包含杜仲花提取物的中药组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种包含杜仲花提取物的中药组合物，按重量百分比由下列组分组成：含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物5.0%～50.0%，含20%～27%水解氨基酸的杜仲花提取物15.0%～50.0%，含60%～90%茶多酚的绿茶提取物2.5%～70.0%。本发明所述的组合物具有平衡三高，温补肝肾，抗疲劳和善睡眠的功效，原料来源易得，易于产业化；可根据需要制成各种剂型，更加有效、质量更加可控，为患者带来更多的利益，从而产生巨大的社会效益。
【专利说明】包含杜仲花提取物的中药组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种包含杜仲花提取物的中药组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002]随着人们生活水平的不断提高，饮食结构的改变，冠心病的发病率日渐攀升。冠心病是由于冠状动脉粥样硬化引起管腔狭窄，造成心肌供血供氧障碍而引起的心脏病，被称为是“世界杀手”。半个世纪以来，冠心病已成为威胁人类健康最严重的疾病之一。流行病学调查显示，近五十年来不论在农村或城市，心脑血管疾病的发病率和死亡率均呈上升趋势。1975年以后心脑血管疾病死亡者已占全部疾病死因第一位。30年中循环系统死因构成将增高59.6%，冠心病和脑卒中分别增高74.6%和75%。这些资料充分说明，心脑血管疾病不仅是危害人类健康的主要疾病，更是目前和未来20年内人类致死、致残的“头号杀手”。
[0003]在心脑血管疾病的治疗药物中，中药副作用小。在目前众多治疗心脑血管疾病的中成药中，复方制剂占有重要的位置，尤其以有效部位为主要活性成分的中成药也愈来愈受到人们的重视。治疗心脑血管疾病的各种中药有效部位的功效各有不同和侧重，临床上存在联合用药的巨大需求，因此，以有效部位制备的具有剂量小、疗效好、质量稳定等特点复方制剂，有着广阔的市场前景。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种包含杜仲花提取物的中药组合物。
[0005]本发明的另一目的是提 供一种上述组合物的制备方法。
[0006]本发明的中药有效部位组合物，按重量百分比包括下列组分:
含70%~98%绿原酸的杜仲叶提取物 5.0%~50.0%
含20%~27%水解氨基酸的杜仲花提取物 15.0%~50.0%
含60%~90%茶多酚的绿茶提取物 2.5%~70.0%。
[0007]本发明的中药有效部位组合物，优选为按重量百分比包括下列组分:
含70%~98%绿原酸的杜仲叶提取物 10.0%~38.0%
含20%~27%水解氨基酸的杜仲花提取物 20.0%~35.0%
含60%~90%茶多酚的绿茶提取物 8%~55.0%。
[0008]本发明的中药有效部位组合物，更优选为按重量百分比包括下列组分:
含70%~98%绿原酸的杜仲叶提取物 27.0%
含20%~27%水解氨基酸的杜仲花提取物 28.0%
含60%~90%茶多酚的绿茶提取物 45.0%
所述的杜仲花提取物中包含黄酮(以无水芦丁计)6%~7%，绿原酸2%~3%，水解氨基酸20%~27%，桅子苷1%~2%，京尼平苷酸2%~2.5%,桃叶珊瑚苷3%~6%。
[0009]优选的，所述的杜仲花提取物中包含黄酮(以无水芦丁计)6.57%，绿原酸2.88%，水解氨基酸23.32%，桅子苷1.12%，京尼平苷酸2.08%，桃叶珊瑚苷4.77%。[0010]所述的杜仲花优选杜仲雄花。
[0011]所述的绿原酸可以从市场上购得后纯化至70%~98%，也可以采用以下步骤制得: 取杜仲叶，将其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1:1)，加热回流40min，提取3次，滤液合
并得提取液I。药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用0DS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品:制备色谱的分离条件:色谱柱为半制备柱(LichrospherC18;10.0mm --250mm，5mm)，流动相为水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序如下:
Omin时，流动相A为85%，流动相B为15% ；
IOmin时，流动相A为79%，流动相B为21% ；
15min时，流动相A为69%，流动相B为31% ；
30min时，流动相A为63%，流动相B为37% ；
35min时，流动相A为15%，流动相B为85% ；
45min时，流动相A为15%，流动相B为85% ；
