大戟脂抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药应用
【专利摘要】本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药大戟脂抗肿瘤有效提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。维吾尔药大戟脂经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，即为该提取物；或维吾尔药大戟脂经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:0-100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:2-0:100的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，体积比100:2-0:100的石油醚：乙酸乙酯洗脱液干燥得到该提取物，或先用体积比100：0-100:3的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用纯甲醇洗脱，纯甲醇洗脱液干燥得到该提取物。
【专利说明】
大戟脂抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和医药应用
技术领域
[0001] 本发明属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药大戟脂抗肿瘤有效提取物及其组 合物的制备方法和其在制备抗脑胶质瘤、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌 等恶性肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 本品为大戟科植物多脂大戟的树脂状分泌物，拉丁名：Euphorbium，维文名称： 排日非云，别名：法而非荣、法刺夫荣、法刺夫云，等。多脂大戟（Euphorbia resinifera Berger)多年生灌木状草本，原产欧洲，非洲亦产，英国、前苏联等也有分布。大戟脂采收加 工是在植物茎的棱缘处，以快刀切伤皮部，收集流出的乳汁，干燥后贮于密闭瓶内，置干燥、 阴凉处。本品为不规则块状或滴状物。大小不等，直径可达3cm，暗黄色或黄棕色，新鲜者 色略浅。质脆。气微，加热则有香脂样芳香，味辛辣而特异。粉末能强烈刺激黏膜并引起喷 嚏。《拜地依药书》载："大戟脂，是一种树的乳状分泌物。新鲜、气味强烈、透明、黄色者为上 品，易溶于橄榄油中，药效期三年；四年以上者，变暗红色，不易在橄榄油中溶化者为次品。" 根据上述维吾尔医本草所述药材特征和实物对照，与现代维吾尔医所用大戟脂一致。化学 成分含大戟脑，大戟醇约为22%，另外，还含有蒲公英留醇，大戟脂醇，β -榄香精，大戟酸， 大戟双酮酸等。
[0003] 大戟脂具有生干生热，清除异常黏液质，强筋健肌，醒脑除紧，散寒止痛，燥湿退 月中，通利肠阻，除白内障等功效，主治湿寒性或黏液质性疾病，如瘫痪，面瘫，昏迷，抽搐，颤 动，坐骨神经痛，关节疼痛，腹水，肠梗阻，白内障等。《注医典》:"消除坏死骨质，消除肢体麻 木，清除眼部有害物质，解毒虫之毒。治骨质坏死，肢体麻木，眼部有害物质，毒虫咬伤等。" 《拜地依药书》:"祛寒健肌，燥湿强筋，开通肠阻，温肾壮腰。治面瘫，关节寒湿，肠梗阻，肾寒 腰虚等。"
[0004] 本发明通过系统地筛选研究，意外地发现大戟脂提取物具有显著抗肿瘤活性，即 大戟脂提取物对脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤的 具有很好的预防及治疗作用，可以应用于癌症的预防和治疗。
【发明内容】
[0005] 本发明所解决的技术问题是提供一种大戟脂提取物。
[0006] 本发明还提供了以大戟脂提取物为主要活性成分的组合物。
[0007] 本发明同时提供了大戟脂提取物及其组合物的制备和应用。
[0008] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0009] 维吾尔药大戟脂经有机溶剂（如优选甲醇）超声提取，提取液浓缩后，提取液浓 缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现用甲醇提取物具 有显著地抗肿瘤活性。该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1，TLC色谱条 件：GF 254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显 色。
[0010] 维吾尔药大戟脂经有机溶剂（优选甲醇）超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱 分离，上样后的硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例 见表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性 筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:0-100:1，体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:2-0:100,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积 比）洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。优选地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石 油醚：乙酸乙酯，100:1，体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:2,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比） 洗脱液干燥即得，本发明抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他 杂质类成分分离开。该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图2, TLC色谱条件： GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显色。 [0011] 或维吾尔药大戟脂经有机溶剂（优选甲醇）超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例见表 1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系 测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100 : 0-100:3,体积比）洗脱，继用纯甲醇洗脱，纯甲醇洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。 优选地，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:3,体积比）洗脱，继用纯 甲醇洗脱，纯甲醇洗脱液干燥即得，本发明的抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得 到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如 图3,TLC色谱条件：GF 254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，显色方法：香 草醛-硫酸显色。
