香没药树子抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药用图
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药香没药树子抗肿瘤有效提取物及其组合物的制备方法和其在脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤的预防及治疗上的用途。所述的提取物通过如下方法获得：维吾尔药香没药树子经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:4的石油醚：丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比100:8的石油醚：丙酮混合溶剂洗脱，石油醚：丙酮100:8混合溶剂洗脱液干燥后即得；或先用体积比100:10的石油醚：丙酮混合溶剂洗脱，继用体积比0:100的石油醚：丙酮混合溶剂洗脱，石油醚：丙酮0:100混合溶剂洗脱液干燥后即得。
【专利说明】
香没药树子抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药用 途
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药香没药树子抗肿瘤提取物及其组 合物的制备方法以及其在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、 宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤的用途。
【背景技术】
[0002] 本品为橄榄科植物，学名Myrrha。香没药树子主要分布于索马里和埃塞俄比亚等 干旱地区，分布较为局限。化学成分：挥发油类及树脂类化合物，但对树胶类成分的研究以 及对其化学成分进行药理活性物质筛选的研究较少，未见关于杂质、水分灰分等纯度质量 标准的研究。
[0003] 香没药树子具有活血祛瘀，消肿止痛，通经生血等功效，主治淤血作痛，跌打损伤， 肠痈腹痛，皮肤诸症。临床主要用于前列腺癌、急慢性炎症、血瘀肿痛等的治疗，本发明在 深入地研究香没药树子的抗癌活性时意外地发现，香没药树子除了具有抗前列腺癌的功效 外，亦具有很好的脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤 的预防及治疗作用，可以应用到多种癌症的预防和治疗上。
[0004] 但是，对其抗肿瘤的有效成分一直不清楚，本发明通过系统地筛选研究，发现了香 没药树子的有效提取物具有显著的抗肿瘤活性，可以应用于肿瘤的预防和治疗。
【发明内容】
[0005] 本发明所解决的技术问题是提供一种香没药树子提取物。
[0006] 本发明还提供了以香没药树子提取物为主要活性成分的组合物。
[0007] 本发明同时提供了香没药树子提取物及其组合物的制备和在制备抗肿瘤药物中 的应用。
[0008] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0009] 维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例见表1)，各石油醚： 乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤 活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100 :〇-1〇〇: 4,体积 比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:5-100:8,体积比）洗 脱，石油醚：乙酸乙酯=100:5-100:8洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性，即，抗肿瘤活 性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物 从未见文献报道，其100:5-100:8洗脱液干燥产物的TLC分析表征如图1。
[0010] 维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例见表1)，各石油醚： 乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤 活性，意外地发现先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗 脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:12-0:100,体积比）洗脱，石 油醚：乙酸乙酯=100:12-0:100洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性，即，抗肿瘤活性的 化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性部位从未见 文献报道，其100:12-0:100洗脱液干燥产物的TLC分析表征如图2。
[0011] 具体，发现过程如下：
[0012] 1、维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取物的制备
[0013] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取 物乙酸乙酯样品I. 2134g，拌样硅胶I. 5g，空白硅胶10g，石油醚-乙酸乙酯系统。
[0014] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果
[0015] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 1.2134g，留样0. 1568g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶1.5g， 空白硅胶l〇g，玻璃柱内径2. 0cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗脱（条件见表1)，柱体积 25ml，每个梯度洗脱200ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚： 乙酸乙酯梯度洗脱提取物，收率见表1，TLC分析结果见图3。
[0016] 表 1
[0019] 3、抗肿瘤活性筛选方法和结果
[0020] 1)实验条件
[0021] a)细胞株信息
[0022] 大鼠脑胶质瘤C6细胞购于中国典型培养物保藏中心细胞库
[0023] b)药品及试剂
[0024] 样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培 养液稀释至所需浓度（DMSO彡1%。）。
[0025] RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马 生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT)。
[0026] c)仪器
[0027] CO2培养箱（SANYO,日本）
[0028] 垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司）
[0029] 倒置生物显微镜（重庆光电仪器有限公司）
[0030] 低/高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）
[0031] 电子天平（奥豪斯仪器有限公司）
[0032] 酶标仪（伯乐生命医学产品有限公司）
[0033] 立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）
[0034] 鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）
[0035] PH 计（SART0RIUS，德国）
[0036] 2)实验方法和过程
[0037] 大鼠脑胶质瘤C6细胞以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔100ul，12h后使用。 各组分以DMSO溶解为lOOmg/mL储存液，保存于-20°C待用。铺板后12h，观察细胞汇合率 约为40%，加药，浓度均为100 μ g/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组（培 养基+细胞；含〇. 1 % DMSO培养基+细胞），3个空白孔（只有培养基）。加入药物24小 时后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴盐 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，继续培养 4 小时。完全弃去上清液，加入100 μ I DMS0,混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD 值。
[0038]
[0039] 3)实验结果
[0040] 表 2 [0041 ]
