一种新型杀菌液的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种杀菌液，重量份数组成如下：天麻粉，山茱萸提取物，透骨草提取物，枯草芽孢杆菌发酵液提取物，黄芩提取物，含氯化氢36%—38%的浓盐酸，碘酒，水；本发明采用多种生物为原料制成生物制剂，采用患处低浓度药液清洗、高浓度药液擦拭的双管齐下的治疗方法，具有治愈率高、经济实惠、复发率低、无任何毒性等特点。
【专利说明】一种新型杀菌液【技术领域】
[0001]本发明是涉及一种治疗顽固性皮肤病杀菌液制剂，尤其是涉及治疗牛皮癣、破裂性奇痒症、颗粒性奇痒症、癞痢、梅毒、肛周炎等外科皮肤病的杀菌液制剂。
【背景技术】
[0002]破裂性奇痒症，是平常人们无法对付的病症，常见有一个或几个指头皮肤变厚、发黄、干燥、开裂、流血、奇痒难受，有的双手掌、双脚掌也变厚、发黄、干燥、开裂、流血、裂缝如同六月干旱的大田一样四分五裂，深处奇痒难受，坐卧不安，无法工作。除了手脚，其他部位也有发作的。
[0003]肛周炎目前世界各国都没有根治的药物，它时而发作，越搔越痒，变来变去，形成肛裂、化脓，有的拖延久了，夹带了危险的病毒，发作为直肠癌，成为终生之恨。
[0004]牛皮癣(银屑病)是一种常见的易反复发作的皮肤顽症，我国属高发区，并较难治愈。此病虽然不危及生命，但却使患者皮肉搔痒、鳞屑脱落，甚至血痕斑斑，既影响患者的美观，又给患者的精神和身体带来不可言喻的痛苦，许多患者因得不到及时有效的治疗，使病情拖延日久，身体衰弱，引起各种并发症，影响心、肝、肾等功能，有的还把病遗传给后代。
[0005]对于牛皮癣，目前国内多采用中西医结合的方法进行治疗，如煎中药汤洗，外抹药膏药水、睡眠疗法、放血疗法、注射等等；国外还有采用激素治疗等，上述各种治疗方法虽有一定的疗效，可是见效 快复发也快，并且有一定的副作用。
[0006]痔疮，这是目前困扰中老年人的常见疾病，患病时痛苦难受，病情严重时，有的无法坐凳，有的靡烂流脓，有的甚至演变成癌症。目前较为常见的治疗方法有:手术切除息肉，用黄胺结晶治疗、肌肉注射青霉素，外敷痔疮膏，内服抗菌素类等。
[0007]以上种种长期用药，无论中医或西医均对肝、肾损害极大。目前存在的专利技术杀菌液配方工艺相对复杂，用料价高。
[0008]_一种治疗皮肤癣、湿疹的中药杀菌液及其制备方法，CN201010010113，一种治疗皮肤癣、湿疹的中药杀菌液，它是由下述重量配比的原料制成的药剂:白鲜皮:土荆皮、土茯苓:地榆:60度白酒=15-20: 5-10: 8-15: 10-15: 50-70。本发明一种治疗皮肤癣、湿疹的中药杀菌液是将白鲜皮、土荆皮、土茯苓、地榆切片浸泡在60度白酒内制成的，为外用制剂，大大减小了不良反应，直接用于患处加快吸收，使患者尽快脱离皮肤疾患。本发明区别于现有中草药复方制剂，通过实验及试验证实:该产品无毒副作用，疗效短，见效快，作用明显，不复发，经济简便，比较现在临床治疗由真菌癣菌引起的皮肤疾病的内服药及外用方法有着本质的差异，从根本上解除病痛。
[0009]水合联氨治疗灰指甲的新用途CN200410023073，本发明公开了一种水合联氨治疗灰指甲的新用途，主要是采用一定比例的水合联氨和一定比例的蒸馏水混合配制成灰指甲杀菌液，涂抹于患甲上，能在最短时间内，杀死真菌，彻底根治灰指甲。
[0010]一种消毒杀菌液和消炎粉CN03128044，一种消毒杀菌液和消炎粉，其重量组成为:食用酒精(乙醇含量68-70%) IOkg;活蜈蚣0.8-1.2kg;活蝮蛇0.8_1.2kg;活乌蛇0.8-1.2kg;蜂王浆 0.4-0.6kg;三七 0.4-0.6kg;金银花 0.4-0.6kg;竹叶 0.4-0.6kg;仙人掌0.8-1.2kg。本发明的优点是利用食用酒精提取具有毒性的野生动物的活性物质，所制成的药液具有较强杀灭多种致病病菌的功能，通过多家医院临床试验，对创伤性感染、病毒、真菌和细菌所导致的皮肤溃烂都具有较好的治疗效果，制造成本低。
[0011]一种克癣浸涂液CN96118672，本发明涉及一种织物经药液浸涂后，能治疗各类真菌引起的癣症一种克癣浸涂液，其浸涂液由杀菌液和杀菌缓释剂组成，其杀菌液由苦参、百部、冰片、蛇床子、乌洛托品加入酒精等构成，其杀菌缓释剂由明矾和铜绿构成，织物经杀菌液浸涂后，再经杀菌缓释剂固化，经过浸涂后的织物能在长时间内治疗由真菌引起的各类癣症，其有效率达98%以上，经过多次洗涤，其药效能达一年以上。
[0012]多功能牛皮癣杀菌液CN200310105020，本发明涉及到一种可治疗牛皮癣等多种皮肤病的杀菌液，即多功能牛皮癣杀菌液。长期以来象牛皮癣之类的许多皮肤病一直缺乏较好的药物，疗效差而多有反复性。本发明采用多种生物为原料制成生物制剂的办法取得良好效果，此即多功能牛皮癣杀菌液。采用的生物原料有海红、海螺、牡蛎、蛤壳、柳树菇、蜈蚣。本制剂可杀灭多种皮肤病菌，特别对顽固性牛皮癣，还有湿疹、腋臭、灰指甲、疥癣、瘙痒、植物性过敏等都有良好治疗效果且无任何毒副作用。本发明不含任何无机化学添加剂而只用水做浸出剂，是一种绿色药物。
[0013]透骨草民间用全草入药，治感冒、跌打损伤，外用治毒疮、湿疹、疥疮。根及叶的鲜汁或水煎液对菜粉蝶、家蝇和三带喙库蚊的幼虫有强烈的毒性。根含透骨草素(phrymarolin)及透骨草醇乙酸酯(leptostachyol acetate),后者为杀虫成分。民间用全草煎水消灭蝇蛆和菜青虫。
[0014]山茱萸(学名:Cornus officinalis),山茱萸科落叶灌木或小乔木。其成熟果实为中药，别名山萸肉、药枣、枣皮、蜀酸枣、肉枣、薯枣、鸡足、实枣、萸肉、药枣、天木籽、山芋肉、实枣儿；山茱萸味酸、涩性，微温。归肝、肾经。补益肝肾，涩精固脱。用于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱，内热消渴，为固涩药，它含有山茱萸甙、莫罗甙、7-0-甲基莫罗甙、山茱萸新甙、当药甙、番木鳖甙等环烯醚萜甙类及皂甙、熊果酸、酒石酸、没食子酸、苹果酸、山茱萸鞣质1、2、3等多种有效成份。有明显的利尿、降压、抗菌与升高血液白细胞的作用。山茱萸，为我国常用名贵中药材，应用历史悠久。它以其补力平和、壮阳而不助火，滋阴而不腻膈，收敛而不留邪等特殊功效被历代医学所喜用。张仲景以山茱萸为君创制了 “金匮肾气丸”。据化学分析，山茱萸含有生理活性较强的山茱萸甙、酒石酸、没食子酸、苹果酸、树酯、鞣质和多种维生素等有效成分，具有增强免疫、抗炎、抗菌等药理作用，是中医临床中常用的一味药。
