用于生产银杏提取物的改进方法
【专利摘要】本发明涉及用于生产用作药物的银杏叶提取物的改进的多步骤方法。
【专利说明】
用于生产银杏提取物的改进方法
技术领域
[0001] 本发明涉及用于生产用作药物的银杏叶提取物的改进的多步骤方法。
【背景技术】
[0002] 银杏叶提取物已作为药物使用了几百年。目前它们用于治疗各种痴呆及其症状以 及脑和外周循环障碍。涉及的活性成分有萜类内酯(银杏内酯A、B、C和白果内酯)和黄酮苷 (槲皮素、山奈酚和异鼠李素）。根据现行欧洲药典(8.0版;专著04/2008:1827"银杏干提取 物，精制和量化"），其对所有银杏提取物具有约束力，但在药典的范围内批准为药物，银杏 提取物含有以黄酮苷计算的22.0 %到27.0 %的黄酮类化合物、2.6 %到3.2 %白果内酯、 2.8%到3·4%银杏内酯A、B和C和不超过5ppm的银杏酸。制备描述如下"Bekanntmachung ? ber die Zulassung und Registrierung von Arzneimittel (Aufbereitungsmonographien fiir den humanmedizinischen Bereich)-银杏叶（银杏 叶)"（"用于药物批准和登记的通知（用于人类医学领域的制备专著）-银杏叶（银杏叶)"） (Bundesanzeiger 46,（133) ,7360-7361(1994)): "用丙酮-水从干燥的银杏林奈叶制备的 干提取物和随后无需添加浓缩物或分离成分的纯化步骤"。
[0003] 最近，正越来越多地得到银杏叶成分的含量，根据欧洲药典的要求，其使用已知的 方法提取不会得到提取物。特别地，目前不断地获得萜类内酯含量过高的银杏叶，导致提取 物含量的相应增加。然而，偶尔银杏叶中也含有含量过高的黄酮类化合物。
[0004] 根据欧洲药典的要求，当使用适当的银杏叶时，得到提取物的最重要的提取方法 在EP 431535 Bl(Dr.Willmar Schwabe GmbH&Co.)和在EP 360556 Bl(Indena S.p.A.)中 描述。最近，根据EP 431536 Bl(Dr.Willmar Schwabe GmbH&Co.)的方法变得更加重要，是 因为使用这种方法不需要毒理学上危险的化合物如铅盐（EP 431535B1)或芳族烃（EP 360556 BI)。
[0005] 根据EP 431536 Bl的权利要求1，所要求的用于生产银杏叶提取物的方法的特征 在于：
[0006] (a)用含水丙酮、碳原子数为1到3的含水烷醇或无水甲醇在约40至KKTC的温度下 提取新鲜或干燥银杏绿叶，
[0007] (b)从提取物中分离有机溶剂的主要量到含量不超过10%(重量），其中，如果必 要，在最后的蒸馏步骤中添加水，
[0008] (C)用水稀释剩余浓缩水溶液到固体含量为5至25% (重量），温度冷却到低于25°C 并同时搅拌，保持低温直到形成沉淀，且分离所形成的由不易溶于水的亲脂性成分构成的 沉淀，
[0009] (d)将硫酸铵添加到剩余水溶液中并用甲基乙基酮或甲基乙基酮和丙酮的混合物 提取所形成的溶液，
[0010] (e)将得到的提取物浓缩到固体含量为50到70%并且用水稀释得到的浓缩物到固 体含量为5到20%，
[0011] (f)用不与水混溶的丁醇或戊醇多步提取上述得到的溶液，
[0012] (g)将丁醇和戊醇相分别浓缩到固体含量为50到70%，
[0013] (h)通过添加这样量的水和乙醇稀释浓缩物，以得到20到60% (重量）的含水乙醇 中含有5到20 % (重量)干提取物的溶液，
[0014] (i)用沸点为60到100°C的脂肪族或环脂族溶剂提取含水醇溶液，用于进一步分离 烷基酚化合物，
