一种美洲大蠊提取物及其制备工艺的制作方法

一种美洲大蠊提取物及其制备工艺的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种美洲大蠊提取物及其制备工艺，所述的制备工艺为通过浓度为60～79%的乙醇对美洲大蠊虫体进行浸泡后，回流提取，浓缩，脱脂。本发明所述的制备工艺操作简单，节约成本和能源。通过本发明所述的方法制备的美洲大蠊提取物具有以下优点：活性成分含量高，其中游离氨基酸的含量可以达到3.54g/100g生药或以上，对UC的治疗效果显著，无腥臭味，色泽浅。
【专利说明】
-种美洲大喊提取物及其制备工艺
技术领域
[0001] 本发明设及中药领域，特别设及一种美洲大赚提取物及其制备工艺。
【背景技术】
[0002] 消化道溃瘍，主要指发生在胃和十二指肠的慢性溃瘍，亦可发生于食管下段、胃空 肠吻合口周围及含有异位胃粘膜的美克尔（MECKEL)憩室。大量研究充分证明，幽口螺杆菌 感染是消化性溃瘍的主要原因。其临床表现为上腹部疼痛，常呈隐痛、纯痛、胀痛、烧灼样 痛。胃溃瘍的疼痛多在餐后1小时内出现，经1~2小时后逐渐缓解，直至下餐进食后再复 现上述节律。部分患者可无症状，或W出血、穿孔等并发症作为首发症状。溃瘍病是一种慢 性常见病，治疗难度较大，一旦罹患溃瘍病，会给患者带来极大的痛苦。
[0003] 治疗消化道溃瘍的西药主要有硫酸侣、西米替下、奥美拉挫、克拉霉素、阿莫西林、 甲硝挫等。但西药的副作用较大。相对于西药，中药具有更高的安全性。
[0004] 溃瘍性结肠炎（ulcerative colitis, UC)，简称溃结，是一种结、直肠粘膜的弥漫 性炎症，症状W腹泻为主，排出含有血、脈和粘液的粪便，常伴有阵发性结肠疫李性疼痛，并 里急后重，排便后可获缓解。
[0005] 目前临床多采用氨基水杨酸类和皮质类固酸类药物治疗溃瘍性结肠炎，但存在停 药后反弹、疗效不稳定、长期用药副作用较大等缺点；手术治疗，就是切除整个结肠，但由于 手术的并发症较多，严重影响术后患者的生命质量。相对于西药的副作用大，中药具有更高 的安全性。
[0006] 当前认为肠道粘膜免疫系统中促炎细胞因子与抗炎细胞因子的失衡是UC的重要 发病机制，二者的平衡对于炎性反应程度与临床预后有重要的意义，大量的研究表明：在 UC的发生、发展和转归的过程中，细胞因子通过调节肠道炎症免疫反应而使炎症加重并持 续存在，并引起肠组织慢性损伤。因此，对细胞因子的检测可作为临床判断疾病严重程度及 疗效的指标。
[0007] 美洲大赚（Periplanetaamericana)为昆虫纲有翅亚纲董赚目董赚科大赚属昆虫， 俗称"蜂卿"，其入药始载于《神农本草经》，其中把它列为中品，谓"味：咸、寒；治：血疲证坚 寒热、破积聚、喉咽闭、内寒无子"。"蜂卿"为其俗名首见于《本草纲目拾遗》，也称其为石姜、 滑虫；各地方有其不同的称法，如：偷油婆、茶婆子、灶妈子等。美洲大赚提取的药液能用于 口腔溃瘍、食道溃瘍、食道黏膜损伤、溃瘍性结肠炎，促进胃溃瘍及十二指肠溃瘍的愈合，另 外还可促进外伤、刀伤、烧烫伤的愈合。
[0008] 目前，采用现有的美洲大赚提取物制备工艺提取的美洲大赚提取物中小分子肤、 氨基酸等活性成分含量低，而且所得提取物色泽深、腥臭味重，使得部分患者在使用过程中 有抵触情绪，甚至出现恶屯、、呕吐等胃肠道不适的情况，导致不能继续治疗，延误病情。因 此，寻找一种活性成分含量高、色泽浅、无腥臭味的美洲大赚提取物的制备工艺具有实在的 价值意义。

【发明内容】

[0009] 本发明的目的在于提供一种美洲大赚提取物的制备工艺，所述的工艺过程简单易 操作，通过所述的制备工艺制备的美洲大赚提取物中的活性成分含量高，色泽浅、无腥臭 味。
[0010] 所述的制备工艺是通过W下方案实现的： A. 浸泡：向称好的美洲大赚虫体中加入药材干重的4~8倍量的体积分数为60~79% 的乙醇冷浸，时间为7~10小时； B. 提取：将步骤A中得到的美洲大赚与乙醇的混合料液在70~80°C回流2~4次，第 一次回流时，回流时间为2~3小时；第二次W后每次回流，加药材干重4~7倍量的体积 分数为60~79%乙醇，回流时间为1~2小时；合并每次回流得到的提取液，50~100目 筛网过滤得到乙醇提取液； C. 浓缩：将步骤B得到的乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行 浓缩，浓缩时在一效真空度为-0.02~-0.04Mpa，溫度为65~70 °C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C的条件下，浓缩至相对密度为1. 05~1. 15的稠 膏； 化脱脂：将步骤C所得的稠膏加入到已经加热至75~85°C的纯化水，纯化水的量为稠 膏重量的8~12倍，揽拌8~15分钟，煮沸保溫30~90分钟，冷却后，在10°C W下保存 10~18小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得美洲大赚提取物。
