专利名称：治疗年龄相关性听力损失的药物组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及听力损失的预防和治疗，具体地说是一种用来治疗由于噪音、手术、毒素以及各种压力引起年龄相关性的听力损失和耳鸣的药物组合物及其应用。
背景技术：
年龄相关性听力损失(age-related hearing loss, ARHL)，或称老年性聋 (presbycusis)，是老年人群最常见的感觉缺失，主要表现为嘈杂环境中听觉敏感程度和言语理解力、声源定位能力下降，以及听觉中枢处理听觉信息的能力减弱。老年性聋对老年人的情绪和行为都有影响，容易导致社会孤立及抑郁感。年龄、噪声损伤、耳科疾病或全身疾病、使用耳毒性药物、遗传易感性等是老年性聋产生的主要原因(1，2).虽然各国都在努力寻找各类治愈或缓解药物，但老年性聋无法逆转，全球都仍无任何一种针对老年性聋的有效药物问世。目前的治疗措施主要是尽可能补偿患者听力损失，以佩戴助听器(hearing aids)为主，可以改善交流能力，但这个方法不能使得听力恢复正常。部分患者有植入人工耳蜗的适应证，植入后可以改善听力，但同样不能用于治疗听力损失。随着我国进入老龄化社会，根据2005年全国1%人口抽样调查主要数据公报，65 岁以上老年人占总人口的7. 69% (2010年底第六次全国人口普查尚未登出公报)，2050年估计将达25%，患老年性聋的人口绝对数还将持续增长(3，4).可以预见，与发达国家类似，老年性聋也将成为我国一个重要的社会问题。发达国家，例如英国，也并非所有患者都能佩戴上助听器。人工耳蜗则价格更高(5，6).由于人们意识到听力下降并寻求医疗帮助往往已经是听力损伤后的8 20年间，各国耳科学家除了加强老年性聋的宣传和筛查，都在探索老年性聋的防治措施，主要集中在药物筛选方面，但目前仍未有突破性进展。我们发现，使用T型Ca2+通道阻断剂中的一类药物——抗癫痫药(例如乙琥胺)，可以获得延缓年龄相关听力损失的能力，并且主要是通过减少耳蜗螺旋神经元的丢失来实现。由于人类老年性聋的复杂性，迄今未有一种可以作为“金标准”的动物模型。携带 Cdh23基因突变的C57BL/6J小鼠是最常用的老年性聋小鼠模型，其耳聋在出生后2 3个月时就发生并加重。C57BL/6J小鼠与其他小鼠同样存在相似之处。据我们所知，这一类型的小鼠是唯一的一种被确认的用来研究老年性耳聋的。我们所用方法的优越性在于(I)由于被选择的药物分别作用于不同的细胞-分子机制靶位点，联用两药可以产生协同效应; 同时(2)被选择的药物是抗氧化剂和FDA批准的药物组合而成，并且只有很少的副作用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，提供一种治疗年龄相关性听力损失的药物组合物及其应用。本发明的目的之一通过以下的技术方案实现治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于它含有治疗有效剂量的钙离子通道阻滞剂和/或自由基清除剂。
作为本发明的进一步改进，所述钙离子通道阻滞剂为已获FDA批准的能够阻断L 型钙离子通道和/或T型钙离子通道的抗高血压或抗癫痫药物。作为本发明的进一步改进，所述钙离子通道阻滞剂为恶唑烷二酮的衍生物或丁二酰亚胺的衍生物。作为本发明的进一步改进，所述钙离子通道阻滞剂为三甲双酮、地尔硫卓或乙琥胺。作为本发明的进一步改进，所述药物组合物含有一种或一种以上的自由基清除剂，所述自由基清除剂是已获FDA批准的抗氧化剂，其用于清除过多的自由基、阻断自由基信号传递。作为本发明的进一步改进，所述自由基清除剂为依布硒林、亲水性的维生素C或疏水性的维生素E。作为本发明的进一步改进，所述治疗有效剂量范围为I 1000mg/kg 日，当所述药物组合物中同时含有钙离子通道阻滞剂和自由基清除剂时，钙离子通道阻滞剂与自由基清除剂质量比为I : I到I : 10。本发明的目的之二是提供上述药物组合物在治疗由于噪音、手术、毒素以及各种压力引起年龄相关性的听力损失方面的应用。本发明与现有技术相比，优点在于本发明使用两类已获FDA批准的药物，即钙离子通道阻滞剂和与自由基代谢途径相关的自由基清除剂(抗氧化剂)，通过将这两类不同的化学药物以协同作用的方式联合使用，可提高其治疗ARHL的效果并且降低药物的毒副作用。本发明的创新之处主要包括以下两个方面(I)本发明将焦点放在11000余种已获 FDA批准的药物，这些药物的药理活性高、副作用小；(2)本发明中所选择的药物分别作用于不同的细胞-分子机制靶位点，联用两药可以产生协同效应。
