有协同治疗作用的眼用药物缓释载体的制作方法

专利名称：有协同治疗作用的眼用药物缓释载体的制作方法
有协同治疗作用的目,药物缓M体狱领域本发明涉及一种长效目艮内SA药物缓職体，特别涉及至ij一种有协同治疗作用的眼 用药物缓職体。 背景絲目前常用的眼用HA载懒n胶原、壳聚糖(几丁质)、PGA(聚f遂乙膨、PLA(聚乳 膨、EVA凍乙烯醋酸乙酸酯)及其共聚物PLGA (P逮乙酸与乳酸的共聚物)、PGLC (乙 交酯一丙交酯一己内IBH元^^见共聚物)等，本身仅为一种载体而已，没有治疗作用。近 年来，卿生物^^材料为载体制备糊師缓释药物制剂，使目前眼科一^ 隹治赚的防治成为可能，所以受至恪国学者的高m视。如制顿一种新型载体，这种载杯仅起到缓漫释放药物的作用，同时，载体本身具有对受损组织的微作用、防治肿瘤、抗 氧化、抑制新ttt^临床需要的活性，对所载药物具有一定的协同治疗作用，显然可 超鹏的治疗效果。另外，己有白犮(Bletilla striata)为兰科植物白芨的^^燥i^，商品化白 系从白芨中提取的一种粘多糖类物质，^fS^质多、舒量分布广，仅P艮于口服或歡卜用。 发明内容本发明的目的^MI—种有协同治疗作用柳艮用药物缓職体，以^l艮现有技术的 战不足。研^a现，白繊具有抑制亂新她管的作用，包括角膜、乐燃膜和视网麟她管在内的目繊^rftL管，作用机制为白 ±要成^ ￡甘露聚糖育,影响血管生长因子与其受体的结合，抑制内皮细胞生长，Sffl新^L管的作用。因it诺以白^m作为载体，贝U辦载体作用的同时赋予了载体治疗M的功能。白赚为载体石摊iJ目睏才IA剂， 禾,白 体内生物,，缓厦释放出活性药物，可使药tr離长时间f親M为稳定 的治疗水平，^1>了药物的用量、用药 M^和毒副作用，对于药物吸收困难的部位，也 會站到很好的用药 媒。itW卜，白芨提取物本身也具有抑制新她管、鄉中瘤割乍用， ^{顿可使1^剂 、协同的治疗作用，可取得更好的抑防治$媒。财卜，白 芨提取物,IIA剂，还可开拓中药駄剂的研究前景，为研究眼禾鹏的防治麟新 思路、 径，在更深层7^Lt拓衝专统医药学在现代眼自治疗学中的地位和作用。 本发明的的药物缓M体是白皿，且该白^ltt要成分为由甘l^^葡^^糖以i:4聚合而成的鰂甘露聚糖，平均針量在65000 150000，雌平均舒量誦00， 白，以，甘露聚^i十， 〉85%。Jd述的白，中可加入起固化作用的交職lJ，将载体之间或药物与载体之间进行交 職禺合，更增加载体的载药量，^!>突释，增强药物缓释 媒，白^K和交職啲质量 比为100: 0.01 20。战的交職伪甲醛、戊二醛、乙二醇鹏7jC甘油醚、丙二醇鹏水甘油醚或丁二 醇 水甘油醚。战白赚中还可加入白蛋白、明臓阿拉伯胶，其中加入量以白S^和其^I^体 干重计，可从0.5 40%。这是为增加白^^载体的娜性和韧性。本发明将普通白赚商品进行，纯化，得到满剁艮科鄉要求的麟伯赚 白赚的纯化制备工艺(1)将普通商品化白^^溶于最小術P冰中，Sevag法脱 蛋白至考马斯離G-250法检测几无蛋白质被测出，然后用)^1/K3it斤三天，真空冷冻 千燥，得一级纯化白tt; (2)将战的一级纯化白赚400mg溶于20ml蒸馏水中， 离心W:清液，在阴离子交换辩隹素DE-52ftJ:层析，先以2 5个柱術只的蒸馏水洗 脱，再用0 4mol/LNaCl溶體线梯度^i兑，？