专利名称：多舌飞蓬提取物的制备方法
技术领域：
本发明属于医药领域，具体涉及ー种多舌飞蓬提取物的制备方法。
背景技术：
多舌飞蓬[Erigeron multiradatus (Lindl) Benth.]为菊科飞蓬属多年生草本植物，主要分布于我国西藏、四川西部和云南西北部高原地区，资源丰富，在藏医药中以全草入药，其藏药名为“美多罗米”，在藏医药中过去多用于跌打损伤、风湿疼痛、牙痛、胃痛、感冒等症，具有发表散寒、消炎止痛、活血化淤等功效。关于多舌飞蓬的药用成分、提取方法资源、化学成分、定性定量分析、药效、毒性的相关研究很多，如，多舌飞蓬的生药学研究[中草药，第35卷第3期2004年3月]公开了药材采用甲醇-水(1比1)超声提取，并对该提取液进行定性定量分析。飞蓬属多种植物的化学成分含量研究[药物分析杂志，2005，25(1)]公开了药材采用80%乙醇水浴提取，并对该提取液进行定性定量分析。多舌飞蓬黄酮成分的研究[中草药，1998年第四卷第12 期]公开了多舌飞蓬全草用95%乙醇回流提取6次，得浸膏，用热水溶解，水溶液冷却后依次用氯仿、乙醚、乙酸乙酷、正丁醇萃取，减压浓缩分别得到了氯仿、乙醚、乙酸乙酷、正丁醇提取物，经柱层析从上述提取物中分离得到化合物芹菜素、灯盏甲素、槲皮素等，并进行了定性分析。多舌飞蓬化学成分的研究[中草药，1999年第30卷第8期]公开了全草粉碎后用丙酮-水(6比4)浸提，滤液合并后，回收丙酮，浓缩物用石油醚萃取除去脂溶性杂质后继续用KOAc萃取，蒸干溶剂后得KOAc部分，残余物用n-BuOH萃取得到n-BuOH部分， n-BuOH部分和KOAc部分上MCl gelCHP20P柱脱色，用甲醇洗脱得到甲醇部分，上硅胶柱层折，用MEOH-CHCI3洗脱灯盏乙素。天然植物因其提取エ艺不同，会导致提取物在成分、成分含量、药效上有极大区別，故需要发明人做出创造性劳动以确定其提取エ艺及提取物的药效等内容。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种全新的方法提取多舌飞蓬提取物，所得提取物药用效果明确，标示性成分含量高。本发明提取方法为A、取多舌飞蓬药材，粉碎成粗粉，用8 16倍量的水、甲醇水溶液或乙醇水溶液提取，合并提取液；B、提取液调pH值至3 5后通过大孔树脂吸附柱洗脱，先用1 5BV(BV表示柱体积)的水，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗涤吸附柱，弃水洗液，之后采用20 70%的乙醇，以 0. 5 2. 5BV/hr的流速洗涤所述吸附柱，收集该乙醇洗脱液，浓縮，干燥，干膏得率为2. 8
. 2 κο ο
本发明的有益效果为1、本发明多舌飞蓬提取物中总黄酮的含量可达20 90%，其中含有芹菜素、槲皮素、木犀草素、灯盏甲素、异槲皮苷、灯盏乙素、汉黄芩素的一种或者多种。该制备方法能有效地富集灯盏甲素和灯盏乙素，去除了无药理作用的杂质成分。2、本发明多舌飞蓬提取物为所含各个活性成分协同起效的组合物，它不同于活性単体，它的药效也不同于各个活性成分药效的简单相加，药用效果明确，可用于预防或治疗心脑血管疾病、糖尿病并发症或炎症。药理实验表明，本发明多舌飞蓬提取物具有抑制小鼠血栓形成，大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，其对应的疾病为脑血栓、脑出血及其后遗症、缺血性中风、冠心病、心绞痛，对糖尿病并发症有较好的治疗作用，对炎症(如类风湿性关节炎)有抑制作用。3、急性毒性实验结果表明本发明多舌飞蓬提取物的毒性低，具有很好的用药安全性，这充分提示了多舌飞蓬提取物临床药用的安全性。4、本发明多舌飞蓬提取物的制备方法简单，成本低廉。其中所采用的大孔树脂纯化方法简便、快捷、重现性好；所选用的大孔树脂吸附容量大，解吸率大，可反复使用；选用乙醇作为溶剤，价廉、无毒，且可以回收再利用。由于具有以上优点，充分说明本发明制备方法适用于多舌飞蓬提取物的エ业化生产，具有很大的适用性。