[0015] (j)在减压条件下浓缩水相并在温度不超过60到80°C下将水相干燥到干提取物的 水含量少于5 %。
【发明内容】
[0016] 本发明的目的是提供用于生产满足欧洲药典要求的银杏叶提取物的改进的方法， 即使是使用成分光谱不优的银杏叶，特别是使用萜类内酯含量增加而且黄酮类化合物含量 增加的银杏叶。此外，本发明的目的是以不添加纯化合物或几乎纯的浓缩物的方式执行该 方法，，是因为这对于银杏提取物用作药物是不允许的。
[0017] 令人惊讶地是，已经发现，可以通过在根据EP 431 536 Bl的方法中额外的方法步 骤，来自成分光谱不优的银杏叶，可得到根据欧洲药典的提取物。为此目的，在根据步骤(d) 的提取(液液分配）后，水相分别从甲基乙基酮和甲基乙基酮丙酮相分离，分别浓缩到干提 取部分为40到80% (重量）以得到浓缩物。用水和甲基乙基酮调节浓缩物的10到60% (重量） 的部分到干提取部分不超过60% (重量)且甲基乙基酮含量不超过30% (重量），并用甲基乙 基酮和沸点为60到100°C脂肪族溶剂、比例为7/3到9/l(m/m)的混合物提取以得到水-甲基 乙基酮相和甲基乙基酮-脂肪族溶剂相。
[0018] 将水-甲基乙基酮相与剩余90到40% (重量）的浓缩物混合以得到溶液，从而以抵 消最终产品中含量过高的萜类内酯。
[0019] 可替代地，所得甲基乙基酮-脂肪族溶剂相可与剩余90到40% (重量）的浓缩物混 合以抵消最终产品中含量过高的黄酮类化合物。
[0020] 因此，根据本发明的用于生产具有以黄酮苷计算的含量为22.0% (重量)到27.0% (重量）的黄酮类化合物、2.6% (重量)到3.2% (重量）的白果内酯、2.8% (重量)到3.4% (重 量)的银杏内酯A、B和C和不超过5ppm的银杏酸的银杏叶干提取物的方法包括以下步骤：
[0021] (a)用含水丙酮、碳原子数为1到3的含水烷醇或无水甲醇在约40至KKTC的温度下 提取新鲜或干燥银杏绿叶得到粗提取溶液，
[0022] (b)通过蒸馏从步骤(a)的粗提取溶液中分离主要量的丙酮或碳原子数为1到3的 烷醇到含量不超过10% (重量），其中，如果在步骤(a)中使用无水甲醇，在最后的蒸馏步骤 中添加水以得到的浓缩水溶液，
[0023] (c)用水稀释步骤(b)的浓缩水溶液到固体含量为5至25% (重量），温度冷却到低 于25°C，保持低温直到沉淀形成并分离形成的沉淀物以再次得到水溶液，
[0024] (d)将硫酸铵添加到步骤(C)中得到的水溶液中并用甲基乙基酮或甲基乙基酮和 丙酮的混合物提取所形成的含有硫酸铵的溶液，从甲基乙基酮或甲基乙基酮-丙酮相中分 离水相以得到甲基乙基酮或甲基乙基酮-丙酮相，
[0025] (e)将步骤(d)的甲基乙基酮或甲基乙基酮-丙酮相浓缩到干提取部分为40到80% (重量)以得到浓缩物，
[0026] (f)用水和甲基乙基酮调节步骤(e)浓缩物中10到60% (重量）的部分到干提取部 分不超过60% (重量)且甲基乙基酮的含量不超过30% (重量）以得到调节的提取液，并用甲 基乙基酮和沸点为60到100°C的脂肪族溶剂、比例为7/3到9/l(m/m)的混合物提取得到的调 节的提取液以得到水-甲基乙基酮相和甲基乙基酮-脂肪族溶剂相，
[0027] (g)将步骤(e)的浓缩物的90到40 % (重量）的剩余部分与步骤(f)的水-甲基乙基 酮相或步骤(f)的甲基乙基酮-脂肪族溶剂相混合以得到溶液，
[0028] (h)浓缩步骤(g)的溶液到固体含量为50到70% (重量)并用水稀释所得浓缩物到 固体含量不超过50 % (重量)以得到溶液，
[0029] (i)用不与水混溶的丁醇或戊醇多步提取步骤(h)中所得溶液以得到丁醇或戊醇 相，
[0030] (j)浓缩步骤(i)的丁醇或戊醇相到固体含量至少为50% (重量）以得到浓缩物，