[0015]没药，别名:末药明没药没药末药制没药炙没药醋炒没药生没药生明没药。拉丁文名:Commiphora myrrha Engl.为橄榄科植物地丁树或哈地丁树的干燥树脂,又名末药。主产于非洲索马里、埃塞俄比亚以及印度等地。采集由树皮裂缝处渗出的白色油胶树脂，于空气中变成红棕色而坚硬的圆块。打碎后，炒至焦黑色应用。主治胸腹瘀痛、痛经、经闭、症瘕、跌打损伤、痈肿疮疡、肠痈、目赤肿痛。有活血止痛、消肿生肌等功效。
【发明内容】
:
[0016] 本发明的目的在于提供一种针对真菌感染的皮肤病具有高效、快捷、复发率低等特点的杀菌液药剂，采用患处低浓度药液清洗、高浓度药液擦拭的双管齐下的疗法。它既省钱又疗效快，治疗非常简单方便。
[0017]本发明所述杀菌液的重量份数组成如下:
[0018]没药粉5-8份，山茱萸提取物8-15份，透骨草提取物10_15份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物10-20份，黄芩提取物3-15份，含氯化氢36% — 38%的浓盐酸15-25份，高锰酸钾0.05-0.15 份，水 10-30 份；
[0019]所述透骨草提取物制备方法如下: [0020]称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70°C _90°C保持2-4h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C _78°C保持3-4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得透骨草提取物。
[0021]所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-1.2 ;乙醇浓度为95% ;丙醇浓度为100% ；
[0022]所述山茱萸提取物的制备方法如下:
[0023]将山茱萸粉碎至粒径为2毫米以下置于容器中，添加3-6倍重量的水，控制温度400C _60°C保持2-4h，控制温度至65°C _75°C保持3_5h，添加混合物料2_3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制温度至30°C _40°C保持3-8h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物。
[0024]所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2，乙醇浓度85-95%。甲醇浓度100%.[0025]所述黄芩提取物制备方法如下:
[0026]称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后置于容器中添加3-6倍重量的水，控制温度75°C~80°C保持2~4h，然后降温至45-60°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5_3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C~78°C保持3~4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得黄芪提取物。
[0027]所述混合酶制剂添加量为混合物料总重量的5_10%。
[0028]所述混合酶制剂的重量份数组成为:内β -葡聚糖酶10-20份，外β -葡聚糖酶10-20份，β-葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，β -淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15 份。
[0029]所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下:
[0030]所述菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏号为CICC23091，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0031](I)菌种活化
[0032]将保存完好的枯草芽孢杆菌CICC23091的斜面菌种接种于斜面培养基，37_45°C培养24-36h进行菌种活化，如此活化2-3次；
[0033]所述斜面培养基组成为:牛肉膏3-10g，氯化钠5_12g，蛋白胨10_20g，葡萄糖2-5g,琼脂 15-20g，蒸馏水 1000mL, pH 值 5-7，121°C 灭菌 20min ；
[0034](2)液体种子扩大培养
[0035]①一级种子培养:将步骤(1)活化后的斜面菌种1-2环接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度38-43°C，培养时间10_15h ；
[0036]②二级种子培养:将一级种子按照10%的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；[0037]③三级种子培养:将二级种子以10%接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度38-43°C，培养时间10_15h ；
[0038]④一级种子罐培养:将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，培养基装量100L，培养温度37-45°C，搅拌速度200-400rpm，通风量(V/V) 1:1-2，罐压0.05Mpa,培养时间 10-20h ；
[0039]一级、二级、三级种子培养基重量组成为:
[0040]酵母粉0.3-0.5%，葡萄糖1-1.5%，蛋白胨0.3-0.5%，牛肉膏0.5-0.8%，磷酸氢二钾0.8-1.5%，硫酸钙1%，氯化镁2%，柠檬酸钠1-3%，不足部分纯净水补足，pH值3_7，121-123? 灭菌 30-40min。
[0041]所述种子罐培养基重量组成为:
[0042]麦芽糊精5-15%，酵母粉0.4-0.8%，蛋白胨0.1-0.5%，玉米浆0.1-0.5%，磷酸氢二钾0.8-1.5%，硫酸镁0.05-0.1%，柠檬酸钠0.1-0.5%，不足部分纯净水补足，pH值3-7,121-123? 灭菌 30-40min。
[0043]所述种子罐发酵液菌体浓度为7.0x108-8.0x108个/ml ；
[0044](3)发酵罐发酵
[0045]将步骤(2)中一级种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度30_38°C，搅拌速度 200-700r/m，通风量(V/V) 1:1-3,培养时间 36_48h。
[0046]溶解氧控制:通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧15-30% ；
[0047]pH控制:通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在3-7 ；
[0048]补料控制:当发酵液中的还原糖含量降至3mg/mL-8mg/mL时，开始添加补料培养基，补料量以维持发酵液还原糖含量为2mg/mL-5mg/mL为准；
[0049]放罐标准:30-50%菌体衰老自溶。
[0050]所述发酵培养基组成为:麦芽糊精50_150g，玉米粉50_60g，豆饼粉15_25g，透骨草10_20g，黄芩10_30g，酵母粉4-8g，玉米浆l_5g，硫酸铵l_3g，磷酸氢二钾l_2g，磷酸二氢钾l_2g，柠檬酸钠l_5g，消泡剂0.Ι-lg,纯净水1000mL, pH值3-7，121°C灭菌20min ；
[0051]所述补料培养基重量组成为:麦芽糊精20-30%，玉米粉10-20%，豆粉15_25%，不足部分纯净水补足，pH值3-7，121-123°C灭菌30_40min。
[0052]所述发酵培养基的调配方法为:
[0053]按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节pH值3-7，加入中温淀粉酶(3u/g玉米粉)与高温淀粉酶(30u/g玉米粉)，同时边搅拌边升温至70°C保温15-30min，然后缓慢升温至90°C保温15_30min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，调初始pH3-7，121-123°C灭菌30_40min备用。
[0054]菌种特征如下:
[0055]1.菌体细胞呈直杆状、芽孢中生或近端生的革兰氏阳性。
[0056]2.菌落特征为白色圆形，隆起，表面光滑，不透明，湿润，挑起粘连。
[0057]3.能够利用多种糖类，如葡萄糖、半乳糖、木糖、纤维二糖、棉籽糖等；产淀粉酶、蛋白酶、能够水解明胶，V.P、甲基红阳性。
[0058]4.最适培养温度37°C,最适ρΗ7.0。
[0059]所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物是枯草芽孢杆菌发酵液中含有的抑菌物质，所述抑菌物质可以有效抑制牛皮癣的复发。1%浓度的抑菌物质溶液可以有效抑制牛皮癣的复发。
[0060]从发酵液中提取抑菌物质的方法为有机溶剂沉淀法:
[0061 ] 首先将发酵液高速离心，温度0-4°C，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；上清液中加入等体积有机溶剂(甲醇:乙醇=1:3)，充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂。蒸馏温度45-65°C，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除。收集沉淀物质即得。
[0062]本菌种分类地位如下:细菌域(Bacteria);厚壁菌门(Firmicutes);芽孢杆菌纲(Bacillales)；芽孢杆菌目(Bacillaceae)；芽孢杆菌科(Bacillus)；芽孢杆菌属(Bacillus);枯草芽抱杆菌种(Bacillus subtilis)。
[0063]所述杀菌液的制备方法如下:
[0064]将上述几种物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。
[0065]有益效果:
[0066]1、药物渗透性极佳，杀菌面深而广；药物化解能力极强，真菌入侵产生的毒素，瞬间就被解除；达到闻效、闻速。
[0067]2、操作虽然严格，但是治疗简单，在专业人员指导下易于掌握。
[0068]3、药物廉价， 使用时只要极少的药量，治疗一个部位仅需0.5-lg，病人经济实惠。
[0069]4、没有任何毒性，且治愈率很高。
[0070]5、本发明产品采用中药材有效提取成分和枯草芽孢杆菌发酵提取物，进行有机组合，组合产物对治疗常见牛皮癣等皮肤病疗效显著。
【具体实施方式】
[0071]下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0072]菌株具体为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏号为CICC23091，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0073]本发明所获得菌株在调整条件进行发酵时，意外发现发酵液提取物中含有高效杀菌物质，杀菌物质具有良好的预防和治疗牛皮癣皮肤病的效果，发明人进而利用本发明开发了此款产品。
[0074]实施例1:
[0075]杀菌液的重量份数组成如下:
[0076]没药粉7份，山茱萸提取物10份，透骨草提取物12份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物15份，黄芩提取物10份，含氯化氢36% — 38%的浓盐酸20份，高锰酸钾0.1份，水20份；