[0011] 进一步，所述的制备工艺是通过W下方案实现的： A. 浸泡：向称好的美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为75%的乙醇冷 浸，时间为8小时； B. 提取：将步骤A中得到的美洲大赚与乙醇的混合料液在70~80°C溫度下进行第一 次回流，回流时间为2. 5小时；药渣中加入原药材干重的6倍量的75%乙醇在70~80°C溫 度下进行第二次回流，回流时间为2小时；药渣中继续加入原药材干重的6倍量的75%乙醇 在70~80°C溫度下进行第Ξ次回流，回流时间为2小时；合并Ξ次回流得到的提取液，100 目筛网过滤得到乙醇提取液； C. 浓缩：将步骤B得到的乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行 浓缩，浓缩时在一效真空度为-0.04~-0.02Mpa，溫度为65~70 °C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C的条件下，浓缩至相对密度为1. 05~1. 15的稠 膏； 化脱脂：将步骤C所得的稠膏加入到已经加热至80°C的纯化水中，纯化水的量为稠膏 重量的10倍，揽拌10分钟，煮沸保溫60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过 滤去除上层油脂，得美洲大赚提取物。
[0012] 通过上述的制备工艺制得的美洲大赚提取物中游离氨基酸、低聚肤类等活性物质 成分含量明显增多，且无腥臭味、液体色泽浅，使用本发明制备的美洲大赚提取物制备的药 物在口腔溃瘍、消化道溃瘍、溃瘍性结肠炎的治疗作用上具有明显的效果，特别是对溃瘍性 结肠炎的治疗作用。具体技术具有的有益效果如下： (1)本发明所述的制备工艺中，直接采用美洲大赚的虫体进行提取，省去了粉碎药材的 步骤，节约了能源和成本。
[0013] (2)本发明所述的制备工艺中，只使用了一次浓缩，使得工艺操作更加简单。
[0014] (3)通过本发明所述的制备工艺制备的美洲大赚提取物，无腥臭味，色泽浅。
[0015] (4)用浓度为60%~79%的乙醇提取的美洲大赚提取物中低聚肤的含量可W达到 3. 52g/100g生药或W上，游离氨基酸含量可W达到3. 54g/100g生药或W上，比使用80% W 上的乙醇提取的美洲大赚提取物中的游离氨基酸、低聚肤含量高，所W使用低浓度的乙醇 比使用高浓度的乙醇提取的美洲大赚提取物的质量好，同时还节约了成本。
[001引（5)同过本发明所述的制备工艺得到的美洲大赚提取物，在治疗UC上有显著的效 果，具有实际的临床意义。
[0017] W下将通过【具体实施方式】对本发明所述的美洲大赚制备工艺作进一步的说明。
【具体实施方式】
[0018] 本发明公开了一种美洲大赚提取物及其制备工艺，本领域技术人员可W借鉴本文 内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人 员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实 施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法 和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[001引实施例1 将称好的10kg美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为75%的乙醇冷浸 8小时后，进行第一次回流，回流时间为2. 5小时；药渣中加入原药材干重的6倍量的75% 乙醇进行第二次回流，回流时间为2小时；药渣中继续加入原药材干重的6倍量的75%乙 醇进行第Ξ次回流，回流时间为2小时；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，将100目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 10的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至80°C的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的10倍，揽拌10分钟，煮沸保溫 60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得浅栋色的美洲大赚 提取物50L。