图1灯盏甲素和灯盏乙素的吸附动力学曲线。图2不同pH值对灯盏甲素和灯盏乙素的吸附影响。图3不同的洗脱体积对灯盏甲素和灯盏乙素的解吸效果的影响。图4泄漏点的測定結果。图5不同浓度的乙醇对灯盏甲素和灯盏乙素的解吸效果。
具体实施例方式本发明提供了一种采用全新方法制备而得的多舌飞蓬提取物，其中灯盏甲素的含量为6. 7 24. 8%，灯盏乙素的含量为7. 6 26. 4% ；它是以水、甲醇水溶液或乙醇水溶液为提取溶剂进行提取，提取液调pH值至3 5后通过大孔树脂吸附柱洗脱，水清洗后采用 20 70%的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗脱，洗脱液浓縮，干燥而得的干膏。它可以采用如下方法制备而得A、取多舌飞蓬药材，粉碎成粗粉，用8 16倍量的水、甲醇水溶液或乙醇水溶液作为提取溶剤，如常用煎煮法、加热回流提取，渗漉法提取，索式提取法，连续逆流提取，超临界提取等，如采用回流提取吋，回流提取2 4次，提取时间为每次0. 5 3小吋，合并提取液；B、提取液调pH值至3 5后通过大孔树脂吸附柱洗脱，先用1 5BV的水，以 0. 5 2. 5BV/hr的流速洗涤所述吸附柱，弃水洗液，之后采用20 70%的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗涤所述吸附柱，收集该乙醇洗脱液，浓縮，干燥，干膏得率为2. 8 7. 2%，所得提取物中灯盏乙素的含量为7. 6 沈.4% ；灯盏甲素的含量为6. 7 8%。
所述的大孔吸附树脂通常为苯乙烯型共聚体的树脂，其结构为大孔网状结构，例如D101大孔树脂，HPD系列大孔树脂及其它系列树脂等。通过筛选试验优选，步骤A中用10倍量的浓度为40%乙醇水溶液回流提取，毎次 5小时。步骤B中的大孔吸附树脂为HPD100, HPD600、HPD450、D100、DlOU D141、D160或 AB-8大孔树脂中任意ー种；上柱前调整提取液的PH值至4，先用水洗脱，弃水洗液，然后改用45 50%的乙醇约3倍体积洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓縮干燥即得。该提取物通过药效试验证明，其药用效果明确，可用于预防或治疗心脑血管疾病 (如脑血栓、脑出血及其后遗症、缺血性中风、冠心病或心绞痛等、糖尿病并发症(如糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、糖尿病心脏病或糖尿病神经病变等或炎症(如类风湿关节炎)， 且该制备方法简单，提取物收率高，质量标准可控，应用试剂低毒，成本低廉。本发明提取物还可按照常规的制剂方法配制成可供给药的药剂形式，包括经ロ或胃肠外给药形式。在可供给药的形式中，应包含治疗有效量的多舌飞蓬提取物。所谓“治疗有效量”是指在该剂量下，本发明的提取物能够改善或者减轻疾病症状，或者能够抑制或阻断疾病的发展。可供给药的药剂形式可以为片剂、胶囊、颗粒剂、丸剤、ロ服液体制剂、注射剂。这些可供给药的組合物还可以根据需要制备成缓控释制剂或靶向制剂。ロ服给药的药剂形式可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剤、ロ服液体制剂、固体分散体、脂质体制剂等。