专利名称：绿原酸在制备防治排卵障碍的药物或食品中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物技术领域，具体地，涉及绿原酸在制备保护卵巢，促进排卵，治疗排卵障碍的药物或食品中的应用。
背景技术：
排卵障碍又称为不排卵，是造成不孕不育的一个主要因素，占女性不孕因素的 25 30%。随着工作强度增强，精神压力的加大，环境的恶化及不健康的生活方式，排卵障碍的发病率在不断上升。排卵障碍除了引起不孕外，还可导致月经失调，闭经，多毛，肥胖等症状。此外，由于长期不排卵，性激素代谢紊乱，子宫内膜过度增生而无周期性的孕激素对抗作用，易诱发子宫内膜癌，乳腺癌等。因此，应对排卵障碍患者给与足够的重视，进行积极的治疗。卵泡发育及排卵是由下丘脑-垂体-卵巢性腺轴调控的，性腺轴的任何一个部位异常都可引起排卵障碍。在排卵障碍中下丘脑功能障碍占38%，垂体疾病占17%，卵巢功能障碍占大约45%。目前，对排卵障碍的治疗主要为药物促排卵。一线的治疗药物包括雌激素，克罗米芬，他莫茜芬，注射用尿促性素，促卵泡生成素及促性腺激素释放激素。这些药物的基本作用都是通过参与下丘脑-垂体-性腺激素的调控过程来促进排卵，都具有副作用，不能长期使用，因此这些药物均不能在根本上治疗排卵障碍，寻找能防治排卵障碍的新药势在必行。中药是我国传统文化的瑰宝，是全人类的财富。随着现代医药技术的不断发展，中药的应用和研究又爆发出新的生命力。对中药尤其是植物药的现代化开发主要是利用现代科学技术从植物药中提取有效部位和单体化学成分。从植物药中开发具有保护卵巢功能， 促进排卵，治疗排卵障碍的药物具有广阔的社会和经济效益前景。绿原酸在植物中分布广泛，从高等双子叶植物到蕨类植物均有，含量较高的植物有传统中药金银花、杜仲的叶中。其产品分别为金银花提取物、杜仲提取物。绿原酸具有广泛的生物活性，而且目前未见绿原算对人体有任何不良副作用的报道，因此是一种非常具有开发潜力的中药成分。迄今为止，现有技术中未见绿原酸具备保护卵巢，促进排卵，治疗排卵障碍的报道。
发明内容
本发明基于绿原酸能提高模式生物线虫的产卵量，缩短排卵周期以及增加小鼠产仔数的机制，将其进一步应用于的促排卵药物或食物中，目的旨在提供绿原酸的医药食品新用途，提供其在制备治疗排卵障碍及保护卵巢功能的药物或食品中的应用。为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案绿原酸在制备治疗排卵障碍的药物中的应用。上述应用中，排卵障碍为黄体化不破裂卵泡综合征。上述应用中，排卵障碍为多囊卵巢综合症。
上述应用中，排卵障碍为卵巢早衰。本发明同时提供绿原酸在制备保护卵巢功能食品中的应用。本发明还提供绿原酸在制备保护卵巢的药物中的应用。本发明还提供绿原酸在制备防治排卵障碍的功能食品中的应用。本发明还提供绿原酸在制备保护卵巢功能药品中的应用。本发明所述的绿原酸(3-(3，4-Dihydroxycinnamoyl)quinicAcid)，其分子结构
特征为本发明绿原酸用做药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0. 1-99 %，优选为0. 5-90 %的绿原酸，其余为药物上可接受的，对人体和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、超填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。绿原酸的组合物采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型，如液体制剂(注射剂、混悬剂、乳剂、 溶液剂、糖浆剂等)、固体制剂(片剂、胶囊剂、颗粒剂、冲剂等)、喷剂、气雾剂等。本发明的药物可经注射(静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射)和口服、舌下给药、粘膜透析等给药途径进行卵巢障碍的防治。
图1绿原酸对线虫在产卵期内每天的平均幼虫数；图2每条线虫幼虫数；图3线虫排卵周期；图4ICR小鼠二细胞胚胎数量；图5ICR小鼠囊胚孵出率；图6新生小鼠数量；图7新生小鼠体重。
具体实施例方式下面结合附图，用本发明的实施例进一步对本发明的实质性内容进行描述，但本发明的内容并不局限于此。实施例1 绿原酸按常规加注射液用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。实施例2
