专利名称：：用于治疗hiv的具有协同作用的组合物的制作方法用于治疗HIV的具有协同作用的组合物本发明涉及具有协同作用的组合物，该组合物含有与CCR5受体结合的单克隆抗体和阻断病毒进入CCR5表达细胞的低分子量别构拮抗剂。本发明还涉及通过共同给药单克隆抗体和CCR5受体的低分子量别构拮抗剂来治疗或预防HIV-1感染的方法。A隱M.Vandamme等人(抗病毒化学&化学疗法(J/iftV/m/C/^附/W^在0le附o^mi/，力，19989:187-203)公开了人类HIV-1感染的当前HAART临床疗法，该疗法包括至少三种药物联用。高效抗逆转录病毒治疗(HAART)通常包括使用核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)和蛋白酶抑制剂(PI)的联合疗法。这些化合物抑制病毒复制必需的生化过程。对顺应的首次药物治疗的患者来说，HAART能有效地降低死亡率以及降低HIV-1转向AIDS的恶化。尽管HAART显著改变HIV-1感染者的预后，但目前的治疗仍遗留许多缺点，包括给药方案非常复杂和有可能出现非常严重的副作用(A.Carr和D.A.Cooper,柳叶刀(丄""",)2000356(9239):1423-1430)。而且，这些多药治疗不能消除HIV-1，并且长期治疗通常会导致多药耐药，因此限制它们在长期治疗中的应用。开发更好地治疗HIV-1的新药物疗法仍需要优先考虑。趋化因子是可溶免疫介质的细胞因子家族中的亚类，是通过G-蛋白-偶联受体发挥其药理作用的促炎症反应肽。CCR5受体是该家族中的一员。趋化因子是能够将白细胞诱集到各种组织(这是对炎症和感染的重要反应)的白细胞趋化蛋白。"趋化因子，，是"趋化细胞因子"的缩写。人类趋化因子包括大约50种包含50-120个氨基酸的在结构上同源的小分子蛋白质。(M.Baggiolini等人，iev./附附""</.199715:675-705)人类CCR5由352个氨基酸组成，具有含有用于与G-蛋白相联的结构模体的细胞内C端，并配体-依赖性发信号(M.OppermannCW/"/w^grt""wg200416:1201-1210)。细胞外N端结构域促成高亲和性趋化因子结合和与gpl20HIV-1蛋白的相互作用(T.Dragic普通病毒学杂志(丄C7ew.K/ra/.)200182:1807-1814;C.Blanpain等人，生物化学杂志f7.祝o/.C7^附.」1999274:34719-34727)。已表明天然激动剂RANTES(调节激活作用，并由正常T-细胞表达和分泌)的结合位点在N端结构域中，且也已表明HIV-1gp120最初与N端结构域相互作用，并还与ECL2相互作用(B.Lee等人，生物化学杂志1999274:9617-26)。CCR5受体的调节剂在治疗各种炎症疾病和状况以及治疗HIV-1和遗传上相关的逆转录病毒引起的感染中可能是有用的。作为白细胞趋化因子，应的必需过程)中起到必不可少的作用。因为趋化因子和它们的受体对炎性、自身免疫性和感染性疾病的病理生理学是非常重要的，在调节(优选拮抗)趋化因子和它们的受体的活性方面具有活性的物质在这些疾病的治疗中是有用的。CCR5受体在治疗炎症和感染性疾病中是特别重要的。CCR5的天然配体是称为MIP-la和MIP-lb的巨噬细胞炎症蛋白类(MIP)以及RANTES。HIV-1通过利用病毒包膜糖蛋白(Env)与CD4抗原的高亲和作用感染单核细胞-巨噬细胞谱系和辅助T-细胞淋巴细胞。但是，CD4抗原看上去是进入细胞的必需但不充分的必要条件，为了感染细胞需要至少另一种表面蛋白(E.A.Berger等人，及ev./附附wwo/.199917:657-700)。随后发现两种趋化因子受体(CCR5或者CXCR4受体)是CD4的辅助受体(co-receptor)，它们是人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染细胞所必需的。从自然出现的无效等位基因CCR5口32强大的疾病改变作用的流行病学确认可推断出CCR5在HIV-1发病机理中的关键作用。口32突变使CCR5基因中32位碱基对缺失导致了称为口32的截短的蛋白。相对于一般群体，n32./口32纯合子在被暴露的/未感染的个体中是显著普遍存在的，表明了CCR5在HIV-1细胞进入中的作用(R.Liu等人，细胞(CW/)199686(3):367画377;M.Samson等人，自然(7Vam")1996382(6593):722國725)。HIV-1包膜蛋白包含两个亚基表面亚基gpl20和跨膜亚基gp41。这两个亚基是非共价联合的，并组成同型三聚体(其组成HIV-1包膜)。每个gp41亚基包含两个螺旋的七残基重复序列区(HR1和HR2)以及一个C端的疏^K融合区。在HIV-1的gpl20上的CD4结合位点显示与CD4分子在细胞表面相互作用，诱导gpl20的构象发生变化，产生或暴露出隐藏的CCR5(或CXCR4)结合位点，并发生构象变化，使gpl20与CCR5和/或CXCR4细胞-表面受体结合。这种二价相互作用使病毒膜与靶细胞膜接近，疏水融合区则能够插入到靶细胞膜中。gp41的构象变化使靶细胞膜的外侧小叶和病毒膜接触，产生融合孔，含有基因组RNA的病毒核通过该孔进入细胞质。病毒融合和细胞进入是一个复杂的多步过程，每一步都为治疗千预提供了可能性。这些步骤包括(/)CD40-gp120相互作用，(//)CCR5和/或CXCR-4相互作用和(沿)gp41介导的膜融合。这些步骤诱导的构象改变使化学治疗干预的其它靶点得以暴露。这些步骤中的每一步都为预防或减緩HIV-1感染的治疗干预提供了机会。设计的用来阻止gpl20/CD4相互作用的小分子(Q.Guo等人，/.K/ro/.200377:10528-63)和抗体(D.R.Kuritzkes等人，第10届反转录病毒和机会致病菌感染会议(7一Om/e"""柳/"/yW尸"5^517n/e"/o/w)，2003年2月10-14日，Boston,MA.摘要13;K.A.Nagashima等人，丄/"/e".Z)/s.2001183:1121-25)已经被公开。CCR5的小分子拮抗剂和抗体在下面进行了讨论。已经研发出CXCR4的小分子量拮抗剂(J,Blanco等人，Jwft附/cro6.C7^附W/iw.200046:1336-39)。恩夫韦地(enfuvirtide)(T20，ENF或FUZEON⑧)是对应于gp41的HR2结构域中的643-678残基的36个氨基酸的肽。恩夫韦地与HR1结构域的三聚体的巻曲螺旋结合，并以显性失活方式阻断内源性六螺旋维管束形成，从而抑制病毒融合(J.M.Kilby等人，A^wE"g.丄19984(11):1302-1307)。恩夫韦地已被批准进入临床使用。除了为CCR5调节剂在控制HIV-1感染方面提供可能性外，CCR5受体还是免疫功能的重要调节器，并且可以证明本发明的化合物在治疗免疫系统紊乱方面是有价值的。可通过对需要这类治疗的人给予有效量的本发明的CCR5拮抗剂化合物，治疗实体器官移植排斥、移植物抗宿主病、关节炎、类风湿关节炎、炎性肠病、异位性皮炎、牛皮裤、哮喘、变态反应或多发性硬化症。本发明涉及用于治疗HIV-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的药物组合物，该药物组合物包含共同给药的治疗有效量的具有协同作用的组合，该具有协同作用的组合是分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3选自SEQIDNO.9或IO)以及CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂的组合。图1描述代表性的CCR5受体的低分子量拮抗剂的结构，所述拮抗剂与单克隆抗体RoAbl3和RoAbl4组合具有协同作用。图2(A)描述利用Greco模型以响应面表示的在细胞-细胞融合中的RoAbl4和MVC之间的协同相互作用。从0到65nM连续地加入RoAbl4,从0到200nM连续地加入MVC。用这两种抑制剂的剂量对百分协同作用(Percentsynergy)作图。百分协同作用以10%增幅用不同色度表示。(B)在95%抑制水平上标绘的RoAbl4-MVC组合的等效线图。图3RoAbl3-MVC组合的剂量响应面。使用Greco(A)和Prichard(B)模型，将由每一组合剂量获得的百分协同作用对RoAM3和MVC剂量作图。图4该图阐明CCR5拮抗剂随着时间进程与5mAb结合的作用。用50nMAK602、MVC、SCH-D或溶媒将CHO-CCR5细胞在室温预孵育1h,然后用CCR5mAbROAbl4(A)、ROAbl3(B)、2D7(C)或45523(D)在0。C孵育不同时间，然后把细胞固定在2%多聚甲醛中，并用FACS(荧光活化细胞分选)分析。基于平均荧光强度(MFI)值绘制在不同拮抗剂存在下的每一mAb的时间进程曲线。图5该图阐明CCR5mAb对MVC与CHO-CCR5细胞结合的作用。用30jig/mL的CCR5mAb或PBS在室温下将细胞(2x105/100fiL)预孵育1h,然后用26nM的SH-MVC孵育。在不同的结束时间点，洗涤细胞，用实施例2所描述的方法测定结合了3H-MVC的膜。将来自对照样品的最大数值设定为100%结合，计算其他所有样品的相对结合率，基于这些在每个时间点的相对结合率绘制时间进程曲线。本发明的一个实施方案提供用于治疗HIV-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的具有协同作用的组合，该具有协同作用的组合是分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3是SEQIDNO.9或10)以及CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂的组合。本发明的另一个实施方案提供药物组合物，该药物组合物包含分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3是SEQIDNO，9或IO)和至少一种选自恩夫韦地(enfuviritide)、TNX画355、TAK-220、TAK-779、AK602(ONO4128)、SCH-C、SCH-D、MVC的其它抗病毒剂，和其中R1、R2、W和Ar如权利要求2所定义的式Ia-Id化合物的具有协同作用的组合。