载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒及制备方法、豌豆凝集素修饰方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒及制备方法、豌豆凝集素修饰方法和应用。载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法为：将多西紫杉醇与聚羟基丁酸酯的三氯甲烷和/或二氯甲烷溶液混合均匀，再与聚乙烯醇的水溶液混合，超声乳化3-10min，固化，去除有机溶剂；多西紫杉醇、聚羟基丁酸酯和聚乙烯醇的质量比（0.8-2）：（4-10）：（20-50）。该方法改善多西紫杉醇的溶解度，制得的产品粒径分布均匀，载药量和包封率高，释药快，体外缓控释药，生物利用度高。豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒提高了药物靶向性和治疗指数，为开发特异性糖介导的肿瘤靶向给药系统奠定了基础。
【专利说明】载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒及制备方法、豌豆凝集素修饰方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，特别涉及载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒和豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒，以及二者的制备方法和应用。
【背景技术】
[0002]多西紫杉醇(docetaxel，DTX)为紫杉烷类新型抗肿瘤药物，通过抑制微管蛋白解聚而阻断细胞有丝分裂，从而抑制肿瘤细胞的繁殖，发挥抗肿瘤活性。临床研究证实，多西紫杉醇对乳腺癌、卵巢癌、肺癌、头颈癌及胃癌等皆有较好疗效，是治疗卵巢癌的一线药物。
[0003]但是，多西紫杉醇的水溶性极低，口服给药生物利用度几乎为零，现临床采用其注射剂给药，该给药方式选用大量的有机溶剂作为溶媒，一般为乙醇及表面活性剂，给药后会出现严重不良反应，同时使用不便、注射疼痛、生产工艺复杂，患者用药依从性较差，临床应用受到限制。另一方面，抗癌药物多具有明显的系统毒性，除抑制肿瘤细胞生长外，对机体正常细胞也会产生一定杀伤作用，从而降低抗癌药物的治疗指数。
[0004]为提高多西紫杉醇在水中的溶解度、减少不良反应的发生、提高靶向性和抗肿瘤活性，国内外学者致力于多西紫杉醇制剂学的研究，已有不少关于多西紫杉醇新型给药系统的成果报道，例如:环糊精包合物、脂质体、聚合物胶束等。这些新型微粒给药系统通过一系列的靶向模式、释放机制及递送策略等来明显地改善多西紫杉醇的体内外药动学行为，成为多西紫杉醇抗肿瘤给药系统的研究热点。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中多西紫杉醇在水中溶解度低、靶向性差等的缺陷，提供载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒和豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒以及二者的制备方法和应用。本发明的制备方法，提供了一种新型的肿瘤靶向给药系统，能够显著改善多西紫杉醇的溶解度；制得的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒以及豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的各项物理指标稳定，粒径分布均匀，载药量和包封率高，释药快，体外缓控释药，生物利用度高，减少了不良反应；特别是豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒，在前述效果的基础上，还提高了药物靶向性和治疗指数，为开发特异性糖介导的肿瘤靶向给药系统、分析“糖控”效应对化疗药物的增敏作用奠定了基础，实现“低毒、高效”的肿瘤化疗新方案。[0006]本发明的目的之一在于，提供一种载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法；所述的制备方法包括以下步骤:将多西紫杉醇与聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液混合均匀得混合液，将所述的混合液与聚乙烯醇的水溶液混合，超声乳化3-10min，固化，去除有机溶剂，即可；所述的多西紫杉醇、聚羟基丁酸酯和聚乙烯醇的质量比为(0.8-2):(4-10):(20-50);所述的聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液为聚羟基丁酸酯的三氯甲烷溶液和/或聚羟基丁酸酯的二氯甲烷溶液。[0007]本发明中，较佳的，所述的多西紫杉醇、聚羟基丁酸酯和聚乙烯醇的质量比较佳的为(1.2-1.8):(6-9): (30-50)，更佳的为 1.6:8:40。
[0008]以下，针对本发明的聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液做以下的说明:
