专利名称：具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物、其制备方法及其在制备口服抗肺癌药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药多组分抗肺癌微乳，该纳米组合物将水不溶性药物灵芝总三萜及薏苡仁酯载入非水相中，将灵芝多糖及薏苡仁多糖载入水相中，制备成多组分微乳组合物。本发明还涉及这种微乳组合物的制备 方法。
背景技术：
肺癌是目前全球第一癌症杀手,全世界每年新增肺癌病例120万例，每30秒就有一人死于肺癌。在我国，肺癌同样是发病率与死亡率最高的癌症，据预测，到2025年，我国每年肺癌患者将超过100万，成为世界第一肺癌大国。2012年肺癌已被纳入医保救助试点范围。因此抗肺癌药物的研发将具有极大的社会效益及经济效益。目前国内外关于肺癌的治疗主要是手术及放疗、化疗，但是这些方法易对患者的正常器官造成较大的副作用，使患者的存活率较低。以“祛邪扶正”为特色的传统中药在治疗肺癌方面发挥了巨大作用，其疗效不仅巩固，而且毒副作用小，增加了对机体用药的安全性，与化疗并用可起到减毒增效的作用。灵芝为多孔菌科真菌赤芝fefloofe/ma lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang)的干燥子实体。性味甘、平；归心、肺、肝、肾经。具有补气安神，止咳平喘之功效。用于心神不宁，肺虚咳喘，虚劳短气，不思饮食等。现代科学研究表明，灵芝具有较强的抗肿瘤作用，其中灵芝总三萜是其抗肿瘤的主要有效组分，灵芝多糖是提高机体免疫力的主要有效组分，但二者口服吸收较差，因而影响其口服药效的发挥。薏该仁为禾本科植物薏该Cbiz lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman. ) Stapf的干燥成熟种仁。性味甘、淡、凉；归脾、胃、肺经。具有利水渗湿，健脾止泻，除痹，排脓，解毒散结之功效。用于水肿，脚气，小便不利，脾虚泄泻，湿痹拘挛，肺痈，肠痈，赘疣，癌肿。现代研究表明，薏苡仁亦具有较好的抗肿瘤作用，其中薏苡仁酯是其主要的抗肿瘤有效组分，薏苡仁多糖是提高机体免疫力的主要有效组分，但二者口服后生物利用度较低，从而影响了其临床疗效的发挥。本发明多组分微乳组合物的药物组成来源于临床抗肺癌验方，该验方由灵芝和薏苡仁两味中药组成，具有补气养阴，利水渗湿，消瘤软坚的作用。其中灵芝总三萜和薏苡仁酯为该复方主要抗肿瘤有效组分，灵芝多糖和薏苡仁多糖是提高机体免疫力的主要有效组分。目前该复方仍以传统水煎煮的方法用于患者，但灵芝总三萜和薏苡仁酯水溶性较差，灵芝多糖及薏苡仁多糖为大分子物质，口服均难于吸收，影响其药效的发挥。因此本发明采用微乳作为口服药物载体，以灵芝总三萜、薏苡仁酯、灵芝多糖及薏苡仁多糖四种组分配伍，薏苡仁酯兼具辅料的作用，多糖既可增强免疫作用又可增加微乳体系的稳定性，制备灵薏方多组分微乳组合物，以促进药物吸收，发挥协同抗肿瘤的作用，使抗肿瘤效果增强。微乳是一种由油相、水相、表面活性剂及助表面活性剂在适当比例自发形成的一种透明或半透明、低黏度、各向同性且热力学稳定的油水混合系统，具有可提高水难溶性药物的溶解度，促进脂溶性及水溶性大分子药物的吸收；提高药物的生物利用度等优点。由于微乳既含有水相又含有非水相，因此适宜于既有脂溶性组分又有水溶性组分的中药复方的负载。经检索，现有技术已有对灵芝或薏苡仁抗肿瘤的相关制剂报道。有关单一薏苡仁油的中国专利申请有一种治疗前列腺疾病的薏苡仁油软胶囊及其应用(02137311. 6)，一种薏该仁油微乳的制备方法(2010101934956. 6), 一种薏该仁油自乳化制剂及其制备方法(200710027400. I)及一种薏苡仁油前体脂质体及其制备方法(201010130883. X)等。有关单一灵芝总三萜的专利有一种抗肿瘤活性的灵芝三萜提取物的自微乳化纳米组合物及其制备方法(200910031997. 6)。有关灵芝及薏苡仁的专利有一种灵芝孢子油与薏苡仁油复合静脉注射乳剂及其制备方法(200510135357. I)。但经文献与专利检索尚未见有将灵芝和 薏苡仁中上述四类组分配伍的制剂报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物及其制备方法，以及该纳米组合物在制备口服抗肺癌药物中的应用。该多组分微乳可促进脂溶性组分灵芝总三萜及薏苡仁酯的吸收，且四种组分配伍具有协同抗肿瘤作用，使抗肿瘤效果增强。本发明的第一个发明目的是通过以下的技术方案来实现的