[0020] 实施例2 将称好的10kg美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为75%的乙醇冷浸8 小时后，进行第一次回流，回流时间为2. 5小时；药渣中加入原药材干重的4倍量的75%乙 醇进行第二次回流，回流时间为2小时；回流溫度控制在70~80°C，合并二次回流得到的 提取液，将100目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 08的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至80°C的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的10倍，揽拌10分钟，煮沸保溫 60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得浅栋色的美洲大赚 提取物3化。
[00川 实施例3 将称好的10kg美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为75%的乙醇冷浸 8小时后，进行第一次回流，回流时间为2. 5小时，再将药渣进行回流提取3次，每次药渣中 加入原药材干重的4倍量的75%乙醇进行回流提取，回流时间为2小时，回流溫度控制在 70~80°C，合并四次回流得到的提取液，将100目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的 加入到双效浓缩器中进行浓缩，双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa， 溫度为65~70°C ;二效真空度为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度 为1. 15的稠膏，将得到的稠膏加入到已经加热至8(TC的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量 的10倍，揽拌10分钟，煮沸保溫60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过滤去 除上层油脂，得浅栋色的美洲大赚提取物67L。
[00过实施例4 将称好的5kg美洲大赚虫体中加入药材干重的6倍量的体积分数为70%的乙醇冷浸 7小时后，进行第一次回流，回流时间为2小时；药渣中加入原药材干重的4倍量的70%乙 醇进行第二次回流，回流时间为1. 5小时；药渣中继续加入原药材干重的4倍量的70%乙 醇进行第Ξ次回流，回流时间为1小时；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，将50目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 12的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至85°C的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的8倍，揽拌15分钟，煮沸保溫 30分钟，冷却后，在10°CW下保存18小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得浅栋色的美洲大赚 提取物2化。
[002引 实施例5 将称好的20kg美洲大赚虫体中加入药材干重的4倍量的体积分数为79%的乙醇冷 浸9小时后，进行第一次回流，回流时间为3小时；药渣中加入原药材干重的4倍量的79% 乙醇进行第二次回流，回流时间为2小时；药渣中继续加入原药材干重的4倍量的79%乙 醇进行第Ξ次回流，回流时间为1小时；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，将80目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 05的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至75Γ的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的12倍，揽拌10分钟，煮沸保溫 90分钟，冷却后，在10°CW下保存10小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得浅栋色的美洲大赚 提取物89L。