[0044] 结果发现：本发明优选的技术方案为：维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取，提 取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:4,体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8， 体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯=100:8洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到高活性提取 物，即为该抗肿瘤的提取物。该活性部位从未见文献报道，其100:8洗脱液的TLC分析表征 如图1。
[0045] 维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱，继用石 油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:12-0:100,体积比）洗脱，石油醚：乙酸 乙酯=100:12-0:100洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到高活性提取物，即为该抗肿瘤的 提取物。该活性部位从未见文献报道，其〇: 100洗脱液的TLC分析表征如图2。
[0046] 4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究
[0047] 1)提取溶剂的种类研究
[0048] 分别用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂 等有机溶剂提取，并测试提取物的C6抗肿瘤活性，结果如下：
[0049]表 3
[0051] 研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲 醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0052] 2)提取溶剂的用量研究
[0053] 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物 对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：
[0054] 表 4
[0058] 提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
[0059] 3)干燥方法的研究
[0060] 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到 的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干 燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对C6细胞抗肿瘤活性提取物进行干燥，其 中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0061] 表 5
[0063] 优选地，香没药树子抗肿瘤提取物的制备方法为：
[0064] 维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅 胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:4,体积比）洗脱2-50倍柱 体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱2-50倍柱 体积。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。其中最优为 先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积，继 用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。
[0065] 维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱2-50倍柱 体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱2-50 倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:10洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该提取物。以上条 件最优为先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱10倍 柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，0:100,体积比）洗脱15倍柱 体积。其中，
[0066] 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。提取物提取用有机溶剂用量为药 材重量的2-50倍（重量/体积比）。
[0067] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0068] 5.香没药树子抗肿瘤有效提取物（洗脱液为100:12-0:100时干燥获得的提取 物）的抗肿瘤活性研究
[0069] 利用各种肿瘤细胞，如脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝 癌等恶性肿瘤细胞株，分别测试香没药树子抗肿瘤提取物的抗肿瘤活性，IC50结果如下：
[0070] 表 6
[0073] 因此，我们发现，香没药树子抗肿瘤提取物具备抗肿瘤活性，可望用于各种肿瘤如 脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤细胞株的预防及治 疗。
[0074] 6、香没药树子抗肿瘤有效提取物的组合物及其制备方法研究
[0075] 1)固体分散体
[0076] 处方
[0078] 制备方法：
[0079] 称取香没药树子提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质 量比分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至香没药树子提取物和载体完全溶 解，转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得香没药树子提取物PVP包合物。
[0080] 2)环糊精包合物
[0081] 处方：
[0082]
[0087] 制备方法：
[0088] 1.香没药树子提取物淀粉分散体的制备，精密称取香没药树子提取物，加入适量 的十二烷基硫酸钠，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温 度下蒸干，粉碎，过100目筛；
[0089] 2.称取处方量，香没药树子提取物淀粉分散体，交联聚维酮，预胶化淀粉，用70% 乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
[0090] 7、香没药树子抗肿瘤有效提取物的检测方法研究
[0091] 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示香没药树子抗肿瘤有效提 取物的特征，见图1，图2。
[0092] 具体条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)显色方法： 香草醛-硫酸显色。
【附图说明】：
[0093] 图1香没药树子活性提取物的TLC色谱图；
[0094] 图2香没药树子活性提取物的TLC色谱图；
[0095] 图3香没药树子得到的化学组分的TLC色谱图。
【具体实施方式】
[0096] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0097] 实施例1 :
[0098] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脱液经回收有机溶剂，真 空干燥，即为该提取物。收率0.06%。
[0099] 实施例2 :
[0100] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脱液经回收有机溶剂，冷 冻干燥，即为该提取物。收率0.041 %。
[0101] 实施例3:
[0102] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脱液经回收有机溶剂，鼓 风干燥，即为该提取物。收率0.033%。
[0103] 实施例4 :
[0104] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脱液经回收有机溶剂，离 心干燥，即为该提取物。收率〇. 026%。
[0105] 实施例5 :
[0106] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用硅 胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚： 乙酸乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脱液经回收有机溶 剂，旋蒸干燥，即为该提取物。收率〇. 028%。
[0107] 实施例6 :
[0108] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸 乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯 100:8洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物。收率0. 047%。