一种具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物，以灵芝总三萜、薏苡仁酯及灵芝多糖、薏苡仁多糖作为原料药，其中薏苡仁酯兼做油相，灵芝多糖、薏苡仁多糖溶于水相，其特征在于，所述原料药与表面活性剂和助表面活性剂组成的纳米组合物，各组分重量份如下灵芝总三萜5-30份，薏苡仁酯45-150份，表面活性剂45-200份，助表面活性剂20-100份，灵芝多糖5-50份，薏苡仁多糖20-100份，蒸馏水300-900份。各组分重量份的优化比例是
灵芝总三萜10-25份，薏苡仁酯60-120份，表面活性剂60-150份，助表面活性剂30-80份，灵芝多糖10-40份，薏苡仁多糖50-90份，蒸馏水400-800份。各组分重量份的更为优化的比例是
灵芝总三萜12-20份，薏苡仁酯75-90份，表面活性剂75-100份，助表面活性剂35-60份，灵芝多糖15-25份，薏苡仁多糖60-80份，蒸馏水500-600份。上述的灵芝总三萜是指将灵芝子实体通过超临界CO2萃取的方法萃取得到，具体流程如下将灵芝粗粉装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为25 MPa，萃取温度为45°C，萃取时间为I. 5 h，夹带剂(95%乙醇)的用量为3倍量的药材；分离釜I压力为7 MPa，温度为500C ;分离釜II压力为4 MPa，温度为36°C ;萃取装置内CO2流量控制在30 L · h—1。当达到试验设定的萃取时间后，从分离釜I和分离釜II出料口接收萃取液，合并萃取液，回收溶齐U，50°c真空干燥，得灵芝总三萜纯度为61% (分光光度法测定，以熊果酸计)的提取物。上述的薏苡仁酯是指将薏苡仁通过超临界CO2萃取的方法萃取得到，具体流程如下将薏苡仁粗粉装入萃取釜中，设定萃取釜的压力为22 MPa，萃取温度为38°C ;萃取时间为2. 5 h，萃取两次；夹带剂(95%乙醇)的用量为3倍量的药材；分离釜I压力为8 MPaJ^度为48°C ;分离釜II压力为4 MPa，温度为26°C ;萃取装置内CO2流量控制在30 L · h'当达到试验设定的萃取时间后，从分离釜I和分离釜II出料口接收萃取液，合并萃取液，回收溶剂，50°C真空干燥，得薏苡仁酯纯度为74% (分光光度法测定，以甘油三油酸酯计)的提取物。上述的灵芝多糖、薏苡仁多糖是指分别将灵芝子实体、薏苡仁超临界CO2萃取后的药渣水提醇沉后得到，具体流程如下取超临界CO2萃取后的灵芝子实体粗粉或薏苡仁粗粉残渣，加入12倍量的水，回流提取2次，每次I h，合并两次提取液，离心滤过，滤液浓缩，力口乙醇沉淀，使溶液含醇量为80%，静置过夜，滤过，将沉淀用水溶解，加入1/5体积的Sevag试剂(正丁醇氯仿=1:5)振摇30 min，离心，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质，将分离得到的水层，浓缩，真空干燥，即得灵芝或薏苡仁多糖提取物，其多糖纯度分别为55%、58%(分光光度法测定，以葡萄糖计)。 上述的表面活性剂可选自以下化合物中的一种或多种吐温80，吐温60，吐温20，泊洛沙姆，卵磷脂，司盘80，司盘60，0P乳化剂，聚氧乙烯氢化蓖麻油，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；