繊为24ml/h，以4ml麟一管，蒽酮画硫酸法检测M定多糖的、w^a并ii^^^产物，冷冻千燥，得二级纯化白TO; (3)再将战的二级纯化白赚50mg溶于2ml蒸馏水中，离心:|0:清液，上SephadexG-100 柱以0.02mol/LNaCl洗脱，流速16ml/h，以2ml收集一管，H^^酸法樹则并确定多糖 的、 ^健，1| ^物，冷冻千燥即得麟啲白赚。本发明的载#^跑到缓侵释放药物的作用，同时，载体本身具有对受损组织的保 护作用、防治肿瘤、抗氧化、抑制新她體临床需要的活性，对所载药物具有一定的 协同治疗作用，1W起到更好的治疗效果。如麟眼用剂型能长时间控制药物的稳定释 放，^1^身鋼部常夫Iii接合药的用量和用药7爐，明显提高药物的生物利用度和降 低毒副作用。il^卜，在眼内的有效治疗剂量仅为全身用药的1%，而维持时间在34个 月，这样可以大幅度斷氐医药费用开支，有利于患者支付费用和支持医疗保险改革。 具鸺施力式本发明的药物缓M;体是白皿，且该白^ltt要成分为由甘露糖和^W糖以l: 4 聚合而成的翻己甘露聚糖，i^^平均^ 量99658 3t^顿，白 以 ￡甘露聚^+， ^^85%。，的白，中加有起固化作用的交 1」，这是为使载,眼内保辦對5^^基本 不变，同时确保药物和载体白赚會,缓释，且白^l^和交職啲质量比为100: 0.01 20。即交raU入量为白，和交ra啲质量比100: 0.01 20。本发明的白，可以iM:将交联后的白S^冷冻千燥后压制自，^t接将交联后 的白鹏口热真空千燥后直接鹏，也可在白^l^溶液中力口入药物，再MJ^方法制■，即可制j^tt片状、粒状、±央状、条状a它适合目艮内用的大小尺寸和皿。 本发明的白^^载体可以柳艮科广创顿的药物合用而制备成新翻艮科制剂，即其具有广泛的iSiS性。其中这些药物包括免疫抑制剂雷帕霉素、环孢素、FK506等；皮质类固麟药物ilkS米松、醋酸曲安奈德、醋酸可的松等抗炎| ^药物如环 丙沙星、莫西沙星、诺氟沙星、克霉唑、妥布霉素等；抗增殖药物5-繊嘧啶、柔红 霉素、紫杉醇、称K仙碱、阿霉素、卡莫司汀等；阮新她管类药称重纟IAiflL管内皮 抑素、Avastin;抗真菌类药物两性霉素B、另II他霉素(natamycin)、匹马霉素(pimaricin)、 繊唑、酮康唑、咪康唑、纖唑、依曲康唑；抗白内Pt^后后翻ltl5称肝素、低另外，本发明和以上药物结合可使药物具有长效特性，释药周期为一周到辨；具 有用药S^、，且能长时间在眼内缓侵释放药物的特点；对于药物吸收困难的離，H腿 到很好的用药 媒。可用于眼科预防和治疗高危角膜移植后的排斥反应，也可用于角膜 新^J&M殖、慢性葡萄膜炎和眼内新^lfc管'fe^。具有一次IIA长期有效，皿物 浓度稳定、生物利用度高、无毒副作用和不良反应的优点。以下列多个实施例，详细说明本发明。 娜列l白 的提取以如下工艺提取和纯4W发明所需的白皿。 本发明所需的m鹏白 的制备包括下列二大步骤一、 粗多糖提取把白芨±^^ 1脇粉碎、M、烘干，加20 ^f^只蒸馏水，6(TC回^^取4h。重 复提取一次。合并两7^^取液。离心(5000xg， 10min) ，W:清，70。CMJE鄉，加三倍体 积95%乙,淀。离心ll^^淀，冷冻千燥，得粗白繊，即普通商品化的白繊。