本发明的另一个实施方案提供药物组合物，该药物组合物包含分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基,列的CDR3是SEQIDNO.9或10)和至少一种在WO2005075484或本发明的另一个实施方案提供药物组合物，该药物组合物包含分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基*列的CDR3是SEQIDNO.9或10)和至少一种选自表1中的1-1到1-22的其它CCR5拮抗剂的具有协同作用的组合。本发明的另一个实施方案提供包含治疗有效量的具有协同作用的组合的药物组合物，所述具有协同作用的組合包含CCR5受体的分离的抗体以及CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂，在所述抗体中，重链和轻链的可变结构域是(i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:2;(,7)SEQIDNO:3和SEQIDNO:4;(7)SEQIDNO:5和SEQIDNO:6或(/v)SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。本发明的另一个实施方案提供包含治疗有效量的具有协同作用的组合的药物组合物，所述具有协同作用的组合包含CCR5受体的分离的抗体、以及至少一种选自TAK-220、TAK國779、AK602(ONO4128)、SCH-C、SCH-D、MVC的CCR5拮抗剂、或其中Ar、R1、R2和R3如权利要求2中所定义的根据式Ia-Id的化合物，在所述抗体中，重链和轻链的可变结构域是(i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:2;()SEQIDNO:3和SEQIDNO:4;(///)SEQIDNO:5和SEQIDNO:6;或(Zv)SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。本发明的另一个实施方案提供包含治疗有效量的具有协同作用的组合的药物组合物，所述具有协同作用的组合包含CCR5受体的分离的抗体和至少一种在WO2005075484或WO2005121145中公开的其它CCR5拮抗剂，在所述抗体中，重链和轻链的可变结构域是(i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:2;()SEQIDNO:3和SEQIDNO:4;(7)SEQIDNO:5和SEQIDNO:6;或(/v)SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。本发明的另一个实施方案提供包含治疗有效量的具有协同作用的组合的药物组合物，所述具有协同作用的组合包含CCR5受体的分离的抗体和恩夫韦地，在所述抗体中，重链和轻链的可变结构域是(i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:2;(,7)SEQIDNO:3和SEQIDNO:4;(7)SEQIDNO:5和SEQIDNO:6;或(,V)SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。本发明的另一个实施方案提供包含治疗有效量的具有协同作用的组合的药物組合物，所述具有协同作用的组合包含CCR5受体的分离的抗体和CD4抗体TNX-355，在所述CCR5受体的分离的抗体中，重链和轻链的可变结构域是(i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:2;()SEQIDNO:3和SEQIDNO:4;(///)SEQIDNO:5和SEQIDNO:6;或(/v)SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。本发明的另一个实施方案提供包含治疗有效量的具有协同作用的组合的药物组合物，所述具有协同作用的组合是由选自m<CCR5>Pz01.F3、m<CCR5>Px04.F6、m<CCR5>Pz03.1C5或m<CCR5>Px02.1Cll的杂交瘤细胞系产生的分离的抗体和CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂的组合。本发明的另一个实施方案提供治疗HIV-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所迷抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3是SEQIDNO.9或IO)和CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂的组合。本发明的另一个实施方案提供一种方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3是SEQIDNO.9或IO)与TAK-220、TAK-779、AK602(ONO4128)、SCH画C、SCH-D、MVC和其中Ar、R1、议2和113如权利要求2中所定义的根据式la-Id的化合物的组合。本发明的另一个实施方案提供一种方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3是SEQIDNO.9或IO)和恩夫韦地的组合。本发明的另一个实施方案提供一种方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体(此抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3是SEQIDNO.9或IO)和TNX-355的組合。本发明的另一个实施方案提供治疗HIV-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体和CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂的组合，在所述的分离的抗体中，重链和轻链的可变结构域是(i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:2;(,Y)SEQIDNO:3和SEQIDNO:4;(7)SEQIDNO:5和SEQIDNO:6;或(/v)SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。本发明的另一个实施方案提供治疗H1V-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体和CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂的组合，所述抗体是由选自m<CCR5>Pz01.F3、m<CCR5>Px04.F6、m<CCR5>Pz03.1C5或m<CCR5>Px02.1Cll的杂交瘤细胞系产生的。本发明的另一个实施方案提供治疗HIV-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体、以及选自TAK-220、TAK-779、AK602(ONO4128)、SCH-C、SCH-D、MVC的CCR5拮抗剂和其中Ar、R1、R"和W如权利要求2中所定义的根据式la-Id的化合物的组合，所述分离的抗体是由选自m<CCR5>Pz01.F3、m<CCR5>Px04.F6、m<CCR5>Pz03.1C5或m<CCR5>Px02.1Cll的杂交瘤细胞系产生的。本发明的另一个实施方案提供治疗HIV-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体和恩夫韦地的组合，所述抗体是由选自m<CCR5>Pz01.F3、m<CCR5>Px04.F6、m<CCR5>Pz03.1C5或m<CCR5>Px02.1Cll的杂交瘤细胞系产生的。本发明的另一个实施方案提供治疗HIV-1感染或者预防HIV-1感染或者治疗AIDS或ARC的方法，该方法包括对有其需要的宿主共同给予治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合是分离的抗体和TNX-335的组合，所述抗体是由选自m<CCR5>Pz01.F3、m<CCR5>Px04.F6、m<CCR5>Pz03.1C5或m<CCR5>Px02.1Cll的杂交瘤细胞系产生的。本文所用的术语"CCR5"是指与C-C类趋化因子成员相结合的趋化因子受体，并且其氨基酸序列包括Genbank登记号1705896提供的序列和相关的多态性结构。术语"趋化因子"是指能刺激白细胞移动的细胞因子。因为已经将CCR5受体鉴定为HIV-1的亲巨核细胞(M-tropic)林的HIV-1细胞进入的CD4的辅助受体，所以它已成为化学疗法的一个靶点。抑制HIV融合的传统的小分子方法和大分子方法都已被公开。本文所用的术语"抗体，，(Ab)包括单克隆抗体(mAb)、多克隆抗体、具有足以显示期望的生物活性的长度的抗体片段。在本文中术语"免疫球蛋白"(Ig)与"抗体"可互换使用。术语"分离的抗体"是指已被鉴定并从它的自然环境的组分或产生它的细胞中分离和/或回收的抗体。它的自然环境中的杂质组分是指能够干扰抗体的治疗作用的物质，可能包括酶、激素和其它的蛋白质性或非蛋白质性溶质。IgG抗体的基本的4-链抗体单位是包含两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链的异四聚体糖蛋白。IgG抗体的4-链单位一般大约为150000道尔顿。每条L链与H链通过一个二硫键连接，而根据H链的同种型，两条H链之间通过一个或多个二硫键连接。每条H链和L链也由链内二硫键规则地隔开。根据它们的重链的恒定域(CH)的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分为不同种类或同种型。免疫球蛋白有5类IgA、IgD、IgE、IgG和IgM,其重链分别被指定为a、S、s、y和n。