专利名称：一种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及ー种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏。·
背景技术：
丁香是原产于印度尼西亚的ー种香料，又指丁香属植物树上的花蕾。从丁香茎蒸馏的丁香油用制杀菌药、香料、漱ロ剂、牙痛的局部麻酔药、合成香草醛，还可作增香剂和增强剂。还可用于烹调、香烟添加剤、焚香的添加剤、制茶等。可作为药用，中药也有丁香花蕾入药，药名公丁香，性温，味辛。香气馥郁，味辛辣，常用于食品调味。丁香树的树根(丁香根)、树皮(丁香树皮)、树枝(丁香枝)、果实(母丁香)、花蕾蒸馏所得的挥发油(丁香油)亦供药用。龙胆草为龙胆科龙胆属植物，又名龙胆，根及根茎入药。味苦，性寒。归肝、胆经。有清热燥湿，泻肝胆实火的作用。主治高血压，头晕耳鸣，胆嚢炎、急性传染性肝炎、阴部湿痒、湿热黄疸、疮疖痈肿，ロ苦和惊风等症，为保肝利胆之良药。根含裂环烯醚萜苷类苦味成分，龙胆苦苷，当药苦苷，当药龙胆草苷，苦龙胆酯苷，痕量苦当药酯苷；苦苷总含量可高达7. 33%，而龙胆苦苷含量可达6. 34%。龙胆碱即秦艽碱甲，龙胆黄碱。足癖(Tinea pedis)俗称脚气、香港脚，主要是由红色毛癖菌(Trichophytonrubrum)等皮肤浅部致病菌引起的传染性脚部皮肤病，容易反复发作，我国足癣发病率高达45. 2%，而74. 5%的人却没有得到有效治疗，市场上很多抗真菌药物用来治疗皮肤癣菌的感染，大多都难以根治足癣，而且随着抗真菌药物的广泛应用、新的菌种的出现及患者个体情况的差异，抗真菌药物的耐药问题也越来越严重。近年来，由于抗生素的不合理使用和药物的乱用，导致致病菌耐药性不断增强，临床耐药菌株不断増加。细菌的耐药性是全球关注的热点，中草药降低或抑制细菌的耐药性是防止细菌耐药性产生的措施之一。中草药作为我国的优势国药，其品种多，来源广泛，对人体的毒副作用小，易于代谢，抗菌作用明显，不易产生耐药性，因此其广阔前景凸显出来。本课题组g在探究大黄-黄柏药对提取物对红色毛癣菌等皮肤浅部致病菌的抑菌活性，为中草药在临床上治疗由红色毛癣菌等皮肤浅部致病菌引起的传染性皮肤病提供科学依据。
发明内容
1、ー种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏的制备，其特征在于包括以下步骤(I)称取龙胆草30. Og,加300-400mL水浸泡3_4h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤渣再加400-500mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液；(2)合并(I)中两次滤液，浓缩至相当于龙胆草重量lg/mL，得到龙胆草流浸膏；(3)称取丁香30. Og,加300-400mL水浸泡3_4h，采用水蒸气蒸馏法获得挥发油；(4)将(3)中丁香挥发油与(2)中龙胆草流浸膏混匀，得到丁香-龙胆草药对流浸膏，调pH值到7. 4 7. 6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后O 4°C保存，待用。2、丁香-龙胆草药对流浸膏用于制备抗足癣作用的药物制剂。
具体实施例方式本发明所述的ー种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏包括以下实施例，下面的实施例可进ー步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1 :1、ー种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏的制备，其特征在于包括以下步骤
(I)称取龙胆草30. Og,加300mL水浸泡3h,煎煮30min,用4层絹布过滤,得滤液，滤渣再加400mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液；(2)合并(I)中两次滤液，浓缩至相当于龙胆草重量lg/mL，得到龙胆草流浸膏；(3)称取丁香30. Og，加300mL水浸泡3h，采用水蒸气蒸馏法获得挥发油；(4)将(3)中丁香挥发油与⑵中龙胆草流浸膏混匀，得到丁香-龙胆草药对流浸膏，调pH值到7. 4之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后0°C保存，待用。2、丁香-龙胆草药对流浸膏用于制备抗足癣作用的药物制剂。实施例2 1、ー种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏的制备，其特征在于包括以下步骤(I)称取龙胆草30. Og,加400mL水浸泡4h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤洛再加500mL水煎煮IOmin,用4层絹布过滤,得滤液；(2)合并⑴中两次滤液，浓缩至相当于龙胆草重量lg/mL，得到龙胆草流浸膏；(3)称取丁香30. Og,加400mL水浸泡4h，采用水蒸气蒸馏法获得挥发油；(4)将(3)中丁香挥发油与(2)中龙胆草流浸膏混匀，得到丁香-龙胆草药对流浸膏，调pH值到7. 6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后4°C保存，待用。2、丁香-龙胆草药对流浸膏用于制备抗足癣作用的药物制剂。药理试验丁香-龙胆草药对流浸膏协同提高抗足癣作用I材料及方法1.1供试材料1.1.1供试菌株本实验所使用的三种具有代表性皮肤浅部致病菌均培养自山东大学(威海)微生物实验室，分别是HS (红色毛癣菌T. rubrum)，DC (大肠埃希氏菌E. coli), JH(金黄色葡萄球菌S. aureus)。