专利名称：具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物，属于中药技术领域。
背景技术：
中药重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.或七叶一枝花 Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根莖,具有清热解毒，消肿止痛、凉肝定惊之功效，用于治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌打伤痛、凉风抽搐等症，是云南白药、宫血宁胶囊、季德胜蛇药片等中成药的主要组成药物。现代药理研究表明，重楼具有细胞毒活性、抑菌抗炎、镇痛、止血、镇静、抗早孕、杀精、对呼吸系统以及心血管系统作用等生理活性，在临床上用于治疗肺系、功能性子宫出血、淋巴结结核溃疡、神经性皮炎、外科炎症以及肿瘤等疾病疗效显著。目前有重楼入药的上市中成药复方有金复康口服液、软坚口服液、楼莲胶囊、肝复乐片等。近年来，重楼及其抗肿瘤有效成分重楼总皂苷的文献报道日益增多。中国中药杂志，2008，33 (16) =2057-2060中公开了滇重楼皂苷对10种肿瘤细胞株的细胞毒谱及构效关系研究；黄贤校等在中草药杂志2009，40 (3) =483-489发表了重楼属药用植物皂苷类化学成分及其生源途径的研究进展；陈志红等考察了重楼总皂苷对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对细胞周期的影响；朱丽丽等对重楼皂苷抑制SGC-7901细胞增殖及诱导凋亡进行了研究；林云华研究发现重楼和奥沙利钼在体外、体内实验中可能具有一定抗血管生成的作用，两者联合应用可能具有协同增效作用。贾科等发现重楼总皂苷可显著抑制MGC-803细胞的生长并呈时间-剂量依赖关系，可阻滞细胞于S期，诱导细胞凋亡率的升高；可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达，同时上调Caspase_3蛋白的表达,进而得出结论其作用机制可能与下调EphA2和survivin 的表达以及促进Caspase_3的表达有关。中国专利第200610052223.8号中公开了一种重楼总皂苷的制备方法，第200810052092.2号中也公开了一种以重楼总皂苷为有效成分的药物制剂及其制备方法。姜黄始载于《唐本草》,为姜科植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根莖,其性味辛、苦、温，归脾、肝经，具有破血行气，通经止痛之功效，可用于胸胁刺痛，胸痹心痛，痛经经闭，癥瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛等病症的治疗。姜黄含有多种化学成分，主要成分为姜黄素类化合物:姜黄素、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、二氢姜黄素等；倍半萜类化合物:姜黄新酮、姜黄酮醇A、B等；挥发油(4.2%):姜黄酮、姜黄烯、莪术醇等，此外还含有姜黄多糖类成分。其中姜黄素类有效成分的药理作用广泛，其抗炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗抑郁、抗肿瘤等作用已被普遍认可，其中抗肿瘤作用自1985年首次提出后，已有大量的实验研究证实，作用机制主要包括诱导肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成，有阻滞细胞周期进程，逆转肿瘤细胞多药耐药等方面。黄东生等研究发现，姜黄素能够增强caspase-8的表达,从而启动外源性凋亡途径，诱导人肺癌细胞凋亡。方悦等报道姜黄素具有抗食道癌、胃癌、肝癌、结肠癌等消化系统肿瘤的作用。中国专利CN1931353A公开了一种姜黄素提取及其中药组合物制备方法。