[0012] 具体，发现过程如下：
[0013] 1、维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取物的制备
[0014] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 SN0194A 样品 2g。
[0015] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果
[0016] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物 SN0194A样品2g上柱，甲醇溶解，共用甲醇15mL。上硅胶柱，拌样硅胶3mg，空白硅胶10g， 玻璃柱内径I. 8cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗脱（条件见表1)，柱体积25mL，每个梯度 洗脱200mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得石油醚：乙酸乙酯梯度洗 脱提取物，收率见表1，TLC分析结果见图4,图5, TLC色谱条件：GF254硅胶板，展开系统：石 油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸 显色。
[0017] 表 1，
[0018]
[0019] 3、抗肿瘤活性筛选方法和结果
[0020] 1)实验条件
[0021] a)细胞株信息
[0022] 大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库
[0023] b)药品及试剂
[0024] 样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培 养液稀释至所需浓度（DMSO彡1%。）。
[0025] RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马 生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT)。
[0026] c)仪器
[0027] CO2培养箱（SANYO,日本）
[0028] 垂直层流洁净工作台（上海上净净化设备有限公司）
[0029] 倒置生物显微镜（重庆光电仪器有限公司）
[0030] 低/高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）
[0031] 电子天平（奥豪斯仪器有限公司）
[0032] 酶标仪（伯乐生命医学产品有限公司）
[0033] 立式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）
[0034] 鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂）
[0035] PH 计（SART0RIUS，德国）
[0036] 2)实验方法和过程
[0037] 大鼠脑胶质瘤细胞株C6以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔100 μ L，12小时后 使用。各组分以DMSO溶解为lOOmg/mL储存液，保存于-20°C待用。铺板后12小时，观察 细胞汇合率约为40%，加药，浓度均为100 μ g/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个 对照组（培养基+细胞；含0. 1DMS0培养基+细胞），3个空白孔（只有培养基）。加入药 物24小时后，加入20 μ L四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四 氮挫溴盐（3-(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，继 续培养4小时。完全弃去上清液，加入100 μ L DMS0,混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm 测定OD值。
[0038] 抑制率（IR)= A对照-A试验 χ 1〇〇 % A对照-A空白
[0039] 3)实验结果表
[0040] 表 2
[0046] 结果发现：
[0047] 本发明的优选方案为：维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取，提取液浓缩，干燥后，利 用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现甲醇提取物具有显著地抗肿瘤 活性。该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。
[0048] 维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例见表1)，各石油醚：乙 酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活 性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:1，体积比）洗脱， 继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱，石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性，即 抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活 性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图2。
[0049] 维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱（石油醚：乙酸乙酯，比例见表1)，各石油醚：乙 酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活 性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:3,体积比）洗脱， 继用纯甲醇洗脱，纯甲醇洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。即抗肿瘤活性的化合物， 可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物从未见文献报 道，其TLC分析表征如图3。
[0050] 具体发现过程如下：
[0051 ] 4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究
[0052] 1)提取溶剂的种类研究