它们可以含有常规赋形剂如粘合剂糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蜻胶、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂如乳糖、蔗糖、淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂如硬脂酸镁；崩解剂如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚维酮、羟乙酸淀粉钠、 微晶纤维素。液体組合物(如ロ服液体組合物)可以制备为ロ服液、糖浆剂形式，或者将他们制备为干燥产物形式，在使用前用水或者其他适当的溶媒溶解。此类液体制剂可以含有常规的添加剤，悬浮剂如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶、氰化可食用脂肪；乳化剂如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水溶性溶媒(可以包括食用油)如杏仁油、分馏椰子油或油性酯如甘油、丙ニ醇或乙醇的酯；防腐剤如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常规的矫味剂或着色剂。胃肠外组合物(如胃肠外给药组合物)可以含有所述活性化合物和无菌溶媒，根据使用的浓度，所述活性化合物可以悬浮于或溶解于该溶媒中。制备胃肠外给药的溶液吋， 可以将本发明的組合物溶于注射用水中，过滤除菌，然后灌装于适当的管制瓶或安瓿中并密封。最好将辅助剂如局部麻酔剂、防腐剂和缓控溶剂溶于所述溶媒中。为增加稳定性，可以将该組合物灌装于管制瓶中后冷冻并真空去除水分。以基本相同的方法可以制备胃肠外悬浮液，但是所述活性化合物是悬浮于溶媒中而不是溶解于溶媒中，并且除菌不能通过过滤进行。可以将所述化合物暴露于环氧乙烷中灭菌，然后将其悬浮于无菌溶媒中，最好该化合物中含有表面活性剂或润湿剂以有助于活性组分的均勻分布。以下为提取液的制备方法1)将新鲜采集的多舌飞蓬药材全植株晾干，粉碎成粗粉，用8 16倍量的水，回流提取2 4次，提取时间为每次0. 5 3小吋，合并提取液，浓缩至相对密度为1. 35 1. 40的稠膏，干燥粉碎即得，干膏得率为15 25%，所得提取物中灯盏甲素的含量1. 5 4. 7%，灯盏乙素的含量为2. 8 5. 3%。2)将新鲜采集的多舌飞蓬药材全植株晾干，粉碎成粗粉，用含8 16倍量的甲醇或者乙醇的水溶液，回流提取2 4次，合并提取液，减压浓縮至无醇味，该浓缩液做澄清处理，取上清液浓缩至相对密度为1.35 1.40的稠膏，干燥粉碎即得，干膏得率为15 25%，所得提取物中灯盏甲素的含量4. 2 8. 7%，灯盏乙素的含量为5. 3 9. 5%。将按照上述两种制备方法得到的提取液调pH值至3 5后通过大孔树脂吸附柱洗脱，先用1 5BV的水，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗涤吸附柱，弃水洗液，之后采用20 70%的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗涤所述吸附柱，收集该乙醇洗脱液，浓縮，干燥，干膏得率为2. 8 7. 2 %，所得提取物中灯盏甲素的含量6. 7 8%，灯盏乙素的含量为 7. 6 26. 4%。本发明多舌飞蓬提取物通过如下方法检测灯盏甲素和灯盏乙素的含量，測定条件如下对照品溶液的制备分別取灯盏乙素、灯盏甲素对照品(自制，含量> 98% )，用 60%甲醇溶解并定容于IOml容量瓶中。供试品溶液的制备取样品药材粉末(过40目筛)，精密称取约1. 