流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5~32.5min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。
[0012]优选的，在时间段15.5~28.5min收集溶液。
[0013]流动相A和B为体积比`；流动相A是在100ml水中加入醋酸0.1ml ;流动相B是乙
腈溶液。
[0014]所述的含水解氨基酸的杜仲花提取物可以从公开市场上购得后再纯化使得水解氨基酸含量达到20%~27%，也可以采用以下方法制备:
取杜仲花，将其粉碎后加入体积比1:2的乙酸乙酯和60%乙醇，加热回流提取3次，第一次I~3小时，第二次和第三次分别I~2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入65%乙醇，加热回流提取3次，第一次I~1.5小时，第二次和第三次分别0.5~I小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用65%乙醇溶解浸膏，采用非极性或弱极性大孔树脂对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I ;然后以60%~70%乙醇洗脱，再以90%~95%乙醇洗脱，得洗脱液II，回收，减压浓缩，干燥，即得杜仲花提取物。
[0015]所述的洗脱流速为2~4BV/h ;优选的，洗脱流速为2~3BV/h，更优选的为3BV/h0
[0016]所述的大孔树脂优选为AB-8和X-5，更优选为AB-8。所述的乙醇浓度为体积浓度。
[0017]经检测，水解氨基酸纯度可达20~27%。
[0018]所述的茶多酚可以从市场上购得后纯化至60%~90%，也可以采用以下方法制备: 绿茶粉碎，加80%乙醇，100°C回流提取3次，料液重量体积比1:8-10，提取时间
10-30min,合并提取液；
离心，弃残渣，得上清液；
聚酰胺树脂吸附:柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h ；
洗脱:去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min,去离子水中含有少量咖啡因，弃去，收集乙醇洗脱液，浓缩，即得。
[0019]经检测，茶多酚80%以上。[0020]本发明所述的绿原酸、杜仲花提取物和茶多酚含量测定均采用现有技术记载的方法。
[0021]本发明的中药组合物，可与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成水针剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂、口服液。优选剂型为口服液、片剂。
[0022]本发明中药组合物具有平衡三高，温补肝肾，抗疲劳和善睡眠的功效，原料来源易得，易于产业化；可根据需要制成各种剂型，更加有效、质量更加可控，为患者带来更多的利益,从而产生巨大的社会效益。
[0023]实验例
几种中药提取物抗心肌缺血作用的实验研究
1、分组及给药
Wister雄性大鼠70只，体重247.8±21.1,按体重随机分为7组:生理盐水对照组；实施例二的杜仲花提取物组；实施例二的绿原酸提取物组；实施例二的茶多酚提取物组；实施例六的中药组合物；实施例五的中药组合物。各药物均以生理盐水稀释至所需浓度,给药量为4ml/kg,尾静脉给药。
[0024]2、方法
(O大鼠实验性心肌梗死模型:动物戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(45mg/kg)，仰位固定。气管插管，在胸骨左侧作2cm的纵 切口，近胸骨侧剪断第3、第4勒软骨，打开胸腔后，连接人工呼吸机(通气量2ml/100g，50次/min)。剪开心包膜，暴露心脏，冠状动脉左前降支根部穿线以备结扎，记录标准II导联心电图，稳定10分钟，结扎冠状动脉左前降支，关闭胸腔。用针筒吸出动物喉部分泌物，使动物恢复自主呼吸。结扎冠状动脉15min后，静脉给药。结扎冠状动脉4小时后，摘取心脏，在结扎线以下横切5片，进行氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色，计算心肌梗死区面积占心室及心脏面积的百分比，并进行统计学处理(t检验)。
[0025](2)离体IangendorfT心脏灌流法:参考药理实验方法学第三版进行。
[0026]3、结果
(I)对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响，结果见表1。
[0027]表1各种提取物对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响(￡±幻
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【权利要求】
