一种胶原蛋白药物磁性缓释载体的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种胶原蛋白药物磁性缓释载体的制备方法，属于药物载体合成领域。本发明以廉价易得的鲫鱼鱼鳞为原料，洗净风干后用碳酸钠和EDTA溶液浸泡除去杂质蛋白、色素和矿物质成分，再用乙酸配合胃蛋白酶溶解鱼鳞中的胶原蛋白，经透析纯化后，在磷酸氢二钾缓冲液中，配合超声处理，包覆纳米四氧化三铁，经分离干燥后，得到胶原蛋白药物磁性缓释载体。本发明所得缓释载体主要成分为胶原蛋白成分，和人体生物相容性好，对人体无害，不会引起免疫排斥反应，在使用过程中，利用四氧化三铁的磁性，可直接到达指定部位缓释药物有效成分，充分发挥药效，使患者提前康复。
【专利说明】
一种胶原蛋白药物磁性缓释载体的制备方法
技术领域
[0001]本发明公开了一种胶原蛋白药物磁性缓释载体的制备方法，属于药物载体合成领域。
【背景技术】
[0002]药物释放系统又称给药系统、药物传输系统、药物投递系统，是指人们在防治疾病的过程中所采用的各种治疗药物的不同给药形式。传统的药物释放体系是活性药物成分扩散的过程。现代技术希望在规定时间内控制或者减缓药物释放的速率，充分发挥活性药物成分的作用，使机体内血药浓度保持恒定，避免出现血药浓度过高或低的现象，尽可能降低药物对机体的毒副作用，提高药物的利用率和治疗效果，减少用药剂量，降低或防止药物对身体器官的损害。
[0003]目前所应用的药物缓释材料是一些合成的(如PEG、PVA、PCL等)，合成高分子载体常常生物相容性不好，易引起机体的免疫排斥反应，有时还含有痕量引发剂等毒性杂质，如在聚乳酸的一般生产方法中使用有机锡催化剂，会产生细胞毒性。
[0004]药物缓释体系虽然已经研究的相当成熟，但是在植入生物体后释放的药物仍然会对正常器官造成损害，为了进一步避免药物伤害正常器官，必须使缓释载体具有靶向性，直接到达指定部位，释放药物有效成分。
【发明内容】
[0005]本发明主要解决的技术问题:针对传统药物缓释材料在制备和使用过程中出现的生物相容性不好，易引起机体的免疫排斥反应，而且靶向性差，造成药物中有效成分的损失的问题，提供了一种胶原蛋白药物磁性缓释载体的制备方法，本发明以廉价易得的鲫鱼鱼鳞为原料，洗净风干后用碳酸钠和EDTA溶液浸泡除去杂质蛋白、色素和矿物质成分，再用乙酸配合胃蛋白酶溶解鱼鳞中的胶原蛋白，经透析纯化后，在磷酸氢二钾缓冲液中，配合超声处理，包覆纳米四氧化三铁，经分离干燥后，得到胶原蛋白药物磁性缓释载体。本发明所得缓释载体主要成分为胶原蛋白成分，和人体生物相容性好，对人体无害，不会引起免疫排斥反应，在使用过程中，利用四氧化三铁的磁性，可直接到达指定部位缓释药物有效成分，充分发挥药效，使患者提前康复。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(1)称取新鲜鲫鱼鱼鳞200?300g，经人工清洗除杂后，平铺于菠萝筛中，再将菠萝筛转至避光通风处，风干处理3?5天，收集风干后的鲫鱼鱼鳞，将其倒入盛有200?300mL浓度为0.3?0.5mol/L碳酸钠溶液的烧杯中，浸泡处理3?5h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3?5次，再将鲫鱼鱼鳞倒入盛有180?260mL浓度为0.2?0.4mol/LEDTA溶液的烧杯中，浸泡处理I?3h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3?5次，得预处理鲫鱼鱼鳞；
(2)将上述所得预处理鲫鱼鱼鳞用液氮冷却处理3?5min，然后迅速铺于石磨磨盘上，混入60?80mL浓度为0.3?0.5mol/L乙酸溶液，研磨处理3?5min，收集研磨楽液，将其置于烧杯中，再加入0.6?0.Sg胃蛋白酶，随后将烧杯转入数显测速恒温磁力搅拌器中，升温至38?45°C，启动搅拌器，以600?800r/min转速搅拌反应30?50min，过滤，除去滤渣，得滤液；
(3)将上述所得滤液转入透析袋中，在自来水中透析处理24?36h，随后转入去离子水中，透析处理36?48h，每6h更换一次去离子水，透析结束，将透析袋中溶液抽滤，得胶原蛋白溶液；