[0077]所述透骨草提取物制备方法如下:
[0078]称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加5倍重量的水，控制温度80°C保持3h，添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制温度至75°C保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得。
[0079]所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1 ;乙醇浓度为95% ;丙醇浓度为100% ；
[0080]所述山茱萸提取物的制备方法如下:[0081 ] 将粉碎至粒径为2毫米以下山茱萸置于容器中，添加5倍重量的水，控制温度50°C保持3h，控制温度至70°C保持4h，添加混合物料3倍重量乙醇和甲醇的混合物，控制温度至35°C保持5h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物。
[0082]所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2，乙醇浓度85%，甲醇浓度100%。
[0083]黄芩提取物制备方法如下:
[0084]称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中添加5倍重量的水，控制温度75°C保持3h，然后降温至55°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为6，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制温度至70°C保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得。
[0085]所述混合酶添加量为混合物料总重量的6%。
[0086]所述混合酶的重量份数组成为:内葡聚糖酶15份，外β-葡聚糖酶10份，β-葡萄糖苷酶10份，木聚糖酶15份，β-淀粉酶10份，中性蛋白酶10份。
[0087]枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下:
[0088]所述菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏号为CICC23091，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0089](I)菌种活化
[0090]将保存完好的枯草芽孢杆菌的斜面菌种接种于斜面培养基，40°C培养30h进行菌种活化，如此活化2-3次；`
[0091]所述斜面培养基组成为:牛肉膏6g,氯化钠IOg,蛋白胨15g,葡萄糖3g,琼脂18g,蒸懼水 1000mL, pH 值 6,121°C灭菌 20min ；
[0092](2)液体种子扩大培养
[0093]①一级种子培养:将步骤(1)活化后的斜面菌种1-2环接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度40°C，培养时间12h ；
[0094]②二级种子培养:将一级种子按照10%的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；
[0095]③三级种子培养:将二级种子以10%接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度40°C，培养时间12h ；
[0096]④一级种子罐培养:将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度40°C，搅拌速度300rpm，通风量(V/V) 1:1,罐压0.05Mpa,培养时间15h ；
[0097]所述一级、二级、三级种子培养基重量组成为:
[0098]酵母粉0.3%，葡萄糖1.5%，蛋白胨0.3%，牛肉膏0.5%，磷酸氢二钾0.8%，硫酸钙Ig,氯化镁2g,柠檬酸钠lg，不足部分纯净水补足，pH值5,121°C灭菌30min。
[0099]所述种子罐培养基重量组成为:
[0100]麦芽糊精10%，酵母粉0.4%，蛋白胨0.3%，玉米浆0.4%，磷酸氢二钾1.0%，硫酸镁0.08%，柠檬酸钠0.3%，不足部分纯净水补足，pH值6，121°C灭菌30min。
[0101]所述种子罐发酵液菌体浓度为7.0x108个/ml ；
[0102](3)发酵罐发酵
[0103]将步骤(2)中一级种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度36°C，搅拌速度300r/m,通风量(V/V) 1: 2，培养时间36h。
[0104]溶解氧控制:通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧20% ；
[0105]PH控制:通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在5 ；
[0106]补料控制:当发酵液中的还原糖含量降至3mg/ml时,开始添加补料培养基,补料量以维持发酵液还原糖含量为4mg/ml ；
[0107]放罐标准:40%菌体衰老自溶。
[0108]所述发酵培养基组成为:麦芽糊精100g，玉米粉50g，豆饼粉25g，透骨草10g，黄芩20g，酵母粉6g，玉米浆3g，硫酸铵2g，磷酸氢二钾lg，磷酸二氢钾lg，柠檬酸钠3g，消泡剂0.1g,纯净水 1000mL，pH 值 6，121°C灭菌 20min ；
[0109]所述补料培养基重量组成为:麦芽糊精25%，玉米粉15%，豆粉20%，不足部分纯净水补足，pH值6,121°C灭菌30min。
[0110]所述发酵培养基的调配方法为:
[0111]按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节PH值6，加入中温淀粉酶(3u/g玉米粉)与高温淀粉酶(30u/g玉米粉)，同时边搅拌边升温至70°C保温15min，然后缓慢升温至90°C保温30min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，调初始pH6,121°C灭菌30min备用。
[0112]从发酵 液中提取抑菌物质方法为有机溶剂沉淀法:
[0113]首先将发酵液高速离心，温度2°C，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；
[0114]上清液中加入等体积有机溶剂(甲醇:乙醇=1:3)，充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂。蒸馏温度55°C，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除。收集沉淀物质即得。
[0115]所述杀菌液的制备方法如下:将上述几种物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。
[0116]实施例2:
[0117]杀菌液的重量份数组成如下:
[0118]没药粉8份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物10份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物20份，黄芩提取物15份，含氯化氢36%的浓盐酸15份，高锰酸钾0.15份，水30份。
[0119]所述透骨草提取物制备方法如下:
[0120]称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3倍重量的水，控制温度70°C保持2h，添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C保持4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得。
[0121]所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1.2 ;乙醇浓度为95% ;丙醇浓度为100% ；
[0122]所述山茱萸提取物的制备方法如下:
[0123]将粉碎至粒径为2毫米以下山茱萸置于容器中，添加3倍重量的水，控制温度40°C保持2h，控制温度至65°C保持3h，添加混合物料2倍重量乙醇和甲醇的混合物，控制温度至30°C保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物。
[0124]所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2，乙醇浓度95%，甲醇浓度100%。
[0125]黄芩提取物制备方法如下:[0126]称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中添加3倍重量的水，控制温度80°C保持2h，然后降温至45°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5，酶解2h，最后添加混合物料0.5倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C保持4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得。
[0127]所述混合酶添加量为混合物料总重量的5%。
[0128]所述混合酶的重量份数组成为:内葡聚糖酶10份，外β-葡聚糖酶15份，β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，β -淀粉酶12份，中性蛋白酶12份。
[0129]枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下:
[0130]所述菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏号为CICC23091，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0131](I)菌种活化
[0132]将保存完好的枯草芽孢杆菌的斜面菌种接种于斜面培养基，37°C培养36h进行菌种活化，如此活化2-3次；
[0133]所述斜面培养基组成为:牛肉膏3g，氯化钠5g，蛋白胨10g，葡萄糖2g，琼脂15-20g，蒸馏水 1000mL，pH 值 5-7，121°C 灭菌 20min ；
[0134](2)液体种子扩大培养
[0135]扩大培养方法基本同实施例1 ;
[0136]所述一级、二级、三级种子培养基重量组成为:
[0137]酵母粉0.5%，葡萄糖1%，蛋白胨0.5%，牛肉膏0.8%，磷酸氢二钾1.5%，硫酸钙Ig,氯化镁2g，柠檬酸钠3g，不足部分纯净水补足，pH值3，123°C灭菌30min。
[0138]所述种子罐培养基重量组成为:
[0139]麦芽糊精5%，酵母粉0.8%，蛋白胨0.1%，玉米浆0.1%，磷酸氢二钾0.8%，硫酸镁0.05%，柠檬酸钠0.1%，不足部分纯净水补足，pH值3，123°C灭菌30min。
[0140]所述种子罐发酵液菌体浓度为8.0xlO8个/ml ；
[0141](3)发酵罐发酵
[0142]将步骤(2)中一级种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度30°C，搅拌速度200r/m，通风量(V/V) 1:1，培养时间36h。
[0143]溶解氧控制:通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧15% ；
[0144]pH控制:通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在3 ；