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别为革兰阳性和革兰阴性细菌，且金黄色葡萄球菌常引起疖、痈和毛囊炎等皮肤感染，大肠杆菌则是最常见的泌尿道感染病原菌；红色毛癣菌是人皮肤癣病最常见的病原菌，因此，选择上述细菌和真菌作为受试菌有较好的代表性。1.1. 2培养基实验菌株所需培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、牛肉膏蛋白胨培养基、沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂(SDA)。(I)SDA :葡萄糖 40. Og、蛋白胨 10. Og、琼脂 15. 0g、蒸懼水 IOOOmL ；
(2) PDA :马铃薯 200. Og、葡萄糖 20. Og、琼脂 15. Og、蒸馏水 IOOOmL ；(3)牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏3. Og、蛋白胨10. Og、氯化钠5. Og、琼脂15. Og、蒸馏水 IOOOmL pH7. 0 7. 2。1.1. 3供试中草药本实验选取植物中草药为丁香-龙胆草，购自威海市颐和堂医药连锁山大店。1.1. 4试验仪器超净工作台、真菌培养箱、高压灭菌锅、电子天平、冷藏用冰箱、数码照相机、烘箱、离心机、旋转蒸发仪、电子游标卡尺等。1. 2实验方法1. 2.1菌悬液的制备细菌菌株经活化后，接种于固体平板于37°C过夜培养，挑取适量菌苔接种于液体培养基，置于振荡培养箱内37°C培养24h，浑浊后平板涂布计数，稀释至I X IO6Cfuzl备用。红色毛癣菌于28°C用PDA活化7d,挑取适量菌苔接种于液体培养基制备菌悬液，振荡15s，浑浊后涂布平板计数并调整至lX106cfu/L。1. 2. 2 丁香-龙胆草药对流浸膏的制备称取龙胆草30. Og,加300mL水浸泡3h,煎煮30min,用4层絹布过滤,得滤液,滤洛再加400mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液；合并两次滤液，浓缩至相当于龙胆草重量lg/mL，得到龙胆草流浸膏；称取丁香30. Og,加300mL水浸泡3h，采用水蒸气蒸馏法获得挥发油；将丁香挥发油与龙胆草流浸膏混匀，得到丁香-龙胆草药对流浸膏，调PH值到7. 4之间，高压蒸汽灭菌30min ;密封后0°C保存，待用。1. 2. 3 丁香-龙胆草药对流浸膏对皮肤浅部致病菌抑菌活性试验采用平板扩散法，制备直径为IOcm平板厚度4mm的PDA固体培养基和牛肉膏蛋白胨培养基平板，各菌悬液加IOOiU涂布均匀后放置20min，平板底部十字划线平分为四个区域，以每区域中心为打孔器打孔中心打孔，打孔器直径为5mm ;另外配制对照组空白对照组(培养基)、阴性对照组(培养基、菌悬液、无菌水)、阳性对照组(培养基、菌悬液、红霉素)，来观察细菌的生长情况、培养基和丁香-龙胆草药对流浸膏对细菌生长的影响。每种菌做四个平行，于各个孔滴加提取液50 u L，结束后放置50min。放置完毕后将培养有细菌的平板置于37°C培养箱内培养24h,,将培养有真菌的平板置于28°C培养箱内培养3d,游标卡尺測量抑菌圈直径。抑菌效果的判定參照參考文献，抑菌圈直径> 20mm为极敏，以“***”表示；15-19mm为高敏，以“**”表示；10_14为中敏，以表示；10以下为低敏，以表示。2结果与分析丁香-龙胆草药对流浸膏对皮肤浅部致病菌抑制作用表I 丁香-龙胆草药对流浸膏对皮肤浅部致病菌的抑制活性(n = 4)
权利要求
1.一种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏的制备，其特征在于包括以下步骤(1)称取龙胆草30.Og,加300-400mL水浸泡3_4h，煎煮30min，用4层絹布过滤，得滤液，滤渣再加400-500mL水煎煮lOmin，用4层絹布过滤，得滤液；(2)合并(I)中两次滤液，浓缩至相当于龙胆草重量lg/mL，得到龙胆草流浸膏；(3)称取丁香30.OgJP 300-400mL水浸泡3_4h，采用水蒸气蒸馏法获得挥发油；(4)将(3)中丁香挥发油与(2)中龙胆草流浸膏混匀，得到丁香-龙胆草药对流浸膏， 调PH值到7. 4 7. 6之间，高压蒸汽灭菌30min，密封后O 4°C保存，待用。
2.如权利要求1所述方法制备的丁香-龙胆草药对流浸膏的用途，其特征在于用于制备抗足癣作用的药物制剂。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种协同提高抗足癣作用的丁香-龙胆草药对流浸膏。称取龙胆草30.0g，加300-400mL水浸泡3-4h，煎煮30min，用4层绢布过滤，得滤液，滤渣再加400-500mL水煎煮10min，过滤，得滤液；合并滤液，浓缩至相当于龙胆草重量1g/mL，得到龙胆草流浸膏；称取丁香30.0g，加300-400mL水浸泡3-4h，采用水蒸气蒸馏法获得挥发油；将丁香挥发油与龙胆草流浸膏混匀，得到丁香-龙胆草药对流浸膏，调pH值到7.4～7.6之间，高压蒸汽灭菌30min；密封后0～4℃保存，待用；丁香-龙胆草药对流浸膏用于制备抗足癣作用的药物制剂。
文档编号A61P31/10GK103006786SQ20131001945
公开日2013年4月3日 申请日期2013年1月4日 优先权日2013年1月4日
发明者张崇禧, 张成城, 王超, 侯欣池, 李永斌, 江长优, 戚婷, 刘朝辉, 张婷婷 申请人:山东大学(威海)