基于Ch序列和功能的相对较小变化，将y和a类进一步分为亚类，如人类表达下述亚类IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。每一条H链在N端有一个可交域(Vh)，对于每一a和Y链，其跟随有3个恒定域(Ch)，对于p和s同种型则跟随有4个恒定域。每条L链在N端有一个可变域(VO，在它的另一端有一个恒定域(CU。Vt和VH是对齐的，Ct和重链的第一个恒定域(CHl)是对齐的。根据它们恒定域的氨基酸序列，可将任何脊椎动物种类的L链分为两种明显不同的类型k和入。据认为特定的氨基酸残基在轻链和重链的可变域之间形成接触面。Vh和VL—起配对形成单独的抗原结合位点。至于不同种类抗体的结构和性质，参见例如基础和临床免疫学(必^Zcflm/C7Zrt/ca//附附WMo/og力，第8版，DanielP.Stites，AbbaI.Terr和TristramG.Parslow(编者)，Appleton&Lange，Norwalk，Conn"1994年，第71页和第6章。术语"可变的"指如下事实在抗体之间可变域的某些片断的序列有^L大差别。V域调节抗原结合和决定特定抗体与特定抗原结合的特异性。然而可变性不是在可变域的110个氨基酸跨度间平均分布的。相反，可变区包含15-30个氨基酸的相对不变的段(stretches),称为框架区(FRs)，其被称为"高变区，，的更短的极度变化区分隔，每个高变区有9-12个氨基酸的长度。天然的重链和轻链的可变域各包括4个FRs，它们大部分采取p-折叠构型，与3个高变区连接，高变区形成连接p-折叠结构的环(loop)，在某些情况下形成P-折叠结构的一部分。每条链的高变区通过FRs靠在一起，并和另一条链的高变区靠在一起，有助于抗体的抗原-结合位点的形成(见Kabat等人，具有免疫学重要性的蛋白序列(&《"ewc"/Vy^/"s<//附附朋o/og/ca//M^es/)，第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，Md.1991)。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出不同的效应子功能。本文所用的术语"高变区"是指抗体的决定抗原-结合的氨基酸残基。高变区一般包括来自"互补决定区"或"CDR"的氨基酸残基(例如在VL中的大约残基24陽34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)，和VH中的大约残基1陽35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3);Kabat等人，见上)和/或来自"高变环"的那些氨基酸残基(例如VL中的残基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)，和VH中的残基26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3);Chothia和Lesk，/A^/.祝o/.1987196:901-917)。本文所用的术语"单克隆抗体"是指从基本上同质性抗体的种群中获得的抗体，即除了可小量存在的可能自然发生的突变以外，所述种群包含的个体抗体是完全相同的。单克隆抗体是高度特异的，针对单一抗原位点(表位)，不像多克隆抗体制品那样包含针对多种表位的多种抗体。单克隆抗体是有优势的，因为它们可以在不被其它抗体污染的情况下合成。修饰词"单克隆的"不要被理解为要求通过任何特定方法制备的抗体。例如，用于本发明中的单克隆抗体可以用Kohler等人首次描述的杂交瘤方法制备(自然(Nature)1975256:495)，或可以釆用重组DNA的方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(见，如美国专利号4816567)。本文的单克隆抗体包括"嵌合"抗体，其中重链和/或轻链的一部分与或亚类，同时该链的剩余部分与衍生自另一物种的抗体的相应的序列相同或是同源的或属于另一种抗体种类或亚类，还包括此类抗体的片段，只要它们具有期望的生物活性(参见，美国专利号4，816，567;和Morrison等人，7VW/，fA^4198481:6851-6855)。本文所关注的嵌合抗体包括"灵长类化(primatized)"的抗体，其包含衍生自非人类灵长类(如旧大陆猴(OldWorldMonkey)、猿等)的可变域抗原结合序列，和人类恒定区序列。生产嵌合抗体是为了减少由鼠抗体引起的人抗鼠抗体(HAMA)反应。通常，嵌合抗体含有大约33%的可变区鼠蛋白和67%的恒定区人蛋白。嵌合抗体可能表现出类似HAMA反应的人抗-嵌合抗体(ACA)反应，这可能限制它们治疗的有效性。嵌合抗体的使用显著降低HAMA反应但不能消除它们(K.Kmis画Reichel等人，C7,Vi.Z>,flgw￡6/附麵wo/.19941:365-372;M.V.PimmL^S"'.199455:PL45-PL49)。随后研制出了部分人源化抗体，其中将鼠单克隆抗体的重链和轻链的6个CDR和有限数目的结构性氨基酸用重组技术移植到缺失CDR的人IgG框架上(P.T.Jones等人，AWwr1986321:522-525)。尽管该方法进一步降低或消除HAMA反应，然而在很多情况下，需要有重要的其它抗体设计方法，以重建原始的鼠抗体必需的特异性和亲和性(J.D.Isaacs及/ie"附"to/(^v200140:724-738)。"人源化"形式的非人类(例如啮齿动物)抗体是包含衍生自非人类抗体的最小序列的嵌合抗体。通常，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体(recipient)抗体)，其中受体的高变区的氨基酸残基被来自非人类物种如小鼠、大鼠、兔子或非人类灵长类的高变区(供体抗体)的氨基酸残基代替，其具有期望的抗体特异性、亲和性和性能。在某些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人类残基代替。而且，人源化抗体可以包含没有在受体抗体或供体抗体中发现的残基。这些修改将进一步优化抗体性能。一般来说，人源化抗体将包含基本上所有的、至少一个、通常两个的可变域，其中所有的或基本上所有的高变环与非人类免疫球蛋白的高变环对应，并且所有的或基本上所有的FRs是人免疫球蛋白序列的FRs。人源化抗体还任选包含至少免疫球蛋白恒定区(Fc)、特别是人免疫球蛋白恒定区的一部分。更详细的细节，见Jones等人，自然1986321:522-525;Riechmann等人，自然1988332:323-329;和Presta,C"/r.0p/".^m".祝o/.19922:593-596。当抗体旨在用于人类治疗应用时，用于制造人源化抗体的人可变域(重链和轻链的)的选择对于减少抗原性和HAMA反应是至关重要的。根据所谓的"最佳适配(best-fit)"方法，在已知人类可变域序列的全部信息库中筛选啮齿动物抗体的可变域的序列。鉴定出与嗤齿动物的可变域序列最接近的人类V域序列，其中的人类框架区(FR)被人源化抗体接受(M.J.Sims等人，//附附wwo/.1993151:2296;Chothia等人，/,Afo/.1987196:901)。另一个方法采用特殊的框架区，该框架区衍生自特定亚类的轻链或重链的所有人类抗体的共有序列。一个替代方法是用良性的氨基酸序列代替鼠可变域的免疫原性表位，从而产生去免疫的可变域。将该去免疫的可变域以遗传学方法连接至人IgG恒定域，产生去免疫的抗体。本文所用的术语"去免疫的抗体"是指体。去免疫的可变域通过重组技术连接至人Fc域。采用计算机化对接方法鉴定去免疫序列，以确定可结合到II类MHC复合体的抗体片断。理想地在没有改变对表位的特异性和亲和性的情况下，进行氨基酸置换，以除去MHC;然而，可以进一步修改以优化这种结合。认为由这些没有改变表位特异性的修改得到的去免疫抗体落在本发明的范围内。本文所用的短语"天然效应子功能"指由免疫球蛋白介导的并由效应分子和抗体的Fc片断结合引发的抗原消除过程。共同的效应子功能包括补体依赖性细胞毒性反应、吞噬作用和抗体依赖性细胞毒性反应。"完整的"抗体是包含抗原-结合位点和C^和至少重链恒定域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定域可能是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。"抗体片段"包含完整抗体的一部分，优选包含完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab，)2和Fv片段。短语抗体的"功能片段或类似物"是具有与全长抗体相同性质的生物活性的化合物。例如，抗-IgE抗体的功能片段或类似物是以阻止或基本上减少IgE免疫球蛋白与高亲和力受体FcsRI结合的能力的方式与IgE免疫球蛋白结合的功能片断或类似物。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个完全相同的抗原结合片段，称为"Fab"片断，和一个"Fc"残基片段，一个反映易结晶能力的名称。Fc片段包含由二硫键结合在一起的两条重链的羧基端部分。抗体的效应子功能由Fc区的序列决定，Fc区也是被在某些类型细胞中发现的Fc受体(FcR)识别的片段。Fab片段包括整个轻链以及H链的可变区域(VH)，和重链的第一个恒定域(Ch1)。每一个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它只有一个抗原结合位点。用胃蛋白酶处理抗体生成一个单独的大的F(ab')2片段，其大致对应于两个二硫键连接的Fab片段，具有双价抗原结合活性，并仍能交联抗原。Fab'片段与Fab片段不同，其在CH1域的羧基端具有另外的少量残基，包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。Fab'-SH在本文中是对其恒定域的半胱氨酸残基带有游离的巯基基团的Fab'的称呼。F(ab，)2抗体片段最初是由在它们之间具有铰链半胱氨酸的一对Fab'片段产生的。抗体片断的其它化学偶联也都是公知的。术语"氨基酸序列变体"是指与天然序列多肽的氨基酸序列在某种程度上不同的多肽。氨基M列变体可在天然氨基酸序列的氨基*列的某些位置发生替换、缺失和/或插入。"