[0024] 实施例6 将称好的10kg美洲大赚虫体中加入药材干重的7倍量的体积分数为65%的乙醇冷 浸10小时后，进行第一次回流，回流时间为3小时，药渣中加入原药材干重的4倍量的65% 乙醇进行第二次回流，回流时间为2小时，药渣中加入原药材干重的4倍量的65%的乙醇 进行第Ξ次回流，回流时间为2小时，回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液；将150目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 08的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至80°C的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的10倍，揽拌8分钟，煮沸保溫 45分钟，冷却后，在10°CW下保存16小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得浅栋色的美洲大赚 提取物4化。
[00幼实施例7 将称好的15kg美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为60%的乙醇冷 浸8小时后，进行第一次回流，回流时间为2. 5小时，药渣中加入原药材干重的4倍量的 60%乙醇进行第二次回流，回流时间为2小时，药渣中加入原药材干重的4倍量的60%的乙 醇进行第Ξ次回流，回流时间为2小时，回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，将200目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 10的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至75°C的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的11倍，揽拌9分钟，煮沸保溫 60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得浅栋色的美洲大赚 提取物61L。
[0026] 参比实施例1 "化201210446618. 1"实施例1所述的制备方法 A、 粉碎：将20kg干燥的美洲大赚虫体粉碎，过24目筛，制得美洲大赚粗粉； B、 浸泡：将步骤A所得到美洲大赚粗粉用浓度为95%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉 液面5cm密闭保存，制得粗粉混合液； C、 提取：将步骤B所得粗粉混合液投入提取罐内，在70~85°C的溫度下进行3次回流 提取，对粗粉混合液进行第一次提取时，加100kg浓度95%的乙醇，提取时间为4小时；第二 次W后每次提取加60kg浓度95%的乙醇，提取时间为3小时；合并提取液，过滤得乙醇提取 液； D、 一级浓缩：将步骤C所得乙醇提取液放入单效浓缩器，在真空度-0. 05~-0. 06MPa、 溫度50~60°C的条件下减压浓缩，至比重为1. 08时，得乙醇浓缩液； E、 脱脂：将步骤D所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入38kg纯化水，边揽拌边升溫至 85~95Γ后，揽拌10分钟，揽拌速度为60转/分，然后保溫静置1小时使油水分层； F、 二级浓缩：将步骤E所得下层水液放出，经滤纸过滤后，滤液移入浓缩器，在溫度 60-80°C、真空度-0. 05~-0. 06MPa条件下减压浓缩，浓缩至比重为1. 28时，得美洲大赚提 取物8化。
[0027] 参比实施例2专利号"化201210446618. 1"实施例2所述制备方法 A、 粉碎：将20kg干燥的美洲大赚虫体粉碎，过24目筛，制得美洲大赚粗粉； B、 浸泡：将步骤A所得到美洲大赚粗粉用浓度为92%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉 液面8cm密闭保存，制得粗粉混合液； C、 提取：将步骤B所得粗粉混合液投入提取罐内，在70~85°C的溫度下进行4次回流 提取，对粗粉混合液进行第一次提取时，加100kg浓度92%的乙醇，提取时间为5小时；第二 次W后每次提取加80kg浓度92%的乙醇，提取时间为4小时；合并提取液，过滤得乙醇提取 液； D、 一级浓缩：将步骤C所得乙醇提取液放入单效浓缩器，在真空度-0. 05~-0. 06MPa、 溫度50~60°C的条件下减压浓缩，至比重为1. 11时，得乙醇浓缩液； E、 脱脂：将步骤D所得乙醇浓缩液移入脱脂罐内，加入41. 6kg纯化水，边揽拌边升溫至 85~95°C后，揽拌40分钟，揽拌速度为40转/分，然后保溫静置4小时使油水分层； F、二级浓缩：将步骤E所得下层水液放出，经滤纸过滤后，滤液移入浓缩器，在溫度 60~80°C、真空度-0. 05~-0. 06MPa条件下减压浓缩，浓缩至比重为1. 32时，得美洲大赚 提取物9化。
[002引参比实施例3申请号"CN201410413571. 8"实施例3所述制备方法 取10kg美洲大赚(粗粉）置于80kg乙醇"（乙醇的体积百分浓度为85%)中浸泡1她， 在溫度为70°C、常压的条件下浸提化，再在溫度为70°C的条件下加热回流2.化，浓缩至无 醇味，获得提取液。