(4)称取0.6?0.8g纳米四氧化三铁粉末，加入盛有30?50mL上述所得胶原蛋白溶液的烧杯中，随后将烧杯转入超声振荡仪中，以15?25kHz功率超声处理8?12min，再向烧杯中加入150?250mL质量浓度为12?16%磷酸氢二钾溶液，继续超声处理6?8min，随后将混合液转入2?4°C冰箱中冷藏6?Sh，取出静置，待分层后，转入离心机离心分离，弃去上清液，得下层黑色沉淀物，用去离子水洗涤沉淀物3?5次，再将其转入冷冻干燥机中干燥处理6?Sh，得黑色粉末，即为胶原蛋白药物磁性缓释载体。
[0007]本发明的具体应用方法:称取0.6?0.Sg本发明所得胶原蛋白药物磁性缓释载体，加入盛有100?120mL质量浓度为15?20%磷酸二氢钾缓冲溶液的烧杯中，再加入10?20mL浓度为0.2?0.5g/L阿霉素溶液，在室温条件下，以600?800r/min转速搅拌混合8?12h，离心分离，弃去上清液，将下层沉淀转入冷冻干燥机中干燥处理6?Sh，将得到的药品给患者服用，在患者需要治疗的部位施加磁场，使药物到达指定位置后缓释，患者在使用过程中未出现任何不良反应，用药量减少了 50?60%，且患者康复时间提前10?15天。
[0008]本发明的有益效果:
(1)本发明以鲫鱼鱼鳞为原料，减少了鱼鳞的随意丢弃而造成的环境污染，同时为渔民增加了经济收入来源；
(2)本发明所的药物载体可以使药物有效成分在指定位置缓释，避免了药物滥用，减少了患者的经济负担，使患者更快康复，减少患病带来的痛苦，值得推广使用。
【具体实施方式】
[0009]称取新鲜鲫鱼鱼鳞200?300g，经人工清洗除杂后，平铺于菠萝筛中，再将菠萝筛转至避光通风处，风干处理3?5天，收集风干后的鲫鱼鱼鳞，将其倒入盛有200?300mL浓度为0.3?0.5mol/L碳酸钠溶液的烧杯中，浸泡处理3?5h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3?5次，再将鲫鱼鱼鳞倒入盛有180?260mL浓度为0.2?0.4mo I/LEDTA溶液的烧杯中，浸泡处理I?3h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3?5次，得预处理鲫鱼鱼鳞;将上述所得预处理鲫鱼鱼鳞用液氮冷却处理3?5min，然后迅速铺于石磨磨盘上，混入60?80mL浓度为0.3?0.5mol/L乙酸溶液，研磨处理3?5min，收集研磨楽液，将其置于烧杯中，再加入0.6?0.8g胃蛋白酶，随后将烧杯转入数显测速恒温磁力搅拌器中，升温至38?45°C，启动搅拌器，以600?800r/min转速搅拌反应30?50min，过滤，除去滤渣，得滤液;将上述所得滤液转入透析袋中，在自来水中透析处理24?36h，随后转入去离子水中，透析处理36?48h，每6h更换一次去离子水，透析结束，将透析袋中溶液抽滤，得胶原蛋白溶液;称取0.6?0.Sg纳米四氧化三铁粉末，加入盛有30?50mL上述所得胶原蛋白溶液的烧杯中，随后将烧杯转入超声振荡仪中，以15?25kHz功率超声处理8?12min，再向烧杯中加入150?250mL质量浓度为12?16%磷酸氢二钾溶液，继续超声处理6?Smin，随后将混合液转入2?4°C冰箱中冷藏6?Sh，取出静置，待分层后，转入离心机离心分离，弃去上清液，得下层黑色沉淀物，用去离子水洗涤沉淀物3?5次，再将其转入冷冻干燥机中干燥处理6?Sh，得黑色粉末，即为胶原蛋白药物磁性缓释载体。
[0010]实例 I