[0009]本发明中，所述的聚羟基丁酸酯(polyhydroxybutyrate, PHB)是一种微生物发酵合成的天然高分子材料，具有完全生物相容性和可生物降解特性，在本发明中作为包覆多西紫杉醇的载体材料使用。较佳的，所述的聚羟基丁酸酯为聚[(R)_3-羟基丁酸](Poly [ (R) -3-hydroxybutyric acid]),所述的聚[(R)_3_ 羟基丁酸]的重均分子量(Mw)为437000，购买厂家为 Sigma-Aldrich。
[0010]本发明中，所述的聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液较佳的为聚羟基丁酸酯的三氯甲烷溶液。所述的聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液的浓度较佳的为0.005-0.10g/mL，更佳的为
0.02g/mL。
[0011]所述的聚羟基丁 酸酯的卤代烃溶液的制备方法较佳的为:将聚羟基丁酸酯与卤代烃溶液混合，61-70°c条件下水浴加热，冷凝，过滤，即可；其中，所述的加热的温度较佳的为700C ;所述的冷凝的时间较佳的为4-5小时，更佳的为4小时；所述的冷凝较佳的在蛇形冷凝管中冷凝；所述的过滤较佳的经3号砂芯抽滤漏斗过滤，按照本领域常识，所述的3号砂芯抽滤漏斗的漏洞规格为35mL-3#。
[0012]关于上述制备方法的说明如下:载体材料聚羟基丁酸酯分子量较大，常温下很难溶解，发明人经过大量研究，选用具有水不溶性、易乳化、低沸点特性的三氯甲烷和/或二氯甲烷作为溶媒，加热回流后，溶液中仍存在少许不溶物，进一步用3号砂芯抽滤漏斗过滤，制得聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液。同时，考虑到三氯甲烷和二氯甲烷的毒性，最后一步需充分搅拌，挥发除去有机溶剂。
[0013]本发明中，所述的聚乙烯醇(PVA)作为胶体稳定剂使用，用以减少载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的聚集。所述的聚乙烯醇(PVA)的水溶液的浓度较佳的为0.002-0.0lg/mL，更佳的为0.005g/mL。当聚乙烯醇(PVA)的水溶液的浓度为0.005g/mL时，制得的载多西紫杉醇的聚羟基丁酸酯纳米粒的粒径最小，粒径分布最均匀。
[0014]本发明中，所述的聚乙烯醇的水溶液的制备方法较佳的为:将聚乙烯醇与水混合，在20-25 °C温度条件下放置5-10min，待其充分溶胀后，边搅拌边升温至95-10(TC，水浴加热90-150min，即可。本发明中，所述的聚乙烯醇的水溶液的制备方法更佳的为:将聚乙烯醇与水混合，在25°C温度条件下放置lOmin，待其充分溶胀后，边搅拌边升温至95°C，水浴加热2小时，即可。
[0015]本发明中，较佳的，所述的多西紫杉醇与聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液混合均匀的方法为本领域常规的方法；所述的多西紫杉醇与聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液混合均匀的方法较佳的为涡旋。
[0016]本发明中，所述的混合液为药物与载体材料的混合溶液(DTX-PHB)。
[0017]本发明中，较佳的，所述的混合液与聚乙烯醇的水溶液混合的方法和条件为本领域常规的方法和条件；所述的混合液与聚乙烯醇的水溶液混合的方法较佳的为向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加所述的混合液。
[0018]其中，较佳的，所述的滴加前，将所述的聚乙烯醇的水溶液超声处理，使其分散均匀。所述的超声处理的时间较佳的为0.5-2min，更佳的为lmin。所述的超声处理的振幅较佳的为40%，脉冲较佳的为5s\5s。所述的超声处理较佳的采用VCX130探头式超声波破碎仪(Sonics&materials,美国)处理。
[0019]其中，较佳的，所述的滴加时搅拌所述的聚乙烯醇的水溶液。所述的滴加时的搅拌较佳的为磁力搅拌。所述的滴加时的搅拌的速度为900-1 IOOrpm,所述的滴加时的搅拌的时间为 0.5-1.5min。
[0020]本发明中，较佳的，所述的超声乳化在冰浴条件下进行。
[0021]本发明中，所述的超声乳化的时间较佳的为5min。所述的超声乳化的振幅较佳的为40%，所述的超声乳化的脉冲较佳的为5s\5s。
[0022]本发明中，较佳的，所述的超声乳化后形成乳白色乳状液。
[0023]本发明中，较佳的，所述的固化的方法为本领域常规的方法。所述的固化的方法较佳的为搅拌固化。所述的搅拌固化较佳的为磁力搅拌。所述的搅拌固化的速度较佳的为400-600rpm,更佳的为500rpm ;所述的搅拌固化的时间较佳的为6_7h,更佳的为6h ;所述的搅拌固化的温度较佳的为20-27 °C。
[0024]本发明中，较佳的，所述的去除有机溶剂的方法为本领域常规的方法。所述的去除有机溶剂的方法较佳的为挥发。
[0025]本发明中，较佳的，所述的去除有机溶剂后得到带淡蓝色乳光的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒溶液(DTX-PHB-NPs )。
