卡麻孜日尤司抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药用图
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药卡麻孜日尤司抗肿瘤活性提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等恶性肿瘤的药物中的应用。本发明的提取物通过如下方法制备：维吾尔药卡麻孜日尤司经超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100：10-100:25为石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:17-100：100的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:17-100：100洗脱液干燥后即得。
【专利说明】
卡麻孜日尤司抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药 用途
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药卡麻孜日尤司抗肿瘤活性提取物 及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、脑胶质瘤等恶性肿 瘤的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 本品为菊科植物苦蒿Dcroptiol repens (L. ) Dc的干燥果实，具有一定的抗肿瘤作 用，但是，对其抗肿瘤的有效成分一直不清楚。本发明在研究广枣抗肿瘤活性时意外地发 现，亦具有很好的乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤 的预防及治疗作用，可以应用癌症的预防和治疗。本发明通过系统地筛选研究，发现了的有 效提取物具有显著的抗肿瘤活性，可以应用于肿瘤的预防和治疗。
【发明内容】
[0003] 本发明所解决的技术问题是提供一种提取物。
[0004] 本发明还提供了以提取物为主要活性成分的组合物。
[0005] 本发明同时提供了卡麻孜日尤司提取物及其组合物的制备和应用。
[0006] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0007] 维吾尔药卡麻孜日尤司经超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（100 :〇-〇 :1〇〇)梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，具体比例 见表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液经浓缩、干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛 选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100 :10-100:25,体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:17-100 :100,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:17-100 :100洗脱液干燥后即。
[0008] 优选地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100 :10-100:14,体 积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积比）洗脱，石 油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液干燥即得；
[0009] 或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100 :20-100:25,体积比） 洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100 :30-100:100,体积比）洗 脱，石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液干燥即得。
[0010] 更为优选地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14,体积 比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积比）洗脱，石 油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。该活性提取物从未见文献 报道，其TLC分析表征如图1，TLC条件为：GF 254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮 (3:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。
[0011] 或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇: 25,体积比）洗脱，继 用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100，体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。该活性提取物从未见文献报道，其TLC 分析表征如图2,TLC条件为=GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)显色 方法：香草醛-硫酸显色。
[0012] 具体，发现过程如下：
[0013] 1、维吾尔药卡麻孜日尤司超声提取物的制备
[0014] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 SN0050 样品 I. 6021g，留样 0· 50g，剩余 I. 1021g。
[0015] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果
[0016] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL超声提取15min，提取液浓缩后，得提取 物SN0050样品1.6021g，留样0. 50g，剩余I. 1021g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅 胶柱色谱，拌样硅胶I. 5g，空白硅胶10g，玻璃柱内径2. 0cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗 脱（石油醚：乙酸乙酯，体积比，见表1)，柱体积29ml，每个梯度洗脱200ml，得到各个浓度 提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱提取物，TLC分析结果见 图3，TLC条件为=GF 254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)显色方法：香草 醛-硫酸显色。
[0017] 表 1
[0020] 3、抗肿熘伯!王师逃力法和结米
[0021] 1)实验条件
[0022] a)细胞株信息
[0023] 大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库
[0024] b)药品及试剂
[0025] 样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培 养液稀释至所需浓度（DMSO彡1%。）。
[0026] RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马 生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT)。
[0027] c)仪器
[0028] CO2培养箱（SANYO,日本）
[0029] 垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司）
[0030] 倒置生物显微镜（重庆光电仪器有限公司）
[0031] 低/高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）
[0032] 电子天平（奥豪斯仪器有限公司）
[0033] 酶标仪（伯乐生命医学产品有限公司）
[0034] 立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）
[0035] 鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）
[0036] PH 计（SART0RIUS，德国）
[0037] 2)实验方法和过程
[0038] 大鼠脑胶质瘤细胞株C6以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔IOOul，12h后使用。 各组分以DMSO溶解为lOOmg/mL储存液，保存于-20°C待用。铺板后12h，观察细胞汇合率 约为40%，加药，浓度均为100 μ g/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组（培 养基+细胞；含〇. 1 % DMSO培养基+细胞），3个空白孔（只有培养基）。加入药物24小 时后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴盐 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，继续培养 4 小时。完全弃去上清液，加入100 μ I DMSO,混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD 值。
[0039]
[0040] 3)实验结果表 [0041 ]表 2
[0047] 本发明优选如下技术方案：维吾尔药卡麻孜日尤司经超声提取，提取液浓缩后， 用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:14,体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积 比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收有机溶剂，干燥后，得到高活性提取物，即 为该抗肿瘤的活性提取物。该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。
[0048] 或维吾尔药卡麻孜日尤司经超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗脱，继用石 油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯 100:100洗脱液经回收有机溶剂，干燥后，得到高活性提取物，即为该抗肿瘤的活性提取物。 该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图2。
[0049] 4、抗肿瘤总有效提取物的提取方法研究
[0050] 1)提取溶剂的种类研究
[0051] 分别用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有 机溶剂提取，并测试提取物对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：
[0052] 表 3