二、 分离纯化(1)将普通商品化白OT^溶于最小^KR7jC中，Sevag法脱蛋白至考马斯皿G-250 法检测几无蛋白质被测出，然后用对2feKil析三天，真空冷冻千燥，得^^化白M;(2)将战的一级纯化白赚400mg溶于20ml蒸馏水中，离心祉清液，在阴离子交 换纤维素DE-52feJl层析，先以2 5个柱^f只的蒸馏7jC繊，再用0 4mol/LNaCl溶 髓线梯度tt， $臓为24 ml/h，以4ml收集一管，蒽酮l酸法检测并确定多糖的洗 脱隨并收磐 ，冷冻干燥，得二^^屯化白赚；(3)再将战的二级纯化白芨 胶50mg溶于2ml蒸馏xK中，离心社清液，上SephadexG-100柱以0.02mol/LNaCl洗 脱，、 16ml/h，以2ml收集1，蒽酮魂酸法检测并确定多糖的 ^健， 产物，冷冻千燥即得麟啲白赚。白l:^^鉴定为翻己甘露聚糖单体纟帔为95.8 % ，好量为99658跡顿。 实施例2翻^^例1制备的白赚，配制12%的白^7夂溶溶液，取白M^K溶液20.0ml 于无Ml^ffi中，力口入乙二醇M水甘油醚20.0mg， ^均匀，55。C水浴方爐3 5小 时，用ffil^用水充分洗涤以去除未反应的乙二醇鹏水甘油醚。取出，将交联的胶液倒 入聚四氟乙烯的模具中，置于4(TC的烘箱千燥制膜。待J^t充^P燥后，取出方^Aftl^ 生a&7jC充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完^P燥后，得到厚度为1.5-2就的片状物，可根据需要裁制#同的^:和大小。实施例3将实施例1中乙二醇鹏水甘油醚舰丙二醇鹏7jC甘油醚，其余割牛不变，亦可得到同样的交駒乍用。 实施例4将实施例1中乙二醇双縮7K甘油醚賊丁二醇双縮水甘油醚，其余割牛不变，亦可得到同样的交駒乍用。鄉例5細实施例1制备的白微，配制W/o的白^7jC溶液，取l亂的白^7jC溶液 10.0ml，加入无 ^瓶中，无菌^f牛下，力口入10%戊二醛7乂溶液lmL， ^均匀，55°C 水浴方燈3 5小时，用、鄉用水充分洗涤以去除未鹏的戊二醛。取出，将交联的胶液 倒入聚四氟乙烯的模具中，置于4(TC的烘箱^f燥制膜。待膜片充^PM^，取出MA注 射生a^7jC充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完^P燥后，得到厚度为1.5-2就、呈12 纳米小孔结构的膜。根据需要，可将lt,成条状、片機不同微。 实施例6将^^例4中戊二醛舰甲醛，其余斜牛不变，亦可得到同样的固化作用。 实施例7选用实施例1审U备的白赚，配制20%的白 7乂溶液，取20%的白 *溶液 5.0ml于无^M瓶中，加入0.25§的明胶，5(TC7jC浴方爐一夜以溶胀明鹏，,分散 均匀，再加入10X甲醛7jC溶液1.5mL，,均匀，55。C水浴方爐3 5小时，用ffi^J"用 7jC充分洗涤以去除未反应的乙醛。取出，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于 45。C的烘箱^^燥制膜。待膜片充^P燥后，取出方iCA旨生S^水充分浸泡洗涤，将膜 片取出，待完^^願，得到厚度为1.5-2就、呈15纳米小孔结构的片 ，再用孔 径为1.5-2 S^的冲tl^厚为1.0~2 、直径为1.5-2 的小片。 实施例8取10%的白^7]0溶'赚#^液50.0ml于100ml烧杯中，乙二醇双縮水甘油醚 500.0mg，加入0,25g的阿拉伯胶，5(TC7jC浴體一夜以溶胀明胶后，,分鹏匀，55°C 水浴方燈3 5小时以充分交联固化白M，固化结束后用ait生S^K充分浸泡洗涤以 去除未鹏的交 0。