白芍是毛茛科植物芍药属的去皮干燥根，性微寒，味苦、酸，有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗之功效。白芍的药效成分包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷，苯甲酰苟药苷等，统称为白苟总苷(total glucosides of peony,TGP)。研究发现,其可以在多个环节影响自身免疫疾病的细胞免疫、体液免疫以及炎症过程，并有镇痛、保肝的作用。芍药苷作为占TGP90%以上的化合物，近年来发现亦有抗肿瘤活性。其作用机制除了增强机体的免疫力外，还具有体内外引起肿瘤细胞周期停滞、诱导肿瘤细胞凋亡、对化疗药物减毒增效等作用。杨加域等发现白芍醇提液超滤膜分离药效部位在体外具有抗肿瘤活性；詹可顺等报道TGP联合化疗治疗非小细胞肺癌优于单纯化疗，并能提高患者生存质量、改善患者细胞免疫功能和升高外周血象。中国专利第200510045840.0号中公开了一种具有升高白细胞作用的芍药苷与芍药内酯苷的组合物，适用于制备治疗因各种原因引起的白细胞减少、血小板和血红球蛋白降低等病症的药物。高小蓉等采用水提醇沉、膜分离、DEAE-纤维素柱层析分离纯化等方法得到白芍多糖Lewis肺癌和S180肉瘤模型均有较好的抑制率。目前，重楼皂苷与黄芪多糖的中药组合物(CN101152408A)的专利已见诸报道，而尚未发现同时具有抗肺癌和肝癌作用且由重楼提取物、姜黄多糖以及白芍提取物组成的中药组合物。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种活性更强且作用明确的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物。为了达到上述目的，本发明提供的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物由重楼提取物、姜黄多糖和白芍提取物以1: 0.1-5: 1-10的重量比组成；其中重楼提取物为市售商品，规格为5: UlO:1 或20:1 ;所述的姜黄多糖的制备方法包括按顺序进行的下列步骤:1)将姜黄药材或饮片粉碎成小块，然后加入到无水乙醇中浸泡I小时，药材与无水乙醇的用量比为Ig: 9.5mL，然后在90°C的温度下加热回流提取I小时，弃去提取液，保留回流物残渣；2)将上述回流物残渣加入到水中，回流物残渣与水的用量比为Ig: 9-10mL，然后在90°C的温度下加热回流提取2次，每次2.5小时，合并2次提取液；3)将上述提取液加入到95%浓度的乙醇溶液中至醇度达75%，静置过夜，然后在7500r.HiirT1的转速下离心分离20min，收集沉淀物并冷冻干燥，之后依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，即得姜黄多糖粗提物；4)将上述姜黄多糖粗提物用水溶解而制成样品溶液，然后加入用量为样品溶液体积1/4的氯仿和正丁醇混合溶剂进行萃取，剧烈振摇20-30min，离心分离，再在滤液中加入1/4滤液体积的氯仿和正丁醇混合溶剂并剧烈振摇，重复上述操作，直至水层和溶剂层交界处的变性蛋白质不再出现，将萃取液减压浓缩至原体积的1/4 ；5)将上述浓缩后的萃取液置于透析袋中流水透析3天，滤去透析袋内不溶物，然后在澄清液中加入95 %浓度的乙醇溶液至醇度达85 %，静置过夜，将沉淀物用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥后即可得到精制后的姜黄多糖；
所述的白芍提取物的制备方法包括按顺序进行的下列步骤:I)将白芍药材或饮片粉碎成粗粉，然后加入到65%浓度的乙醇溶液中浸泡I小时，白芍和65%浓度的乙醇用量比为Ig: 8-10mL，然后在95°C的温度下加热回流提取3次，第I次2小时，第2、3次各I小时，合并3次提取液；2)将上述提取液过滤后减压浓缩至原体积的1/2，然后加入1.5倍体积的水，加热至微沸后于阴凉处静置12小时后过滤，将沉淀物在85°C的温度下蒸发干燥而得到白芍提取物。在上述姜黄多糖的制备方法中，所述的步骤2}和步骤3}之间还包括一个脱色步骤，方法是将步骤2)得到的提取液过滤后减压浓缩至25°C下相对密度为1.0，然后采用大孔弱碱性阴离子交换树脂D301-G在35°C，pH = 5.5的条件下进行脱色。