专利名称：桑黄中单体成分-纤孔菌素a及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种属于药物领域，尤其涉及提取自桑黄中的一种单体成分纤孔菌素A (inoscavin 及其制备方法和应用。
背景技术：
癌症是仅次于心血管疾病的人类第二大致死疾病，严重威胁人类健康。预计至 2030年，全球新发病癌症病人将达到约2100万，死亡病人约1320万。我国肿瘤每年新发病例约为220万，死亡人数约为160万，因此，对恶性肿瘤的防治与研究已成为全球医药工作者闻度关注的研究领域。
中药治疗癌症，因其多靶点、多环节、多效应的作用特点，能够提高机体免疫力，在延长生存期，提高生活质量方面发挥了重要作用，临床应用已证实中药辅助治疗肿瘤具有确切的疗效及独特的优势。抗肿瘤中药的发现及深入研究，将为中药抗肿瘤临床应用提供新的药物选择，为提高肿瘤治疗效果，促进人类健康事业做贡献。
桑MiPhellinus spp.)是一类大型真菌，以附生于野生桑树(ifo/YAs L.)的最为珍贵，桑黄始载于《本草纲目》，中医传统多用于治疗痢疾、盗汗、血崩、血淋、脐腹涩痛、脱肛泻血、带下、闭经等症。近年来由于发现其具有免疫调节以及抗肿瘤作用，逐渐成为研究开发的热点，日韩等国桑黄应用及产品开发丰富，如采用发酵罐人工生产桑黄菌丝体，并提取桑黄有效成分，以冻干粉为剂型，作为抗肿瘤药品；同时将桑黄广泛应用于护肤和保健产品中。目前我国对桑黄的研究及应用尚处于产业发展初期。
目前对桑黄的研究主要集中于抗肿瘤，抗炎，抗氧化作用等方面。对桑黄的成分研究多集中在桑黄多糖，已证实桑黄多糖具有确切的免疫调节、对多种肿瘤细胞的体外抑制作用、抗炎、及降血糖作用。对桑黄的其他化学成分，如黄酮类、三萜类的研究报道较少，而桑黄黄酮类具有抗氧化作用，呋喃酮类具有抗肿瘤作用，为了进一步阐述桑黄成分，客观全面评价其功效作用，进而推广应用，有必要对桑黄的非多糖成分进行研究。
本发明采用溶剂提取，高速逆流色谱分离技术，自桑黄中纯化制备得到一种单体成分，结合波谱解析，确定为呋喃酮类成分纤孔菌素A，经体外实验具有抑制肺癌肿瘤细胞、 肝癌肿瘤细胞增殖活性；体内活性试验验证具有抗炎、免疫调节及肿瘤化疗药物协同作用； 确定了该单体成分的纯化制备方法。应用该方法，能够批量制备桑黄单体成分，为桑黄药效学研究及药材质量控制提供物质基础。经检索，未见与本发明类似的桑黄中单体成分的制备方法的专利公开，未见与本发明类似的单体成分纯化制备方法的文献报道。发明内容
为了解决目前桑黄尚无法定及商品化标准物质，单体成分制备研究的不足的技术问题，本发明的第一个目的是提供桑黄中单体成分-纤孔菌素A化合物，该化合物经体外实验具有抑制肺癌肿瘤细胞、肝癌肿瘤细胞增殖活性；体内活性试验验证具有抗炎、免疫调节及肿瘤化疗药物协同作用，为进一步开展桑黄的药效学研究及药材质量评价与控制提供物质基础，最终为养生保健乃至疾病治疗提供新的保健食品或药物选择。
本发明的第二个目的是提供上述的纤孔菌素A化合物的制备方法。
本发明的第三个目的是提供上述的纤孔菌素A化合物的应用。
为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案纤孔菌素A化合物，该化合物具有以下的结构式
权利要求
1.纤孔菌素A化合物，其特征在于该化合物具有以下的结构式
2.根据权利要求I所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于该方法提取化合物的原料药材为桑黄。
3.根据权利要求2所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤 1)桑黄药材粉碎，采用乙醇回流提取； 2)乙醇提取物经石油醚萃取，弃去石油醚； 3)提取物经二氯甲烷萃取，取二氯甲烷层，干燥得二氯甲烷萃取物； 4)萃取物溶于流动相，经高速逆流色谱分离，接收、合并流分后回收溶剂，得到干粉。
4.根据权利要求3所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于步骤I)中取桑黄药材,粉碎成蚕豆大颗粒,加入相当于8倍药材质量的质量浓度为75%的乙醇水溶液，浸泡3h，80°C温浸提取2h，滤过；滤渣再加6倍药材质量的质量浓度为75%的乙醇水溶液，80°C温浸提取lh，滤过；滤渣再次加4倍药材质量的质量浓度为75%的乙醇水溶液，80°C温浸提取O. 5h，滤过；合并3次滤液，减压浓缩至稠液，备用。