[0029] 取上述制得的提取液加入200kg70°C的纯净水中，揽拌9min，混合均匀后， 自然冷却至20°C，静置2地。过滤后，进行真空浓缩，真空浓缩具体为：蒸发室的真空 表上降到-〇.〇5MPa W下时开始进料；浓缩时，蒸汽压力不超过0. 15MPa，真空表上降 到-0. 05MPa~-0. 08MPa ;收膏时，目测浓缩液，药液粘度增大，浓缩成稠膏，真空表压力下 降时，暂停浓缩，关闭蒸汽阀和真空累，打开出料阀，放出浓缩液。再用纸浆抽滤，得美洲大 赚提取物54L。
[0030] 参比实施例4使用浓度为85%的乙醇进行提取 将称好的10kg美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为85%的乙醇冷浸 8小时后，进行第一次回流，回流时间为2. 5小时；药渣中加入原药材干重的6倍量的85% 乙醇进行第二次回流，回流时间为2小时；药渣中继续加入原药材干重的6倍量的85%乙 醇进行第Ξ次回流，回流时间为2小时；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，将100目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 10的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至80°C的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的10倍，揽拌10分钟，煮沸保溫 60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得美洲大赚提取物 41L。
[0031] 参比实施例5使用浓度为90%的乙醇进行提取 将称好的10kg美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为90%的乙醇冷浸 8小时后，进行第一次回流，回流时间为2. 5小时；药渣中加入原药材干重的6倍量的90% 乙醇进行第二次回流，回流时间为2小时；药渣中继续加入原药材干重的6倍量的90%乙 醇进行第Ξ次回流，回流时间为2小时；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，将100目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 10的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至8(TC的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的10倍，揽拌10分钟，煮沸保溫 60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得美洲大赚提取物 46L。
[0032] 参比实施例6使用浓度为95%的乙醇进行提取 将称好的10kg美洲大赚虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为95%的乙醇冷浸 8小时后，进行第一次回流，回流时间为2. 5小时；药渣中加入原药材干重的6倍量的95% 乙醇进行第二次回流，回流时间为2小时；药渣中继续加入原药材干重的6倍量的95%乙 醇进行第Ξ次回流，回流时间为2小时；回流溫度控制在70~80°C，合并Ξ次回流得到的 提取液，将100目筛网过滤得到乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行浓缩， 双效浓缩器设置条件为一效真空度为-0. 02~-0. 04Mpa，溫度为65~70°C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，溫度为60~65°C，浓缩至相对密度为1. 10的稠膏，将得到的稠膏加 入到已经加热至8(TC的纯化水中，纯化水的量为稠膏重量的10倍，揽拌10分钟，煮沸保溫 60分钟，冷却后，在10°CW下保存12小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得美洲大赚提取物 45L。
[003引 W上参比实施例1和参比实施例2是参照专利号为"ZL201210446618. 1"中 公开的美洲大赚提取物的制备工艺来进行实施的。参比实施例3是参照申请号为 "201410413571. 8"公开的美洲大赚提取物的制备工艺来进行实施的。参比实施例4~6是 参照本发明中实施例1中的条件进行美洲大赚提取物的制备，与实施例1不同之处仅在于 所用乙醇的浓度不同，其余的条件都一样。
