β羟基丁酸在治疗安非它明类精神药物成瘾中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了β羟基丁酸在治疗安非它明类精神药物成瘾中的应用。本发明经药理学和行为学实验证实，β羟基丁酸促进安非它明类精神药物成瘾消退，并减少安非它明类精神药物成瘾重现的发生。
【专利说明】β羟基丁酸在治疗安非它明类精神药物成癮中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及β羟基丁酸的应用，具体涉及β羟基丁酸在安非它明类药物成瘾治疗中的应用。
【背景技术】
[0002]上世纪90年代以来，安非它明类中枢兴奋剂滥用增长迅速，联合国禁毒署公布安非它明类中枢兴奋剂是最广泛的毒品，如冰毒、摇头丸等。给个人、家庭和社会带来巨大危害。
[0003]安非它明类中枢兴奋剂成瘾是慢性、复发性脑病，其精神依赖性非常严重，其核心特征是对药物强烈的渴求感，以及在渴求感的驱使下，形成强迫性药物寻觅和使用行为。学习记忆在安非它明类药物成瘾及复发过程中占重要地位。成瘾患者一旦来到与以前接受药物有关环境中(人、地点或其他与药物有关的暗示)就会表现出对药物强烈的渴求感和觅药行为。致依赖性药物所导致的成瘾记忆十分深刻，甚至在戒断若干年后，再接触与成瘾有关的暗示(如人、物、与过去用药有关的环境等)都可以诱发复吸。
[0004]因此，安非它明成瘾治疗中迫切需要能促使成瘾消退，使患者回归正常社会，避免复发的治疗方案。β羟基丁酸是机体能量代谢中间产物，在持续运动和禁食饥饿状态下的重要能源物质。饥饿状态下，肝脏增强脂肪酸代谢，血中β羟基丁酸升高至1-2 mM，长时间禁食，升高至6-8 mM以上。本发明人在研究中发现，β羟基丁酸在安非它明类精神药物成瘾治疗中的作用。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是公开β羟基丁酸的一种新用途。
[0006]具体的说，本发明提供了 β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂成瘾中的应用，即β羟基丁酸能促进安非它明类成瘾消退，并减少成瘾重现的发生。
[0007]本发明公开了 β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂成瘾中的用途。
[0008]本发明所述的成瘾指与成瘾有关的行为，主要包括强迫性觅药和用药，在动物模型中通常表现为条件位置偏爱(conditioned place preference, CPP)。
[0009]本发明所述的β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂精神药物成瘾中的应用，其特征在于β羟基丁酸促进安非它明类精神药物成瘾消退。
[0010]本发明所述的β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂精神药物成瘾中的应用，其特征在于β羟基丁酸减少安非它明类精神药物成瘾行为消退后重建。
[0011]本发明所述的 安非它明类药物为安非它明(Amphetamine, A)、甲基安非它明(Methamphetamine, MA)、摇头丸、冰毒等社会常见毒品。
[0012]本发明所述的药物β羟基丁酸通过市售得到。
[0013]本发明通过动物行为学实验，采用条件位置偏爱(CPP)来判断安非它明类精神药物成瘾获得、消退、重建，以进行成瘾研究。[0014]本发明所述的β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂精神药物成瘾中的应用，β羟基丁酸的有效剂量范围为100-2000 mg/kg，最佳剂量范围为300-600 mg/kg。
[0015]本发明研究了 β羟基丁酸在安非它明类成瘾行为消退中的作用，结果发现β羟基丁酸促进安非它明类成瘾小鼠条件位置偏爱的消退。
[0016]本发明研究了 β羟基丁酸在安非它明类成瘾消退后重建中的作用，结果发现β羟基丁酸减少安非它明类成瘾小鼠成瘾消退后的重建。
[0017]本发明研究了 β羟基丁酸的成瘾性，结果表明β羟基丁酸(100-2000 mg/kg)本身并不引起条件性位置偏爱，也不产生条件性的厌恶效应，不具有成瘾性。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1是甲基安非它明CPP建立流程示意图。其中MA为甲基安非它明，NS为生理盐水。
[0019]图2是甲基安非它明诱导CPP建立结果。其中MA为甲基安非它明，β-OHB为β羟基丁酸。
[0020]图3是非限制性消退实验流程图。其中MA为甲基安非它明，NS为生理盐水，β-OHB为β羟基丁酸。
[0021]图4是在甲基安非它明成瘾一消退操作中，β羟基丁酸促进CPP非限制性消退结果O
[0022]图5是限制性消退实验流程图。其中MA为甲基安非它明，NS为生理盐水，β -OHB为β羟基丁酸。