1. 一种包含杜仲花提取物的中药组合物，按重量百分比由下列组分组成: 含70%~98%绿原酸的杜仲叶提取物 5.0%~50.0% 含20%~27%水解氨基酸的杜仲花提取物 15.0%~50.0% 含60%~90%茶多酚的绿茶提取物 2.5%~70.0%。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述组分的重量百分比为: 含70%~98%绿原酸的杜仲叶提取物 10.0%~38.0% 含20%~27%水解氨基酸的杜仲花提取物 20.0%~35.0% 含60%~90%茶多酚的绿茶提取物 8%~55.0%。
3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述组分的重量百分比为: 含70%~98%绿原酸的杜仲叶提取物 27.0% 含20%~27%水解氨基酸的杜仲花提取物 28.0% 含60%~90%茶多酚的绿茶提取物 45.0%。
4.根据权利要求1~3任一权利要求所述的中药组合物，其特征在于，所述的杜仲花提取物中包含黄酮6%~7%，绿原酸2%~3%，水解氨基酸20%~27%，桅子苷1%~2%，京尼平苷酸2%~2.5%,桃叶珊瑚苷3%~6%ο
5.根据权利要求4所述的中药组合物，其特征在于，所述的杜仲花提取物中包含黄酮6.57%，绿原酸2.88%，水解氨基酸23.32%，桅子苷1.12%，京尼平苷酸2.08%,桃叶珊瑚苷4.77%。
6.根据权利要求1~5任一权利要求所述的中药组合物，其特征在于，所述的绿原酸采用以下步骤制得:取杜仲叶，将其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1:1)，加热回流40!^11，提取3次，滤液合并得提取液I ;药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品:制备色谱的分离条件:色谱柱为半制备柱(Lichrospher C18; 10.0mm --250mm, 5mm),流动相为水(A)和乙腈(B),梯度洗脱程序如下: Omin时，流动相A为85%，流动相B为15% ； IOmin时，流动相A为79%，流动相B为21% ； 15min时，流动相A为69%，流动相B为31% ； 30min时，流动相A为63%，流动相B为37% ； 35min时，流动相A为15%，流动相B为85% ； 45min时，流动相A为15%，流动相B为85% ； 流动相A是在100ml水中加入醋酸0.1ml ;流动相B是乙腈溶液，流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5~32.5min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。
7.根据权利要求7所述的中药组合物，其特征在于，在时间段15.5~28.5min收集溶液。
8.根据权利要求1~3任一权利要求所述的中药组合物，其特征在于，所述的的杜仲黄酮采用以下方法制备:取杜仲皮，将其粉碎后加入体积比2:3的乙酸乙酯和65%乙醇，加热回流提取3次，第一次I~3小时，第二次和第三次分别I~2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入70%乙醇，加热回流提取3次，第一次I~1.5小时，第二次和第三次分别0.5~I小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用70%乙醇溶解浸膏，采用非极性或弱极性大孔树脂对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I ;然后以60%~70%乙醇洗脱，再以90%~95%乙醇洗脱，得洗脱液II，回收，减压浓缩，干燥，即得杜仲总黄酮提取物。
9.根据权利要求8所述的中药组合物，其特征在于，所述的洗脱流速为2~6BV/h，优选为2~4BV/h，最优为3BV/h。
10.根据权利要求1~5任一权利要求所述的中药组合物，其特征在于，所述的茶多酚采用以下方法制备:绿茶粉碎，加80%乙醇，100°C回流提取3次，料液重量体积比1:8-10，提取时间10-30min，合并提取液；离心，弃残渣，得上清液；聚酰胺树脂吸附:柱高与直径比·20，去离子水洗涤0.5h ;去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min，去离子水中含有少量咖啡因，弃去， 收集乙醇洗脱液，浓缩，即得。
【文档编号】A61P9/10GK103520375SQ201310479574
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年10月15日 优先权日:2013年10月15日
【发明者】蹇奇先, 范仕明, 柯昌林 申请人:广元亿明生物科技有限公司