[0031] (k)如果必要，通过加入一定量的水和乙醇稀释步骤（j)中所得的浓缩物，可得到 水中具有5到20% (重量)的干提取物的溶液或不超过60% (重量)含水乙醇溶液，
[0032] (1)用具有沸点为60到HKTC的脂肪族溶剂提取步骤(k)中水或含水乙醇溶液，从 脂肪族溶剂相中分离水相以得到水相，
[0033] (m)在减压且温度不超过60到80°C的情况下浓缩步骤（1)中得到的水相以得到水 含量小于5 % (重量)的干提取物。
[0034]在本发明的优选的实施方案中，
[0035] ?使用丙酮含量为约50到70% (重量），特别优选为丙酮含量约为60% (重量)的含 水丙酮作为步骤(a)中的提取溶剂，
[0036] ?使用选自甲醇、乙醇、1 -丙醇和2-丙醇的烷醇含量为约50 % (重量）到70 % (重 量）的含水烷醇，特别优选乙醇含量约为60% (重量）的含水乙醇作为步骤(a)中的提取溶 剂，
[0037] ?在步骤(c)中，稀释活性溶液冷却到低于12°C的温度，
[0038] ?相对于步骤(c)中的水溶液，步骤(d)中添加至少30 % (重量）的硫酸铵，特别优 选30到50 % (重量）的硫酸铵，
[0039] ?在步骤(d)中用甲基乙基酮和丙酮、比例为7/3到3/4(m/m)的混合物提取，
[0040] ?在步骤(i)中用1-丁醇提取和/或
[0041] ?在步骤(1)中用庚烷提取，特别优选为用正庚烷或具有正庚烷部分大于35% (重 量)的庚烷异构体的混合物提取。
[0042] 此外，类似于EP 1868625 Bl和EP 1868568 Bl，可以进行用于除去4'-0_甲基吡哆 醇的下列补充方法步骤：
[0043] (η)从步骤(k)的水相或从步骤(m)的干提取物中制备乙醇含量为40 % (重量）到 60% (重量)的含水乙醇银杏提取液，
[0044] (〇)将步骤(η)中的含水乙醇银杏提取液涂覆在强酸性离子交换剂上以除去保留 在离子交换剂中的4'-0_甲基吡哆醇并使用含水乙醇洗脱以得到不含4'-0_甲基吡哆醇的 提取液作为洗脱液，
[0045] (ρ)在减压情况下浓缩步骤(〇)的洗脱液并在不超过60到80 °C的温度下干燥到干 提取物的水含量小于5 % (重量）。
[0046] Merck I和Amberlite IR-120是强酸性离子交换剂的例子。通常，强酸性离子交换 剂是与磺酸基团结合的聚苯乙烯树脂。
[0047] 在下文中，使用的与根据本发明的方法有关的一些术语的定义如下：
[0048] 干提取物:根据欧洲药典，干提取物的水含量一般不超过5% (重量）。
[0049] 例如与步骤(a)中无水甲醇有关的无水的根据本发明是指水含量<1% (重量）。
[0050] 提取包括一步、多步和连续提取。
[0051] 沸点为60到100°C的脂肪族溶剂优选为正庚烷或饱和无环和/或环状脂肪族烃的 混合物，该混合物通过其沸点定义，并且在指定为石油醚或石油汽油的情况下是已知和市 售的。优选地，使用的是基本上由正庚烷和其他C7烷烃构成的脂肪烃的混合物。超过35% (重量)的正庚烷(沸点98°C)的较多部分的正庚烷在如94-100°C段的组分找到。
[0052]步骤(i)中提到的不与水混溶的丁醇或戊醇优选为1-丁醇或1-戊醇。
【具体实施方式】
[0053]在下文中，根据本发明的方法被进一步解释并通过根据EP 431 536 Bl的比较实 施例1和根据本发明的实施例1来说明。
[0054]用于实施例1和比较实施例1的起始溶液
[0055](根据EP 431 536 Bl的方法步骤(a)到(d)和根据本发明的方法）
[0056]在以下实施例中，术语"庚烧"是指沸点范围为94_100°C的饱和脂肪烃和超过35% (重量)的正庚烷部分的混合物。