[0023]图6是在甲基安非它明成瘾一消退操作中，β羟基丁酸促进CPP限制性消退结果。
[0024]图7是消退后重建实验流程图。其中MA为甲基安非它明，NS为生理盐水，β -OHB为β羟基丁酸。
[0025]图8是在甲基安非它明成瘾一消退一重建操作中，β羟基丁酸减少消退后重建结果。其中A图表示经4次重复的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退。B图显示重建Test3结果，消退期β羟基丁酸使用明显减少偏爱重建。
[0026]图9是安非它明诱导CPP建立结果。
[0027]图10是在安非它明成瘾一消退操作中，β羟基丁酸促进CPP非限制性消退结果。
[0028]图11是在安非它明成瘾一消退操作中，β羟基丁酸促进了 CPP限制性消退结果。
[0029]图12是在安非它明成瘾一消退一重建操作中，β羟基丁酸减少消退后重建结果。其中A图表示经4次重复的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退；Β图显示重建Test 3结果，消退期β羟基丁酸使用明显减少偏爱重建。
【具体实施方式】
[0030]以下通过实施例进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的范围。
[0031]本发明实施例中所使用的甲基安非它明(MA)和安非它明(A)为标准品，购自中国药品检定所羟基丁酸购自TOKYO CHEMICAL INDUSTRY CO。
[0032]本实施例中所使用的CPP实验系统为红外视频跟踪-计算机自动分析的条件位置偏爱黑白箱实验系统(上海移数信息科技有限公司型号:RD1111-CPP-M-4)。
[0033]计量资料以均数土标准差表示，应用SPSS16.0软件进行方差分析，p〈0.05为有显著性差异，图中用*标识。
[0034]实施例1:甲基安非它明诱导的条件位置偏爱(CPP)形成
小鼠分层随机分为4组,生理盐水组、MA paired组、MA无关环境组和β -OHB paired组，每组8只小鼠。只是在CPP建立训练时，四组处理不同，其余相同。甲基安非它明诱导条件位置偏爱(CPP)实验流程见图1。
1)天然偏爱测试:实验前三天(dl、d2、d3)，每天8:30左右，先将实验动物(每亚组小鼠4只同笼)运送至CPP装置测试室，开启CPP装置，打开CPP穿梭盒中间通道型隔板，将小鼠(头朝向白盒)轻柔放置两盒交界处，让其在两盒内自由活动15分钟，并于d3测试摄录活动情况，由电脑辅助系统纪录各小鼠在每个盒子中的停留时间，即记录偏爱基础值t black(秒)、t white (秒)分析其天然偏爱情况。根据天然偏爱测试结果确定小鼠的天然偏爱箱。记录各小鼠的CPP基础值,即TO =非天然偏爱盒时间-天然偏爱盒时间。
2)CPP建立:
MA paired 组
训练:根据天然偏爱结果以及相关文献，天然偏爱盒不易建立CPP，故选择非偏爱盒作为甲基安非它明伴药盒，进行条件化训练。训练期间采用封闭型隔板，将穿梭盒分隔成两个独立的盒子，甲基安非它明处理(MA paired)小鼠在d4、d6, d8腹腔注射lmg/kg的盐酸甲基安非它明后放置非偏爱盒训练30分钟；d5、d7，d9腹腔注射0.2ml/10g生理盐水后放置自然偏爱盒训练30分钟。
生理盐水组小鼠6天内均给 予生理盐水，其它处理训练同MA paired实验组小鼠。甲基安非它明无关环境组小鼠，d4-9，均在所设无关环境内处置，并不放入CPP装置，给药同MA-paired 组。β-OHB paired 组 β-OHB 剂量为 300 mg/kg,其处理训练同 MA-paired 实验组。
偏爱测试:实验dlO，开启CPP装置，打开CPP穿梭盒中间通道型隔板，将小鼠(头朝向白盒)轻柔放置两盒交界处，让其在两盒内自由活动15 min，由电脑辅助系统纪录各小鼠在每个盒子中的停留时间，记录CPP测试值t black (秒)、t white (秒),取其值为Tl,为非天然偏爱盒时间_天然偏爱盒时间的差。
CPP结果计算:
为了减少系统误差，平衡实验各因素，CPP值定义为:测试值-基础值，即:Τ (η)(非天然偏爱盒时间[即伴药侧]-天然偏爱盒时间)-TO (非天然偏爱盒时间-天然偏爱盒时间)。
3)MA paired组建立对伴药箱的偏爱。见附图2。
与生理盐水对照组和无关环境组相比，MA-paired组建立对伴药箱的偏爱，差异有显著性意义。而β-OHB本身并不引起条件性位置偏爱，也不产生条件性的厌恶效应，不具有成瘾性。
在实施例1中确定了小鼠形成CPP的实验方案。实施例2 — 4以MA paired组的实验流程先建立CPP，此基础上进行消退和重建实验研究。
[0035]实施例2:甲基安非它明成瘾非限制性消退实验小鼠分2组，β羟基丁酸组和生理盐水组，每组8只。
DDl-1O同实施例1 1 ）~2)中的MA paired组，进行天然偏爱(Test 0)、CPP训练和偏爱测试(Test I)。