洗涤扁 ^烧杯置于冷冻千燥机中，冷冻千燥72小时以充分去 除水。粉令冻千燥后的疏松状物用^JSJLffi审lM^约0.5ml的致密薄膜，4(TC的jft箱干 燥制膜，再用孑L径为1.0"2.0就的冲餅压^a:径为1.0-2.0就小片。 实施例9細实施例1制备的白 ，配制10%的白 ^溶液，取10"/。的白S^K溶液 50.0ml于100mlj^不中，乙二醇 水甘油醚500.0mg，加入0.25§的白蛋白，溶解分 散均匀，55'C水浴，3 5小时以充分交联固化白，，固^束后用、，生Ji^K充 分浸泡洗涤以去除未反应的交联剂。洗涤后夂^^烧杯置于冷冻千燥机中，冷冻千燥72 小时以充分去除水。粉令冻千燥后的疏松状物掛ffimffi制成后约0.5ml的致密薄膜， 4(TC的;)ft來rp^^膜，再用孑L径为1.0"2.0 的冲丰莫冲]5^1^5为1.0-2.0 *小片。 实施例10翻实施例1制备的白赚，配制5%的白M^JC溶液，取5%的白^7K溶液5.0ml 于无W^瓶中，力口入0.25g的明胶，5(TC水浴體一夜以溶胀明鹏，无菌斜牛下， 加入全反式维甲酸微粉化粉末300mg， 分 匀，再加入10X甲醛水溶液1.0mL， 均匀，55。C7jC浴體3 5小时。取出洗被除残余的乙醛，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的模具中，置于40。C的烘箱千燥制膜。待膜片充^B喿后，取出方JCA湖生鹏 水充分浸泡洗涤，将膜片取出，待完^P燥后，得到厚度为1.5-2.0就的Mi^剂，再 用孑L径为1.5-2.0就的冲模冲压成厚为1.0-2.0 、直径为1.5-2.0就的帝挤U。将此 帝挤,环氧乙，蒸24小时灭菌消毒、再方 1周即可。 实施例11100g的阿拉伯胶浸泡在3升7(TC的ait用水中，约12h后加入白赚300g，无菌 斜牛下，加入那他霉素280g， it^溶解，再加入戊二醛3.0L， It^均匀，55。C水浴方燈 3—5小时。取出取出洗涤去除残余的戊二醛，将交联的胶液倒入聚四氟乙烯的丰躲中， 置于4(TC的烘箱千燥制膜。待膜片充^B喿后，取出&A激生a^7乂充分浸泡洗涤， 将膜片取出，待完^B跪，得到厚度为1.5-2就、赵勺20纳米小孔结构的片状药剂， 再用孔径为1.5-2.0就的冲牛餅压鹏为1.0"2.0就、直径为1.5-2.0就的制剂。将 此制剂用环氧乙^l^24小时灭菌消毒、再隨l周后即可。 实施例12白^K载体的眼内相容性按$^例2方法制^5白白^^缓 体，将空白白^1$缓 体、空白PLGA植 入剂分别gA剣艮前房、后囊或^g体腔中，于l、 2、 4、 6、 8、 14、 20周分别处死兔 子，取全眼球切片，HE她，可见视网麟度正常，各层结构清晰，魏胞丢^S坏 死，无炎性细胞浸润。对各组的肝脏检査可见肝小叶排列^S^f状，细胞结构正常，中 央静鹏n汇管区结构无异常，鄉胞 ，无炎性细胞浸润。肾脏检査可见肾小球结构 識，未ML管系M^且织增生，细胞结构正常，未见炎性细胞浸润，可见白M同PLGA 一样，具有良好的生物相容性，适合目艮内4顿。 鄉例13雷帕霉素白^^缓释禾tA剂的体外释药特性将制得的载药03mg的植雷帕霉素白SI^I[A剂艘于25mL含0.05%叠氮化钠的 pH7.4磷麟缓冲液中，gA37。