在上述姜黄多糖的制备方法中，所述的步骤4)中氯仿和正丁醇混合溶剂中氯仿和正丁醇的体积比为4.5: I。所述重楼提取物、姜黄多糖以及白芍提取物的用量比为1: 2.5: 5。本发明提供的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物是由市售重楼提取物、姜黄多糖以及白芍提取物混合制成。经体外MTT法活性试验证明，此中药组合物可显著抑制LA795等肺癌细胞株以及Hep-B3等肝癌细胞株的生长；对肺腺癌和肝癌荷瘤小鼠模型试验显示，抑瘤率分别均在50 %以上，提高小鼠脾指数与肝指数，抗肺癌和肝癌的活性更高且作用明确，对肺癌、肝癌具有很好的抑制作用。另外，所述的中药组合物制备过程简单，并可制备成各种不同剂型。
具体实施例方式实施例一:
(I)取Ig过80目筛后规格为10: I的市售重楼提取物(宝鸡市方晟生物开发有限公司生产)粉末。(2)姜黄多糖的制备I)将300g姜黄药材粉碎成小块，然后加入到无水乙醇中浸泡I小时，药材与无水乙醇的用量比为Ig: 9.5mL，然后在90°C的温度下加热回流提取I小时，弃去提取液，保留回流物残渣；2)将上述回流物残渣加入到水中，回流物残渣与水的用量比为Ig: 9mL，然后在90°C的温度下加热回流提取2次，每次2.5小时，合并2次提取液；3)将上述得到的提取液过滤后减压浓缩至25°C下相对密度为1.0，然后采用大孔弱碱性阴离子交换树脂D301-G在35°C，pH = 5.5的条件下进行脱色；4)将上述脱色后的提取液加入到95%浓度的乙醇溶液中至醇度达75%，静置过夜，然后在7500r.HiirT1的转速下离心分离20min，收集沉淀物并冷冻干燥，之后依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，即得姜黄多糖粗提物；5)将上述姜黄多糖粗提物用水溶解而制成样品溶液，然后加入用量为样品溶液体积1/4的氯仿和正丁醇混合溶剂(V/V = 4.5: I)进行萃取，剧烈振摇20-30min，离心分离，再在滤液中加入1/4滤液体积的氯仿和正丁醇混合溶剂并剧烈振摇，重复上述操作，直至水层和溶剂层交界处的变性蛋白质不再出现，将萃取液减压浓缩至原体积的1/4 ；
6)将上述浓缩后的萃取液置于透析袋中流水透析3天，滤去透析袋内不溶物，然后在澄清液中加入95 %浓度的乙醇溶液至醇度达85 %，静置过夜，将沉淀物用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥后即可得到精制后的姜黄多糖20.lg。(3)白芍提取物的制备I)将IOOg白芍药材粉碎成粗粉，然后加入到65%浓度的乙醇溶液中浸泡I小时，白芍和65%浓度的乙醇用量比为Ig: 9mL，然后在95°C的温度下加热回流提取3次，第I次2小时，第2、3次各I小时，合并3次提取液；2)将上述提取液过滤后减压浓缩至原体积的1/2，然后加入1.5倍体积的水，加热至微沸后于阴凉处静置12小时后过滤，将沉淀物在85°C的温度下蒸发干燥而得到白芍提取物13.5g。(4)中药组合物的制备将上述重楼提取物、姜黄多糖以及白芍提取物按1: 2.5: 5的重量比混合后即可制成本发明提供的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物。实施例二:(I)取IOg过80目筛后规格为5: I的市售重楼提取物粉末。(2)姜黄多糖的制备I)将300g姜黄药材粉碎成小块，然后加入到无水乙醇中浸泡I小时，药材与无水乙醇的用量比为Ig: 9.5mL，然后在90°C的温度下加热回流提取I小时，弃去提取液，保留回流物残渣；2)将上述回流物残渣加入到水中，回流物残渣与水的用量比为Ig: 10mL，然后在90°C的温度下加热回流提取2次，每次2.5小时，合并2次提取液；3)将上述得到的提取液过滤后减压浓缩至25°C下相对密度为1.0，然后采用大孔弱碱性阴离子交换树脂D301-G在35°C，pH = 5.5的条件下进行脱色；4)将上述脱色后的提取液加入到95%浓度的乙醇溶液中至醇度达75%，静置过夜，然后在7500r.HiirT1的转速下离心分离20min，收集沉淀物并冷冻干燥，之后依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，即得姜黄多糖粗提物；5)将上述姜黄多糖粗提物用水溶解而制成样品溶液，然后加入用量为样品溶液体积1/4的氯仿和正丁醇混合溶剂(V/V = 4.5: I)进行萃取，剧烈振摇20-30min，离心分离，再在滤液中加入1/4滤液体积的氯仿和正丁醇混合溶剂并剧烈振摇，重复上述操作，直至水层和溶剂层交界处的变性蛋白质不再出现，将萃取液减压浓缩至原体积的1/4 ；6)将上述浓缩后的萃取液置于透析袋中流水透析3天，滤去透析袋内不溶物，然后在澄清液中加入95 %浓度的乙醇溶液至醇度达85 %，静置过夜，将沉淀物用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥后即可得到精制后的姜黄多糖20.6g。(3)白芍提取物的制备I)将IOOg白 芍药材粉碎成粗粉，然后加入到65%浓度的乙醇溶液中浸泡I小时，白芍和65%浓度的乙醇用量比为Ig: 8mL，然后在95°C的温度下加热回流提取3次，第I次2小时，第2、3次各I小时，合并3次提取液；2)将上述提取液过滤后减压浓缩至原体积的1/2，然后加入1.5倍体积的水，加热至微沸后于阴凉处静置12小时后过滤，将沉淀物在85°C的温度下蒸发干燥而得到白芍提取物13.5g。(4)中药组合物的制备将上述重楼提取物、姜黄多糖以及白芍提取物按1: 0.1:1的重量比混合后即可制成本发明提供的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物。实施例三:(I)取IOg过80目筛后规格为20: I的市售重楼提取物粉末。(2)姜黄多糖的制备I)将300g姜黄药材粉碎成小块，然后加入到无水乙醇中浸泡I小时，药材与无水乙醇的用量比为Ig: 9.5mL，然后在90°C的温度下加热回流提取I小时，弃去提取液，保留回流物残渣；2)将上述回流物残渣加入到水中，回流物残渣与水的用量比为Ig: 10mL，然后在90°C的温度下加热回流提取2次，每次2.5小时，合并2次提取液；3)将上述 得到的提取液过滤后减压浓缩至25°C下相对密度为1.0，然后采用大孔弱碱性阴离子交换树脂D301-G在35°C，pH = 5.5的条件下进行脱色；4)将上述脱色后的提取液加入到95%浓度的乙醇溶液中至醇度达75%，静置过夜，然后在7500r.HiirT1的转速下离心分离20min，收集沉淀物并冷冻干燥，之后依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，即得姜黄多糖粗提物；5)将上述姜黄多糖粗提物用水溶解而制成样品溶液，然后加入用量为样品溶液体积1/4的氯仿和正丁醇混合溶剂(V/V = 4.5: I)进行萃取，剧烈振摇20-30min，离心分离，再在滤液中加入1/4滤液体积的氯仿和正丁醇混合溶剂并剧烈振摇，重复上述操作，直至水层和溶剂层交界处的变性蛋白质不再出现，将萃取液减压浓缩；6)将上述浓缩后的萃取液置于透析袋中流水透析3天，滤去透析袋内不溶物，然后在澄清液中加入95 %浓度的乙醇溶液至醇度达85 %，静置过夜，将沉淀物用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥后即可得到精制后的姜黄多糖20.6g。(3)所述白芍提取物的提取方法包括按顺序进行的下列步骤:I)将粉碎成粗粉的白芍药材100g，采用IL白芍粗粉干重的(W/W) 65%乙醇，浸泡I小时后于温度95°C下回流提取2小时，并且按第I次回流提取操作条件再进行回流提取2次，每次I小时,合并3次提取液；2)提取液过滤后经减压浓缩至原体积的1/2，加入1.5倍体积的水，加热至微沸后于阴凉处静置12小时后过滤，沉淀物在85°C下蒸发干燥，得到白芍提取物。(4)中药组合物的制备将上述重楼提取物、姜黄多糖以及白芍提取物按1: 5: 10的重量比混合后即可制成本发明提供的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物。为了验证本发明提供的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物的药效，本发明人进行了如下试验:一.抗肿瘤活性试验1.