图I为实验实施例I中的第一实验组给药照组的对比图。图2为实验实施例2中的第二实验组给药照组的对比图。图3为实验实施例3中的第三实验组给药照组的对比图。图4为实验实施例4中的第四实验组给药移与空白对照组的对比图。图5为实验实施例5中的第五实验组给药移与空白对照组的对比图。
(三甲双酮)前后的ABR阈移与空白对 (依布硒林)前后的ABR阈移与空白对 (地尔硫卓)前后的ABR阈移与空白对 (三甲双酮+依布硒林)前后的ABR阈 (地尔硫卓+依布硒林)前后的ABR阈
具体实施例方式下面结合具体附图和实施例对本发明作进一步说明。小鼠的听性脑干反应(ABR)测试方法小鼠的耳蜗对频率在2-100千赫兹的声音有反应。最敏感的范围大概是5-40千赫兹。所以我们分别测试了它们对5、10、20、28和40千赫兹的反应。所谓“近场”的声刺激是指把麦克风放在距离耳朵7厘米左右的地方，使其在耳朵周围形成一个均匀的声场。为了确保声刺激是一个恒定不变的量，一个B&K 4135 1/4英尺麦克风被摆放在老鼠耳朵通常在的位置，并且每次实验前调到标准的状态。在实验开始前，所有的老鼠通过注射戊巴比妥(60mg/kg)麻醉，并且给予硫酸阿托品来降低呼吸困难。耳镜检查是为了确保鼓膜是正常的。通过一个自动调温的电热毯连同一个直肠探针，中心温度一般保持在37+/-loC。为了测试听性脑干反应(ABR)，一个白金丝针电极皮下注射到右耳后方。电极被连接到一个 P15差分放大器(100-10000赫兹，X100)，然后一个自制的扩音器再另外放大1000倍，最后连接到电脑上进行数字处理。型号为WaVetekl48的振荡器产生了非正弦波刺激，该振荡器由一个定制的电子开关组成。声刺激通过型号为CrownD150A功率放大器放大并且由一个 KSN1020A压电陶瓷式麦克风输出。最低的能产生反应的声压水平式有由指定的频率决定的，一般使用5分贝为最小步长。实验材料实验动物及分组以10个月大的自交系C57BL/6J小鼠(购自The Jackson Laboratory)作为受试对象，取耳廓反射正常的健康C57BL/6J小鼠48只，随机分为七组，其中第一实验组8只，第二实验组8只，第三实验组8只，第四实验组8只，第五实验组8只和空白对照组8只。实验药品三甲双酮(TMO)、地尔硫卓(diltiazem)、依布硒林(ebselen),均购自 Sigma-Aldrich 公司。实验实施例I :三甲双酮(TMO)对年龄相关性听力损失的预防性作用以第一实验组中的8只10个月大的自交系C57BL/6J小鼠为受试对象，在进行实验前先使用听觉脑干反应(ABR)方法测定小鼠的听觉阈值。然后通过它们日常的饮用水给它们口服三甲双酮(TMO)持续两个月，药物剂量为每天200mg/kg。小鼠的体重和它们的饮用水量每三天监测一次。三甲双酮溶液装在有色瓶子里，并且每三天更换一次。在给药两个月后，利用听觉脑干反应(ABR)方法分析检测小鼠耳朵的听觉阈值，评定其听力状况，分析结果如图I所示。对比图I中给药组的ABR阈移(ABR threshold shifts)和空白对照组的ABR阈移可见，三甲双酮能够延缓听力下降。实验实施例2 :依布硒林(ebselen)对年龄相关性听力损失的预防性作用以第二实验组中的8只10个月大的自交系C57BL/6J小鼠为受试对象，在进行实验前先使用听觉脑干反应(ABR)方法测定小鼠的听觉阈值。然后通过它们日常的饮用水给它们口服依布硒林(ebselen)持续两个月，药物剂量为每天400mg/kg。小鼠的体重和它们的饮用水量每三天监测一次。依布硒林溶液装在有色瓶子里，并且每三天更换一次。在给药两个月后，利用听觉脑干反应(ABR)方法分析检测小鼠耳朵的听觉阈值，评定其听力状况， 分析结果如图2所示。对比图2中给药组的ABR阈移(ABR threshold shifts)和空白对照组的ABR阈移可见，依布硒林能够延缓听力下降。实验实施例3 :地尔硫卓(diltiazem)对年龄相关性听力损失的预防性作用以第三实验组中的8只10个月大的自交系C57BL/6J小鼠为受试对象，在进行实验前先使用听觉脑干反应(ABR)方法测定小鼠的听觉阈值。然后通过它们日常的饮用水给它们口服地尔硫卓(diltiazem)持续两个月，药物剂量为每天200mg/kg。小鼠的体重和它们的饮用水量每三天监测一次。地尔硫卓溶液装在有色瓶子里，并且每三天更换一次。在给药两个月后，利用听觉脑干反应(ABR)方法分析检测小鼠耳朵的听觉阈值，评定其听力状况，分析结果如图3所示。对比图3中给药组的ABR阈移(ABR threshold shifts)和空白对照组的ABR阈移可见，地尔硫卓能够延缓听力下降。实验实施例4:三甲双酮(TMO)和依布硒林(ebselen)联合用药对年龄相关性听力损失的预防性作用以第四实验组中的8只10个月大的自交系C57BL/6J小鼠为受试对象，在进行实验前先使用听觉脑干反应(ABR)方法测定小鼠的听觉阈值。