[0034] 通过不同的人对本发明所述的美洲大赚提取物进行简单的观察评判，综合得到本 发明所述的美洲大赚提取物基本无腥臭味且色泽浅。
[0035] W下将通过具体的实验数据来对本发明所述的有益效果作进一步说明： 实验例1本发明所述的美洲大赚提取物中活性物质的检测 1、本发明所述美洲大赚提取物中总低聚肤含量的检测 (1)标准曲线的建立 牛血清白蛋白2. 05mg，加水定容至10ml，摇匀，即得标准品溶液。作为母液，然后吸取 母液，加入碱性铜溶液5ml，摇匀。室溫放置10分钟后，快速加入酪试剂0. 5ml，最后加水稀 释成不同浓度的标准品溶液：〇mg/ml，0. 041mg/ml，0. 082mg/ml，0. 123mg/ml，0. 164mg/ml， 0. 205mg/ml。置30°C水浴锅中恒溫30分钟，放冷后在650nm波长处测定吸光度，建立标准 曲线方程。
[0036] ( 2 )供试品溶液的配制 精密量取试样美洲大赚提取物2ml置于量瓶中，加入10% Ξ氯乙酸溶液至10ml，摇匀， 放置10分钟，在4000r/min条件下离屯、15分钟，精密量取上清液1ml至100ml量瓶中，加 水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
[0037] (3)含量测定 精密移取供试品1ml，置10ml具塞试管中，加碱性铜溶液5ml，摇匀。室溫放置10分钟 后，快速加入酪试剂0. 5ml，摇匀，置30°C水浴锅中恒溫30分钟，放冷后于波长650皿处测 定吸光度，最终计算得到供试品中低聚肤的含量。
[003引所述的供试品溶液分别是由实施例1~7、参比实施例1~6中所述的美洲大赚提 取物配置而成。
[0039] (4)实验结果 供试品中低聚肤的含量的计算公式为
X-样品中肤的含量，单位为g/iooml ; 标准品中牛血清白蛋白的浓度，单位mg/ml ; 样品的吸光度； 标准品的吸光度； F-稀释倍数。
[0040] 标准品溶液的吸光度见表1 : 表1 :标准直线回归方程
标准直线回归方程巧=2. 606X+0. 070, R2=0. 996。
[0041] 最终计算得到供试品中低聚肤的含量，将单位换算成g/lOOg生药后结果见表2 : 表2 :低聚肤含量_
由表2中数据得到胃，实施例1制备的美洲大赚提取物中的低聚肤含量最高，而参比实施 例中制备的美洲大赚提取物中的低聚肤含量在均低于实施例制备的美洲大赚提取物中低 聚肤的含量。由此说明通过本发明中所述的制备工艺得到的美洲大赚提取物中低聚肤的含 量高。
[0042] 2、本发明所述的美洲大赚提取物中游离氨基酸的含量测定 (1)标准品溶液的配置 准确吸取0. 200ml混合氨基酸标准品，用抑2. 2的缓冲液稀释到5ml，浓度为 5.OOnmol/50 μ 1。
[0043] 所述的混合氨基酸为天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、 鄉氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸。
[0044] ( 2 )供试品溶液的配置 准确吸取美洲大赚提取物10ml置于水解管内，加入等体积的浓盐酸，再加入新蒸馈的 苯酪3~4滴，再将水解管放入冷冻剂中冷冻3~5分钟，抽真空，然后充入高纯氮气，再 抽真空充氮气，重复Ξ次后，在充氮气的状态下封口或梓紧螺丝盖将已封口的水解管放在 110°C ± rC的恒溫干燥箱内，水解22小时，取出冷却。
[0045] 将水解液过滤后，水解液全部转移到50ml容量瓶内定容。吸取1ml于5ml容量瓶 内，在40~50°C下真空干燥，残留物用1~2ml水溶解，再干燥，反复进行2次，最后蒸干， 用2的缓冲溶液溶解，即得供试品溶液。
[0046] (3)最后用氨基酸自动分析仪W外标法测定试样测定液中氨基酸的含量。经计算 后，结果如表3 : 表3游离氨基酸的含量_
由表3结果可W看出，实施例1中制备的美洲大赚提取物中游离氨基酸的含量最高，而 参比实施例所述的美洲大赚提取物中游离氨基酸的含量明显低于本发明所述美洲大赚提 取物中的游离氨基酸的含量。
[0047] 综上，由表2和表3中的结果可W看出，通过本发明所述的制备工艺制备的美洲大 赚提取物中的低聚肤、游离氨基酸的含量明显高于参比实施例，说明本发明的制备工艺制 备得到的美洲大赚提取物中的活性成分含量高，同时说明本发明所述的制备工艺能够明显 的提高美洲大赚提取物中活性成分的含量。由上述结果还可W得到，使用浓度为75%的乙 醇对美洲大赚进行回流提取3次，得到的美洲大赚提取物中的活性成分含量最高，即实施 例1所述的美洲大赚提取物中的活性成分含量最高。
[0048] 实验例2本发明所述美洲大赚提取物在溃瘍性结肠炎上的治疗效果 1、建立大鼠 UC模型 取70只健康雄性SD大鼠，禁食不禁水4化后，将直径2mm橡胶软管给予石蜡油润滑后 插入肛口约8cm，再用1ml的注射器将5%TNBS与无水乙醇配成体积比为1:1的混合液0. 6ml 缓慢的注入结肠，再注入0. 3ml的空气，轻轻取出后，给予保持肛口高位5min，使药液充分 到达全结肠后，放回笼内进行饲养，正常对照组（10只）W等容积生理盐水给予灌肠，1周 后，有66只大鼠 UC建模成功。