体外抗肿瘤活性试验1.1细胞株及培养小鼠肺腺癌LA795细胞株，培养于含10 %灭活胎牛血清、100U/mL青霉素和100 μ g/mL链霉素的RPMn640培养基中，于37°C，5 % CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3-4天传代一次。人肺腺癌A549细胞株，培养于含10 %灭活胎牛血清、100U/mL青霉素和100 μ g/mL链霉素的DMEM培养基中，于37°C，5 % CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3 4天传代一次。BEL-7402肝癌细胞株，培养于含10%灭活胎牛血清、100U/mL青霉素和100 μ g/mL链霉素的RPMn640培养基中，于37°C，5% CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3_4天传代一次。!fep-B3肝癌细胞株，培养于含10%灭活胎牛血清、100U/mL青霉素和100μ g/mL链霉素的DMEM培养基中，于37°C，5% CO2培养箱及饱和湿度条件下培养，3 4天传代一次。1.2药物抗肿瘤活性测定MTT法:将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为3X IO4个/mL的细胞悬液，接种于96孔酶标板，每孔加200 μ L0 24h后换不含血清培养液，使细胞同步化生长,每孔200 μ L。第三天向孔中加入受试药，即分别加入重楼提取物水溶液，姜黄多糖水溶液，白芍提取物水溶液以及本中药组合物水溶液；另设对照组:0.1%二甲基亚砜(DMSO)，每孔加200 μ L0受试药每组分别设0.01,0 .1,1,10,100,1000 μ g/mL六个浓度，每个浓度设8个平行孔，于37°C下培养24h后，每孔加无血清无酚红培养液新鲜配制的0.5mg/mL MTT100 μ L，继续培养4h，然后，每孔加IOOyL DMSO溶解MTT甲臜颗粒，用微型振荡器振荡混匀后，于酶标仪上测定光密度值(OD)，实验重复三次，取平均值。以溶剂对照处理肿瘤细胞为对照组，由OD值计算抑制率，公式为:细胞生长抑制率=(对照组OD值一实验组OD值)/对照组OD X 100%，并以药物浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制细胞生长曲线，并求得IC5tl (半数抑制率)，IC5tl =细胞生长抑制率为50%的药物浓度。结果见表I。2.体内抗肿瘤活性试验分别将100只T739小鼠(雌性，18_20g)给予上述实施例制备的中药组合物进行小鼠LA795肺腺癌转移模型体内药效试验。分别将100只昆明小鼠(雌性，18_20g)给予上述实施例制备的中药组合物进行小鼠HepA肝癌模型和H22肝癌模型体内药效试验。2.1动物造模2.1.1HepA肝癌模型取接种H印A肝癌细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠，用生理盐水洗涤腹部以进行消毒，于超净工作台中抽取5mL乳白色腹水作为瘤源，然后加入5mL生理盐水而配制成1:1比例的细胞悬液，用无菌注射器抽取0.1mL并接种于一只小鼠腋下，共接种100只。整个操作在无菌条件下进行。2.1.2H22肝癌模型取接种H22肝癌细胞后腹水饱满的荷瘤小鼠，用生理盐水洗涤腹部以进行消毒，于超净工作台中抽取5mL乳白色腹水作为瘤源，然后加入5mL生理盐水而配制成1:1比例的细胞悬液，用无菌注射器抽取0.1mL并接种于一只小鼠腋下，共接种100只。整个操作在无菌条件下进行。2.1.3LA795肺腺癌转移模型取接种LA795肺腺癌细胞后第6_8天肿瘤生长良好的T739荷瘤鼠，拉断颈椎处死小鼠，在无菌条件下剥离肿瘤，选择新鲜无坏死的瘤组织剪碎并置于玻璃研磨器中，加适量生理盐水轻轻研磨制备成瘤细胞悬液，细胞筛过滤后加生理盐水稀释、计数，调配成细胞浓度为1000万/毫升的细胞悬液，接种于健康小鼠右前肢腋窝皮下，每只0.2ml。