[0053] 分别用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有 机溶剂提取，并测试提取物的对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：
[0054] 表 3
[0056] 研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶剂、乙醇水混合溶剂。
[0057] 2)提取溶剂的用量研究
[0058] 分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物 的抗肿瘤活性，结果如下：
[0059]表 4
[0063] 有效提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。
[0064] 3)干燥方法的研究
[0065] 分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到 的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干 燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最优为 真空干燥法、冷冻干燥法。
[0066] 表 5
[0068] 因此，大戟脂抗肿瘤有效提取物的制备方法优选为：
[0069] 维吾尔药大戟脂经有机溶剂超声提取，提取液浓缩，干燥后，即为该有效提取物。 其中最优提取溶剂为甲醇。
[0070] 维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，1〇〇: 1，体积比）洗脱2-50倍柱体 积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱2-50倍柱体 积，石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱液干燥后，即为该 有效提取物。以上条件最优为先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:1， 体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体 积比）洗脱40倍柱体积。
[0071] 维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:3,体积比）洗脱2-50倍柱体 积，继用纯甲醇洗脱2-50倍柱体积，纯甲醇洗脱液干燥后，即为该有效提取物。以上条件最 优为先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:3,体积比）洗脱25倍柱体 积，继用纯甲醇洗脱40倍柱体积。其中，
[0072] 1)有效提取物提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95乙醇。有效提取物提取用有机溶剂用量为 药材重量的2-40彳首（重量/体积比）。
[0073] 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干 燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。
[0074] 5.大戟脂总抗肿瘤有效提取物的抗肿瘤活性研究
[0075] 利用各种肿瘤细胞，如脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑 胶质瘤、肝癌等恶性肿瘤细胞株，分别测试大戟脂抗肿瘤提取物的抗肿瘤活性，IC 5。结果如 下：
[0076] 表 6
[0079] 因此，我们发现，大戟脂抗肿瘤有效提取物具备抗肿瘤活性，可望用于各种肿瘤如 脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等恶性肿瘤细胞株 的预防及治疗。
[0080] 6、大戟脂抗肿瘤有效提取物的组合物及其制备方法研究
[0081] 1)固体分散体 「00821 々卜方
[0084] 制备方法：
[0085] 称取大戟脂有效提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质 量比分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至大戟脂有效提取物和载体完全溶 解，转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得大戟脂有效提取物PVP包合物。
[0086] 2)环糊精包合物
[0087] 处方：
[0089] 制备方法：
[0090] 将β -环糊精与1~5倍水研匀，加大戟脂有效提取物（水难溶性的应先溶于少 量有机溶剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0091] 3)分散片处方：
[0093] 制备方法：
[0094] 1.大戟脂有效提取物淀粉分散体的制备，精密称取大戟脂有效提取物，加入适量 的十二烷基硫酸钠，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后，在70°C的温 度下蒸干，粉碎，过100目筛；
[0095] 2.称取处方量，大戟脂有效提取物淀粉分散体，交联聚维酮，预胶化淀粉，用70% 乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，制成湿颗粒过14目筛，室温下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
[0096] 7、大戟脂抗肿瘤有效提取物的检测方法研究
[0097] 我们发现，可以用薄层色谱的方法，很好地检测和标示大戟脂抗肿瘤有效提取物 的特征，见图1，图2,图3。
[0098] 具体条件为：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)，显色方法： 香草醛-硫酸显色
【附图说明】：
[0099] 图1大戟脂C6抑制活性提取物的TLC色谱图；
[0100] 图2大戟脂C6抑制活性提取物的TLC色谱图；
[0101] 图3大戟脂C6抑制活性提取物的TLC色谱图；
[0102] 图4大戟脂得到的化学组分的TLC色谱图；
[0103] 图5大戟脂得到的化学组分的TLC色谱图。
【具体实施方式】
[0104] 以下实施例表示本发明的实用性，本发明不受此限制。
[0105] 实施例1 :
[0106] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，回收有机溶 剂，真空干燥，即为该有效提取物。收率为5. 13%。
[0107] 实施例2 :
[0108] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，回收有机溶 剂，冷冻干燥，即为该有效提取物。收率为4. 73%。
[0109] 实施例3 :
[0110] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，回收有机溶 剂，鼓风干燥，即为该有效提取物。收率为4. 21 %。
[0111] 实施例4:
[0112] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，回收有机溶 剂，离心干燥，即为该有效提取物。收率为4. 09%。