[0026]本发明中，较佳的，所述的去除有机溶剂后，离心和/或旋转蒸发。
[0027]其中，所述的离心的目的 是进一步去除杂质，富集载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒。所述的离心的方法和条件为本领域常规的方法和条件。所述的离心的转速较佳的为8000-12000rpm，更佳的为IOOOOrpm ;所述的离心的时间较佳的为20_40min，更佳的为30mino
[0028]其中，所述的离心后，弃去上清液，并洗涤得到的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒。按照本领域常识，所述的上清液中包括微量的杂质，如三氯甲烷和/或未形成纳米粒的材料等。所述的洗涤的目的是去除载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒表面残留的杂质。所述的洗涤较佳的为用磷酸盐缓冲液(PBS，pH7-8)洗涤2-4次，更佳的为用磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)洗涤 3 次。
[0029]本发明中，较佳的，所述的去除有机溶剂后还进行冻干。
[0030]本发明中，载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法一个较佳的技术方案为:
[0031](I)将多西紫杉醇与聚[(R)-3_羟基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均匀得混合液；所述的聚[(R)_3-羟基丁酸]的三氯甲烷溶液的浓度为0.02g/mL;
[0032](2)将聚乙烯醇的水溶液超声处理Imin，在搅拌条件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步骤(I)中所述的混合液；所述的搅拌的速度为lOOOrpm，所述的聚乙烯醇(PVA)的水溶液的浓度为0.005g/mL ；
[0033](3)冰浴条件下超声乳化5min,超声乳化的振幅为40%,脉冲为5s\5s,磁力搅拌固化，搅拌的速度为500rpm,搅拌的时间为6h,挥发去除有机溶剂，即可；
[0034]其中，所述的多西紫杉醇、聚羟基丁酸酯和聚乙烯醇的质量比为1.6:8:40。
[0035]本发明中，载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法一个更佳的技术方案为:
[0036](I)将1.6mg的多西紫杉醇与0.4mL的聚[(R) _3_羟基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均匀得混合液；所述的聚[(R)-3-羟基丁酸]的三氯甲烷溶液中的聚[(R)-3-羟基丁酸]的含量为8mg ；
[0037](2)将SmL的聚乙烯醇的水溶液超声处理Imin，在搅拌条件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步骤(I)中所述的混合液；所述的搅拌的速度为lOOOrpm，所述的聚乙烯醇(PVA)的水溶液中的聚乙烯醇的含量为40mg ；
[0038](3)冰浴条件下超声乳化5min,超声乳化的振幅为40%,脉冲为5s\5s,磁力搅拌固化，搅拌的速度为500rpm,搅拌的时间为6h,挥发去除有机溶剂，即可。
[0039]本发明的目的之二在于，提供如上所述的方法制得的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒。所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的粒径较佳的为100-200nm，更佳的为(172.5±0.64) nm;所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的包封率较佳的为(62.6±0.92)%;所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的载药量较佳的为(6.1±1.97)%。
[0040]本发明的目的之三在于，提供如上所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0041]本发明的目的之四在于:提供一种豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法；所述的制备方法包括以下步骤:将如上所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒与豌豆凝集素的溶液混合均匀，在2-6°C温度下静置10-12h，即可；其中，所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的多西紫杉醇与所述的豌豆凝集素的质量比为1:(0.1-0.5)。`
