究被证实是有效的。本鉴定法中实施的更多的重复次数造成了就群体中形成孢子的百分数而言更大的标准差。可以外推出超过两周时程的数据以显示如下内容:引入单只形成孢子的尸体的蟑螂中，平均有40%被Met52菌丝生长感染、消耗，并被鉴定为Met52形成孢子阳性。[0100]本发明可以用以下编号的段落来描述:[0101]1.一种用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的组合物，其包含有效量的一种或多种昆虫病原性真菌。[0102]2.段落I的组合物，其中所述昆虫病原性真菌选自下组:绿僵菌属菌种(Metarhiziumspp.)、白僵菌属菌种(Beauveriaspp.)、拟青霉属菌种(Paecilomycesspp.)、阶霉属菌种(Lecanicilliumspp.)和被毛抱属菌种(Hirsutellaspp.)。[0103]3.段落I的组合物，其中所述昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)。[0104]4.段落3的组合物，其中所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。[0105]5.段落I的组合物，其中所述组合物进ー步包含化学杀虫剂。[0106]6.段落5的组合物，其中所述化学杀虫剂是饵配制物，喷雾配制物和粉末配制物。[0107]7.段落6的组合物，其中所述化学杀虫剂包含活性成分，所述活性成分选自下组:硼酸，阿巴克丁，氟虫臆，氟蚁腙，茚虫威，和吡虫啉。[0108]8.段落I的组合物，其中所述节肢动物是蟑螂。[0109]9.段落8的组合物,其中所述蟑螂是德国蟑螂德国小蠊(Blatellagermanica)、褐带蟑螂长须皮蠊(Supella1ngipaloa)、东方蟑螂东方蜚蠊(Blattaorientalis)、烟褐蟑螂烟色大爐(Periplanetafuliginosa)，美洲蟑螂美洲大爐(PeriplanetaAmericana)、土耳其斯坦蟑螂Blattalateralis,和田野蟑螂Blattavaga。[0110]10.一种用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的方法，其包括:[0111](a)制备具有有效量的ー种或多种昆虫病原性真菌的组合物；以及[0112](b)使所述组合物暴露于目标节肢动物害虫。[0113]11.段落10的方法，其中所述昆虫病原性真菌选自下组:绿僵菌属菌种、白僵菌属囷种、拟青霉属囷种、阶霉属囷种、和被毛抱属囷种。[0114]12.段落11的方法，其中所述昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)。[0115]13.段落12的方法，其中所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。[0116]14.段落10的方法，其中通过将所述组合物放置于诱捕器中使所述目标节肢动物害虫暴露于所述组合物。[0117]15.段落10的方法，其中通过将所述组合物与食物源组合使所述目标节肢动物害虫暴露于所述组合物。[0118]16.段落10的方法，其中通过将所述组合物与化学杀虫剂组合使所述目标节肢动物害虫暴露于所述组合物。[0119]17.段落16的方法，其中所述化学杀虫剂是饵配制物，喷雾配制物和粉末配制物。`[0120]18.段落17的方法，其中所述化学杀虫剂包含活性成分，所述活性成分选自下组:硼酸，阿巴克丁，氟虫臆，氟蚁腙，茚虫威，和吡虫啉。[0121]19.段落10的方法，其中所述目标节肢动物害虫是ー种或多种蟑螂。[0122]20.段落19的方法，其中所述蟑螂是德国蟑螂德国小蠊、褐带蟑螂长须皮蠊、东方蟑螂东方蜚蠊、烟褐蟑螂烟色大蠊，美洲蟑螂美洲大蠊、土耳其斯坦蟑螂Blattalateralis,和田野蟑螂Blattavaga。[0123]21.ー种昆虫诱捕器，其包含能够吸引昆虫的盒/房以及ー种或多种用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的组合物，所述组合物包含有效量的ー种或多种昆虫病原性真菌。[0124]22.段落21的昆虫诱捕器，其中所述昆虫病原性真菌选自下组:绿僵菌属菌种、白僵菌属菌种、拟青霉属菌种、蚧霉属菌种、和被毛孢属菌种。[0125]23.段落21的组合物,其中所述昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)。[0126]24.段落23的组合物，其中所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。[0127]25.段落21的组合物，其中所述组合物进ー步包含化学杀虫剂。[0128]26.段落25的组合物，其中所述化学杀虫剂是饵配制物，喷雾配制物和粉末配制物。[0129]27.段落26的组合物，其中所述化学杀虫剂包含活性成分，所述活性成分选自下组:硼酸，阿巴克丁，氟虫臆，氟蚁腙，茚虫威，和吡虫啉。