酶辅助超声法提取蒙药瞿麦总皂苷的方法
【专利摘要】本发明公开了一种酶辅助超声法提取蒙药瞿麦中总皂苷的方法,包括：称取瞿麦粉末，石油醚回流，过滤，干燥至无石油醚味，HAc-NaAc缓冲液浸泡，加入淀粉酶，60℃水浴加热30min，然后于水浴灭酶，放置至室温，超声处理，过滤，水饱和正丁醇萃取。
【专利说明】酶辅助超声法提取蒙药瞿麦总皂苷的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物成分提取领域，特别地，涉及瞿麦总皂苷的提取。
【背景技术】
[0002]瞿麦Dianthus superbus L,别名十样景花、竹节草花、山瞿麦、剪绒花,蒙药名:高优-巴沙嘎。石竹科多年生草本植物，全草入药，性苦、寒、辛、无毒。具有利尿通淋，破血通经。用于热淋，血淋，石淋，小便不通，淋浙涩痛，月经闭止，是蒙医常用药之一。瞿麦皂苷具有免疫作用，能抑制人体B细胞免疫球蛋白的分泌；还具有抑菌杀虫作用。瞿麦的水和乙醇提取物对大肠杆菌、副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和变形杆菌均有抑制作用；抗脂质过氧化；兴奋子宫；溶血作用；具有心血管药理活性，表现为提高浆膜的渗透性、正性肌力、抗心律失常、舒张血管、降低血压、止痛、抗高胆固醇和保护毛细血管等作用。本实验采用酶辅助超声法提取蒙药瞿麦中总皂苷，酶能够破坏植物细胞壁，使有效成分快速溶出，而超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散和溶解，从而显著提高提取效率。总皂苷的测定方法有重量法，UV, TLCS, HPLC, GC-MS法。目前对蒙药瞿麦总皂苷的工艺研究和含量测定尚未见报道
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种酶辅助超声法提取蒙药瞿麦中总皂苷的方法，具体包括步骤:称取瞿麦粉末，按重量体积比1:10加入石油醚于50°C水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，按与瞿麦粉末重量体积比1:30 (料液比)加入pH为6.0的HAc-NaAc缓冲液，浸泡30min，按与瞿麦粉末重量比l:4(g:mg)加入淀粉酶，60°C水浴加热30min，然后于95°C水浴灭酶lOmin，取出后放置至室温，超声功率180W，超声15min，过滤，滤液用水饱和正丁醇以等体积萃取。
[0004]本发明提供了一种新的高效的瞿麦总皂苷的提取方法，同时发明人发现，淀粉酶的用量、超声功率、时间、料液比四个因素对提取效率有着重大的影响，因此创造性的确定了最佳的提取工艺，同时发明人还发现，发明也发现石油醚回流、缓冲液浸泡等工艺步骤对于提取效率也有一定的影响，也同时确定了最佳的技术参数。
[0005]附图概要说明
[0006]图1:对照品与供试品光谱叠加图
[0007]图2:标准曲线图
[0008]图3:酶用量对皂苷提取率的影响，由图3可知，当酶用量为4mg时总皂苷含量最大，故选取2,4,6mg三个较优的水平做正交试验。
[0009]图4:料液比对总皂苷提取率的影响，由图4可知，在料液比为1:30时，皂苷含量最大，故选取1:25，1:30，1:35三个较优的水平做正交试验
[0010]图5:超声时间对瞿麦提取率的影响，由图5可知，在超声时间为20min时，皂苷含量最大。故选取15，20，25min作为三个较优的水平做正交试验。[0011]图6:超声功率对总皂苷提取率的影响，由图6可知，超声功率为160W时，皂苷含量最大，故选取140，160，180W作为三个较优的水平做正交试验。
【具体实施方式】
[0012]实施例1
[0013]精密称取蒙药瞿麦粉末1.0g，W IOmL石油醚于50°C水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，将其置于锥形瓶中，加入pH为6.0的HAc-NaAc缓冲液30mL (即料液比I: 30)，浸泡30min，按最佳工艺条件加入4mg的淀粉酶，60°C水浴加热30min，然后于95°C水浴灭酶lOmin，取出后放置至室温，超声功率180W，超声15min。过滤，滤液与水饱和正丁醇以等体积萃取，萃取三次，合并滤液，挥干，用无水乙醇洗出，定容至25mL。