[0042]凝集素是一种能够对某一特异性糖基专一性结合的蛋白质，本研究使用的豌豆凝集素(Pisum sativum agglutinin, PSA)是从豌豆中提取的植物凝集素,对维系肿瘤细胞存活与生长的葡萄糖具有绑定特异性。发明人经过大量研究发现:维系肿瘤细胞生长的葡萄糖浓度(>25mmol/L)通常是正常组织糖浓度(3.89-6.llmmol/L)的5倍以上。这为豌豆凝集素修饰的载药系统向高糖浓度肿瘤部位介导创造了重要条件，非常有利于实现肿瘤组织的糖介导给药，增强化疗药物的作用。
[0043]植物凝集素作为聚羟基丁酸酯(PHB)的调节蛋白，能够紧紧吸附在聚羟基丁酸酯(PHB)颗粒表面，利用该特性，对载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒(DTX-PHB-NPs)进行豌豆凝集素化修饰，构建豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒(DTX-PHB-PSA-NPs)给药系统。聚羟基丁酸酯(PHB)纳米粒上富集的豌豆凝集素(PSA)到达肿瘤组织后，竞争瘤细胞内的糖供给，抑制葡萄糖供给瘤细胞，能量限制联合化疗，显示出更高的药物敏感性，使药物对肿瘤细胞的生长抑制和促凋亡作用更加突出。
[0044]本发明中，较佳的，所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的豌豆凝集素的重均分子量(Mw)为49kDa，状态为冻干粉。
[0045]本发明中，较佳的，所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的多西紫杉醇与所述的豌豆凝集素的质量比为1:0.35。
[0046]本发明中，较佳的，所述的静置的温度较佳的为4°C。
[0047]本发明中，所述的豌豆凝集素的溶液中的溶液较佳的为磷酸盐缓冲液(PBS)、三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris缓冲液)和去离子水中的一种或多种；其中，所述的磷酸盐缓冲液的PH值较佳的为7.0-7.6，更佳的为pH7.0-7.4，进一步更佳的为pH7.4。
[0048]本发明的目的之五在于，提供所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法制得的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒。本发明中，所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的豌豆凝集素与载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的结合率较佳的为(26.91±0.39)%。
[0049]本发明的目的之六在于，提供如上所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0050]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0051]本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0052]本发明的积极进步效果在于:本发明的制备方法提供了一种新型的肿瘤靶向给药系统，能够显著改善多西紫杉醇的溶解度；制得的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒和豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的各项物理指标稳定，粒径分布均匀，载药量和包封率高，释药快，体外缓控释药，生物利用度高，减少了不良反应；特别是豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒，在前述效果的基础上，还提高了药物靶向性和治疗指数，为开发特异性糖介导的肿瘤靶向给药系统、分析“糖控”效应对化疗药物的增敏作用奠定了基础，实现“低毒、高效”的肿瘤化疗新方案。
【专利附图】
【附图说明】
[0053]图1为载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒(DTX-PHB-NPs)和空白聚羟基丁酸酯纳米粒的透射电镜照片(A:空白聚羟 基丁酸酯纳米粒(PHB-NPs)，X4000 ；B:载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒(DTX-PHB-NPs )，X 4000 )
[0054]图2为载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒(DTX-PHB-NPs)的粒径分布图。
[0055]图3为载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒(DTX-PHB-NPs)的电位分布图。
[0056]图4为载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒(DTX-PHB-NPs)的体外释放曲线。
[0057]图5为豌豆凝集素(PSA)的凝胶渗透HPLC色谱图(A:不含豌豆凝集素(PSA)的流动相溶液:含豌豆凝集素(PSA)的流动相溶液)。
[0058]图6为用豌豆凝集素修饰载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的示意图。