[0145]补料控制:当发酵液中的还原糖含量降至3mg/ml时,开始添加补料培养基,补料量以维持发酵液还原糖含量为5mg/ml ；
[0146]放罐标准:30%菌体衰老自溶。
[0147]所述发酵培养基组成为:麦芽糊精150g，玉米粉60g，豆饼粉25g，透骨草20g，黄芩30g，酵母粉Sg，玉米浆5g，硫酸铵3g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g，柠檬酸钠5g，消泡剂Ig,纯净水 1000mL, pH 值 3，121°C灭菌 20min ；
[0148]所述补料培养基重量组成为:麦芽糊精20%，玉米粉10%，豆粉15%，不足部分纯净水补足，pH值3,121°C灭菌30min。
[0149]所述发酵培养基的调配方法为:
[0150]按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节pH值3，加入中温淀粉酶(3u/g玉米粉)与高温淀粉酶(30u/g玉米粉)，同时边搅拌边升温至70°C保温30min，然后缓慢升温至90°C保温20min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，调初始pH3,121°C灭菌30min备用。
[0151]从发酵液中提取抑菌物质方法基本同实施例1。
[0152]所述杀菌液的制备方法如下:将上述几种物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。
[0153]实施例3:
[0154]杀菌液重量份数组成如下:没药粉5份，山茱萸提取物15份，透骨草提取物15份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物10份，黄芩提取物3份，含氯化氢36% — 38%的浓盐酸25份，高锰酸钾0.05份，水30份。
[0155]所述透骨草提取物制备方法如下:
[0156]称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加6倍重量的水，控制温度90°C保持4h，添加混合物料3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至78°C保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得透骨草提取物。
[0157]所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1 ;乙醇浓度为95% ;丙醇浓度为100% ；
[0158]所述山茱萸提取物的制备方法如下: [0159]将山茱萸粉碎至粒径为2毫米以下置于容器中，添加6倍重量的水，控制温度60°C保持4h，控制温度至75°C保持5h，添加混合物料3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制温度至40°C保持8h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物。
[0160]所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2，乙醇浓度90%，甲醇浓度100%。
[0161]所述黄芩提取物制备方法如下:
[0162]称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后置于容器中添加6倍重量的水，控制温度78°C保持4h，然后降温至60°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为6.8，酶解4h，最后添加混合物料3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至78°C保持3h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得黄芪提取物。
[0163]所述混合酶制剂添加量为混合物料总重量的10%。
[0164]所述混合酶制剂的重量份数组成为:内葡聚糖酶20份，外β_葡聚糖酶20份，β-葡萄糖苷酶15份，木聚糖酶20份，β-淀粉酶15份，中性蛋白酶15份。
[0165]所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下:
[0166]所述菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏号为CICC23091，购于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0167](I)菌种活化
[0168]将保存完好的枯草芽孢杆菌CICC23091的斜面菌种接种于斜面培养基，45°C培养24h进行菌种活化，如此活化2-3次；
[0169]所述斜面培养基组成为:牛肉膏10g，氯化钠12g，蛋白胨20g，葡萄糖5g，琼脂20g，蒸馏水 1000mL，pH 值 7，121°C灭菌 20min ；
[0170](2)液体种子扩大培养
[0171]扩大培养方法基本同实施例1 ;
[0172]—级、二级、三级种子培养基重量组成为:[0173]酵母粉0.4%，葡萄糖1.2%，蛋白胨0.4%，牛肉膏0.56%，磷酸氢二钾1.0%，硫酸钙1%,氯化镁2%，柠檬酸钠2%，不足部分纯净水补足，pH值7，121°C灭菌40min。
[0174]所述种子罐培养基重量组成为:
[0175]麦芽糊精15%，酵母粉0.5%，蛋白胨0.5%，玉米浆0.5%，磷酸氢二钾1.5%，硫酸镁
0.1%，柠檬酸钠0.5%，不足部分纯净水补足，pH值7，121°C灭菌40min。
[0176]所述种子罐发酵液菌体浓度为8.0xlO8个/ml ；
[0177](3)发酵罐发酵
[0178]将步骤(2)中一级种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度38°C，搅拌速度700r/m，通风量(V/V) 1:3,培养时间48h。