上述助表面活性剂可选自以下化合物中的一种或多种乙醇，异丙醇，1，2-丙二醇，丙三醇，正丁醇，聚乙二醇300，聚乙二醇400，或乙二醇单乙基醚。本发明基于临床抗肺癌验方“灵薏方”，在中医药理论的指导下，充分发挥了中药多组分多靶点及配伍给药的用药特点设计出一种多组分微乳载药系统，且在现有专利及文献中尚未发现关于灵芝总三萜、薏苡仁酯、灵芝多糖及薏苡仁多糖配伍的微乳及其制备方法的报道。配伍是中医药用药的一大特色，本发明中的灵芝总三萜与薏苡仁酯均是抗肿瘤疗效确切的组分，灵芝多糖与薏苡仁多糖均是提高免疫力疗效确切的组分。本发明通过大量的实验研究发现灵芝总三萜、薏苡仁酯、灵芝多糖及薏苡仁多糖配伍后，灵芝总三萜和薏苡仁酯配伍对诱导细胞凋亡抑制肿瘤细胞增殖及细胞周期阻滞方面均显示出协同作用。灵芝总三職与薏该仁酯配伍使用能激活Caspase-3, Caspase-9及Caspase-8,明显下调Bcl_2蛋白水平，表明灵芝总三萜和薏苡仁酯配伍可调控细胞凋亡的相关蛋白来促进对肿瘤细胞增殖的抑制作用。灵芝总三萜和薏苡仁酯在配伍灵芝多糖与薏苡仁多糖口服后，荷瘤动物的肝指数、胸腺指数、脾指数和血浆中TNF-α、IL-6含量等免疫学指标与不配伍多糖相比均显著提高(P〈0. 05)，体现了多途径协同抗肿瘤作用。本发明前期研究亦发现灵芝总三萜、薏苡仁酯、灵芝多糖及薏苡仁多糖的肠道吸收较差，为克服上述缺陷，更好的发挥灵薏方中组分配伍的抗肿瘤效果，本发明针对灵芝总三萜、薏苡仁酯、灵芝多糖及薏苡仁多糖的理化性质，采用适合中药多组分的微乳作为载体，通过大量的筛选试验克服了多组分难以制备成微乳的技术难点，灵芝总三萜为脂溶性药物，薏苡仁酯兼做油相，载入非水相中，灵芝多糖及薏苡仁多糖为水溶性药物，载入水相中，选择适宜的表面活性剂及助表面活性剂，制备中药多组分载药的微乳给药系统，该给药系统既发挥了灵芝总三萜、薏苡仁酯、灵芝及薏苡仁多糖配伍协同抗肿瘤作用，又促进了上述四种组分的吸收，同时降低了辅料的用量，多糖加入水相还能增加微乳体系的稳定性，此外口服给药途径增强了患者的顺应性，避免了注射给药潜在的安全性问题，使制剂更安全、稳定。
完成本申请第二个发明任务的技术方案是，上述具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物的制备方法，步骤如下
(1)按比例精密称取灵芝多糖和薏苡仁多糖，溶于处方量的蒸馏水中，制备成水相，备
用；
(2)另取容器，按比例精密称取灵芝总三萜放于容器中，加入薏苡仁酯，磁力搅拌器下混匀，使药物溶解；
(3)接步骤2，再加入表面活性剂、助表面活性剂，磁力搅拌器下混匀；
(4)接步骤3，用步骤I制备的水相，滴入含有灵芝三萜、薏苡仁酯、表面活性剂及助表面活性剂的非水相中，搅拌混匀，即得一种多组分抗肺癌微乳组合物；
本发明制备的中药多组分微乳是在磁力搅拌器下搅拌即可形成。 本发明的中药多组分微乳可以以口服液的形式直接服用。与常规乳剂和亚微乳(100-10000 nm)相比，微乳粒径更小(10-100 nm)，属于热力学稳定体系；0/w型微乳处方中由于存在水相和非水相，适宜于中药复方含有水溶性及脂溶性有效组分的负载，微乳制剂制备工艺简单，易于工业化，具有良好的产业化前景。本发明的第三个发明目的的技术方案是上述具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物在制备口服抗肺癌药物中的应用。I.采用动物模型对“灵薏方”多组分微乳的抗肺癌作用进行药效评价。将细胞密度调至为I X IO7个/mL的Lewis肺癌细胞悬液接种于C57BL/6小鼠右腋部皮下，每只0.2 mL。接种后次日，称重，随机分组，每组8只。空白对照组生理盐水，每曰O. 4 mL/次；阳性对照组:环磷酰胺(20 mg · g-1 · cf1)，每日O. 2 mL/次；药物组灵芝总三萜+薏苡仁酯+灵芝多糖+薏苡仁多糖混悬液(重量比1:5:1. 2:4. 7)、灵芝总三萜+薏苡仁酯+灵芝多糖+薏苡仁多糖(重量比1:5:1. 2:4. 7)组成的微乳，给药剂量均为3. Og· kg—1· Cf1，每日O. 4 mL/次。环磷酰胺阳性对照组为腹腔注射，其他为灌胃给药。连续给药14 d，期间每天称重，观察小鼠的一般活动、毛发等状况。停药次日，称重，脱颈处死小鼠，剥离腋下肿瘤、肝脏、胸腺和脾脏。计算抑瘤率、肝指数、胸腺指数和脾指数。结果见表1，2。抑瘤率(%)=(模型组平均瘤重-给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重X 100% ； 肝指数(mg/g) =肝脏重量(mg)/小鼠体重(g)；