同源性"定义为经过序列比对和引入空位后在氨基^列变体中相同的残基的百分比，必要时，达到最大同源百分比。用于比对的方法和计算机程序为本领域公知的。很容易以实验测定不改变本发明的特异性或协同性质的序列变体，并且其落在本发明的范围之内。本文所用的术语"表位"指能够与抗体特异性结合的蛋白决定簇。表位一般包含分子的化学活性表面基团如氨基酸或糖侧链，并且一般具有特异的三维结构特性和特异的电荷特性。构象和非构象表位区别在于前者(而不是后者)在变性溶剂存在时消失。本文所用的术语"协同作用"或"具有协同作用的"意为当化合物联合使用时的组合效果比所述化合物单独使用时的相加效果更好。测定协同作用存在的定量方法在下面进行描述。对CCR5和CXCR4辅助受体在HIV-1发病机理中的作用的认识为千预提供了新靶点，并且鉴别趋化因子或gp120结合抑制剂的计划已启动。病毒包膜蛋白与CD4及趋化因子辅助受体之间的相互作用是复杂的，并为化疗干预提供多种可能。鉴别趋化因子调节剂的成果已被综述过(F.Shaheen和R.G.Collman，0/7/"./"/e"2004，17:7-16;W.Kazmierski等人C7ie附.200311:2663-76;L.Agrawal和G.Alkhatib，五;c/;e"T7^f.T^geto20015(3):303-326;具有4-氨基哌啶骨架的趋化因子CCR5拮抗剂(C/re/wo/r/weCC/5/wcw/^mri"g4-fl/Mi>Y>enV//wesrflj5^/fi0，￡"jc/eWO/^Vi.7Trer.Pa,cwto200313(9):1469-1473;M.A.Cascieri和M.S.Springer,Op/".C7^/m.20004:420-426，和其中的引用文献)。小分子CCR5拮抗剂和大分子抗体二者都被研究过。代表性的低分子量CCR5拮抗剂如图1中所述，细胞-细胞融合实验中的ICso值列于表2中。在CCF实验系统中所有的CCR5拮抗剂都表现出低nM或不足nM浓度的IC50(0，4-5nM)。低分子量CCR5拮抗剂武田公司(Takeda)鉴定出TAK-779为一种潜在的CCR5拮抗剂。(M.Shiraishi等人，丄C7^附.200043(10):2049-2063;M.Babba等人iVoc.爿ow/t/5J199996:5698-5703)和TAK-220(C.Tremblay等人200549(8):3483-3485)。TAK-220已表现出与TM6中的Asn252和L225，以及TM4中的G163和TM5中的1198相互作用(M.Nishikawa等人，J/iriw/mA.々ewfC/re附C/rer.200549(11):4708-4715)。TAK-779结合到丙氨酸的突变体的分析表明位于TM1、2、3和7中的残基L33、Y37、T82、W86、Y108和T123是与该拮抗剂相互作用的重要残基(T.Drajic等人爿carf.f/514200097(10):5639-5644)。WO0039125(D.R.Armour等人)和WO0190106(M.Perros等人)公开了为有效的选择性的CCR5拮抗剂的杂环化合物。辉瑞(Pfizer)的UK-427，857(MVC)已进入III期临床试验，并对HIV-1分离林和实验林均表J见出活小生(P.Dorr等人，/4wri/mcTo6.C7^/wo幼er.200549(11):4721-4732;A.Wood和D.Armour,Oie附.200543:239-271;C.Watson等人，Mt/.尸/iflr附.200567(4):1268-1282;M.J.Macartney等人，第43届关于抗微生物剂和化疗的交叉科学会议(W"/wfersd.Cow//4w&Vmcro6.爿gewtoCAe/MO狄er)，2003年9月14-17日，摘要H-875)。先灵公司(Schering)已使Sch-351125(SCH-C)进入I/II期临床研究，又报道了使更有效的后续化合物Sch-417690(SCH-D)进入I期临床研究(S.W.McCrombie等人，WO00066559;B.M.Baroudy等人，WO00066558;A.Palani等人，/C7^附.200144(21):3339画3342;J.R.Tagat等人，/.A/^/.C7^附.200144(21):3343陽3346;J.A.Est6，/wve"20023(3):379-383;J.M.Stmzki等人，iV",.爿c^w/200198:12718-12723)。对丙氨酸突变体和SCHC的模型研究表明活性取决于跨膜螺旋l、2、3、5和7中的残基，特别是L33和Y37(TM1)、D76和W86(TM2)、F113(TM3)、1198(TM5)和E283(TM6)(F.Tsamis等人丄F,w/.200377(9):5201-5208)0<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>默克(Merck)已公开对CCR5受体有纟艮好的亲和性并具有有效的抗HIV-1活性的化合物(2S)-2-(3-氯苯基)-l-N-(甲基)-N-(苯磺酰基)氨基l-4-[螺(2，3-二氢苯并噻吩-3，4'-哌咬-1，-基)丁烷S-氧化物(l)和相关衍生物、三取代的吡咯烷类化合物2和取代的哌啶类化合物3的制备(P.E.Finke等人，M^/.C7^附.厶e汰，200111:265-270;P.E.Finke等人，C7ie附.le汰，200111:2469-2475;P.E.Finke等人，祝w^.C7ie附.le汰，200111:2475-2479;J.J.Hale等人，3fW.CAe附.le汰，200111:2741-22745;D.Kim等人，J,Wrg.AfW.C7ie附.k汰，200111:3099-3102)C.L.Lynch等人，Org丄e汰20035:2473詞2475;R.S.Veazey等人./.2003198:1551-1562.)。熊本大学(KumamotoUniversity)启动的项目鉴别出ONO-4128、E醫913、AK602(K.Maeda等人./.祝o/.C7^附.2001276:35194-35200;H.Nakata等人./.Ki>o/.2卯579(4):2087-2096)在WO00/166525、WO00/187839、WO02/076948、WO02/076948、WO02/079156、WO2002070749、WO2003080574、WO2003042178、WO2004056773、WO2004018425中，阿斯利康(AstraZeneca)公开了为CCR5拮抗剂的4-氨基哌咬化合物。如本文所公开，可以在具有协同作用的组合物中与抗体一起使用的或用于治疗HIV-1感染的其它代表性的CCR5拮抗剂包括根据式Ia-Id所述的化合物和其药学上可接受的盐,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>其中Ar是苯基、3-氟苯基、3-氯苯基或3,5-二氟苯基；R'选自Me、、，iN、、，i>(a)R，其中Ra是氩、-OH、-NMeCH2CONH2或OCMe2CONH2;Me(b)Rb，其中Rb是氢或氰基;MeMeO和(d)Me"N"l，其中RC是&三氟甲基峻溱-S-基、嘧啶巧-基、5一三氟甲基-吡啶-2-基；W选自环戊基、2-羧基-环戊基、3-氧代-环戊基、3-氧代-环己基、3-氧代-环丁基、3-氧杂-环戊基、2-氧杂-环戊基、4，4-二氟环己基、3，3-二氟环丁基、N-乙酰基-氮杂环丁烷-3-基、N-曱磺酰基-氮杂环丁烷-3-基和甲氧基羰基；W选自环己基曱基、四氢-吡喃-4-基甲基；4-甲氧基-环己基、4-氟-苄基、4，4-二氟环己基-曱基、2-吗啉-4-基-乙基和N-Cw烷氧基羰基-哌啶斗基甲基。根据式Ia和Ib所述的化合物已被S.MGabriel和D.M.Rotstein在2005年8月18日公布的WO2005075484中公开。根据式Ic和Id所述的化合物已被E.K.Lee等人在2005年12月22日公布的WO2005121145中公开。本文公开的组合物和方法可用本文公开的化合物来实施。根据式Ia-Id所述的一些具体化合物在表l中列出。通常来说，在本申请中所用的名称是由AUTONOMv.4.0(用于产生IUPAC系统命名的Beilstein研究所的计算机化系统)来命名的。如果在所描绘的结构和该结构所给的命名之间有偏差的话，则所描绘的结构将占有更多的确定权重。本领域的技术人员将认识到，已被制备的具有相似结构的许多其它类似物和它们在包含抗CCR5抗体的组合物中的用途在本发明的范围之内，因此该表不是用于限制的。CCR5拮抗剂的寻找将是研究的活跃领域，新的结构必将^皮发现，其将与本文所述的mAb形成具有协同作用的组合。本领域的技术人员将理解，可不经过度的实验即可测定协同作用水平，并且这样的组合落在本文权利要求的范围内。