2) D10-17:每天接受15 min偏爱测试(test 1-test 8),并与每次偏爱测试后,按分组立即给予①β羟基丁酸注射(100 mg/kg,腹腔注射)，或②蒸馏水注射(0.2 ml/10g，腹腔注射)，注射后放入home cage。
本实施例有10次测试结果Test 0，1，2，3，4，5，6，7，8。
4)结果显示:甲基安非它明成瘾一非限制性消退操作中，非限制性消退期使用β羟基丁酸促进CPP消退。见图4。
[0036]实施例3:甲基安非它明成瘾限制性消退实验
小鼠分2组，β羟基丁酸组和生理盐水组。每组8只。限制性消退实验流程见图5。OD1-9同实施例1 I)~2)中的MA-paired组，进行天然偏爱(Test O)、CPP训练和偏爱测试(Test I)。
2)Dll-12为限制性消退期。
Dll,动物限制在MA-paired侧3 min,然后立即，β羟基丁酸组给予100 mg/kg β轻基丁酸，生理盐水组给生理盐水；
D12,动物限制在MA-unpaired侧3 mi n,然后立即，2组均给生理盐水。
3)D13，进行偏爱测试(Test 2)。
本实施例有3次测试结果Test 0,l,2o
4)结果显示:甲基安非它明成瘾一限制性消退操作中，限制性消退期使用β羟基丁酸促进CPP消退。见图6。
[0037]实施例4:甲基安非它明成瘾消退后重建实验
小鼠分2组，β羟基丁酸组和生理盐水组。①β羟基丁酸组注射(100 mg/kg, ip)②蒸馏水注射(0.2 ml/10g)。每组8只。消退后重建实验流程见图7。
OD1-9同实施例1 I 2)中的MA paired组，进行天然偏爱(Test O)、CPP训练和偏爱测试(Test I)。
2)Dll-18为限制性消退期。
D11，动物限制在MA伴药侧3 min，然后β羟基丁酸组给予β羟基丁酸100 mg/kg，生理盐水组给生理盐水；D12，动物限制在MA非伴药侧3 min，然后2亚组均给生理盐水；D13-18:再重复 Dll-12，3 次；
3)D19:进行偏爱测试(Test 2)。
4)D20:Test 2 后 24 小时，进行重建试验 reinstatement test (Test 3)。即给予 MA(0.2 mg/kg)立即进行偏爱测试。
本实施例有有4次测试结果Test 0,l,2,3o
5)结果显示:在甲基安非它明成瘾一消退一重建操作中，β羟基丁酸组减少消退后的重建。见图8，其中A图表示经4次重复的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退。B图显示重建Test 3结果，消退期β羟基丁酸使用明显减少偏爱重建。
[0038]实施例5: β羟基丁酸对安非它明成瘾消退和重建的影响
同实施例1-4实验步骤，研究β羟基丁酸对安非它明(A)成瘾消退和重建的影响。安非它明诱导小鼠CPP的剂量为I mg/kg，重建试验中安非它明剂量为0.2 mg/kg。
O安非它明诱导的条件位置偏爱(CPP)形成，操作流程同实施例1，其中MA组在本实验中为安非它明(A)组。安非它明剂量为I mg/kg。结果显示与生理盐水对照组和无关环境组相比，A paired组建立对伴药箱的偏爱，差异有显著性意义，见图9。
2)安非它明成瘾非限制性消退，操作流程同实施例2，其中诱导小鼠CPP的药物为安非它明。结果显示:在安非它明成瘾一非限制性消退操作中，非限制性消退期使用β羟基丁酸促进CPP消退。见图10。
3)安非它明成瘾限制性消退，操作流程同实施例3，其中诱导小鼠CPP的药物为安非它明。结果显示:在安非它明成瘾一限制性消退操作中，限制性消退期使用β羟基丁酸促进CPP消退。见图11。
4)安非它明成瘾消退后重建，操作流程同实施例4，其中诱导小鼠CPP的药物为安非它明。进行消退后重建试验时给予安非它明的剂量为0.2 mg/kg。结果显示:在安非它明成瘾一消退一重建操作中，β羟基丁酸组减少成瘾消退后的重建。见图12，其中A图表示经4次重复的限制性消退程序，小鼠CPP完全消退。B图显示重建Test 3结果，消退期β羟基丁酸使用明显减少偏爱重建。
【权利要求】
1.β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂精神药物成瘾中的应用。
2.权利要求1所述的β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂精神药物成瘾中的应用，其特征在于β羟基丁酸促进安非它明类精神药物成瘾消退。
3.权利要求1所述的β羟基丁酸在治疗安非它明类兴奋剂精神药物成瘾中的应用，其特征在于β羟基丁酸减少安`非它明类精神药物成瘾行为消退后重建。
【文档编号】A61P25/30GK103860534SQ201410048807
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年2月12日 优先权日:2014年2月12日
【发明者】赵营, 翟德胜, 王守英, 陈志国, 谷争, 杨云雷, 张瑞岭, 李嵩箕, 周度爽, 赵二奇, 何欢欢, 侯田田 申请人:新乡医学院