5.根据权利要求3所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于步骤2)中取步骤I)的稠液，精密计量体积，加20倍量的热水溶散，转移至分液漏斗中，放冷；加入与热水相同体积的石油醚，振摇萃取；静置分层；分取下层水液，上层石油醚层弃去；下层水液采用同样的萃取过程，重复萃取I次；弃去石油醚层，得石油醚萃取去杂后的水液，备用。
6.根据权利要求3所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于步骤3)中取步骤2)的水液，加入等体积的二氯甲烷，振摇萃取；静置分层；分取下层二氯甲烷萃取层，上层水液采用同样的萃取过程，重复萃取2次；合并3次的二氯甲烷萃取液；50°C水浴蒸干，残渣冷藏备用。
7.根据权利要求3所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于步骤4)中流动相采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，精密计量体积，配制成体积比为1:1.5:1:1.5的混合溶液，充分振摇后静置3h，上下两层完全分层澄清，分离上下层，得到上相溶液与下相溶液，分别超声脱气，备用。
8.根据权利要求7所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于步骤4)中取步骤3)的残渣，精密称重，取下相溶液，体积相当于残渣质量数的10倍量，溶解残渣，用O. 45Mffl孔径的微孔滤膜滤过，滤液备用；取上相溶液，泵入高速逆流色谱仪分离管，待固定相充满整个分离管后，调节主机为正转，至800r/min转速，同时将下相溶液泵入，待流动相从柱口流出且固定相不流出，两相溶剂在分离管中达到动态平衡后，取滤液10mL，注入进样阀进样，流速3mL/min的条件下,395nm波长下检测,分离样品，总分析时间200min,每15min收集I个流分；合并其中90-160min时间段内所收集流分，减压回收溶剂，得到干粉。
9.根据权利要求3所述的纤孔菌素A化合物的制备方法，其特征在于该方法还包括精制步骤取制备的干粉，加乙腈溶解成质量浓度为lmg/mL的溶液，备用；采用C18制备色谱柱，在流动相乙腈-水体积比为25:75，流速5mL/min条件下，精密吸取步骤7)的溶液，进样3mL,分离精制,395nm波长检测，总运行时间45min,收集31_36min的洗脱液,减压干燥，得到淡黄色无定形粉末，即纤孔菌素A精制品。
10.根据权利要求I所述的纤孔菌素A化合物用于制备抑制肺癌肿瘤细胞、肝癌肿瘤细胞增殖活性以及抗炎、免疫调节或与肿瘤化疗药物协同作用的药物或保健食品中的应用；或者，该化合物用于作为桑黄药材的质量评价与质量控制的指标成分。
全文摘要
本发明涉及一种属于药物领域，尤其涉及提取自桑黄中的一种单体成分纤孔菌素A(inoscavinA)及其制备方法和应用。纤孔菌素A的制备方法包括以下步骤1)桑黄药材粉碎,采用乙醇回流提取；2)乙醇提取物经石油醚萃取，弃去石油醚；3)提取物经二氯甲烷萃取，取二氯甲烷层，干燥得二氯甲烷萃取物；4)萃取物溶于流动相，经高速逆流色谱分离，接收、合并流分后回收溶剂,得到干粉。本发明由于采用了上述的技术方案可以实现桑黄中单体成分纤孔菌素A化合物的批量制备，该化合物经体外实验具有抑制肺癌肿瘤细胞、肝癌肿瘤细胞增殖活性；体内活性试验验证具有抗炎、免疫调节及肿瘤化疗药物协同作用进一步研究其体内外药效作用。
文档编号A61P37/02GK102977114SQ20121047713
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月20日 优先权日2012年11月20日
发明者董宇, 寿旦, 李洪玉, 俞忠明, 陈平华, 王绪平, 陈莉君, 黄孝闻, 章建民, 张扬, 吴人杰 申请人:浙江省中医药研究院