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>1-82-羟基-环戊烷曱酸[(S)-3-[5-(4，6-二曱基-嗜啶-5-羰基)-六氬-吡咯并[3，4-cl吡咯-2-基-l-(3-^-苯基)-丙基-酰胺；带有三l乙酸的化合物1-9环戊烷甲酸[(S)-3-[5-(3，5-二甲基-l-嘧啶-5-基-l好-吡唑-4-羰基)-六氢-吡咯并[3，4-cl吡咯-2-基H-(3-氟-苯基)-丙基卜酰胺1-103-氧代-环丁烷甲酸[(S)-3-[5-(6-氰基-2，4-二甲基-吡啶-3-羰基)-六氢-吡咯并[3，4-c]吡咯-2-基-l-(3-氟-苯基)-丙基-酰胺I國ll5-丁基-9國[1-(4，6-二曱基-嘧啶-5-羰基)-4-曱基-哌啶-4-基]-3-[2-(四氢-吡喃-4-基)-乙基-l-氧杂-3，9-二氮杂-螺5.5十一画2隱酮1-123，3-二氟-环丁烷甲酸{(S)-l-苯基-3-[5-(1，2，4-三甲基-6-氧代-1，6-二氢-吡啶-3-羰基)-六氢-吡咯并[3，4^吡咯-2-基-丙基}-酰胺1-13l國乙酰基-氮杂环丁烷-3-甲酸((S)-3-[5-(6-氰基-2，4-二甲基画吡啶-3-羰基)-六氢-吡咯并[3，4-c吡咯-2-基-l-苯基-丙基}-酰胺1-141-曱磺酰基-氮杂环丁烷-3-甲酸{(8)-3-[5-(4，6-二曱基-嘧啶-5-羰基)-六氢-吡咯并[3，4<吡咯-2-基-1-苯基-丙基}-酰胺；带有三氟乙酸的化合物1-154-丁基-8-[l-(4，6-二甲基-嘧啶-5-羰基)-4-曱基-哌啶-4-基l-3-(四氢-吡喃-4-基曱基)-l-氧杂-3，8-二氮杂-螺[4.5癸-2-酮1-165-丁基-9-[1-(4，6-二甲基-嘧啶-5-羰基)-4-甲基-哌啶-4-基-3-(2-吗啉-4-基-乙基)-l-氧杂-3，9-二氮杂-螺[5，5j十一-2-酮1-175-丁基-9-[1-(4，6-二曱基-嘧啶-5-羰基)-4-甲基-哌啶-4-基卜3-(4-氟一节基)小氧杂-3，9-二氮杂-螺[5.5十一-2-酮118环戊烷甲酸{(S)-3-[5墨(2，6画二曱基-苯曱酰基)-六氢-吡咯并[3，4-c]吡咯-2-基l-l-苯基-丙基卜酰胺1-191-乙酰基-哌啶-4-曱酸(3-氯-4-曱基-苯基)-{3-[5-(2，6-二曱基-苯甲酰基)-六氢-吡咯并[3，4-c吡咯-2-基-丙基卜酰胺1-20l-(8-[(S)-3-乙酰M-3-(3-氟-苯基)-丙基l-8-氮杂-二环[3.2.1I辛-3-基卜2-甲基-l，4，6，7-四氢-咪唑并[4，5-c吡啶-5-甲酸甲酯1-21N-{(S)-l-(3-氟-苯基)-3-[3-(5-异丁酰基-2-曱基-4，5，6，7-四氢-咪唑斗[4，5-c吡啶-3-基)-8-氮杂-二环[3.2.1辛-8-基-丙基)-乙酰胺1-224-((S)-5-丁基-9-[l-(4，6-二曱基-嘧啶-5-羰基)-4-曱基-哌啶-4-基_2-氧代-1-氧杂-3，9-二氮杂-螺[5.5十一-3-基甲基}-哌啶-1-甲酸曱酯融合抑制剂恩夫韦地(FUZEON⑧，T-20)是独特的融合抑制剂，其在病毒壳蛋白与CD4和CCR5结合后与病毒包膜蛋白gp41结合，并干扰病毒包膜蛋白与宿主细胞膜的连接。恩夫韦地是对应于HIV-1gpl60的残基643-678的36个氨基酸的多肽。恩夫韦地选择性地抑制HIV-1细胞融合，而不能抑制HIV-2或猴免疫缺陷病毒的细胞融合。恩夫韦地对耐药病毒林仍有效，所述耐药病毒林对其它抗逆转录病毒药物耐药(T.Matthews等人.7VatZev.Z)nigi)/sam20043:215-225)。吸附抑制剂TNX-355是人源化的IgG4单克隆抗体，它与CD4的结构域2上的构象表位结合(L.C.Burkly等人，/./附附朋o/.1992149:1779-87)。在由gpl20/CD4结合诱导的构象变化后，TNX-355表位变得易于接近，因此与没有HIV-1的免疫细胞不发生相互作用。TNX-355可以抑制CCR5-、CXCR4-和双重/混合嗜性的HIV-1抹的病毒吸附(E.Godofsky等人，人源化的抗CD4单克隆抗体TNX-355对CCR5、CXCR4和双重嗜性的分离林的体外活性以及与恩夫韦地的协同作用(/"F/"oActivityoftheHumanizedAnti-CD4MonoclonalAntibody,TNX-355,againstCCR5,CXCR4，andDual-TropicIsolatesandSynergywithEnfuvirtide),第45届关于抗微生物剂和化疗的交叉科学年会(45^^ww"fl///^/wZew"CW"/emiceoJw,/附/m6Zfl/々ewte朋cfC^ewo幼em/^，ICAAC)，2005年12月16-19日，WashingtonDC.摘要#3844;D.Norris等人，TNX-355与最佳的背景方案(OBR)联合在有HIV-治疗经历的患者中表现出比单独应用OBR更好的抗病毒活性(TNX-355inCombinationwithOptimizedBackgroundRegime(OBR)ExhibitsGreaterAntiviralActivitythanOBRAloneinHIV-TreatmentExperiencedPatients),第45届关于抗微生物剂和化疗的交叉科学年会(ICAAC),2005年12月16-19日，WashingtonDC.摘要#4020)。抗-CCR5抗体包括抗体、可溶性受体和其生物活性片段的大分子疗法已经成为常规低分子量药物的日益重要的补充(O.H.Brekke和I.SandlieA^w"/ev/ewZ)rwgZ)/腳v.20032:52-62;A.M.Reichert胸訓肠tecA.200119:819-821)。具有高度特异性和亲和性的抗体能够靶向于病毒细胞融合必需的细胞外蛋白。CD4、CCR5和CXCR4已成为抑制病毒融合的抗体的靼点。V.Roschke等人(特异性拮抗CCR5和阻断HIV-1进入的一组新的人源化抗体的鉴定(CharacterizationofaPanelofNovelHumanMonoclonalAntibodiesthatSpecificallyAntagonizeCCR5andBlockHIV画lEntry),第44届关于抗微生物剂和化疗的交叉科学年会(ICAAC)，2004年10月29日，WashingtonDC.摘要#2871)已经公开了与CCR5受体结合并抑制HIV进入表达CCR5受体的细胞的单克隆抗体。L.Wu和C.RMacKay在2001年5月30日提交的11.8.序列号09/870，932中公开了单克隆抗体5€7和207，它们以能够抑制细胞的HIV感染的方式与CCR5受体结合。W.C.Olsen等人(丄F/m/.199973(5):4145-4155)公开了能够抑制(i)HIV-l细胞进入、(ii)HIV-l包膜-介导的膜融合、(iii)gpl20与CCR5结合以及(iv)CC-趋化因子活性的单克隆抗体。在抗CCR5抗体Pro140和低分子量CCR5拮抗剂之间的协同作用已被Murga等人公开(第三届IAS关于发病机理和治疗会议(3rdIASConferenceonHIVPathogenesisandTreatment),摘要TuOa.02.06.2005年7月24-27日，RiodeJaneiro,Brazil)。已分离的抑制HIV-1细胞进入的抗-CCR5抗体包括在2005年4月1日提交的EP05007138.0中公开的RoAbl3(<CCR5>Pz01.F3)、RoAbl4(<CCR5>Px02.1Cll)、RoAbl5(<CCR5>Pz03.1C5)、RoAbl6(<CCR5>F3.1H12.2E5),将该文献以其全部内容在此引入作为参考。所迷细胞系已于2004年8月18曰保藏在DeutscheSammlung彻MikroorganismenundZellkulturenGmbH(DMSZ;德国微生物和细胞培养物保藏中心(GermanCollectionofMicroorganismsandCellCultures)),保藏号为m<CCR5>Px01.F3(DSMACC2681)、m<CCR5>Pz02.1Cll(DSMACC2682)、m<CCR5>Pz03.1C5(DDSMACC2683)和m<CCR5>Pz04.1F6(DSMACC2684)。保藏是根据为专利申请程序的微生物保藏取得国际承认的布达佩斯条约(BudapestTreatyontheInternationalRecognitionoftheDepositofMicroorganismsforthePurposeofPatentProcedure)(布达佩斯条约)的条款和其规定进行的。这确保自保藏之日起活的培养物可保存30年。一旦相关的美国专利授权或一旦任何美国或外国专利申请向公众披露后，不论哪种情况先发生，所述有机体对公众而言将是可获得的。鼠抗人CCR5单克隆抗体(mAb)的产生多克隆抗体优选在动物中通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂获取。免疫学上的佐剂是能够提高对抗原的特异性免疫应答的物质。佐剂有不同的作用机理，应根据给药途径和具体疫苗所需的免疫应答的类型(抗体、细胞介导的或粘膜免疫)来选择使用。抗-CCR5抗体通过用具有高水平CCR5表达的CHO或L1.2细胞以及弗氏完全佐剂(FCA)使小鼠免疫而引出。最初使用1(TCCR5表达细胞和FCA对动物免疫接种。随后，以4-6周间隔用CCR5表达细胞和弗氏不完全佐剂加强免疫。单克隆抗体可以用Kohler等人首次描述的杂交瘤方法(自然19"256:495)制得，或也可以用重组DNA方法制得。抗体的重组生产是本领域公知的，并描述在例如下列综述文章中S.C.Makrides尸卬te/w199917:183-202;S.Geisse等人，/VW"Ti19968:271-282;R.J.Kaufman,Afo/.200016:151-161;R.G.Werner,Z)mgJ"199848:870-880。从免疫小鼠中获得脾脏，用适当的融合剂如聚乙二醇使其与骨髓瘤细胞系融合，形成杂交瘤细胞(J.W.Goding.单克隆抗体原理与实践(InMonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice),第二版；学术出版社(AcademicPress):纽约，1986，第59-103页)。这样制备的杂交瘤细胞被接种在适当的培养基中并生长，所述培养基优选含有一种或多种抑制未融合的、亲代骨髓瘤细胞(也称为融合伙伴(fusionpartner))的生长或存活的物质。本发明的抗体可以用重组DNA技术很方便地制备。用常规方法(如使用能够特异性地与鼠抗体的编码重链和轻链的基因结合的寡核苷酸探针)可很容易地将DNA编码的单克隆抗体分离和测序。杂交瘤细胞可作为这样的DNA的优选来源。一旦分离出来，可将DNA置于表达载体中，然后转染到不另外产生抗体蛋白质的宿主细胞如大肠杆菌(五.co/0细胞、猴(simian)COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞中，从而在重组宿主细胞中合成单克隆抗体。关于编码抗体的DNA细菌中的重组表达的综述文章包括A.Skerra，Cwr./附附wwo/.19935:256-262和Pluckthun，/顯,/.版1992130:151-188。可以修饰编码抗体的DNA以产生嵌合或融合抗体多肽，这是如下实现的例如，将人的重链和轻链恒定域(CH和Cl)序列(即人源化抗体或去免疫抗体)取代同源的鼠序列(美国专利号4816567;和Morrison爿cm/.Sd.CAS^，198481:6851)，或使免疫球蛋白编码序列与非免疫球蛋白多肽(异源性多肽)的全部或部分编码序列融合。非免疫球蛋白多肽序列可代替抗体的恒定域。