【具体实施方式】
[0059]下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0060]本发明的下述实施例中使用的产品的购买厂家及其型号为:
[0061]多西紫杉醇:上海北卡医药技术有限公司，含量:98.7% ；
[0062]聚[(R)-3-羟基丁酸]:(Mw=437000,natural origin, Sigma-Aldrich)；
[0063]三氯甲烷:国药集团化学试剂有限公司；
[0064]聚乙烯醇(PVA):Mw=13, 000 -23，000,87% -89%hydrolyzed, Sigma-Aldrich[0065]豌豆凝集素:Mw=49kDa,lyophiIized powder, Medicago
[0066]实施例1
[0067]载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法。实施例1中使用的仪器如表I所
/Jn ο
[0068]表I实施例1中使用的仪器及其购买厂家和型号
[0069]
【权利要求】
1.一种载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法，其特征在于:所述的制备方法包括以下步骤:将多西紫杉醇与聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液混合均匀得混合液，将所述的混合液与聚乙烯醇的水溶液混合，超声乳化3-10min，固化，去除有机溶剂，即可；所述的多西紫杉醇、聚羟基丁酸酯和聚乙烯醇的质量比为(0.8-2):(4-10):(20-50);所述的聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液为聚羟基丁酸酯的三氯甲烷溶液和/或聚羟基丁酸酯的二氯甲烷溶液。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述的多西紫杉醇、聚羟基丁酸酯和聚乙烯醇的质量比为(1.2-1.8):(6-9): (30-50)，较佳的为1.6:8:40 ； 所述的聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液的浓度为0.005-0.10g/mL，较佳的为0.02g/mL ;所述的聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液的制备方法较佳的为:将聚羟基丁酸酯与卤代烃溶液混合，61-70°C条件下水浴加热，冷凝，过滤，即可；其中，所述的加热的温度较佳的为70°C ;所述的冷凝的时间较佳的为4-5小时，更佳的为4小时；所述的过滤较佳的经3号砂芯抽滤漏斗过滤，所述的3号砂芯抽滤漏斗的漏洞规格为35mL-3# ； 所述的聚乙烯醇的水溶液的浓度较佳的为0.002-0.01g/mL,更佳的为0.005g/mL ;所述的聚乙烯醇的水溶液的制备方法较佳的为:将聚乙烯醇与水混合，在20-25 V温度条件下放置5-10min，待其溶胀后，边搅拌边升温至95-100°C，水浴加热90_150min，即可；所述的聚乙烯醇的水溶液的制备方法更佳的为:将聚乙烯醇与水混合，在25°C温度条件下放置lOmin，待其溶胀后，边搅拌边升温至95°C，水浴加热2小时，即可； 所述的多西紫杉醇与聚羟基丁酸酯的卤代烃溶液混合均匀的方法为涡旋； 所述的混合液与聚乙烯醇的水溶液混合的方法为向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加所述的混合液； 所述的滴加前，将所述的聚乙烯醇的水溶液超声处理，使其分散均匀；所述的超声处理的时间较佳的为0.5-2min，更佳的为Imin ;所述的超声处理的振幅较佳的为40%，脉冲较佳的为5s\5s ;所述的超声处理较佳的采用VCX130探头式超声波破碎仪处理； 所述的滴加时搅拌所述的聚乙烯醇的水溶液；所述的滴加时的搅拌较佳的为磁力搅拌；所述的滴加时的搅拌的速度为900-1100rpm，所述的滴加时的搅拌的时间为0.5-1.5min。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述的超声乳化在冰浴条件下进行； 所述的超声乳化的时间较佳的为5min ;所述的超声乳化的振幅较佳的为40%，所述的超声乳化的脉冲较佳的为5s\5s ； 所述的固化的方法为搅拌固化；所述的搅拌固化较佳的为磁力搅拌；所述的搅拌固化的速度较佳的为400-600rpm,更佳的为500rpm ;所述的搅拌固化的时间较佳的为6_7h,更佳的为6h ;所述的搅拌固化的温度较佳的为20-27°C ； 所述的去除有机溶剂的方法为挥发； 所述的去除有机溶剂后，离心和/或旋转蒸发；其中，所述的离心的转速较佳的为8000-12000rpm,更佳的为IOOOOrpm ;所述的离心的时间较佳的为20_40min，更佳的为30min ;所述的离心后，弃去上清液，并洗涤；所述的洗涤较佳的为用PH7-8的磷酸盐缓冲液洗涤2-4次，更佳的为用pH7.4的磷酸盐缓冲液洗涤3次； 所述的去除有机溶剂后还进行冻干。