[0057] 用3.751^60%(重量）的丙酮在60°(：提取50(^干燥且压碎的银杏叶301^11。过滤该 植物材料，再次用3.75kg 60 % (重量)丙酮在60 °C提取30min并再次过滤。将这样得到的两 种提取液混合并浓缩(438g;干燥提取部分36.9 % )。
[0058]用400g水稀释得到的浓缩物并在12°C下搅拌lh。过滤所形成的沉淀且将240g硫酸 铵添加到滤液中并溶解。用各400ml甲基乙基酮/丙酮6/5(m/m)将该溶液提取两次。将甲基 乙基酮/丙酮相混合(808g)。
[0059] 根据EP 431536B1的比较实施例1 [0060](根据方法步骤(e)至（j))
[00611 浓缩上述起始溶液(404g)的一半（27.2g);干提取物部分(50%)。用107.8g水(干 提取物部分10%)稀释此浓缩物并通过每次用65ml水饱和1-丁醇摇动三次来提取。混合、浓 缩1-丁醇相并在50°C下真空干燥16h(6.72g)。
[0062]将这样得到的干提取物在20.2g乙醇和40.3g水(干提取物部分10 % )的混合物中 溶解。该溶液通过每次用20ml庚烷摇动三次来提取，浓缩并在50°C下真空干燥16小时： 6. llg(相对于药物为2.4% )。
[0064] ~这样得到提取物在白果内酯和银杏内酯A、B和C含量方面不符合欧洲药典的要求.
[0065] 根据本发明的实施例1
[0066](根据本发明的方法步骤(e)到(m))
[0067] 浓缩上述起始溶液(404g)的第二半(20 · 5g;干提取部分68 · 2 % )。用8 · Ig水和5 · 6g 甲基乙基酮调节10.75g此浓缩物得到干提取物部分为30%且甲基乙基酮含量为23% (重 量），并通过每次用18.3g甲基乙基酮/庚烷8/2(m/m)摇动两次来提取。
[0068]用起始溶液的剩余浓缩物（9.75g)将水-甲基乙基酮相混合。将此溶液浓缩至 24.17g，并用115.5g水调节到干提取物部分为10%，且通过每次使用65ml水饱和1-丁醇摇 动三次来提取。混合、浓缩1-丁醇相并在50°C下真空中干燥16h(5.93g)。
[0069]将这样得到的干提取物在17.8g乙醇和35.6g水(干提取物部分10% )的混合物中 溶解。该溶液通过每次用20ml庚烷摇动三次来提取，浓缩并在50°C下真空干燥16小时： 5.29g(相对于药物为2.1%)。
L〇〇71 J 这样得到提取物在所有含量方_，特别是白果内酯和银否内酯A、B和C含量方_符 合欧洲药典的要求。
【主权项】
1. 用于生产银杏叶干提取物的方法，所述提取物具有以黄酮苷计，重量为22.0%到 27.0%的黄酮类化合物、重量为2.6%到3.2%的白果内酯、重量为2.8%到3.4%的银杏内酯A、B 和C以及不超过5ppm的银杏酸，所述方法包括以下步骤： (a) 用含水丙酮、碳原子数为1到3的含水烷醇或无水甲醇在约40至IOOtC的温度下提取 新鲜或干燥银杏绿叶得到粗提取溶液， (b) 通过蒸馏从步骤(a)的粗提取溶液中分离主要量的丙酮或碳原子数为1到3的烷醇 到重量含量不超过10%，其中，如果在步骤(a)中使用无水甲醇，在最后的蒸馏步骤中添加水 以得到浓缩的水溶液， (c) 用水稀释步骤(b)的浓缩水溶液到固体重量含量为5至25%，温度冷却到低于25°C， 保持低温直到沉淀形成并分离形成的沉淀物以再次得到水溶液， (d) 将硫酸铵添加到步骤(c)中得到的水溶液中并用甲基乙基酮或甲基乙基酮和丙酮 的混合物提取所形成的含有硫酸铵的溶液，从甲基乙基酮或甲基乙基酮-丙酮相中分离水 相以得到甲基乙基酮或甲基乙基酮-丙酮相， (e) 将步骤(d)的甲基乙基酮或甲基乙基酮-丙酮相浓缩到干提取部分重量为40到80% 