抗体的特异性存在于互补定义区(即抗体F化部分的高变区)。可以在不改变表位的选择性的情况下改变抗体分子的其他部分，经常需要通过修改抗体分子的其他部分来改变或消除它的药效学性质。已经发现了很多可减少来自包括嵌合抗体、人源化抗体和去免疫抗体的抗体分子的非抗原结合部分的副作用的技术。非人类衍生的抗体的抗原性的减少将允许多次给药和使延长血清半衰期的技术得以实现。可以在不脱离本发明的精神的情况下，应用前面提到的提高抗-CCR5抗体的安全性的方法。具有RoAbl3-RoAb16的CDR、但经修饰以消除不良反应的抗体在本发明的范围之内。本领域的技术人员将理解，包含全长抗体的部分的抗体片断也可具有本文所描述的性质。该抗体片断将包含其可变区或至少其抗原结合部分，并保留抑制病毒细胞融合的足够的大小和功能位点，其与全长抗体以相同的方式作用。识别CCR5受体的胞外片断的单克隆抗体和低分子量别构的CCR5拮抗剂两者在不同的评价病毒进入实验中已被证明能抑制病毒的细胞融合。单克隆抗体RoAbl3和RoAbl4的表位位于氨基端和ECL2,二者皆为有效的病毒进入抑制剂。两种商业上可得的其它抗体2D7和45523分别表现出有效的(ICso=4.3nM)和弱的(ICs()=23nM)活性。化合物4-6为罗氏(RochePaloAlto)鉴定的CCR5拮抗剂。SCH-D、MVC和AK-602是作为病毒融合抑制剂开发的其他CCR5拮抗剂。(见图1)表2<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>CCR5和CXCR4作为CD4的对于HIV-1细胞融合而言的辅助受体的阐明为抗HIV-1化学疗法提供了新靶点，所述化学疗法可以包括在抗HIV-1组合中。抗体和CCR5拮抗剂之间的协同作用能增强它们的效用。令人惊讶地是，目前已发现当与CCR5拮抗剂、病毒进入抑制剂或病毒吸附抑制剂一起给药时，抗体RoAbl3-RoAbl6表现出对HIV-l细胞融合的有效的协同抑制作用。对所有被测定的各种别构CCR5拮抗剂都观察到这种协同作用。在单克隆抗体和融合抑制剂恩夫韦地(enfuvitide，T-20)之间也发现了协同作用。本领域的技术人员将理解，本文所解决的问题是鉴别抗体以及允许所述抗体和CCR5拮抗剂、病毒进入抑制剂或病毒吸附抑制剂共存结合的表位。协同作用已证明抗逆转录病毒药物的联合用药是控制HIV-1复制的一种有效的策略。随着AZT在HIV-1化疗中的应用被关注后，很明显对单一疗法的耐受将4艮快出现。人们发现HIV-1逆转录病毒抑制剂的联用是有优势的，并且随着蛋白酶抑制剂的出现，两种或三种药物的组合已被常规使用。联用抗逆转录病毒药物的理论包括数种潜在的益处，包括同时靶向于几个不同靼点，这能够阻碍耐药林的形成，并可能开发出具有增强的效用和降低的毒性的具有协同作用的组合，因此可以减少每种必须给药的药物的量。但是，简单的药物组合不必然产生协同作用。能影响药物相互作用的几种因素包括药代动力学原因、结合亲和性和对特定靶点的潜在竟争。药物相互作用分析对于体外细胞-细胞融合研究而言，需考虑CCR5抗体与CCR5拮抗剂组合的增强效力(协同作用)或降低效力(拮抗作用)的可能性。体外药物相互作用评估的模型和方法已被描述和综述(M.C.Berenbaum/77^^.5^/.1985114:413-431，尸/ianMfl"/./^v.198941:93-141;W.R.Greco等人尸A"/7wao/.Wev.199547:331-385;M,NPritchard和C.ShipmanJr.紐199014:181-205;J.Suhnel颠流T仏199013:23-39.)。协同作用和拮抗作用定义为与两种药物之间没有相互作用的假设的偏差。Lowe相加模型(LA)理论和Bliss独立模型(BI)理论是用于参照模型的两个主要理论，它们遵循两种不同加和性的药物相互作用理论。基于LA理论的药物相互作用模型假定药物与其自身不能相互作用。将组合中的药物浓度与产生相同的效应的单独使用的药物的浓度相比较(S.Loewe，爿/^""'wFwsc^.19533:285-2卯)。该关系由方程式1=dA/DA+dB/DB来描述，其中dA和dB是引起一定效应(如50。/。抑制)的组合中的药物A和B的浓度，Da和DB是单独使用的每种药物的等效浓度(如ICSD)。用Greco等人描述的浓度响应面方法(Gm"f/仏19卯50:5318-5327)来分析数据。用七参数非线性模型(/)拟合所有的实验数据，所述实验数据包括从2个384-孔板中的单独的和组合中的两种药物的所有浓度的复制(replicate)计算出来的抑制百分比。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>其中E最大是药物游离对照的最大响应；ICsoa和IC50B分别是产生50%En的药物A和B的中值抑制浓度；mA和niB分别是药物A和B的浓度响应曲线的斜率；Da和Db分別是葯物A和B的药物浓度，作为上述方程式的输入量；E是在药物浓度DA和DB下测定的响应值，作为输出量；且a是描述相互作用性质的药物相互作用参数。采用SAS程序(SAS用户指南统计(SASUser'sGuide:Statistics).1999,第8版，SASInstitute,Cay,NorthCarolina.),利用未加权最小二乘法非线性回归和试验获得的全部数据集拟合上述方程式。得到七个参数和它们相关的渐进标准误差和95%可信区间的评价，以解释结果。此外，R2、相关系数(correlation)和协方差阵，和残差图用来检验模型的拟合优度。当参数a为正的且它的95%可信区间不包括0时，表明为协同作用。当a为负的且它的95%可信区间不包括0时，表明为拮抗作用。当a的95%可信区间包括0时，表明为Loewe相加或无相互作用。此外，除了固定为0的a外，用Greco模型的所有评估参数来计算联用药物的预测加和性。如果在预测响应面和预测相加面之间的偏差为正的(即如果响应面在相加面之上)，则将这种偏差解释为百分协同作用，如果偏差为负(即响应面在相加面之下)，则将这种偏差解释为百分拮抗作用。为了测定协同作用的大小以及确定产生协同作用的药物浓度的范围，绘制三维图和等值线图。对于基于BI理论(C.I.BlissJ/^/.所o/.193926:585画615)的药物相互作用模型而言，将根据单独使用的药物的效果得到的组合药物的效果估计值与实验中观察到的数据进行比较。该关系由方程式I组合=IA+IB-IZIb来描述，其中I組合是无相互作用的组合中的药物A和B的预测的百分抑制作用。Ia和lB是每种药物单独使用时观察到的百分抑制作用。用M.NPrichard和C.ShipmanJr.发明的三维方法04w"v/r.Wd19卯14:181-205)来评估药物相互作用。由基于Bliss独立模型方程式的单个药物的剂量响应曲线来计算理论相加性相互作用。对于每块板上的两种药物的每个组合而言，从理论相加百分抑制作用中减去观察到的百分抑制作用，以显示大于预期的活性。如果相互作用仅仅是相加，则得到的面则显示为在预测相加面以上的0。/。抑制处的水平面。这个面以上的任何峰都表示协同作用。类似地，在这个面上的任何凹陷都表示拮抗作用。用关于试验剂量响应面的95%可信区间在统计学上评价数据。计算观察到的百分抑制作用与预测的相加百分比的95%可信区间的上限之间的差值总和，作为统计学上显著的协同量(synergyvolume)ZSYN。计算观察到的百分抑制作用与预测的相加百分比的95。/。可信区间的下限之间的差值总和，作为统计学上显著的拮抗量(antagonismvolume)￡ANT。一般来说，当相互作用量少于100%时认为药物相互作用是弱的。当相互作用量在100%和200%之间时认为药物相互作用是中等的。当相互作用量大于200%时认为药物相互作用是强的。在CCR5-介导的细胞-细胞融合(CCF)实验中测试鼠抗人CCR5mAbROAbl3和ROAbl4，以及两种其它的CCR5mAb2D7和45523。在CCF实验中还测试了六种拮抗剂的IC5。值(表2)。如表2所示，在CCF实验中ROAM3和ROAbl4都表现出强抑制作用，其ICso值分别为14nM和1.3nM。抗体2D7也表现出强效的抗病毒作用(1(:5。=4.3nM),然而，mAb45523则表现出相对较弱的细胞-细胞融合抑制作用(IC5o=23nM)。在CCF实验中测定单独的或在各种组合中的七点半对数稀释的CCR5ROAbl4和十点半对数稀释的CCR5拮抗剂4。计算每个剂量点的抑制作用，并用抑制百分比表示。ROAbl4和MVC对细胞-细胞融合的强协同作用是很明显的。例如，当MVC和ROAbl4都以0.27nM单独加入时，分别得到13%和12%的抑制作用。然而当这两种药物以相同的浓度一起加入时，观察到42%的抑制作用，这比基于Bliss独立模型方程式计算出的预测的相加的23%抑制作用高出19%。而且，在使用该剂量组合情况下计算出具有95%可信度的16%协同作用。类似地，计算所有的方格盘剂量点(checkerboarddosingpoints)的具有95%可信度的百分协同作用，制得3D图，其表明在宽剂量范围内药物ROAbl4和MVC的显著协同作用(图2)。全参数Greco模型的相互作用参数a为正的(24.88±2.8)，并且95%可信区间不与0重叠，表明统计学上显著的协同作用。当用Prichard模型基于Bliss独立模型理论测定相互作用时，测得385。/。协同量(95V。ZSYN)，这也表明强的协同作用(表3)。没有观察到拮抗作用。RoAbl4A和MVC的数据还在图2中标绘为等效线图，该等效线图提供了在特定抑制水平上的协同作用水平的2-维图解表示。用Greco等人(Om"r及仏199050:5318-5327)提出的七参数非线性模型(ii)拟合所有实验数据，来计算等效线图，所述实验数据包括从2个384-孔板中的单独的和组合中的两种药物的所有浓度的复制计算出来的抑制百分比。以下列形式计算等效线图<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>其中Dx，A和Dx，B分别为产生X。/o抑制作用(如10。/0、50%、卯％抑制作用)的药物A和B的估计浓度；iiiA和niB分别为药物A和B的浓度响应曲线的斜率；DA和I)B分别为药物A和B的药物浓度；以及a为药物相互作用参数。用SAS程序(SAS用户指南统计，1999，第8版，SASInstitute,Cay，NorthCarolina)计算和标绘等效线图。