然后通过它们日常的饮用水给它们口服三甲双酮(TMO)和依布硒林(ebselen)持续两个月，其中三甲双酮的药物剂量为每天100mg/kg,依布硒林的药物剂量为每天100mg/kg。小鼠的体重和它们的饮用水量每三天监测一次。三甲双酮和依布硒林溶液分别装在有色瓶子里，并且每三天更换一次。在给药两个月后，利用听觉脑干反应(ABR)方法分析检测小鼠耳朵的听觉阈值，评定其听力状况， 分析结果如图4所示。对比图4中给药组的ABR阈移(ABR threshold shifts)和空白对照组的ABR阈移可见，三甲双酮和依布硒林联合用药能够延缓听力下降。实验实施例5 :地尔硫卓(diltiazem)和依布硒林(ebselen)联合用药对年龄相关性听力损失的预防性作用以第五实验组中的8只10个月大的自交系C57BL/6J小鼠为受试对象，在进行实验前先使用听觉脑干反应(ABR)方法测定小鼠的听觉阈值。然后通过它们日常的饮用水给它们口服地尔硫卓(diltiazem)和依布硒林(ebselen)持续两个月，其中地尔硫卓的药物剂量为每天100mg/kg,依布硒林的药物剂量为每天100mg/kg。小鼠的体重和它们的饮用水量每三天监测一次。地尔硫卓和依布硒林溶液分别装在有色瓶子里，并且每三天更换一次。在给药两个月后，利用听觉脑干反应(ABR)方法分析检测小鼠耳朵的听觉阈值，评定其听力状况，分析结果如图5所示。对比图5中给药组的ABR阈移(ABR threshold shifts) 和空白对照组的ABR阈移可见，地尔硫卓和依布硒林联合用药能够延缓听力下降。在上述的实验实施例I 5中，所述空白对照组进行实验的方法及参数与各实验组相同，区别仅在于空白对照组中的实验动物不给任何药物。在实验中，我们发现两类不同的化学药物对小鼠的听觉具有良好的保护作用(图 I 图3所示)。我们还发现联合使用两种不同的化学药物，可以有效延缓年龄相关性听力损失。(图4、图5所不)。
权利要求
1.治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于它含有治疗有效剂量的钙离子通道阻滞剂和/或自由基清除剂。
2.如权利要求I所述的治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于所述钙离子通道阻滞剂为能够阻断L型钙离子通道和/或T型钙离子通道的抗高血压或抗癫痫药物。
3.如权利要求2所述的治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于所述钙离子通道阻滞剂为恶唑烷二酮的衍生物或丁二酰亚胺的衍生物。
4.如权利要求2所述的治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于所述钙离子通道阻滞剂为三甲双酮、地尔硫卓或乙琥胺。
5.如权利要求I所述的治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于所述药物组合物含有一种或一种以上的自由基清除剂，所述自由基清除剂是抗氧化剂。
6.如权利要求5所述的治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于所述自由基清除剂为依布硒林、亲水性的维生素C或疏水性的维生素E。
7.如权利要求I所述的治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于所述治疗有效剂量范围为I 1000mg/kg 日，当所述药物组合物中同时含有钙离子通道阻滞剂和自由基清除剂时，钙离子通道阻滞剂与自由基清除剂质量比为I : I到I : 10。
8.权利要求I 7任一项所述的药物组合物在治疗由于噪音、手术、毒素以及各种压力引起年龄相关性的听力损失方面的应用。
全文摘要
本发明涉及一种治疗年龄相关性听力损失的药物组合物，其特征在于它含有治疗有效剂量的钙离子通道阻滞剂和/或自由基清除剂。本发明使用两类已获FDA批准的药物，即钙离子通道阻滞剂和与自由基代谢途径相关的自由基清除剂(抗氧化剂)，通过将这两类不同的化学药物以协同作用的方式联合使用，可提高其治疗ARHL的效果并且降低药物的毒副作用。本发明的创新之处主要包括以下两个方面(1)本发明将焦点放在11000余种已获FDA批准的药物，这些药物的药理活性高、副作用小；(2)本发明中所选择的药物分别作用于不同的细胞-分子机制靶位点，联用两药可以产生协同效应。
文档编号A61K31/355GK102526734SQ201210008900
公开日2012年7月4日 申请日期2012年1月12日 优先权日2012年1月12日
发明者王玉丰 申请人:王玉丰