称取新鲜鲫鱼鱼鳞200g，经人工清洗除杂后，平铺于菠萝筛中，再将菠萝筛转至避光通风处，风干处理3天，收集风干后的鲫鱼鱼鳞，将其倒入盛有200mL浓度为0.3mol/L碳酸钠溶液的烧杯中，浸泡处理3h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3次，再将鲫鱼鱼鳞倒入盛有180mL浓度为0.2moI/LEDTA溶液的烧杯中，浸泡处理Ih，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3次，得预处理鲫鱼鱼鳞;将上述所得预处理鲫鱼鱼鳞用液氮冷却处理3min，然后迅速铺于石磨磨盘上，混入60mL浓度为0.3mol/L乙酸溶液，研磨处理3min，收集研磨浆液，将其置于烧杯中，再加入0.6g胃蛋白酶，随后将烧杯转入数显测速恒温磁力搅拌器中，升温至38 V，启动搅拌器，以600r/min转速搅拌反应30min，过滤，除去滤渣，得滤液;将上述所得滤液转入透析袋中，在自来水中透析处理24h，随后转入去离子水中，透析处理36h，每6h更换一次去离子水，透析结束，将透析袋中溶液抽滤，得胶原蛋白溶液；称取0.6g纳米四氧化三铁粉末，加入盛有30mL上述所得胶原蛋白溶液的烧杯中，随后将烧杯转入超声振荡仪中，以15kHz功率超声处理Smin，再向烧杯中加入150mL质量浓度为12%磷酸氢二钾溶液，继续超声处理6min，随后将混合液转入2 °C冰箱中冷藏6h，取出静置，待分层后，转入离心机离心分离，弃去上清液，得下层黑色沉淀物，用去离子水洗涤沉淀物3次，再将其转入冷冻干燥机中干燥处理6h，得黑色粉末，即为胶原蛋白药物磁性缓释载体。
[0011 ]本发明的具体应用方法:称取0.6g本发明所得胶原蛋白药物磁性缓释载体，加入盛有10mL质量浓度为15%磷酸二氢钾缓冲溶液的烧杯中，再加入1mL浓度为0.2g/L阿霉素溶液，在室温条件下，以600r/min转速搅拌混合8h，离心分离，弃去上清液，将下层沉淀转入冷冻干燥机中干燥处理6h，将得到的药品给患者服用，在患者需要治疗的部位施加磁场，使药物到达指定位置后缓释，患者在使用过程中未出现任何不良反应，用药量减少了 50%，且患者康复时间提前1天。
[0012]实例2
称取新鲜鲫鱼鱼鳞260g，经人工清洗除杂后，平铺于菠萝筛中，再将菠萝筛转至避光通风处，风干处理4天，收集风干后的鲫鱼鱼鳞，将其倒入盛有260mL浓度为0.4mol/L碳酸钠溶液的烧杯中，浸泡处理4h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤4次，再将鲫鱼鱼鳞倒入盛有240mL浓度为0.3moI/LEDTA溶液的烧杯中，浸泡处理2h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤4次，得预处理鲫鱼鱼鳞;将上述所得预处理鲫鱼鱼鳞用液氮冷却处理4min，然后迅速铺于石磨磨盘上，混入70mL浓度为0.4mol/L乙酸溶液，研磨处理4min，收集研磨浆液，将其置于烧杯中，再加入
0.7g胃蛋白酶，随后将烧杯转入数显测速恒温磁力搅拌器中，升温至40 V，启动搅拌器，以700r/min转速搅拌反应40min，过滤，除去滤渣，得滤液;将上述所得滤液转入透析袋中，在自来水中透析处理28h，随后转入去离子水中，透析处理42h，每6h更换一次去离子水，透析结束，将透析袋中溶液抽滤，得胶原蛋白溶液；称取0.7g纳米四氧化三铁粉末，加入盛有40mL上述所得胶原蛋白溶液的烧杯中，随后将烧杯转入超声振荡仪中，以20kHz功率超声处理lOmin，再向烧杯中加入180mL质量浓度为14%磷酸氢二钾溶液，继续超声处理7min，随后将混合液转入3 °C冰箱中冷藏7h，取出静置，待分层后，转入离心机离心分离，弃去上清液，得下层黑色沉淀物，用去离子水洗涤沉淀物4次，再将其转入冷冻干燥机中干燥处理7h，得黑色粉末，即为胶原蛋白药物磁性缓释载体。
[0013]本发明的具体应用方法:称取0.7g本发明所得胶原蛋白药物磁性缓释载体，加入盛有I1mL质量浓度为18%磷酸二氢钾缓冲溶液的烧杯中，再加入15mL浓度为0.4g/L阿霉素溶液，在室温条件下，以700r/min转速搅拌混合1h，离心分离，弃去上清液，将下层沉淀转入冷冻干燥机中干燥处理7h，将得到的药品给患者服用，在患者需要治疗的部位施加磁场，使药物到达指定位置后缓释，患者在使用过程中未出现任何不良反应，用药量减少了 55%，且患者康复时间提前12天。
[0014]实例3