[0113] 实施例5:
[0114] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，回收有机 溶剂，旋蒸干燥，即为该有效提取物。收率为4. 16%。
[0115] 实施例6:
[0116] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取15min， 提取液浓缩后，回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该有效提取物。收率为4. 88%。
[0117] 实施例7:
[0118] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取15min， 提取液浓缩后，回收有机溶剂，真空干燥，即为该有效提取物。收率为4. 72%。
[0119] 实施例8:
[0120] 维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，提取液浓缩后，回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该有效提取物。收率为4. 95%。
[0121] 实施例9:
[0122] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 体积比）洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该有效提取物。收率为0. 50%。
[0123] 实施例10 :
[0124] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 体积比）洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该有效提取物。收率为0. 44%。
[0125] 实施例11 :
[0126] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 体积比）洗脱液经回收有机溶剂，鼓风干燥，即为该有效提取物。收率为0. 39%。
[0127] 实施例12 :
[0128] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:2，体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2， 体积比）洗脱液经回收有机溶剂，离心干燥，即为该有效提取物。收率为0. 42%。
[0129] 实施例13 :
[0130] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸 乙酯，100:2,体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯， 100:2,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该有效提取物。收率为0.43%。
[0131] 实施例14:
[0132] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸 乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混 合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该有效 提取物。收率为0.48%。
[0133] 实施例15 :
[0134] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸 乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混 合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该有效 提取物。收率为0.47%。
[0135] 实施例16 :
[0136] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用石油醚：乙酸 乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱35倍柱体积。石油醚：乙酸乙酯混 合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:2,体积比）洗脱液经回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该有效 提取物。收率为0.46%。
[0137] 实施例17 :
[0138] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOmL甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35倍柱体积。纯甲醇洗脱液经回收 有机溶剂，真空干燥，即为该有效提取物，收率为3. 92%。
[0139] 实施例18 :
[0140] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOm乙醇超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35倍柱体积。纯甲醇洗脱液经回收 有机溶剂，冷冻干燥，即为该有效提取物，收率为3. 80%。
[0141] 实施例19 :
[0142] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOm丙酮超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35倍柱体积。纯甲醇洗脱液经回收 有机溶剂，鼓风干燥，即为该有效提取物，收率为3. 21 %。
[0143] 实施例20 :
[0144] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOm氯仿超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分 离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙 酯，100:3,体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35倍柱体积。纯甲醇洗脱液经回收 有机溶剂，离心干燥，即为该有效提取物，收率为3. 34%。
[0145] 实施例21 :
[0146] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOm乙酸乙酯超声提取15min，提取液浓缩后，用硅胶 柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙 酸乙酯，100:3，体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35倍柱体积。纯甲醇洗脱液经 回收有机溶剂，旋蒸干燥，即为该有效提取物，收率为3. 45%。
[0147] 实施例22 :