将绿原酸溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后灭菌熔封得粉针剂。实施例3 按绿原酸与赋形剂重量比为9 1的比例加入赋形剂，制成粉剂。实施例4 按绿原酸与赋形剂重量比为1 5-1 10的比例加入赋形剂，制粒压片。实施例5 绿原酸按常规口服液制法制成口服液。实施例6 按绿原酸与赋形剂重量比为5 1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。实施例7 按绿原酸与赋形剂重量比为3 1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。实施例8 按绿原酸46. 6克，加入淀粉600克，乳糖200克，薄荷醇3克，羧甲基淀粉钠152 克，制成含片，作为功能食品。为了更好的理解本发明的实质，下面以本发明的试验例即绿原酸与药用载体和/ 或赋形剂组成的药物组合物的药理作用结果来说明本发明的优异性，但不以此来限制本发明。试验例1 绿原酸在线虫中促进排卵的活性试验以秀丽线虫(Caenorhabditis elegans，C. elegans)作为模型进行实验，该化合物在20°C，0. 05mM(毫摩尔)和0. 5mM的给药浓度能够增加线虫的产卵量，缩短线虫的产卵周期。结果表明，绿原酸具有促进线虫排卵的功能。实验材料野生型秀丽线虫N2 购自美国线虫遗传中心(CGC)；MWM (3-(3,4-Dihydroxycinnamoyl)quinic Acid) :! Adamas Reagent 公司。实验方案1、线虫复苏、同步化(1)从-80°C冰箱中取出冻存的N2线虫(CGC，美国)1_2管，放置在超净台中，自然解冻约5分钟。(2)吸取离心管中上清冻存液，剩余约0. 5ml，注意更换枪头，不能造成交叉污染。(3)用移液器轻轻吸打沉淀的线虫，使悬浮，全部吸取后，转移到NGM+0P50 (大肠杆菌突变株)平板上培养。(4)在无菌风条件下吹干平板上残余液体，约10-15分钟。(5)盖上培养皿盖子后，放置在温度20°C，湿度60%的培养箱中培养。(6)吸出的废液及枪头全部放入烧杯，实验结束后，加入部分次氯酸水处理2小时后倒掉。(7)复苏培养约50小时后，取出，显微镜下，35倍单视野中有80-100个卵时，可以进行同步化。(8) ddH20 8ml冲洗每个平板。(9)每个平板收集约7. 5ml洗脱液，将洗脱液转移到15ml离心管中。(10)称取IOgNaOH,溶解在50ml无菌水中，配成5N NaOH, 5N NaOH/次氯酸钠按照 1. 5/3配成4. 5ml混合液，混勻备用。(11)向15ml离心管中加入3. 5ml上述混合液，每2分钟摇勻1次，管中无线虫残体为止。(12) 1300g 离心 1 分钟。(13)去上清，加入无菌去离子水:3ml，混勻。(14) 1300g 离心 1 分钟。(15)去上清，用Iml M9重悬，将混勻后的收集液转移到约含有25_35ml M9的50ml 离心管中，20°C，湿度60%条件下培养过夜。(16) 1300g离心收集Ll期同步化线虫，将收集的同步化线虫转移到90mm NGM平板上培养，20°C，湿度60%条件下培养。2、含化合物平板制备和线虫培养(1) 200ml固体NGM，微波炉融化，65°C以下时，加入以下成分IM MgS04200 μ 1，5mg/ml Chol est erol 200 μ 1，IM CaCl2200 μ 1, 5ml KPO4 (108. 3g KH2PO4, 35. 6g K2HPO4, H2O 至 1 升)pH6，4mM fudr 200 μ 1，将绿原酸母液按各终浓度的比例加入65°C以下时的NGM培养基，混合均勻，倒制约10个直径9cm细胞培养板。 多余的平板封口后，放4°C保存备用。(2)在NGM平板上铺制灭活的0P50菌液，无菌风吹干。(3)每个工作平板挑取60-80条L4后期的线虫，每个待测化合物做两个重复平板， 20°C培养。3、排卵实验(1)材料准备和线虫成虫处理同上。(2)将培养的同步化线虫成虫转移到对照、0. 05mM绿原酸、0. 5mM绿原酸平板上， 20°C培养。(3)每天转移成虫到新的培养皿中，旧培养皿于20°C继续培养，至幼虫孵出，技术每个培养皿中的幼虫数。(4)重复步骤(3)，直至成虫不再产卵。实验结果绿原酸(0. 05mM,0. 5mM) 20°C处理后每条线虫的排卵情况。结果表明， 绿原酸在线虫排卵初期显著性增加排卵量，并缩短排卵周期(见表1)表1绿原酸对线虫排卵情况的影响
权利要求
1.绿原酸在制备防治排卵障碍的药物中的应用。
2.根据权利要求1的应用，所述的排卵障碍为黄体化不破裂卵泡综合征。
3.根据权利要求1的应用，所述的排卵障碍为多囊卵巢综合症。
4.根据权利要求1的应用，所述的排卵障碍为卵巢早衰。
5.绿原酸在制备保护卵巢的药物中的应用。
6.绿原酸在制备防治排卵障碍的功能食品中的应用。
7.绿原酸在制备保护卵巢功能食品中的应用。
全文摘要
绿原酸在制备保护卵巢功能，促进排卵，治疗排卵障碍的药物及功能食品中的应用。本发明中的绿原酸可制备成各种形式的药物制剂，包括口服、注射、肺吸入制剂、透皮制剂，具体包括注射剂、口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂、气雾剂、粉雾剂、喷雾剂、贴剂等。
文档编号A61K31/216GK102526015SQ20121003157
公开日2012年7月4日 申请日期2012年2月13日 优先权日2012年2月13日
发明者吴桂生, 杨洁, 罗怀容, 郑善清 申请人:中国科学院昆明植物研究所