[0049] 将建模成功的UC大鼠随机分为6组，每组11只。
[0050] 2、具体给药方法 正常对照组（10只）：〇. 9%氯化钢溶液（lml/200g)进行灌肠，每天1次，共25天； 实验组： 模型组（11只）：〇. 9%氯化钢溶液（lml/200g)进行灌肠，每天1次，共25天； 阳性对照组（11只）：美沙拉嗦肠溶片0. 0312g/200g进行灌肠，每天1次，共25天； 实施例1组（11只）：实施例1所述美洲大赚提取物（lml/200g)进行灌肠，每天1次， 共25天； 实施例4组（11只）：实施例4所述美洲大赚提取物（lml/200g)进行灌肠，每天1次， 共25天； 参比实施例2组（11只）：参比实施例2所述美洲大赚提取物（lml/200g)进行灌肠，每 天1次，共25天； 参比实施例3组（11只）：参比实施例3所述美洲大赚提取物（lml/200g)进行灌肠，每 天1次，共25天。
[005。 3、观测指标及方法 (1)肉眼观察大鼠结肠情况：包括肠壁是否增厚，肠腔點膜是否充血、水肿、糜烂、馈 瘍、粘连等情况。
[0052] (2) ELISA法检测大鼠血清中TNF-a、比-6、比-8、比-10的指标。
[0053] 4、统计学处理 采用统计软件SPSS17. 0进行统计分析，将检验资料检验，确认正态分布时，结果W均 数+标准差（+S)表示，如不满足正态分布则采用秩和检验。
[0054] 5、实验结果 (一）肉眼观察大鼠结肠情况 正常组：结肠粘膜颜色呈现淡粉色、點膜皱襲纹理清晰、表面光滑。
[00巧]模型组：结肠粘膜颜色发黑，肠壁增厚、肠腔點膜充血水肿，并有多处糜烂、溃瘍， 肠管外壁与周围组织粘连，严重者可见肠穿孔。
[0056] 阳性对照组：结肠粘膜颜色变化、肠管扩张均不明显，肠壁未见增厚，充血点散在、 少量糜烂，溃瘍消失，或可见溃瘍愈合的癒痕。
[0057] 实施例1组：结肠粘膜颜色变红，肠壁未见增厚，充血点散在、少量糜烂，溃瘍消 失，或可见溃瘍愈合的癒痕。
[0058] 实施例4组：结肠粘膜颜色变红，肠壁未见增厚，充血点散在、少量糜烂，溃瘍消 失，或可见溃瘍愈合的癒痕。
[0059] 参比实施例2组：结肠粘膜颜色较暗，呈灰黑色，肠壁增厚、肠腔點膜充血水肿、糜 烂、溃瘍仍存在。
[0060] 参比实施例3组：结肠粘膜颜色较暗，呈灰黑色，肠壁增厚、肠腔點膜充血水肿、糜 烂、溃瘍仍存在。
[0061] 从上述直接用肉眼观察结肠形态的结果中可W初步得出，使用本发明所述的美洲 大赚提取物治疗溃瘍性结肠炎的效果明显好于参比实施例2和参比实施例3中所述的美洲 大赚提取物。
[0062] (二）各组大鼠血清中TNF-a、比-6、比-8、比-10的变化 1.各组大鼠血清TNF-a的变化 表4各组大鼠血清TNF-a的变化（+ S)(
pg/ml)_ 注:与正常对照组比较，*P<0.01，与模型组比较，午<0.05, ##P<0.01 ;与阳性对照组相 tt，中<0. 05 由表4中结果：与正常对照组相比，阳性对照组、实施例1组和实施例4组均无显著差 异，参比实施例2组与参比实施例3组的TNF-a值均高于正常对照组的TNF-a值，具有统计 学意义（P<0. 01);与模型组相比，阳性对照组、实施例1组和实施例4组均具有显著的差异 (P<0. 01);与阳性对照组相比，参比实施例2组与参比实施例3组的TNF-a值均明显高于阳 性对照组，具有统计学意义（P<〇. 05)，而实施例1组和实施例4组与阳性对照组相比均无显 著差异（P〉〇. 05)。
[0063] 2.大鼠血清比-6的变化 表5各组大鼠血清比-6的变化（+S) (pg/ml)_
注：与正常对照组比较，*P<〇. 01 ;与模型组比较，午<0. 05, ##P<0. 01 ;与阳性对照组相 tt，中<0. 05 由表5结果：与正常对照组相比，实施例1组、实施4组均不具有显著性差异；与模型组 相比，阳性对照组、实施例1组和实施例4组均具有显著差异（P<0. 01)，参比实施例2组合 参比实施例3组均具有统计学意义（P<0. 05);与阳性对照组相比，实施例1组与实施例4组 均无显著差异（P〉〇. 05)，参比实施例2组与参比实施例3组均具有统计学意义（P<0. 05)。
[0064] 3.大鼠血清比-8的变化 表6各组大鼠血清比-8的变化（+S) (pg/ml)
注:与正常对照组比较，*P<0.01 ;与模型组相比，午<0.05, ##P<0.01 ;与阳性对照组相 tt，中<0. 05 由表6的结果：与正常对照组比较，阳性对照组、实施例1组、实施例4组均无显著 差异（P〉0. 05);与模型组相比，阳性对照组、实施例1组、实施例4组均具有显著的差异 (P<0. 01 )，参比实施例2组和参比实施例3组均具有统计学意义（P<0. 05);与阳性对照组相 比，实施例1组合实施例4组均无显著差异（P〉0. 05)，参比实施例2组合参比实施例3组均 具有统计学意义（P<〇. 05)。