[0148] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOm甲醇水混合溶剂（甲醇：水=1:1)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:3,体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35 倍柱体积。纯甲醇洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该有效提取物，收率为3. 70%。
[0149] 实施例23 :
[0150] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOm乙醇水混合溶剂（乙醇：水=1:1)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:3,体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35 倍柱体积。纯甲醇洗脱液经回收有机溶剂，真空干燥，即为该有效提取物，收率为3. 68%。
[0151] 实施例24:
[0152] 取维吾尔药大戟脂20g，经IOOm乙醇水混合溶剂（乙醇：水=90:10)超声提取 15min，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱（I. 8cm内径小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:3,体积比）洗脱35倍柱体积，继用纯甲醇洗脱35 倍柱体积。纯甲醇洗脱液经回收有机溶剂，冷冻干燥，即为该有效提取物，收率为3. 68%。
[0153] 实施例25:固体分散体
[0154] 称取大戟脂有效提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的质 量比分别放入烧杯中，加入无水乙醇，磁力搅拌器搅拌至大戟脂有效提取物和载体完全溶 解，转入旋蒸仪中除去有机溶剂，干燥，粉碎过80目筛，即得大戟脂有效提取物PVP包合物。
[0155] 实施例26 :环糊精包合物
[0156] 将β -环糊精与1~5倍水研匀，加大戟脂有效提取物（水难溶性的应先溶于少 量有机溶剂中）充分研磨至成糊状物，低温干燥即得。
[0157] 实施例27 :分散片
[0158] 1.称取干燥的大戟脂有效提取物，加入适量的十二烷基硫酸钠，使用70%的乙醇 充分溶解，加入水溶性淀粉与大戟脂有效提取物（I: 1)，搅拌混合均匀，在70°C下干燥，粉 碎，过100目筛，得大戟脂有效提取物分散体。
[0159] 2.精密称取处方量，大戟脂有效提取物分散体，交联聚维酮，可压性淀粉，用70% 乙醇做湿润剂，边加入边搅拌，14目筛制成湿颗粒，室温下放置15min后，70°C烘箱烘干 45min，16目筛整粒，加入滑石粉和微分硅胶，混合均匀后，压片。
【主权项】
1. 一种维吾尔药大戟脂提取物，其特征为，维吾尔药大戟脂经有机溶剂超声提取，提取 液浓缩后，即为该提取物； 或维吾尔药大戟脂经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，先用体积比100:0-100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:2-0:100 的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，体积比100:2-0:100的石油醚：乙酸乙酯洗脱液干燥得 到该提取物； 或维吾尔药大戟脂经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶 柱，先用体积比100 :0-100:3的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用纯甲醇洗脱，纯甲醇 洗脱液干燥得到该提取物。2. 如权利要求1所述的维吾尔药大戟脂提取物，其特征为，提取用有机溶剂为，甲醇、 乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，提取物提取用有机溶剂用 量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。3. 如权利要求1或2所述的一种维吾尔药大戟脂提取物，其特征为，维吾尔药大戟脂经 甲醇超声提取，提取液浓缩后，即为该提取物； 或维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱， 先用体积比100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:2的石油醚：乙酸乙 酯混合溶剂洗脱，体积比100:2的石油醚：乙酸乙酯洗脱液干燥得到该提取物； 或维吾尔药大戟脂经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱， 先用体积比100:3的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用纯甲醇洗脱，纯甲醇洗脱液干燥 得到该提取物。4. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药大戟脂提取物，其特征为，用于洗脱 的石油醚：乙酸乙酯、甲醇的洗脱体积为2-50倍柱体积。5. 如权利要求3或4任何一项所述的一种维吾尔药大戟脂提取物，其特征为，先用体积 比100:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱15倍柱体积，继用体积比100:2的石油醚：乙酸 乙酯混合溶剂洗脱10倍柱体积； 或先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂体积比100:3的石油醚：乙酸乙酯洗脱25倍柱体 积，继用纯甲醇洗脱50倍柱体积。6. -种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的大戟脂提取物和 药学上可接受的载体。7. -种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1-5任何一项所述的大戟脂提取物或权 利要求6所述的药物组合物。8. 权利要求1-5任何一项所述的大戟脂提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求 7所述的药物制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。9. 如权利要求8所述的应用，其特征为，所述的肿瘤为脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、 结肠癌、胰腺癌、宫颈癌或肝癌。10. 如权利要求1-5任何一项所述的大戟脂提取物，其特征在于，用TLC法检测，其色谱 条件为：GF254硅胶板，展开系统：GF 254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1)， 石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显色。
【文档编号】G01N30/90GK105982945SQ201510082429
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月15日
【发明人】王金辉, 黄健, 王书云
【申请人】沈阳药科大学