2.2动物分组及给药2.2.HfepA肝癌模型于接种次日开始给药，每日I次:(I)模型组，灌服生理盐水，每只0.2mL ； (2)化疗组:按20mg/kg -bw腹腔注射环磷酰胺；(3)重楼高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；⑷重楼低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；(5)姜黄多糖高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(6)姜黄多糖低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；(7)白苟高剂量组:按400mg/kg *bw灌服；⑶白苟低剂量组:按200mg/kg *bw灌服；(9)中药组合物高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(10)中药组合物低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；给药两周，于给药结束后次日颈部脱白处死小鼠，解剖取其瘤组织并称重，按下式计算抑瘤率；同时摘取脾，胸腺并称重，按下式计算脾指数和胸腺指数。结果见表2、表3。抑瘤率(％ ) = (1-给药组平均瘤重/生理盐水组平均瘤重)X 100%脾指数=(脾脏重量/体重)*1000胸腺指数=(胸腺重量/体重)*10002.2.2H22肝癌模型于接种次日开始给药，每日I次:(I)模型组，灌服生理盐水，每只0.2mL ； (2)化疗组:按20mg/kg -bw腹腔注射环磷酰胺；(3)重楼高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(4)重楼低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；(5)姜黄多糖高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(6)姜黄多糖低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；(7)白苟高剂量组:按400mg/kg *bw灌服；⑶白苟低剂量组:按200mg/kg *bw灌服；(9)中药组合物高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(10)中药组合物低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；给药两周，于给药结束后次日颈部脱白处死小鼠，解剖取其瘤组织并称重，按上面的公式计算抑瘤率；同时摘取脾，胸腺并称重，按上面的公式计算脾指数`和胸腺指数。结果见表4、表5。2.2.3LA795肺腺癌转移模型于接种次日开始给药，每日I次:(I)模型组，灌服生理盐水，每只0.2mL ； (2)化疗组:按20mg/kg -bw腹腔注射环磷酰胺；(3)重楼高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(4)重楼低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；(5)姜黄多糖高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(6)姜黄多糖低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；(7)白苟高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(8)白苟低剂量组:按200mg/kg.bw灌服；(9)中药组合物高剂量组:按400mg/kg.bw灌服；(10)中药组合物低剂量组:按200mg/kg.bw灌服。给药两周，于给药结束后次日颈部脱白处死小鼠，解剖取其瘤组织并称重，按上面的公式计算抑瘤率；摘取肝，脾，胸腺、肾、心、脑、肺、胃、回肠、结肠，其中肝，脾分别称重，按上面的公式计算脾指数和胸腺指数。将取下的组织保存于10%中性福尔马林中，并做石蜡切片，进行常规HE染色，其中瘤组织亦做TUNEL染色，观察细胞凋亡。结果见表6-表8。二、抗肿瘤活性试验结果表I本中药组合物体外抗癌活性试验结果