等效线图方程式是一个双曲线。在95%抑制水平制得的等效线图如图2所述。如果只观察到相加作用，则预期为对角直线，朝向低剂量的向内曲线则表示协同作用，而向外曲线则表示拮抗作用。曲线越靠近低剂量，协同作用越高，达到给定抑制作用所需要的组合中的药物剂量越小。协同作用使组合的抗体和拮抗剂的剂量可以比单独使用每种化合物达到相同效力所需要的剂量小。比方说，要达到95%抑制作用，分别需要65nM的ROAbl4和22.2nM的MVC;然而，如果两种药物一起加入时，只需要0.8nM的ROAbl4加上2.47nM的MVC即可达到95%抑制作用。在这种情况下可看到ROAbl4剂量减少了81倍或MVC剂量减少了9.8倍。当与相同的CCR5拮抗剂MVC组合时，与CCR5的N-末端结合的ROAbl3表现出比ROAbl4大约高60。/。的协同作用(图3)。用Greco模型计算ROAbl3-MVC组合的a参数，为662±99(表3),其比ROAbl4-MVC组合的a参数(24.8±2，8)高得多。类似地，由Prichard模型得出的1314%协同量(95%ZSYN)比ROAbl4-MVC组合的协同量(i;SYN=385%)高得多。而且，这种协同作用在ROAbl3和MVC两者都较宽的剂量范围内发生，表明真正有效的协同作用。在CCF实验系统中也测定了其它CCR5拮抗剂包括SCH-D、AK602和新的拮抗剂4、5和6与各种抗体之间的相互作用。这些拮抗剂具有不同的结构但都表现出有效的抗病毒活性。用Greco模型和Prichard模型分析这些不同组合的药物相互作用，并将结果总结在表3中。在测试的所有CCR5拮抗剂中，当与ROAbl4或ROAbl3组合时，AK602表现出最高的协同作用。表3药物1药物2Greco模型Prichard模型a士SEZSYNH層AK602126.9±58.8769-2MVC24.8±2.8385画17RoAbl4SCH-D20.6±1.7308-11420,7±2.6398-17516.7±3.1286-769.8±1.8165-5户值-OAK6023296.3±1113.216120MVC662.3±99.51314-lSCH-D555.2±87.01164-3RoAbl34183.6±24.6995-852214.2±568.92034-56215.3±61.611440维/縱S-3MVC13.2±1.5298-l2D7AK6022.1±0.6113-l60.3±0.245-36*值5.2/52-/6.745532MVC-0.03±0.0083-102AK602-0.03±0.0072-114#值-,2.5在所有的抗-CCR5抗体之间没有观察到强的协同作用，并且RoAbl3和RoAvl4之间的有效协同作用也是意料之外的。据报道鼠CCR5mAb2D7与CCR5的胞外环(ECL2)的N端一侧结合，其在与CCR5拮抗剂MVC和AK602的组合时表现出弱到中等的协同作用。用Greco模型测得2D7-MVC和2D7-AK602组合的a参数分别为13.2和2.1。这些数值比ROAbl3-MVC或ROAbl4-MVC组合的数值小得多(表3)。先前也已表明另一种商业上可得的抗CCR5mAb45523与CCR的多个外结构域(exodomain)结合，也在细胞-细胞融合实验中研究了其与CCR5拮抗剂的相互作用。如表3所示，45523-MVC组合的a参数和^SYN分别为-0.03和3，表明45523和MVC之间没有协同作用。CCR5拮抗剂AK602完全阻断mAb45523的结合(K.Maeda等人/P7w/.200478:8654-62)。当抗体和低分子量拮抗剂(或融合抑制剂或吸附抑制剂)可以独立地与CCR5受体结合时，应当会使协同作用的潜力达到最大化。表位的精确位置和别构地诱导构象改变的可能性使得预测独立结合很困难。令人惊讶地是RoAbl3和RoAbl4结合不受用CCR5拮抗剂MVC、AK602或SCH-D预孵育和所述拮抗剂的继续存在影响(图4A和4B)。相反地，mAb2D7的总结合被CHO-CCR5细胞与拮抗剂AK602、MVC和SCH-D的预孵育部分抑制(图4C)。45523的总结合几乎完全被上面所述的三种拮抗剂阻断，它的结合速度(on-rate)显著减小(图4D)。用mAb预孵育CHO-CCR5细胞，并随后进行竟争性结合试验，证明RoAM3对MVC结合无影响，而RoAbl4和2D7则表现出38%和67%的结合抑制(图5)。用AK602、MVC和SCH-D预孵育CCR5受体，强烈抑制45523结合达75-85%(图4D)，与不表现协同作用相一致。在ENF和ROAbl3之间也观察到有效的协同作用(9^15.8±2.5)，在ENF和ROAM4之间甚至观察到更强的协同作用(91=32.3±5.4)(表4)。这个结果与mAb-拮抗剂相互作用相反，观察到ROAbl3-拮抗剂组合比ROAb14-拮抗剂组合具有高得多的协同作用。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>药物制剂和给药本发明涉及药物组合物，该药物组合物包含抗CCR5抗体和低分子量别构CCR5拮抗剂以及一种或多种药物载体。各组分可分别配制在单独的药物组合物中或配制在包含两种组分的整体药物组合物中。本发明还涉及用使用具有协同作用的药物组合的联合疗法治疗或预防HIV-1的方法。联合疗法可通过共同或相继地给药来完成。本文所用的"共同给药"包括在相同时间或不同时间给予物质。两种或多种物质的同时给药可通过包含两种或多种活性成分的单一制剂完成，或通过含有单一活性物质的两种或多种剂型基本上同时给药来完成。化合物还可以以不同途径独立给药，并且每种药物制剂可独立地优化以提供最佳的药物水平。因此，抗体可以以胃肠外(parental)制剂经静脉给药，而低分子量化合物则可以以口服的液体或固体制剂给药。为了制备根据本发明所述用途的药物组合物，将有效量的碱或酸加成盐形式的作为活性成分的特定化合物与药学上可接受的载体紧密混合，该栽体根据给药所需的制剂形式而以不同形式存在。本文所用的"药学上可接受的载体"包括任何和所有的生理学相容的溶剂、分散剂、包衣剂、抗菌剂或抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这些药物组合物预期优选以适于口服给药、直肠给药、经皮给药或胃肠外注射给药的整体剂型存在。例如，在制备口服剂型的组合物时，可以使用任何常用的药物介质，例如在口服液体制剂例如悬浮剂、糖浆剂、酏剂和溶液剂的情况下，可以使用水、二醇类、油类和醇类等；或在散剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况下可以使用固体载体，例如淀粉、糖、白陶土、润滑剂、粘合剂和崩解剂等。因为片剂和胶嚢剂易于给药，它们代表了低分子量拮抗剂的常规口服剂量单位形式，在该情况下显然可使用固体药物载体。低分子量拮抗剂还可以在胃肠外制剂中与抗体联用。对于胃肠外组合物来说，栽体通常包括至少占大部分的无菌水，但也可包括其他任选的成分以增加溶解性，所述成分包括药学上接受的载体、赋形剂或稳定剂。例如可以制备注射用溶液，其中载体包括盐溶液、葡萄糖溶液或者盐水和葡萄糖溶液的混合物。还可以制备注射用混悬液，在该情况时可以使用适当的液体载体、助悬剂等。用于胃肠外给药的制剂必须为无菌溶液，这可以通过将溶液通过灭菌滤膜过滤实现。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且其包括緩沖剂如醋酸盐、TRIS、磷酸盐、柠蒙酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基千基氯化铵；六甲氯铵(hexamethoniumchloride);苯扎氯铵、千索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟苯曱酸烷基酯类，例如对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲苯酚)；低分子量(少于约IO个残基)多肽类；蛋白质类，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白类；亲水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精类；螯合剂，例如EDTA;张力调节剂(tonicifiers)，例如海藻糖和氯化钠；糖类，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；表面活性剂，例如聚山梨醇酯；成盐的抗衡离子，例如钠离子；金属络合物(例如Zn-蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，例如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。抗体优选包括浓度在5-200mg/mL的抗体。本发明的药物组合物或治疗方案中的各活性成分的实际剂量水平可单独地改变以得到每个有效成分的量，该量对特定患者、组合物和给药方式而言可达到所需的治疗响应而对患者无毒性。选取的剂量范围取决于各种药代动力学因素包括本发明使用的具体组分或其酯、盐或酰胺的活性、给药途径、给药时间、所用具体化合物的排泄速率(reate)、接受治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康情况和以前的医疗史以及医疗领域共知的其他因素。实施例1单克隆抗体的制备抗体通过用带有完全弗氏佐剂的107CCR5-表达细胞(CHO-CCR5或L1.2-CCR5)对雌性Balb/c小鼠进行初次腹膜内免疫接种来制备。除了对细胞使用不完全弗氏佐剂外，4-6周后类似地进行第二次免疫接种。然后以4-6周的时间间隔对小鼠用不带佐剂的107CHO-CCR5或L1.2-CCR5细胞加强免疫。在融合前的第三天或第四天通过用107CCR5-表达细胞腹膜内或2x106CCR5-表达细胞静脉内进行最后一次免疫接种。根据Galf"方法(Galfre，G.和C.Milstdn，单克隆抗体的制备策略和程序(Preparationofmonoclonalantibodies:strategiesandprocedures),酶学方法(MethodsEnzymol.)。198173(PtB):3-46.)