[0054] 研究结果表明：提取用溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合 溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0055] 2)提取溶剂的用量研究
[0056] 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物 对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：
[0057] 表 4
[0060] 活性提取物提取用溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
[0061] 3)干燥方法的研究
[0062] 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到 的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干 燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对C6细胞的抗肿瘤活性提取物进行干燥，其 中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0063] 表 5
[0065] 因此，卡麻孜日尤司抗肿瘤活性提取物的制备方法为：
[0066] 优选地，维吾尔药卡麻孜日尤司经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14,体积比）洗 脱2-50倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积比）洗 脱2-50倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提 取物。以上条件最优为先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14,体积 比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积 比）洗脱15倍柱体积。
[0067] 维吾尔药卡麻孜日尤司经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的 硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗脱2-50倍 柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱2-50 倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。 以上条件最优为先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗 脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗 脱15倍柱体积。其中，
[0068] 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用溶剂用量为药材重量的 2-40倍（重量/体积比）。
[0069] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0070] 5、卡麻孜日尤司活性提取物的抗肿瘤活性研究
[0071] 利用各种肿瘤细胞，如乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝 癌等恶性肿瘤细胞株，分别测试卡麻孜日尤司抗肿瘤活性提取物的抗肿瘤活性，结果如 下：
[0072] 表6卡麻孜日尤司抗肿瘤提取物对各种肿瘤细胞的抑制活性
[0075] 因此，我们发现，卡麻孜日尤司抗肿瘤活性提取物具备抗肿瘤活性，可望用于各种 肿瘤如乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等恶性肿瘤的预防及治 疗。
[0076] 6、卡麻孜日尤司抗肿瘤活性提取物的组合物及其制备方法研究
[0077] 1)固体分散体
[0078] 处方
[0080] 制备方法：
[0081] 称取卡麻孜日尤司活性提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、 1:6的质量比分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至卡麻孜日尤司活性提取物 和载体完全溶解，转入旋蒸仪中除去溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得卡麻孜日尤司活性提 取物PVP包合物。
[0082] 2)环糊精包合物
[0083] 处方
[0084]
[0085] 制备方法：
[0086] 将β-环糊精与1-5倍水研匀，加卡麻孜日尤司活性提取物（水难溶性的应先溶 于少量有机溶剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0087] 3)分散片处方：
[0089] 制备方法：
[0090] 1.卡麻孜日尤司活性提取物淀粉分散体的制备，精密称取卡麻孜日尤司活性提取 物，加入适量的十二烷基硫酸钠，用70 %的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后， 在70°C的温度下蒸干，粉碎，过100目筛；
[0091] 2.称取处方量，卡麻孜日尤司活性提取物淀粉分散体，交联聚维酮，预胶化淀粉， 用70%乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min后，60°C烘 箱烘干45min，16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
[0092] 7、卡麻孜日尤司抗肿瘤活性提取物的检测方法研究
[0093] 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示卡麻孜日尤司抗肿瘤活性 提取物的特征，见图3。
[0094] 具体条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)显色方法： 香草醛-硫酸显色
【附图说明】：
[0095] 图1卡麻孜日尤司活性提取物的TLC色谱图；
[0096] 图2卡麻孜日尤司活性提取物的TLC色谱图；
[0097] 图3卡麻孜日尤司得到的化学组分的TLC色谱图。
【具体实施方式】
[0098] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0099] 实施例1 :
[0100] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收有机 溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。收率0. 3%。
[0101] 实施例2:
[0102] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收有机 溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。收率〇. 22%。
[0103] 实施例3 :
[0104] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收有机 溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。收率〇. 17%。
[0105] 实施例4 :
[0106] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收有机 溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。收率〇. 14%。
[0107] 实施例5 :
[0108] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后， 用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油 醚：乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油 醚：乙酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收 有机溶剂，旋蒸干燥，即为该活性提取物。收率〇. 15%。
[0109] 实施例6 :
[0110] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸 乙酯100:17洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。收率0.23%。
[0111] 实施例7:
[0112] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸 乙酯100:17洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。收率0. 26%。
[0113] 实施例8:
[0114] 维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14,体积比）洗脱15倍柱体积。继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸 乙酯100:17洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。收率0. 27%。
[0115] 实施例9:
[0116] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用娃 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经 回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。收率1. 43%。
[0117] 实施例10 :
[0118] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经 回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。收率1. 31%。
[0119] 实施例11 :
[0120] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用娃 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经 回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物。收率1. 13%。
[0121] 实施例12 :
[0122] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用娃 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚： 乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经 回收有机溶剂，离心干燥，即为该活性提取物。收率1. 08%。
[0123] 实施例13 :
[0124] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后， 用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油 醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石 油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱 液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该活性提取物。收率I. 11%。