权利要求
1.一种具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物，其特征在于:所述的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物由重楼提取物、姜黄多糖和白芍提取物以1: 0.1-5: 1-10的重量比组成；其中重楼提取物为市售商品，规格为5: UlO: I或20: I ； 所述的姜黄多糖的制备方法包括按顺序进行的下列步骤: 1)将姜黄药材或饮片粉碎成小块，然后加入到无水乙醇中浸泡I小时，药材与无水乙醇的用量比为Ig: 9.5mL，然后在90°C的温度下加热回流提取I小时，弃去提取液，保留回流物残渣； 2)将上述回流物残渣加入到水中，回流物残渣与水的用量比为Ig: 9-10mL，然后在90°C的温度下加热回流提取2次，每次2.5小时，合并2次提取液； 3)将上述提取液加入到95%浓度的乙醇溶液中至醇度达75%，静置过夜，然后在7500r.HiirT1的转速下离心分离20min，收集沉淀物并冷冻干燥，之后依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，即得姜黄多糖粗提物； 4)将上述姜黄多糖粗提物用水溶解而制成样品溶液，然后加入用量为样品溶液体积1/4的氯仿和正丁醇混合溶剂进行萃取，剧烈振摇20-30min，离心分离，再在滤液中加入1/4滤液体积的氯仿和正丁醇混合溶剂并剧烈振摇，重复上述操作，直至水层和溶剂层交界处的变性蛋白质不再出现，将萃取液减压浓缩至原体积的1/4 ； 5)将上述浓缩后的萃取液置于透析袋中流水透析3天，滤去透析袋内不溶物，然后在澄清液中加入95%浓度的乙醇溶液至醇度达85%，静置过夜，将沉淀物用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥后即可得到精制后的姜黄多糖； 所述的白芍提取物的制备方法包括按顺序进行的下列步骤: 1)将白芍药材或饮片粉碎成粗粉，然后加入到65%浓度的乙醇溶液中浸泡I小时，白芍和65%浓度的乙醇用量比为Ig: 8-10mL，然后在95°C的温度下加热回流提取3次，第I次2小时，第2、3次各I小时，合并3次提取液； 2)将上述提取液过滤后减压浓缩至原体积的1/2，然后加入1.5倍体积的水，加热至微沸后于阴凉处静置12小时后过滤，将沉淀物在85°C的温度下蒸发干燥而得到白芍提取物。
在上述姜黄多糖的制备方法中，所述的步骤2)和步骤3)之间还包括一个脱色步骤，方法是将步骤2)得到的提取液过滤后减压浓缩至25°C下相对密度为1.0，然后采用大孔弱碱性阴离子交换树脂D301-G在35°C，pH = 5.5的条件下进行脱色。
2.根据权利要求1所述的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物，其特征在于:在上述姜黄多糖的制备方法中，所述的步骤4)中氯仿和正丁醇混合溶剂中氯仿和正丁醇的体积比为4.5: I。
3.根据权利要求1所述的具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物，其特征在于:所述重楼提取物、姜黄多糖以 及白芍提取物的用量比为1: 2.5: 5。
全文摘要
本发明公开了一种具有抗肺癌和肝癌作用的中药组合物，其由重楼提取物、姜黄多糖和白芍提取物以1∶0.1-5∶1-10的重量比组成。本发明提供的中药组合物经体外MTT法活性试验证明，可显著抑制LA795等肺癌细胞株以及Hep-B3等肝癌细胞株的生长；肺腺癌和肝癌荷瘤小鼠模型试验显示，抑瘤率分别均在50％以上，可提高小鼠脾指数与肝指数，明显抑制小鼠皮下移植肿瘤的肺转移和引起肿瘤细胞的凋亡且无明显毒副作用。与单独应用原药材相比，该药物组合物抗肺癌和肝癌的活性更高且作用明确，对肺癌、肝癌具有很好的抑制作用。
文档编号A61P35/00GK103169844SQ20131007930
公开日2013年6月26日 申请日期2013年3月13日 优先权日2013年3月13日
发明者高文远, 张瑶, 刘振, 满淑丽, 李红法 申请人:天津大学