称取新鲜鲫鱼鱼鳞300g，经人工清洗除杂后，平铺于菠萝筛中，再将菠萝筛转至避光通风处，风干处理5天，收集风干后的鲫鱼鱼鳞，将其倒入盛有300mL浓度为0.5mol/L碳酸钠溶液的烧杯中，浸泡处理5h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤5次，再将鲫鱼鱼鳞倒入盛有260mL浓度为0.4moI/LEDTA溶液的烧杯中，浸泡处理3h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤5次，得预处理鲫鱼鱼鳞;将上述所得预处理鲫鱼鱼鳞用液氮冷却处理5min，然后迅速铺于石磨磨盘上，混入SOmL浓度为0.5mol/L乙酸溶液，研磨处理5min，收集研磨浆液，将其置于烧杯中，再加入
0.Sg胃蛋白酶，随后将烧杯转入数显测速恒温磁力搅拌器中，升温至45 V，启动搅拌器，以800r/min转速搅拌反应50min，过滤，除去滤渣，得滤液;将上述所得滤液转入透析袋中，在自来水中透析处理36h，随后转入去离子水中，透析处理48h，每6h更换一次去离子水，透析结束，将透析袋中溶液抽滤，得胶原蛋白溶液；称取0.Sg纳米四氧化三铁粉末，加入盛有50mL上述所得胶原蛋白溶液的烧杯中，随后将烧杯转入超声振荡仪中，以25kHz功率超声处理12min，再向烧杯中加入250mL质量浓度为16%磷酸氢二钾溶液，继续超声处理8min，随后将混合液转入4 °C冰箱中冷藏Sh，取出静置，待分层后，转入离心机离心分离，弃去上清液，得下层黑色沉淀物，用去离子水洗涤沉淀物5次，再将其转入冷冻干燥机中干燥处理Sh，得黑色粉末，即为胶原蛋白药物磁性缓释载体。
[0015]本发明的具体应用方法:称取0.Sg本发明所得胶原蛋白药物磁性缓释载体，加入盛有120mL质量浓度为20%磷酸二氢钾缓冲溶液的烧杯中，再加入20mL浓度为0.5g/L阿霉素溶液，在室温条件下，以800r/min转速搅拌混合12h，离心分离，弃去上清液，将下层沉淀转入冷冻干燥机中干燥处理8h，将得到的药品给患者服用，在患者需要治疗的部位施加磁场，使药物到达指定位置后缓释，患者在使用过程中未出现任何不良反应，用药量减少了 60%，且患者康复时间提前15天。
【主权项】
1.一种胶原蛋白药物磁性缓释载体的制备方法，其特征在于具体制备步骤为: (1)称取新鲜鲫鱼鱼鳞200?300g，经人工清洗除杂后，平铺于菠萝筛中，再将菠萝筛转至避光通风处，风干处理3?5天，收集风干后的鲫鱼鱼鳞，将其倒入盛有200?300mL浓度为.0.3?0.5mol/L碳酸钠溶液的烧杯中，浸泡处理3?5h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3?5次，再将鲫鱼鱼鳞倒入盛有180?260mL浓度为0.2?0.4mol/LEDTA溶液的烧杯中，浸泡处理I?3h，取出鱼鳞，用去离子水洗涤3?5次，得预处理鲫鱼鱼鳞； (2)将上述所得预处理鲫鱼鱼鳞用液氮冷却处理3?5min，然后迅速铺于石磨磨盘上，混入60?80mL浓度为0.3?0.5mol/L乙酸溶液，研磨处理3?5min，收集研磨楽液，将其置于烧杯中，再加入0.6?0.Sg胃蛋白酶，随后将烧杯转入数显测速恒温磁力搅拌器中，升温至38?45°C，启动搅拌器，以600?800r/min转速搅拌反应30?50min，过滤，除去滤渣，得滤液； (3)将上述所得滤液转入透析袋中，在自来水中透析处理24?36h，随后转入去离子水中，透析处理36?48h，每6h更换一次去离子水，透析结束，将透析袋中溶液抽滤，得胶原蛋白溶液； (4)称取0.6?0.8g纳米四氧化三铁粉末，加入盛有30?50mL上述所得胶原蛋白溶液的烧杯中，随后将烧杯转入超声振荡仪中，以15?25kHz功率超声处理8?12min，再向烧杯中加入150?250mL质量浓度为12?16%磷酸氢二钾溶液，继续超声处理6?8min，随后将混合液转入2?4°C冰箱中冷藏6?Sh，取出静置，待分层后，转入离心机离心分离，弃去上清液，得下层黑色沉淀物，用去离子水洗涤沉淀物3?5次，再将其转入冷冻干燥机中干燥处理6?Sh，得黑色粉末，即得胶原蛋白药物磁性缓释载体。
【文档编号】C07K14/78GK106075463SQ201610462046
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】袁春华, 许博伟
【申请人】袁春华