0克，装入锥形瓶，加甲醇-水(1 1) 20ml，超声提取30min，倾出上清液于50ml容量瓶中，再加甲醇-水 (1 1) 20ml，超声提取30min，合并两次提取液，甲醇定容到刻度。在以上条件下，分別取供试品溶液与对照品溶液10 μ 1进样。色谱条件为乙腈acetonitile(A)，0· 4%冰醋酸 aqueous acetic acid (ν/ν, B) 流速为1. Oml · mirT1，柱温为35°C，检测波长为335nm。本发明提供了所述多舌飞蓬提取物的制备エ艺，首次采用多舌飞蓬进行了提取、 大孔吸附树脂制备エ艺的研究，提供了一种多舌飞蓬的大孔树脂纯化方法，该纯化方法是将多舌飞蓬提取液经上大孔树脂柱、洗脱收集洗脱液、浓缩干燥，获得纯化的多舌飞蓬提取物，从而有效的富集了灯盏甲素和灯盏乙素，并去除了大量的杂质。本发明多舌飞蓬提取物的制备方法筛选试验如下，通过如下筛选试验确定了满足提取物质量的提取エ艺及相关參数，并确定了最佳エ艺方案。一、均勻设计法优选多舌飞蓬的提取エ艺1. 1药材的处理按中国药典药材取样方法，分別取多舌飞蓬药材粗粉5g，根据均勻设计法的条件进行回流提取。每个水平重复3次，取其平均值。1. 2实验方法——均勻设计法选取溶剂浓度(乙醇30% 95%)、溶剂倍数(8 16)、提取时间(0.5 3小吋) 作为因素分析的三因素，分别设定为相应的9个水平，确定为提取エ艺优化条件的范围，见表1。根据均勻设计表(U95)确定实验序列，见表2。表1因素水平表
权利要求
1.多舌飞蓬提取物的制备方法，其特征在于它包括如下步骤A、取多舌飞蓬药材，粉碎成粗粉，用水、甲醇水溶液或乙醇水溶液提取，得提取液；B、提取液调pH值至3 5后过大孔树脂吸附柱，水洗涤后，弃水洗液，采用20 70% 的乙醇，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗脱，收集该乙醇洗脱液，浓縮，干燥即得。
2.根据权利要求1所述的多舌飞蓬提取物的制备方法，其特征在于步骤A中提取时采用回流提取，用8 16倍量的水、甲醇水溶液或乙醇水溶液回流提取2 4次，毎次 0.5 3小吋，合并提取液。
3.根据权利要求1所述的多舌飞蓬提取物的制备方法，其特征在于步骤A中提取时采用回流提取，用10倍量的浓度为40 50%乙醇水溶液回流提取2 4次，毎次1. 5小时。
4.根据权利要求1所述的多舌飞蓬提取物的制备方法，其特征在于步骤B提取液过大孔树脂吸附后，先用1 5BV的水，以0. 5 2. 5BV/hr的流速洗涤，弃水洗液后再用乙醇水溶液洗脱。
5.根据权利要求1所述的多舌飞蓬提取物的制备方法，其特征在于步骤B所述的大孔树脂为 D100、D101、D141、HPD100、HPD600、HPD450 或 AB-8 大孔树脂中任意ー种。
6.根据权利要求1所述的多舌飞蓬提取物的制备方法，其特征在于步骤B上柱前调整提取液的PH值至4。
7.根据权利要求1所述的多舌飞蓬提取物的制备方法，其特征在于步骤B中水洗涤后，采用45 50%的乙醇洗脱。
全文摘要
本发明属于医药领域，具体涉及多舌飞蓬的制备方法。本发明提供了一种由全新的方法提取多舌飞蓬，该提取方法为将多舌飞蓬药材以水、甲醇水溶液或乙醇水溶液为提取溶剂进行提取，提取液调pH值后过大孔树脂洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，即得多舌飞蓬提取物。该方法简单，成本低廉，所得提取物药用效果明确，标示性成分含量高，可用于预防或治疗心脑血管疾病、糖尿病并发症或炎症。
文档编号A61P9/10GK102552359SQ20121000894
公开日2012年7月11日 申请日期2008年6月27日 优先权日2008年6月27日
发明者张志锋, 张 浩 申请人:四川大学