胸腺指数(mg/g) =胸腺重量(mg)/小鼠体重(g)；
脾指数(mg/g) =脾脏重量(mg)/小鼠体重(g)。表I “灵薏方”有效组分配伍混悬液及其微乳对Lewis荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用(
X ±5； /7=8)
组别I体重(g) I瘤重(g) I抑瘤率(%
生理盐水23. 86±2· 36 5. 42±0· 91 ~~
环磷酰胺16·73±1·69 I. 38±0· 48* Τ~4· 59
灵芝总三萜+薏苡仁酯+灵芝多糖+薏苡仁多糖(1:5:1.2:4.7)混悬液 9. 94±2. 02 5.93±0. 44* 45.89
灵芝总三萜+薏苡仁酯+灵芝多糖+薏苡仁多糖(1:5:1.2:4.7)微乳|20. 81±1.02|2. 32±0. 71*|57.25
注为各组与生理盐水组比较(* p〈0. 05)。结果表明与生理盐水组比较，本发明所得到的灵芝总三萜、薏苡仁酯、灵芝多糖、薏苡仁多糖四组分混悬液及微乳对体内Lewis肿瘤的生长均有显著性抑制作用，且微乳的抗肿瘤效果要远优于混悬液。说明采用现代提取分离手段及新型纳米给药系统将本药物组合物中的有效组分最大程度地提取分离、配伍并制备成微乳，可以更好地发挥协同抗肿瘤作用。表2 “灵薏方”有效组分配伍混悬液及其微乳对Lewis荷瘤小鼠免疫器官的影响Cx +51, /7=8)
权利要求
1.一种具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物，以灵芝总三萜、薏苡仁酯及灵芝多糖、薏苡仁多糖作为原料药，其中薏苡仁酯兼做油相，灵芝多糖、薏苡仁多糖溶于水相，其特征在于，所述的中药多组分微乳组合物是由原料药、表面活性剂和助表面活性剂组成的纳米组合物，其各组分重量份如下 灵芝总三萜5-30份，薏苡仁酯45-150份，表面活性剂45-200份，助表面活性剂20-100份，灵芝多糖5-50份，薏苡仁多糖20-100份，蒸馏水300-900份。
2.根据权利要求I所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物，其特征在于，所述各组分的重量份比例是 灵芝总三萜10-25份，薏苡仁酯60-120份，表面活性剂60-150份，助表面活性剂30-80份，灵芝多糖10-40份，薏苡仁多糖50-90份，蒸馏水400-800份。
3.根据权利要求2所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物，其特征在于，所述各组分的重量份比例是 灵芝总三萜12-20份，薏苡仁酯75-90份，表面活性剂75-100份，助表面活性剂35-60份，灵芝多糖15-25份，薏苡仁多糖60-80份，蒸馏水500-600份。
4.根据权利要求I所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物，其特征在于，所述的灵芝总三萜是指将灵芝子实体粗粉通过超临界CO2萃取的方法得到的灵芝总三萜提取物，其总三萜纯度>50% ;薏苡仁酯是指将薏苡仁粗粉通过超临界CO2萃取的方法得到的薏苡仁提取物，其甘油三油酸酯纯度>50% ;灵芝多糖是指将灵芝子实体超临界CO2萃取后的药渣水提醇沉后得到的多糖提取物，多糖纯度>50% ;薏苡仁多糖是指将薏苡仁超临界CO2萃取后的药渣水提醇沉后得到的多糖提取物，多糖纯度>50%。
5.根据权利要求I或2或3或4所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物，其特征在于， 所述的表面活性剂选自以下化合物中的一种或多种吐温80，吐温60，吐温20，泊洛沙姆，卵磷脂，司盘80，司盘60，OP乳化剂，聚氧乙烯氢化蓖麻油，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚； 所述的助表面活性剂选自下以下化合物中的一种或多种乙醇、正丙醇、异丙醇、1，2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、或乙二醇单乙基醚。