，将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合。简单来讲，将大约1xio8免疫小鼠的脾细胞与相同数目的骨髓瘤细胞P3X63曙Ag8-653(ATCC，Manassas,VA)混合，在HAZ培养基(包含10%FCS、100mM次黄嘌呤和1pg/ml重氮丝氨酸的RPMI1640)中融合和培育。融合后十天，就特异性抗体的产生检测上清液。然后通过有限稀释克隆杂交瘤，所述杂交瘤是产生在抑制CCR5-介导的细胞-细胞融合方面最有效的上清液的杂交瘤。实施例2CCR5-介导的CCF实验CCF实验按之前所述进行(C.Ji，J.Zhang,N.Cammack和S.Sankuratri,丄i&附o/.Sc/re".2006ll(6):652-663)。采用Multimek(贝克曼(Beckman)，Fullerton，CA),将Hela-R5细胞(表达来自R5-嗜性的病毒和HIV-1Tat的gpl60)平铺于384孔白色培养板(BD生物科学(BDBioscience),PaloAlto，CA)中，每孔7.5xl()3个细胞，在补加有10%FBS、lx青霉素-链霉素、300fig/mLG418、100jig/mL潮霉素和1jig/mL多西环素(Dox)的无酚红的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)(BD生物科学，PaloAlto,CA)中，在37。C孵育过夜，以诱导gpl60的表达。将10nL在含有5%DMSO的培养基中的稀释的化合物加至细胞中，然后以1.5x104细胞/15jiL/孔的浓度加入CEM-NKr-CCR5-Luc(从NIHAIDS研究&参考试剂项目(NIHAIDSResearch&ReferenceReagentsProgram)中获得的)，其表达CD4和CCR5并携带HIV-2长末端重复序列(LTR)-驱动的萤光素酶报告基因，孵育24小时。在共同孵育末期，向每孔中加入15nLSteady-Glo荧光素酶底物，将培养物密封，轻轻振摇451^11。通过使用16-通道TopCountNXT仪(銷金埃尔默(PerkinElmer)，Shelton，CT)，进行10min暗适应，通过测定每孔10秒发光来测定萤光素酶的活性，读数为每秒计数(CPS)。对于药物相互作用试验来说，将小分子化合物或抗体连续稀释在含有5%二甲基亚砜(DMSO)(CalBiochem，LaJolla，CA)和1x青霉素-链霉素的无血清和无酚红的RPMI中。在加入靶细胞之前，立即将5^L的两种用于药物-药物相互作用的待测的稀释化合物或mAb的每一种加入Hda-R5细胞中。各种浓度的方格盘(checkerboard)药物组合如图1A所示进行实验。为了清楚和易于理解的目的，通过举例说明和实施例详细地描述了上迷发明。可以在附随的权利要求的范围内进行改变和修改，这对本领域的技术人员来说是很明显的。因此，可以理解，上面的说明书旨在用于说明而不是用于限制。因此，本发明的范围不应参考上述说明书来确定，而应当参照下面所附权利要求以及这些权利要求所享有的等同原则所确定的全部范围确定。对于所有目的来说，将本申请引用的所有专利、专利申请和出版物的全部内容在此引入本说明书作为参考，好像每项专利、专利申请或出版物在此单独公开一样。权利要求1.药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的具有协同作用的组合，所述具有协同作用的组合包含分离的抗体和CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂，所述分离的抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链序列的CDR3是SEQIDNO.9或10。2.根据权利要求1的药物组合物，其中所述病毒融合抑制剂为恩夫韦地，所述的病毒吸附剂为TNX-355,或所述的CCR5拮抗剂选自TAK-220;TAK画779;AK602(ONO4128);SCH-C;SCH-D;MVC;Ia、Ib、Ic和Id或其药学上可接受的盐，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中Ar为苯基、R1选自3-氟苯基、3-氯苯基或3，5-二氟苯基；(a)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中Ra是氢、-OH、-NMeCH2CONH2或Me(b)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>，其中Rb是氢或氰基；(c)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>和(d)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>，其中rc是6-三氟甲基哒嗪-3-基、嘧啶-5-基或5-三氟甲基-吡咬-2-基；W选自环戊基、2-羧基-环戊基、3-氧代-环戊基、3-氧代-环己基、3-氧代-环丁基、3-氧杂-环戊基、2-氧杂-环戊基、4，4-二氟环己基、3，3-二氟环丁基、N-乙酰基-氮杂环丁烷-3-基、N-甲磺酰基-氮杂环丁烷-3-基和甲氧基羰基；W选自环己基曱基、四氢-吡喃-4-基曱基、4-甲氧基-环己基、4-氟苄基、4,4-二氟环己基-甲基、2-吗啉-4-基-乙基和N-Cw烷氧基羰基-哌啶-4-基甲基。3.根据权利要求的药物组合物，其中所述的CCR5拮抗剂选白1-1、12、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、I画IO、1-11、112、1-13、1-14、1-15、1-16、1-17、1-18、1-19、1-20、1-21和1-22。4.根据权利要求1的药物组合物，其中所述的分离的抗体具有选自下列的可变重链序列和可变轻链序列(a)所述的可变重链序列为SEQIDNO:1,且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:2;(b)所述的可变重链序列为SEQIDNO:3，且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:4;(c)所述的可变重链序列为SEQIDNO:5,且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:6;和(d)所述的可变重链序列为SEQIDNO:7，且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:8。5.根据权利要求4的药物组合物，其中所述的CCR5拮抗剂选自TAK-220、TAK-779、AK602(ONO4128)、SCH-C、SCH陽D、Ia、Ib、Ic和Id，其中Ar、R1、112和113如先前所定义。6.根据权利要求4的药物组合物，其中所述的病毒融合抑制剂为恩夫韦地。7.根据权利要求4的药物组合物，其中所述的病毒吸附抑制剂为TNX-355。8.根据权利要求1的组合物，其中所述的抗体由选自m<CCR5>Pz01.F3、m<CCR5>Px04.F6、m<CCR5>Pz03.1C5和m<CCR5>Px02.1Cll的杂交瘤细胞系产生。9.包含治疗有效量的具有协同作用的组合的药物组合物在制备治疗HIV-l感染或者预防HIV-l感染或者治疗AIDS或ARC的药物中的用途，所述具有协同作用的组合包含分离的抗体和CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂，所述的分离的抗体与CCR5受体结合，并且其中所述抗体的可变的重链氨基酸序列的CDR3选自SEQIDNO.9或10。10.根据权利要求9所述的用途，其中所述的CCR5拮抗剂选自TAK-220、TAK-779、AK602(ONO4128)、SCH-C、SCH-D、Ia、Ib、Ic和Id，其中Ar、R1、R2和R3如先前所定义。11.根据权利要求9所述的用途，其中所述的病毒融合抑制剂为恩夫韦地。12.根据权利要求9所述的用途，其中所述的病毒吸附抑制剂为TNX-355。13.根据权利要求9所述的用途，其中所述的分离的抗体具有选自下列的可变重链序列和可变轻链序列(a)所述的可变重链序列为SEQIDNO:1，且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:2;(b)所述的可变重链序列为SEQIDNO:3，且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:4;(c)所述的可变重链序列为SEQIDNO:5，且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:6;和(d)所述的可变重链序列为SEQIDNO:7，且所述的可变轻链序列为SEQIDNO:8。14.根据权利要求13所述的用途，其中所述的抗体由选自m<CCR5>Pz01.F3、m<CCR5>Px04.F6、m<CCR5>Pz03.1C5和m<CCR5>Px02.1Cll的杂交瘤细胞系产生。15.根据权利要求14所述的用途，其中所述的CCR5拮抗剂选自TAK-220、TAK-779、AK602(ONO4128)、SCH-C、SCH-D、MVC、Ia、Ib、Ic和Id,其中Ar、R1、R2和R3如先前所定义。16.根据权利要求14所述的用途，其中所述的病毒融合抑制剂为恩夫韦地。17.根据权利要求14所述的用途，其中所述的病毒吸附抑制剂为TNX-355。18.如上文所述的本发明。全文摘要本发明公开了用于治疗或预防HIV-1感染的具有协同作用的药物组合物，该药物组合物含有抗-CCR5单克隆抗体和CCR5拮抗剂、病毒融合抑制剂或病毒吸附抑制剂。所述组合物表现出比由单独使用任一成分的活性所预期的活性显著更好的活性。还提供了使用上述药物组合物治疗或预防HIV-1的方法。文档编号A61P31/18GK101410414SQ200780010614公开日2009年4月15日申请日期2007年1月19日优先权日2006年1月30日发明者C·季,S·桑库拉特里申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司