[0125] 实施例14:
[0126] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚： 乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。收率1. 26%。
[0127] 实施例15 :
[0128] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚： 乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物。收率1. 22%。
[0129] 实施例16 :
[0130] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声 提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗脱洗脱20倍柱体积，继用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油 醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物。收率1. 35%。
[0131] 实施例17 :
[0132] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用娃 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机 溶剂，真空干燥，即为该活性提取物，收率1. 44%。
[0133] 实施例18 :
[0134] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用娃 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机 溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物，收率1. 38%。
[0135] 实施例19 :
[0136] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用娃 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机 溶剂，鼓风干燥，即为该活性提取物，收率1. 20%。
[0137] 实施例20:
[0138] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用娃 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:25,体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回收有机 溶剂，离心干燥，即为该活性提取物，收率1. 19%。
[0139] 实施例21:
[0140] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后， 用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油 醚：乙酸乙酯，100:25,体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油 醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回 收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该活性提取物，收率1. 17%。
[0141] 实施例22:
[0142] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声 提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25，体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该活性提取物，收率1. 32%。
[0143] 实施例23 :
[0144] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声 提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25，体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物，收率1. 27%。
[0145] 实施例24 :
[0146] 取维吾尔药卡麻孜日尤司20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声 提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25，体积比）洗脱30倍柱体积，继用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:100,体积比）洗脱25倍柱体积。石油醚：乙酸乙 酯100:100洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该活性提取物，收率1. 38%。
[0147] 实施例25:固体分散体
[0148] 称取卡麻孜日尤司活性提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、 1:6的质量比分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至卡麻孜日尤司活性提取物 和载体完全溶解，转入旋蒸仪中出去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得卡麻孜日尤司活 性提取物PVP包合物。
[0149] 实施例26 :环糊精包合物
[0150] 将环糊精与1-5倍水研匀，加卡麻孜日尤司活性提取物（水难溶性的应先溶 于少量有机溶剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0151] 实施例27:分散片
[0152] 1.称取干燥的卡麻孜日尤司活性提取物，加入适量的十二烷基硫酸钠，使用70% 的乙醇充分溶解，加入水溶性淀粉与卡麻孜日尤司活性提取物（1:1)，搅拌混合均匀，在 70°C下干燥，粉碎，过100目筛，得卡麻孜日尤司活性提取物分散体。
[0153] 2.精密称取处方量，卡麻孜日尤司活性提取物分散体，交联聚维酮，可压性淀粉， 用70 %乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，14目筛制成湿颗粒，室温下放置15min后，70°C烘箱 烘干45min，16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
【主权项】
1. 一种维吾尔药卡麻孜日尤司提取物，其特征为，维吾尔药卡麻孜日尤司经超声提取， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100 :10-100:25为石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:17-100 :100的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，石 油醚：乙酸乙酯100:17-100 :100洗脱液干燥后即得。2. 如权利要求1所述的维吾尔药卡麻孜日尤司提取物，其特征为，先用体积比100 : 10-100:14的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:17的石油醚：乙酸乙酯混合 溶剂洗脱； 或先用体积比100 :20-100:25的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100 : 30-100:100的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱； 优选地： 先用体积比100:14的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:17的石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:17洗脱液经回收溶剂干燥后，即为该活性 提取物； 或先用体积比100:25的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:100 石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:100洗脱液经回收 溶剂干燥后，即为该活性提取物。3. 如权利要求1-2任何一项所述的维吾尔药卡麻孜日尤司提取物，其特征为， 提取用溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或 乙醇水混合溶剂，优选甲醇或95%乙醇，提取用溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/ 体积比)。4. 如权利要求1-3任何一项所述的维吾尔药卡麻孜日尤司提取物，其特征为，石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂洗脱2-50倍柱体积。5. 如权利要求2所述的维吾尔药卡麻孜日尤司提取物，其特征为，先用体积比100:14 的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用体积比100:17的石油醚：乙酸乙酯混 合溶剂洗脱15倍柱体积； 或先用体积比100:25的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱10倍柱体积，继用 体积比100:100的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱15倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5中任何一项所述的维吾尔药卡麻 孜日尤司提取物和药学上可接受的赋形剂。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药卡麻孜日 尤司提取物或权利要求6所述的药物组合物。8. 权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药卡麻孜日尤司提取物或权利要求6所述的组 合物或权利要求7所述的药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。9. 如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、 胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤或肝癌。10. 如权利要求1-5中任何一项所述的维吾尔药卡麻孜日尤司提取物，其特征在于，用 TLC法检测，其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)显色 方法：香草醛-硫酸显色。
【文档编号】A61P35/00GK105982935SQ201510079843
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月15日
【发明人】王金辉, 黄健, 吴文熙
【申请人】沈阳药科大学