[0014]实施例2，工艺优选参数的确定
[0015]I仪器与试药
[0016]TU-1901型双光束紫外分光光度计[北京普析通用有限责任公司];LX_07A多功能粉碎机[上海江信科技有限公司];电热鼓风干燥箱[上海一恒科学仪器有限公司];AB135-分析天平[Made inSwitzerland] ;BSA124S型电子天平[北京赛多利斯科学仪器有限公司];旋转蒸发仪[上海亚荣生化仪器厂];循环水式多用真空泵[郑州长城科工贸有限公司];旋转蒸发仪[郑州长城科工贸有限公司];恒温水浴锅[上海亚荣生化仪器厂];电子恒温不锈钢水浴锅余[姚市上通温控仪表厂];KH5200DE型高功率数控超声清洗器[昆山禾创超声仪器有限 公司];PHS-25酸度计[成都世纪方舟科技有限公司]。
[0017]瞿麦[内蒙古天立药业，经内蒙古医科大学药学院药用植物教研室乔俊缠教授鉴定为石竹科植物瞿麦Dianthus superbus L.的带花地上部分];薯菌阜苷元对照品[中国药品生物制品鉴定所提供，批号:111539-200001];淀粉酶[江苏无锡，活性单位I万U/g]；无水乙醇；冰乙酸；正丁醇；香草醛；高氯酸；石油醚，以上均为分析纯。
[0018]2 方法
[0019]2.1对照品溶液的制备
[0020]精密称取干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品5.0mg,用无水乙醇溶解，定容至25mL，摇匀，即得200 μ g/mL薯蓣皂苷元对照品溶液。
[0021]2.2供试品溶液的制备
[0022]精密称取蒙药瞿麦粉末1.0gJP IOmL石油醚于50°C水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，将其置于锥形瓶中，加入pH为6.0的HAc-NaAc缓冲液，浸泡30min，加入一定量的淀粉酶，60°C水浴加热30min，然后于95°C水浴灭酶lOmin，取出后放置至室温，超声。过滤，滤液与水饱和正丁醇以等体积萃取，萃取三次，合并滤液，挥干，用无水乙醇洗出，定容至25mL。在提取工艺研究中改变相应参数。
[0023]2.3测定波长的选择
[0024]精密量取对照品和供试品溶液0.5mL于IOmL具塞试管中，于60°C水浴挥干，加入
0.2mL5%香草醛-冰醋酸溶液，0.8mL高氯酸于60°C水浴加热20min，取出放置2min，加入冰醋酸定容至IOmL摇匀，放置15min，在300nm — 600nm范围内做波长扫描。结果显示对照品和供试品均在410nm有最大吸收，故选择410nm做为测定波长,结果见图1。
[0025]2.4标准曲线的制备[0026]精密量取对照品溶液0.0, 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL分别置于IOmL具塞试管中，按
2.3项下显色方法显色，在410nm处测定吸光度，以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=0.025X+0.004, r=0.9999，结果表明浓度在4.176-20.88 μ g/mL内与吸光度值呈良好线性关系，结果见表1，图2。
[0027]表1回归方程表
【权利要求】
1.一种酶辅助超声法提取蒙药瞿麦中总皂苷的方法，其特征在于包括步骤:称取瞿麦粉末，按重量体积比1:10加入石油醚于50°C水浴加热回流2h，过滤，干燥至无石油醚味，按与瞿麦粉末重量体积比1:30 (料液比)加入pH为6.0的HAc-NaAc缓冲液，浸泡30min，按与瞿麦粉末重量比l:4(g:mg)加入淀粉酶，60°C水浴加热30min，然后于95°C水浴灭酶lOmin，取出后放置至室温，超声功率180W，超声15min，过滤，滤液用水饱和正丁醇以等体积萃 取。
【文档编号】A61K36/36GK103520252SQ201310490457
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年10月18日 优先权日:2013年10月18日
【发明者】陈建平, 布仁, 朱晓伟, 额尔敦, 马岚, 杜艳青 申请人:内蒙古医科大学