[0065] 4.大鼠血清中比-10的变化 表7各组大鼠血清中比-10的变化（+S) (pg/ml)

注：与正常对照组比较，*P<〇. 01 ;与模型组相比，午<0. 05, ##P<0. 01 ;与阳性对照组相 tt，中<0. 05 由表7结果：与正常对照组相比，阳性对照组、实施例1组、实施例4组无显著差异， 但是参比实施例2组和参比实施例3组的IL-10值均显著低于正常对照组（P<0. 01);与 模型组相比，阳性对照组、实施例1组、实施例4组均具有显著差异（P<0. 01)，而参比实施 例2组和参比实施例3组具有统计学意义（P<0. 05);与阳性对照组相比，实施例1组和实 施例4组均无显著差异（P〉0. 05)，而参比实施例2组和参比实施例3组均具有统计学意义 (P<0. 05)。
[0066] 综合表4、表5、表6、表7中的结果：与正常对照组比较，模型组大鼠血清中促炎细 胞因子（TNF-a、比-6、IL-8)水平升高，抗炎细胞因子IL-10下降，说明本实验中大鼠 UC模 型建造是成功的。同时，4个表格中的数据都显示，使用实施例1与实施例4中所述的美洲 大赚提取物与使用美沙拉嗦肠溶片治疗溃瘍性结肠炎的效果基本上相同，比参比实施例2 和参比实施例3中所述的美洲大赚提取物治疗溃瘍性结肠炎的效果好。从上面的实验结果 还可W看出使用实施例4的美洲大赚提取物治疗UC的效果要弱与使用实施例1中所述的 美洲大赚提取物的效果，但比参比实施例中的美洲大赚的效果好。
[0067] 综上所述，本发明没有对美洲大赚进行粉碎处理，而是直接通过浓度为60%~79% 的乙醇进行回流提取，提取液经过双效浓缩器浓缩，脱脂后得到美洲大赚提取物，在运样简 单的制备工艺下得到的美洲大赚提取物具有活性成分含量高，治疗UC的效果显著，无腥臭 味，色泽浅的特点。运样的效果是不可预料的。
[006引本发明中所用的美洲大赚为同一批次的有效成分质量一致的干燥虫体。
【主权项】
1. 一种美洲大蠊提取物的制备工艺，其特征在于包括以下步骤： A. 浸泡：向称好的美洲大蠊虫体中加入药材干重的4~8倍量的体积分数为60~79% 的乙醇冷浸，时间为6~9小时； B. 提取：将步骤A中得到的美洲大蠊与乙醇的混合料液在70~80°C温度下回流2~ 4次，第一次回流时，回流时间为2~3小时；第二次以后每次回流，加药材干重4~7倍量 的体积分数为60~79%乙醇，回流时间为1~2小时；合并每次回流得到的提取液，50~ 200目筛网过滤得到乙醇提取液； C. 浓缩：将步骤B得到的乙醇提取液缓慢不起泡的加入到双效浓缩器中进行 浓缩，浓缩时在一效真空度为-0.02~-0.04Mpa，温度为65~70 °C ;二效真空度 为-0. 06~-0. 04Mpa，温度为60~65°C的条件下，浓缩至相对密度为1. 05~1. 15的稠 膏； D. 脱脂：将步骤C所得的稠膏加入到已经加热至75~85°C的纯化水，搅拌8~15分 钟，煮沸保温30~90分钟，冷却后，在KTC以下保存10~18小时，用滤纸过滤去除上层油 月旨，得美洲大蠊提取物。2. 根据权利要求1中所述的制备工艺，其特征在于，步骤A可以才用以下技术方案：向 称好的美洲大蠊虫体中加入药材干重的8倍量的体积分数为75%的乙醇冷浸，时间为8小 时。3. 根据权利要求1中所述的制备工艺，其特征在于，步骤B可以才用以下技术方案：将 步骤A中得到的美洲大蠊与乙醇的混合料液在70~80°C温度下进行第一次回流，回流时间 为2. 5小时；药渣中加入原药材干重的6倍量的75%乙醇在70~80°C下进行第二次回流， 回流时间为2小时；药渣中继续加入原药材干重的6倍量的75%乙醇在70~80°C下进行 第三次回流，回流时间为2小时；合并三次回流得到的提取液，100目筛网过滤得到乙醇提 取液。4. 根据权利要求1中所述的制备工艺，其特征在于，步骤D可以才用以下技术方案：将 步骤C所得的稠膏加入到已经加热至80°C的纯化水中，搅拌10分钟，煮沸保温60分钟，冷 却后，在KTC以下保存12小时，用滤纸过滤去除上层油脂，得美洲大蠊提取物。5. 根据权利要求1中所述的制备工艺，其特征在于，步骤D中所述的纯化水的加入量为 稠膏重量的8~12倍。6. 根据权利要求1或4或5中所述的制备工艺，其特征在于，步骤D中所述的纯化水的 加入量为稠霄重量的10倍。7. 根据权利要求1~6中任意一项所述的美洲大蠊的制备工艺制备的美洲大蠊提取 物。
【文档编号】A61P1/00GK105878292SQ201510614596
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2015年9月24日
【发明人】陈光健
【申请人】陈光健