6.权利要求I所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物的制备方法，其特征在于，步骤如下 (1)按比例精密称取灵芝多糖和薏苡仁多糖，溶于处方量的蒸馏水中，制备成水相，备用； (2)另取容器，按比例精密称取灵芝总三萜放于容器中，加入薏苡仁酯，磁力搅拌器下混匀，使药物溶解； (3)接步骤2，再加入表面活性剂、助表面活性剂，磁力搅拌器下混匀； (4)接步骤3，用步骤I制备的水相，滴入含有灵芝三萜、薏苡仁酯、表面活性剂及助表面活性剂的非水相中，搅拌混匀，即得一种多组分抗肺癌微乳组合物； 其中，各组分重量份如下灵芝总三萜5-30份，薏苡仁酯45-150份，灵芝多糖5-50份，薏苡仁多糖10-90份，表面活性剂45-200份，助表面活性剂20-100份，蒸馏水300-900份。
7.根据权利要求6所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物的制备方法，其特征在于，所述各组分的重量份比例是 灵芝总三萜5-30份，薏苡仁酯45-150份，灵芝多糖5-50份，薏苡仁多糖10-90份，表面活性剂45-200份，助表面活性剂20-100份，蒸馏水300-900份； 所述的表面活性剂选自以下化合物中的一种或多种吐温80，吐温60，吐温20，泊洛沙姆，卵磷脂，司盘80，司盘60，OP乳化剂，聚氧乙烯氢化蓖麻油，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚； 所述的助表面活性剂选自以下化合物中的一种或多种乙醇、正丙醇、异丙醇、1，2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、或乙二醇单乙基醚。
8.根据权利要求6或7所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物的制备方法，其特征在于，所述各组分的重量份比例是 灵芝总三萜10-25份，薏苡仁酯60-120份，表面活性剂60-150份，助表面活性剂30-80 份，灵芝多糖10-40份，薏苡仁多糖50-90份，蒸馏水400-800份。
9.根据权利要求6或8所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物的制备方法，其特征在于，所述各组分的重量份比例是 灵芝总三萜12-20份，薏苡仁酯75-90份，表面活性剂75-100份，助表面活性剂35-60份，灵芝多糖15-25份，薏苡仁多糖60-80份，蒸馏水500-600份。
10.根据权利要求I所述的具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物在制备抗肺癌口服药物中的应用。
全文摘要
具有抗肺癌作用的中药多组分微乳组合物、其制备方法及其在制备口服抗肺癌药物中的应用以灵芝总三萜、薏苡仁酯及灵芝多糖、薏苡仁多糖为原料药，加入表面活性剂和助表面活性剂组成的纳米药物组合物，各组分重量份是灵芝总三萜5-30份，薏苡仁酯45-150份，灵芝多糖5-50份，薏苡仁多糖10-90份，表面活性剂45-200份，助表面活性剂20-100份，蒸馏水300-900份。本发明还公开了该组合物的制备方法。本发明将灵芝总三萜及薏苡仁酯载入非水相中，将灵芝、薏苡仁多糖载入水相中，其中薏苡仁酯既为药物又具有辅料的作用，多糖既可增强免疫作用又可增加微乳体系的稳定性。该微乳可促进脂溶性组分灵芝总三萜及薏苡仁酯的吸收，且四种组分配伍具有协同抗肿瘤作用，使抗肿瘤效果增强。
文档编号A61P35/00GK102961417SQ20121055221
公开日2013年3月13日 申请日期2012年12月18日 优先权日2012年12月18日
发明者陈彦, 贺俊杰 申请人:陈彦