一种忍冬叶有效提取物的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种忍冬叶有效提取物的制备方法，包括以下步骤：醇回流提取、调酸过滤、大孔树脂洗脱除杂和浓缩、干燥等。本发明操作简单，所用大孔树脂可再生利用，制备成本低且环境污染小；使用乙醇溶液作为提取纯化溶剂，安全性高，廉价易得；所得的忍冬有效提取物中绿原酸、总黄酮含量高，成分全，不仅含绿原酸、黄酮类有效成分，也含环烯醚萜苷类和酚酸类等成分，与忍冬叶各组分天然比例接近。
【专利说明】一种忍冬叶有效提取物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种忍冬叶有效提取物的制备方法，属于中药领域。
【背景技术】
[0002]忍冬叶为忍冬属忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干燥叶,李时珍谓:“忍冬莖叶及花功用皆同”，药效及成分与金银花基本相同，具有清热解毒、疏风通络、保肝利胆之功效，常用于治疗上呼吸道感染，咽痛、喉痹、扁桃体炎、口腔炎等。忍冬叶的主要有效成分为绿原酸、黄酮、苷类(皂苷、环烯醚萜苷)、挥发油和其它微量成分等，具有抗病原微生物、降血压、降血脂、抗肿瘤等多种作用。
[0003]忍冬花因其产量有限，常供不应求。而忍冬叶与花同株，为了保证花蕾的正常生长，忍冬需多次修剪整形，每年可得大量的叶，而这些忍冬叶为忍冬传统的废弃部分，一直被视为非药用部位而长期未得到利用，浪费现象十分严重。有文献报道，忍冬叶与金银花的主要有效成分均为酚酸类化合物，单位重量的忍冬叶有机酸的含量为金银花的70%，总黄酮含量高于花蕾，而且忍冬叶粗黄酮的抑菌效果和抗氧化活性均高于忍冬花中的绿原酸粗品，具有相当闻的研究和应用价值。
[0004]对于忍冬叶中绿原酸、总黄酮、总酚酸和环烯醚萜苷等大类成分的提取、分离，国内已有详细的专利及文献报道，例如，中国专利文献CN102988457A公开了一种用灰毡毛忍冬叶提取总黄酮的方法，包括水提醇沉、DlOl或AB — 8树脂纯化等步骤；中国专利CN103183616A提供了一 种从红腺忍冬叶中提取绿原酸的方法，包括醇提、凝絮沉淀、树脂分离、浓缩、重结晶等步骤；中国专利CN103142677A公开了一种从忍冬叶中提取酚酸类化合物的方法，具体步骤包括水煎煮提取、调节pH、聚酰胺柱纯化等步骤；胡润准以60%的乙醇破碎提取忍冬叶3次，每次2min，合并醇提液，浓缩，上聚酰胺柱以不同浓度的乙醇洗脱，得相应的洗脱份，即得绿原酸和总黄酮的分离产物(胡润准，袁珂，孙德梅.忍冬叶中绿原酸和总黄酮分离工艺的研究[J].河南科学，2006，17 (4):382-384.);姜洪芳等以70%的乙醇回流提取忍冬叶，浓缩后以正丁醇萃取，正丁醇相减压蒸干，上硅胶柱，再用乙酸乙酯、乙醇洗脱，洗脱液以甲醇或乙醇重结晶，得黄酮类化合物(姜洪芳，张卫明，张玖.忍冬叶黄酮类化合物的提取分离与结构鉴定[J].安徽农业科学，2008，36 (27):11795-11797.);马俊利等以75%的乙醇回流提取忍冬叶3次，合并提取液，减压浓缩，后以正丁醇萃取，取正丁醇层经硅胶色谱柱层析，以氯仿一甲醇梯度洗脱，后经反复硅胶色谱柱色谱和制备液相色谱分离纯化，再经重结晶处理，得到环烯醚萜苷类成分(马俊利，肖楠，宋琨.忍冬叶中的环烯醚萜苷类成分[J].中国实验方剂学杂志，2011，17 (9):121-123.)。
[0005]以上都是关于忍冬叶中绿原酸、总黄酮、总酚酸和环烯醚萜苷等大类成分的提取、分离，但有关忍冬叶总有效成分提取物的提取、纯化研究却甚少。马俊利用70%的乙醇回流提取干燥的金银忍冬叶3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏混悬于适量的水中，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯部分经反复硅胶色谱柱，以氯仿一甲醇(200:1—1:1)梯度洗脱，TLC检测，得10个流份，2— 4流份经硅胶色谱柱分离、纯化，得到目标产物(马俊利.金银忍冬叶化学成分的分离与鉴定[J].亚太传统医药，2013，9 (2):33-34.)。该方法使用较多有害溶剂，操作步骤繁琐，所得并非忍冬叶总有效成分提取物，而且其主要目的是为了分离忍冬叶中的化学成分并进行鉴定；胡润准，万焱用15倍量60%的乙醇提取忍冬叶3次，每次I小时，合并醇提液，减压浓缩，加入0.5%的活性炭煮沸0.5小时，过滤，在减压的条件下制备成干粉，将干粉加适量的水溶解后加在DlOl大孔吸附树脂柱上部，后用10%、20%、30%、40%、50%、60%和70%的乙醇作为洗脱剂进行洗脱，按每份IOOmL收集，以TLC检识并合并相同成分的洗脱液，分离得到绿原酸、总黄酮和其它成分(胡润准.万焱.忍冬叶活性成分分离工艺的研究[J].中成药，2007，29 (7):附6-附7.)。该方法中相同的洗脱组分要不断用TLC检识，操作步骤繁多，且分别用不同浓度乙醇洗脱、收集，大生产中难以实现，而且其得到的是分开的大类成分，并非忍冬叶总有成分提取物。
[0006]鉴于现有技术的不足，有必要发明一种新的制备忍冬叶有效提取物的制备方法，使之既能简化操作过程，在最大程度上少用或不用有害溶剂，适合工业化大生产，又能提高有效提取物中各有效成分的含量。
【发明内容】
[0007]本发明所要解决的技术问题是克服现有提取、纯化工艺的不足，提供一种简单、有效的制备忍冬叶有效提取物的方法。