[0130]应当理解，本发明的说明书和实施例只是例举性质的，且本领域技术人员可以想到在本发明的精神和范围之内其它的实施方案。虽然本发明是以特定的形式以及其实施方案所描述的，但是也可以在不背离如所附权利要求中限定的本发明的精神或范围的情况下采用除以上所讨论内容之外的各种修改形式。例如，可以以等同内容替换具体描述的那些，并且在某些情况下，可以逆转或插入特定步骤的运用，这些都不背离如所附权利要求中描述的本发明的精神或范`围。【权利要求】1.一种用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的组合物，其包含有效量的ー种或多种昆虫病原性真菌。2.权利要求1的组合物，其中所述昆虫病原性真菌选自下组:绿僵菌属菌种(Metarhiziumspp.)、白僵菌属菌种(Beauveriaspp.)、拟青霉属菌种(Paecilomycesspp.)、阶霉属菌种(Lecanicilliumspp.)和被毛抱属菌种(Hirsutellaspp.)。3.权利要求1的组合物，其中所述昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)。4.权利要求3的组合物，其中所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。5.权利要求1的组合物，其中所述组合物进ー步包含化学杀虫剂。6.权利要求5的组合物，其中所述化学杀虫剂是饵配制物、喷雾配制物和粉末配制物。7.权利要求6的组合物，其中所述化学杀虫剂包含活性成分，所述活性成分选自下组:硼酸，阿巴克丁(abamectin)，氟虫腈(fipronil)，氟蚁腙(hydramethylnon)，却虫威(indoxacarb),和批虫啉(imidacloprid)。8.权利要求1的组合物，其中所述节肢动物是蟑螂。9.权利要求8的组合物,其中所述蟑螂是德国蟑螂德国小蠊(Blatellagermanica)、褐带蟑螂长须皮蠊(Supella1ngipaloa)、东方蟑螂东方蜚蠊(Blattaorientalis)、烟褐蟑螂烟色大爐(Periplanetafuliginosa)，美洲蟑螂美洲大爐(PeriplanetaAmericana)、土耳其斯坦蟑螂Blattalateralis,和田野蟑螂BlattaVaga010.一种用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的方法，其包括:(C)制备具有有效量的ー种或多种昆虫病原性真菌的组合物；并(d)使所述组合物暴露于目标节肢动物害虫。11.权利要求10的方法，其中所述昆虫病原性真菌选自下组:绿僵菌属菌种、白僵菌属囷种、拟青霉属囷种、阶霉属囷种、和被毛抱属囷种。12.权利要求11的方法，其中所述昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌。13.权利要求12的方法，其中所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。14.权利要求10的方法，其中通过将所述组合物放置于诱捕器中使所述目标节肢动物害虫暴露于所述组合物。15.权利要求10的方法，其中通过将所述组合物与食物源组合使所述目标节肢动物害虫暴露于所述组合物。16.权利要求10的方法，其中通过将所述组合物与化学杀虫剂组合使所述目标节肢动物害虫暴露于所述组合物。17.权利要求16的方法，其中所述化学杀虫剂是饵配制物，喷雾配制物和粉末配制物。18.权利要求17的方法，其中所述化学杀虫剂包含活性成分，所述活性成分选自下组:硼酸，阿巴克丁，氟虫臆，氟蚁腙，茚虫威，和吡虫啉。19.权利要求10的方法，其中所述目标节肢动物害虫是ー种或多种蟑螂。20.权利要求19的方法，其中所述蟑螂是德国蟑螂德国小蠊、褐带蟑螂长须皮蠊、东方蟑螂东方蜚蠊、烟褐蟑螂烟色大蠊，美洲蟑螂美洲大蠊、土耳其斯坦蟑螂Blattalateralis,和田野蟑螂BlattaVaga021.ー种昆虫诱捕器，其包含能够吸引昆虫的盒/室以及ー种或多种用于降低或消除由腐烂中的节肢动物尸体产生的恶臭的组合物，所述组合物包含有效量的ー种或多种昆虫病原性真菌。22.权利要求21的昆虫诱捕器，其中所述昆虫病原性真菌选自下组:绿僵菌属菌种、白僵菌属菌种、拟青霉属菌种、蚧霉属菌种、和被毛孢属菌种。23.权利要求21的组合物，其中所述昆虫病原性真菌是金龟子绿僵菌。24.权利要求23的组合物，其中所述昆虫病原性真菌是DSM3884、DSM3885或其混合物。25.权利要求21的组合物，其中所述组合物进ー步包含化学杀虫剂。26.权利要求25的组合物，其中所述化学杀虫剂是饵配制物，喷雾配制物和粉末配制物。27.权利要求26的组合物，其中所述化学杀虫剂包含活性成分，所述活性成分选自下组:硼酸，阿巴克丁，`氟虫臆，氟蚁腙，茚虫威，和吡虫啉。【文档编号】A61L9/01GK103491787SQ201180061720【公开日】2014年1月1日申请日期:2011年10月18日优先权日:2010年10月29日【发明者】J.E.勒兰德申请人:诺维信生物股份有限公司