[0109] 实施例7 :
[0110] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙酸 乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯 100:8洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该提取物。收率0. 043%。
[0111] 实施例8:
[0112] 维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:4,体积比）洗脱10倍柱体积。继用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:8,体积比）洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯 100:8洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物。收率0. 052%。
[0113] 实施例9:
[0114] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脱液经回收有 机溶剂，真空干燥，即为该提取物。收率9. 7%。
[0115] 实施例10 :
[0116] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脱液经回收有 机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物。收率7. 43%。
[0117] 实施例11 :
[0118] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脱液经回收有 机溶剂，鼓风干燥，即为该提取物。收率6. 53%。
[0119] 实施例12 :
[0120] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脱液经回收有 机溶剂，离心干燥，即为该提取物。收率6. 27%。
[0121] 实施例13 :
[0122] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用 硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚： 乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油 醚：乙酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脱液经回 收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该提取物。收率6. 79%。
[0123] 实施例14:
[0124] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙 酸乙酯0:100洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物。收率7. 97%。
[0125] 实施例15 :
[0126] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提 取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油醚：乙 酸乙酯0:100洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该提取物。收率7. 61 %。
[0127] 实施例16 :
[0128] 取维吾尔药香没药树子20g，经100mL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声 提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（2. Ocm内径小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:10,体积比）洗脱洗脱10倍柱体积，继用石油 醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，0:100,体积比）洗脱洗脱15倍柱体积。石油 醚：乙酸乙酯0:100洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该提取物。收率8. 44%。
[0129] 实施例17 :固体分散体
[0130] 称取香没药树子提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质 量比分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至香没药树子提取物和载体完全溶 解，转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得香没药树子提取物PVP包合物。 实施例18 :环糊精包合物
[0131] 将β -环糊精与1-5倍水研匀，加香没药树子提取物（水难溶性的应先溶于少量 有机溶剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0132] 实施例19 :分散片
[0133] 1.称取干燥的香没药树子提取物，加入适量的十二烷基硫酸钠，使用70%的乙醇 充分溶解，加入水溶性淀粉与香没药树子提取物（I : 1)，搅拌混合均匀，在70°C下干燥，粉 碎，过100目筛，得香没药树子提取物分散体。
[0134] 2.精密称取处方量，香没药树子提取物分散体，交联聚维酮，可压性淀粉，用70% 乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，14目筛制成湿颗粒，室温下放置15min后，70°C烘箱烘干 45min，16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
【主权项】
1. 一种维吾尔药香没药树子提取物，其特征为，维吾尔药香没药树子经溶剂超声提取， 提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:0-100:4的石油醚：乙酸 乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:5-100:8的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，石油醚： 乙酸乙酯100:5-100:8洗脱液经回收有机溶剂，干燥即为该提取物；或先用体积比100:10 的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:12-0:100的石油醚-乙酸乙酯混合溶 剂洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:12-0:100的洗脱液经回收有机溶剂，干燥即得。2. 如权利要求1所述的一种维吾尔药香没药树子提取物，其特征为，所述的提取用有 机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，优选甲醇 或95%乙醇，提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。3. 如权利要求1所述维的维吾尔药香没药树子提取物，其特征为，洗脱液的用量为 2-50倍柱体积。4. 如权利要求1所述的维吾尔药香没药树子提取物，其特征为，先用体积比100:4的石 油醚：丙酮洗脱10倍柱体积，继用体积比100:8的石油醚：丙酮洗脱15倍柱体积。5. 如权利要求1所述的维吾尔药香没药树子提取物，其特征为，先用体积比100:10的 石油醚：丙酮洗脱20倍柱体积，继用体积比0:100的石油醚：丙酮洗脱25倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的香没药树子提取 物和药学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的香没药树子提取物 或权利要求6所述的药物组合物。8. 如权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述的制剂为固体分散体、环糊精包合 物、分散片。9. 权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述 的药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠 癌、胰腺癌、宫颈癌或肝癌。10. 如权利要求1-5任何一项所述的维吾尔药香没药树子提取物，其特征在于，用TLC 法检测，其色谱条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：乙酸乙酯（3:1:1)显色 方法：香草醛-硫酸显色。
【文档编号】G01N30/90GK105982941SQ201510079838
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月15日
【发明人】王金辉, 黄健, 刘晓雪
【申请人】沈阳药科大学