[0179]溶解氧控制:通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧30% ；
[0180]pH控制:通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在7 ；
[0181]补料控制:当发酵液中的还原糖含量降至3mg/mL-8mg/mL时，开始添加补料培养基，补料量以维持发酵液还原糖含量为2mg/mL-5mg/mL为准；
[0182]放罐标准:50%菌体衰老自溶。
`[0183]所述发酵培养基组成为:麦芽糊精50g，玉米粉55g，豆饼粉15g，透骨草15g，黄芩IOg,酵母粉4g，玉米浆lg，硫酸铵lg，磷酸氢二钾1.5g，磷酸二氢钾1.5g，柠檬酸钠lg，消泡剂 0.5g,纯净水 1000mL, pH 值 7，121°C灭菌 20min ；
[0184]所述补料培养基重量组成为:麦芽糊精30%，玉米粉20%，豆粉25%，不足部分纯净水补足，pH值7,121灭菌40min。
[0185]所述发酵培养基的调配方法基本同实施例1。
[0186]从发酵液中提取抑菌物质的方法基本同实施例1。
[0187]所述杀菌液的制备方法如下:将上述几种物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。
[0188]实施例4:实验效果
[0189]实例一:治疗牛皮癣
[0190]2007年浙江松阳县斋坦乡花桥头村的周玉法，年龄28岁。观察到的病情，左面项颈连肩部附近，约有10平方厘米的表面，有银白色燥皮屑脱落，时间有8年了。里面发痒，十分难受。一搔才知皮下红肿发炎。右面项颈连肩部附近约有10多平方厘米的表面，跟左面不同，却是一片黑色，撕开少量的黑皮，皮下也红肿发炎，不堪忍受。患者说到乡卫生院、县医院求医多年均无效。
[0191]诊断:属于重症牛皮癣。①先用防蔓延抗复发的清洗液擦洗一次。②由于患者年轻力壮，承受力强，病历也较长。为了高速治病，清洗隔10分钟，马上用此高档杀菌液对患部擦拭5— 7秒钟。值得提醒的是:取药棉时必须十分小心，先用镊子夹住I立方厘米大小的棉球，打开瓶口，即插入药剂中，然后拉至瓶口稍稍揉压，湿度如同酒精棉。先盖好瓶口，再到患部擦拭。快慢以秒针走动的速度为准。第二次施药中间隔2天。以此类推，左颈患部治疗4次，右颈患部也治疗4次，一共8次。几年了，周玉法颈部安然无恙，一直在松阳县城做工。
[0192]采用此方法用本发明产品先后治愈100多例此类病人。
[0193]实例二:治疗破裂性奇痒症用同例I的方法治疗此类病人50多例，85%以上治疗成功。
[0194]实例三:治疗颗粒性搔痒症用同例I的方法治疗此类病人60多例，治疗成功。
[0195]实例四:治疗小儿癞痢
[0196]2003年4月，浙江松阳大竹溪村九岁的叶廷军，前额上部约有七八个平方厘米的面积不长黑发了，患部有很多白色碎皮屑，边沿生着一圈红肿的颗粒，真菌还在侵蚀其它黑发。
[0197]治疗方案:用杀菌液3毫升，治疗时先用清洗液洗一次，10分钟后，用杀菌液擦拭5— 7秒，30分钟后，把患部用温开水弄湿，用其他消炎膏敷上。中间隔2天后，以此类推，第二次上药。因为对症用药，头部真菌灭得快，头发也长得快。2次也不过共用药14秒。2天后患处全面开始生长黑发。至今十年了，孩子已长大，没有任何复发的诉苦。同样方法治疗同类病人85例。
[0198]从那么多的巧妙治疗顽固性皮肤病成功的经历，联想起过去，立足于现在，才找到了本发明的配方依据:人们皮肤患上形形色色难以攻克的顽症，主要是真菌作怪造成，因为真菌外层的组成份为特种钙类化合物，防水性能极佳，所以溶解于水的抗生素或其他中药、西药外敷，都很难渗入真菌体内，真菌就无损毫毛。现在找到的既能适合人体又能突破真菌菌体的最佳酸类是含氯化氢的稀盐酸。人体本身每天制造所含有的轻度盐酸就是人体内抗菌免疫的重要一环，只是人体外部表面所含的盐酸浓度非常低。尤其是躯干的表面、四肢的末端、人体头部。这些部位最易被攻，最易得病。躯干末端的排污肛门首当其冲。本发明提倡在患者皮肤表面上使用浓度较高或较低的高档杀菌液，正是弥补了人体先天的不足，又能轻而易举地杀灭真菌， 从而达到治疗皮肤病的目的。
【权利要求】
1.一种新型杀菌液，其特征在于，所述新型杀菌液重量份数组成如下:没药粉5-8份，山茱萸提取物8-15份，透骨草提取物10-15份，枯草芽孢杆菌发酵液提取物10-20份，黄芩提取物3-15份，含氯化氢36% — 38%的浓盐酸15-25份，高锰酸钾0.05-0.15份，水10-30份；所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下:将枯草芽孢杆菌CICC23091菌种活化，液体种子扩大培养,发酵罐发酵:将种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度30-38°C，搅拌速度200-700r/m，通风量(V/V) 1:1-3,培养时间36_48h ;放罐标准:30-50%菌体衰老自溶； 从发酵液中提取抑菌物质方法为有机溶剂沉淀法:首先将发酵液高速离心，温度0-4°C，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；上清液中加入等体积有机溶剂，所述有机溶剂为甲醇:乙醇=1:3，充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂；蒸馏温度45-65°C，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除；收集沉淀物质即得； 所述透骨草提取物的制备方法如下:称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70 V -90°C保持2-4h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C _78°C保持3-4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得；所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-1.2 ;乙醇浓度为95%，丙醇浓度为100% ； 所述山茱萸提取物的制备方法如下:将山茱萸粉碎至粒径为2毫米以下置于容器中，添加3-6倍重量的水，控制温度40°C _60°C保持2-4h，控制温度至65°C _75°C保持3_5h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制温度至30°C _40°C保持3-8h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物；所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2，乙醇浓度85-95%,甲醇浓度100%。 