[0008]本发明的发明目的是通过以下方式实现的。
[0009]本发明忍冬叶有效提取物的制备方法包括:醇回流提取、调酸过滤、大孔树脂洗脱除杂和浓缩、干燥等步骤。
[0010]进一步，本发明所涉及的一种忍冬叶有效提取物的制备方法包括以下步骤:
[0011]I)取忍冬叶，用乙醇溶液回流提取，滤过，合并滤液，减压浓缩，待用；
[0012]2)步骤I)浓缩液调pH值至1.0~6.0，过滤，待用；
[0013]3)步骤2)滤液以3BV/h的速度加于预处理好的径高比为1:5的大孔树脂柱上，调节纯水pH至1.0~6.0，洗至洗脱液澄清，再用7倍柱床体积的60%的乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得忍冬叶有效提取物。
[0014]优选地，步骤2)浓缩液调节pH值至5.0 ；
[0015]优选地，步骤3)所述的大孔树脂为弱极性、中级性和极性大孔树脂中的一种。
[0016]优选地，步骤3)所述的大孔树脂为 AB-8、HPD400、HPD100, HPD826、LS-300B、LS-303中的一种，最优为LS-303B。
[0017]优选地，步骤3)用盐酸调节纯水pH至5.0 ;
[0018]优选地，步骤3)所述的干燥方法为真空干燥、微波真空干燥中的一种，最优为微波
真空干燥。
[0019]与现有技术比较，本发明忍冬叶有效提取物制备方法具有以下显著的进步:
[0020]1、操作简单，条件可控，具良好的可重复性，所用大孔树脂可重复利用，制备成本低且不污染环境，适合工业化生产；
[0021]2、本发明使用乙醇溶液作为提取纯化溶剂，廉价易得，有效提取物无有害溶剂残留，所得的忍冬叶有效提取物药物安全性高；
[0022]3、与现有的忍冬叶有效成分制备方法相比较，用本发明方法制备的有效提取物中绿原酸、总酚酸、总黄酮含量高，经测定，其总酚酸含量在58%以上，总黄酮在15%以上；
[0023]4、与现有忍冬叶有效成分提取分离方法相比较，用本发明方法制备的忍冬叶有效提取物成分全，不仅含绿原酸、环烯醚萜苷类，也含有酚酸类和黄酮类等成分，与忍冬叶各组分天然比例接近。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1.水洗脱部位
[0025]图2.10%醇洗脱部位
[0026]图3.30%醇洗脱部位
[0027]图4.60%醇洗脱部位
【具体实施方式】
[0028]以下通过忍冬叶提取及纯化工艺试验例和忍冬叶有效提取物制备的【具体实施方式】对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0029]实施例1忍冬叶纯化工艺优选 [0030]I大孔树脂型号选择试验设计
[0031]忍冬叶中酚酸类具有一定的极性和水溶性，且多酚羟基，易和大孔树脂形成氢键，故本工艺选用以下六种对酚羟基具有较好富集效果的树脂作为考察目标，进行筛选。
[0032]根据酚酸类的性质和树脂的吸附性能，选择AB-8、HPD400、HPD100, HPD826、LS-300B、LS-303六种型号的大孔树脂供优化选择，其主要性能见表1。
[0033]表1各型号大孔树脂的性能
【权利要求】
1.一种忍冬叶有效提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)取忍冬叶，用乙醇溶液回流提取，滤过，合并滤液，减压浓缩，待用； 2)步骤I)浓缩液调pH值至1.0~6.0，过滤，待用； 3)步骤2)滤液以3BV/h的速度加于预处理好的径高比为1:5的大孔树脂柱上，调节纯水pH至1.0~6.0，洗至洗脱液澄清，再用7倍柱床体积的60%的乙醇以2BV/h的流速洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得忍冬叶有效提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)浓缩液调节pH值至5.0。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述的大孔树脂为弱极性、中级性和极性大孔树脂中的一种。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂的型号为AB-8、HPD400、HPD100, HPD826、LS-303、LS-300B 中的一种。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述大孔树脂为LS-300B型。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)用盐酸调节纯水pH值至5.0。
7.如权利要求1 所述的方法，其特征在于，步骤3)的干燥方法为真空干燥或微波真空干燥中的一种。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的干燥方法为微波真空干燥。
【文档编号】A61K127/00GK103830306SQ201410057244
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年2月20日 优先权日:2014年2月20日
【发明者】赵志全, 苏瑞强, 李守信, 李蔚群 申请人:鲁南制药集团股份有限公司