C恒M7jCM荡器以72ipm的M水顿荡，前两周每 天更换介质并用高效液相测定介质中雷帕霉素的药物量，两周后每周领啶一次，麟测 定12周，结果表明体外具有明显的缓稱寺性。 鄉例14低好翻素白SI^缓释tlA剂的体外释药特性将制得的载药l.Omg的樹氏好翻素白^i^IA剂體于25.0mL含0.05%叠氮 化钠的pH7.4磷麟缓冲液中，gA 37。C恒M/KM荡器以72rpm的 7夂平振荡，前 两周每天更换介质并用,免疫法测定介质中低W肝素的药物量，两周后每周测定一 次，3i^则定12周，结果表明体外具有明显的缓##性。
权利要求
1、一种有协同治疗作用的眼用药物缓释载体，其特征在于该药物缓释载体是白芨胶，且该白芨胶主要成分为由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000道尔顿，优选平均分子量99658道尔顿，白芨胶以葡配甘露聚糖计，含量＞85％。
2、 如权利要求1所述的有协同治疗作用的眼用药物缓释载体，其特征 在于上述的白芨胶中加有起固化作用的交联剂，且白芨胶和交联剂的质量 比为100: 0.01 20。
3、 如权利要求2所述的有协同治疗作用的眼用药物缓释载体，其特征 在于上述的交联剂为甲醛、戊二醛、乙二醇双縮水甘油醚、丙二醇双縮水 甘油醚或丁二醇双縮水甘油醚。
4、 如权利要求1所述的有协同治疗作用的眼用药物缓释载体，其特 征在于上述白芨胶中又加有白蛋白、明胶或阿拉伯胶，其中加入量以白芨 胶和其他胶体干重计，从0.5 40%。
5、 白芨胶的纯化制备工艺(1)将普通商品化白芨胶溶于最小体积水 中，Sevag法脱蛋白至考马斯亮蓝G-250法检测几无蛋白质被测出，然后 用对流水透析三天，真空冷冻干燥，得一级纯化白芨胶；(2)将上述的一 级纯化白芨胶400mg溶于20ml蒸馏水中，离心取上清液，在阴离子交换 纤维素DE-52柱上层析，先以2 5个柱体积的蒸馏水洗脱，再用0 4mol/L NaCl溶液直线梯度洗脱，流速为24ml/h,以4ml收集一管，蒽酮-硫酸法 检测并确定多糖的洗脱位置并收集洗脱产物，冷冻干燥，得二级纯化白芨 胶；(3)再将上述的二级纯化白芨胶50mg溶于2ml蒸馏水中，离心取上 清液，上SephadexG-100柱以0.02mol/LNaCl洗脱，流速16ml/h，以2ml 收集一管，蒽酮-硫酸法检测并确定多糖的洗脱位置，收集洗脱产物，冷冻 干燥即得精制的白芨胶。
全文摘要
本发明公开一种有协同治疗作用的眼用药物缓释载体，其特征在于该药物缓释载体是白芨胶，且该白芨胶主要成分为由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000，优选平均分子量100000，白芨胶以葡配甘露聚糖计，含量＞85％。上述的白芨胶中加有起固化作用的交联剂，且其质量比为100∶0.01～20。上述交联剂为甲醛、戊二醛、乙二醇双缩水甘油醚、丙二醇双缩水甘油醚或丁二醇双缩水甘油醚。上述白芨胶中又加有白蛋白、明胶或阿拉伯胶。本发明不仅起到缓慢释放药物的作用，而且具有对受损组织的保护作用、防治肿瘤、抗氧化、抑制新生血管等临床需要的活性，对所载药物具有一定的协同治疗作用而起到更好的治疗效果。
文档编号C08B37/00GK101269221SQ200810093990
公开日2008年9月24日 申请日期2008年4月25日 优先权日2008年4月25日
发明者史伟云, 吴祥根, 谢立信 申请人:山东省眼科研究所