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于: 所述的制备方法包括以下步骤: (1)将多西紫杉醇与聚[(R)_3-羟基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均匀得混合液；所述的聚[(R)_3-羟基丁酸]的三氯甲烷溶液的浓度为0.02g/mL; (2)将聚乙烯醇的水溶液超声处理lmin，在搅拌条件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步骤(I)中所述的混合液；所述的搅拌的速度为lOOOrpm，所述的聚乙烯醇的水溶液的浓度为 0.005g/mL ； (3)冰浴条件下超声乳化5min,超声乳化的振幅为40%,脉冲为5s\5s,磁力搅拌固化，搅拌的速度为500rpm,搅拌的时间为6h,挥发去除有机溶剂，即可； 其中，所述的多西紫杉醇、聚羟基丁酸酯和聚乙烯醇的质量比为1.6:8:40 ； 较佳的，所述的制备方法包括以下步骤: (1)将1.6mg的多西紫杉醇与0.4mL的聚[(R)_3_羟基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均匀得混合液；所述的聚[(R)_3-羟基丁酸]的三氯甲烷溶液中的聚[(R)_3-羟基丁酸]的含量为8mg ； (2)将SmL的聚乙烯醇的水溶液超声处理lmin，在搅拌条件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步骤(I)中所述的混合液；所述的搅拌的速度为lOOOrpm，所述的聚乙烯醇的水溶液中的聚乙烯醇的含量为40mg ； (3)冰浴条件下超声乳化5min,超声乳化的振幅为40%,脉冲为5s\5s,磁力搅拌固化，搅拌的速度为500rpm,搅拌的时间为6h,挥发去除有机溶剂，即可。
5.如权利要求1-4所述的制备方法制得的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒；所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的粒径较佳的为100-200nm，更佳的为(172.5±0.64)nm ;所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的包封率较佳的为(62.6±0.92) % ;所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的载药量较佳的为(6.1 ±1.97) %。
6.如权利要求5所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.—种豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的制备方法，其特征在于:所述的制备方法包括以下步骤:将如权利要求5所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒与豌豆凝集素的溶液混合均匀，在2-6°C温度下静置10-12h，即可；其中，所述的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的多西紫杉醇与所述的豌豆凝集素的质量比为1:(0.1-0.5)。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于:所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的豌豆凝集素的重均分子量为49kDa，状态为冻干粉； 所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的多西紫杉醇与所述的豌豆凝集素的质量比为1:0.35 ； 所述的静置的温度为4°C ； 所述的豌豆凝集素的溶液中的溶液较佳的为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液和去离子水中的一种或多种；其中，所述的磷酸盐缓冲液的pH值较佳的为7.0-7.6，更佳的为pH7.0-7.4，进一步更佳的为pH7.4。
9.如权利要求7或8所述的制备方法制得的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒；所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒中的豌豆凝集素与载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒的结合率较佳的为(26.91±0.39)%。
10.如权利要求9所述的豌豆凝集素修饰的载多西紫杉醇聚羟基丁酸酯纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。 ·
【文档编号】A61K47/34GK103446060SQ201310433512
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年9月22日 优先权日:2013年9月22日
【发明者】李凤前, 董文凤, 李菲, 杜丽 申请人:上海市第八人民医院