所述黄芩提取物的制备方法如下:称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后置于容器中添加3-6倍重量的水，`控制温度75°C~80°C保持2~4h，然后降温至45_60°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节PH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C~78°C保持3~4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得；所述混合酶制剂的添加量为混合物料总重量的5-10%。
2.根据权利要求1所述的一种新型杀菌液，其特征在于，所述透骨草提取物的制备方法如下:称取透骨草；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70°C _90°C保持2-4h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C _78°C保持3-4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得；所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-1.2 ;乙醇浓度为95%，丙醇浓度为100%。
3.根据权利要求1所述的一种新型杀菌液，其特征在于，所述山茱萸提取物的制备方法如下:将山茱萸粉碎至粒径为2毫米以下置于容器中，添加3-6倍重量的水，控制温度400C _60°C保持2-4h，控制温度至65°C _75°C保持3_5h，添加混合物料2_3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制温度至30°C _40°C保持3-8h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得山茱萸提取物；所述乙醇和甲醇的质量比例为1:2，乙醇浓度85-95%，甲醇浓度100%。
4.根据权利要求1所述的一种新型杀菌液，其特征在于，所述黄芩提取物的制备方法如下:称取黄芪；将其粉碎至粒径为2毫米以下，然后置于容器中添加3-6倍重量的水，控制温度75°C~80°C保持2~4h，然后降温至45-60°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节PH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制温度至60°C~78°C保持3~4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得；所述混合酶制剂的添加量为混合物料总重量的5-10%。
5.根据权利要求4所述的一种新型杀菌液，其特征在于，所述混合酶制剂的重量份数组成为:内β -葡聚糖酶10-20份，外β -葡聚糖酶10-20份，β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，β -淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份。
6.根据权利要求1所述的一种新型杀菌液，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌发酵液提取物制备方法如下:将枯草芽孢杆菌CICC23091菌种活化，液体种子扩大培养，发酵罐发酵:将种子罐发酵液以6%接种量接入发酵罐，培养温度30-38°C，搅拌速度200-700r/m，通风量(V/V) 1:1-3,培养时间36-48h ;放罐标准:30-50%菌体衰老自溶； 从发酵液 中提取抑菌物质方法为有机溶剂沉淀法:首先将发酵液高速离心，温度.0-4°C，转速为7000转/分钟，离心十分钟，保留上清液；上清液中加入等体积有机溶剂，所述有机溶剂为甲醇:乙醇=1:3，充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度50摄氏度，搅拌速度为40rpm，时间为4小时，收集有机相，采用真空蒸馏法除去有机溶剂；蒸馏温度45-65°C，蒸馏20分钟，将有机溶剂去除；收集沉淀物质即得。
7.根据权利要求6所述的一种新型杀菌液，其特征在于，所述发酵培养基组成为:麦芽糊精50-150g，玉米粉50-60g，豆饼粉15-25g，透骨草10_20g，黄芩10_30g，酵母粉4_8g，玉米浆l_5g，硫酸铵l_3g，磷酸氢二钾l_2g，磷酸二氢钾l_2g，柠檬酸钠l_5g，消泡剂.0.Ι-lg,纯净水1000mL, pH值3-7，121°C灭菌20min。8.如权利要求1-7任一所述的一种新型杀菌液的制备方法，所述制备方法如下:将所述杀菌液组成物质按照比例混合均匀，灌装，杀菌包装即可。
【文档编号】A61K36/40GK103585270SQ201310524778
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月29日 优先权日:2013年10月29日
【发明者】潘志荣 申请人:潘志荣