以得到浓缩物， (f) 用水和甲基乙基酮调节步骤(e)浓缩物中重量为10到60%的部分到干提取部分重量 不超过60%和甲基乙基酮的重量含量不超过30%以得到调节的提取液，并用甲基乙基酮和沸 点为60到IOO tC的脂肪族溶剂、比例为7/3到9/l(m/m)的混合物提取得到的调节提取液以得 到水-甲基乙基酮相和甲基乙基酮-脂肪族溶剂相， (g) 将步骤(e)的浓缩物的重量为90到40%的剩余部分与步骤(f)的水-甲基乙基酮相或 步骤(f)的甲基乙基酮-脂肪族溶剂混合以获得溶液， (h) 浓缩步骤(g)的溶液到固体重量含量为50到70%并用水稀释所得浓缩物到固体重量 含量不超过50%以得到溶液， (i) 用不与水混溶的丁醇或戊醇多步提取步骤(h)中所得溶液以得到丁醇或戊醇相， (j) 浓缩步骤(i)的丁醇或戊醇相到固体重量含量至少为50%以得到浓缩物， (k) 如果必要，通过加入一定量的水和乙醇稀释步骤(j)中所得的浓缩物，得到水中具 有重量为5到20 %的干提取物的溶液或重量不超过60 %的含水乙醇溶液， (l) 用具有沸点为60到HKTC的脂肪族溶剂提取步骤(k)中水或含水乙醇溶液，从脂肪 族溶剂相中分离水相以得到水相， (m) 在减压且温度不超过60到80°C的情况下浓缩步骤（1)中得到的水相以得到水重量 含量小于5%的干提取物。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，使用丙酮重量含量约50%到70%的含水丙酮作为步 骤(a)中的提取溶剂。3. 根据权利要求2所述的方法，其中，使用丙酮重量含量约60%的含水丙酮作为步骤(a) 中的提取溶剂。4. 根据权利要求1所述的方法，其中，使用选自甲醇、乙醇、1-丙醇和2-丙醇，烷醇重量 含量约50%到70%的含水烷醇作为步骤(a )中的提取溶剂。5. 根据权利要求4所述的方法，其中，使用乙醇重量含量约60%的含水乙醇作为步骤(a) 中的提取溶剂。6. 根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其中，步骤(c)中稀释水溶液冷却到低于12 °(：的温度。7. 根据权利要求1到6中任一项所述的方法，其中，相对于步骤(c)中的水溶液，步骤(d) 中添加至少30%重量的硫酸铵。8. 根据权利要求1到7中任一项所述的方法，其中，在步骤(d)中用甲基乙基酮和丙酮、 比例为7/3到3/4(m/m)的混合物提取。9. 根据权利要求1到8中任一项所述的方法，其中，在步骤(i)中用1-丁醇提取。10. 根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，在步骤(1)中用庚烷提取。11. 根据权利要求10的方法，其中，庚烷是正庚烷或具有正庚烷部分大于35%重量的庚 烷异构体的混合物。12. 根据权利要求1到11中任一项所述的方法，包括以下附加步骤： (η)从步骤(k)的水相或从步骤(m)的干提取物中制备乙醇重量含量为40%到60%的含水 乙醇银杏提取液， (〇)将步骤(η)中的含水乙醇银杏提取液涂覆在强酸性离子交换剂上以除去保留在离 子交换剂中的4'-0_甲基吡哆醇并使用含水乙醇洗脱以得到不含4'-0_甲基吡哆醇的提取 液作为洗脱液， (P)在减压情况下浓缩步骤(O)的洗脱液并在不超过60到80°C的温度下干燥到干提取 物的水重量含量小于5%。
【文档编号】A61K36/16GK105960245SQ201580005342
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2015年1月12日
【发明人】弗兰克·魏默, 斯特芬·莱茵哈德, 荷尔曼·豪尔
【申请人】威玛舒培博士公司