一种去毒何首乌提取物及其制备方法
【专利摘要】一种去毒何首乌提取物及其制备方法，属于中药【技术领域】。按照何首乌粗粉:溶剂=1:4～20（重量）的比例，回流提取2～3次，每次1～4小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏，其中所述溶剂为甲醇或乙醇，浓度为30～80%；将上述何首乌流浸膏加水稀释，何首乌流浸膏:水=1:4～10（重量），稀释液经大孔吸附树脂柱富集，收集过柱液、水洗液以及乙醇洗脱液，合并以上溶液，减压回收溶剂，得到浓缩液，浓缩液干燥，即得到去毒何首乌提取物。本发明应用大孔吸附树脂分离技术，有效去除何首乌中蒽醌类成分，制成无毒何首乌提取物，该方法简单，适合工业化生产。
【专利说明】一种去毒何首乌提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种去毒何首乌提取物，具体涉及去毒何首乌提取物及其制备方法， 属于中药【技术领域】。 技术背景
[0002] 何首乌为寥科植物首乌（Polygonum multiflorum Thunb.)千燥块根，味苦、湿，性 温。归肝、心、肾经，具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效，是中药常用补益药。现代 药理研究发现何首乌具有延缓衰老，益智，提高DNA修复功能，延长寿命，降低胆固醇以及 改善脂肪代谢等药理作用。临床上用于治疗高血脂、脱发以及久病体虚等症。然而近年来， 国内外相继出现了多起何首乌的毒性与不良反应的报道[1、陈盛君.何首乌肝损伤不良反 应信息分析及其毒性机制研究进展[J]·中国医院药学杂志， 2〇13,〇7:573-577·和2、练祥， 柯婷婷，胡爱荣.何首乌及其制剂致药物性肝损伤52例临床分析.中华中医药学刊.2013， 31 (5) : 1133-11：Μ·]，引起了人们对何首乌毒性的重视。研究发现何首乌毒性来自于其中 蒽醌类化学成分，长时间或大剂量服食蒽醌类成分会导致药物性肝损伤（drug-induced liver injury，DILI)。为保证用药安全，满足人们对健康保健的需求，本发明利用现代提取 分离技术，制备去毒何首乌提取物，该发明成果对于何首乌的开发应用具有广阔的前景和 现实意义。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是制备去毒何首乌提取物。
[0004] -种去毒何首乌提取物的制备方法，其特征在于，其制备方法如下：
[0005] (1)将何首乌药材粉碎成粗粉，按照何首乌粗粉：溶剂=1:4?20 (重量）的比例， 回流提取2?3次，每次1?4小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏，其中所述溶剂为甲醇或乙 醇，浓度为30?80%;
[0006] (2)将上述何首乌流浸膏加水稀释，何首乌流浸膏：水=1:4?10 (重量)，稀释液 经大孔吸附树脂柱富集，收集过柱液、水洗液以及乙醇洗脱液，合并以上溶液，减压回收溶 剂，得到浓缩液，浓缩液干燥，即得到去毒何首乌提取物。
[0007] 上述步骤（1)中的何首乌药材为寥科植物首乌（Polygonum multiflorum Thunb.) 千燥块根。
[0008] 优选步骤（1)每lmL流浸膏相对于原药材lg。
[0009] 上述步骤（2)中所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性大孔吸附树脂，优选为D101 或AB-8型大孔吸附树脂。
[0010] 上述步骤（2)中所述大孔吸附树脂纯化条件为：药材量与树脂比（g:g)为1:1? 5,树脂层析柱径尚比1:3?9,上样流速0. 1?lmL/min/g树脂，然后分别用去尚子水和 20?60wt%乙醇水溶液洗脱，其中去离子水的用量为2?5倍体积的树脂，乙醇水溶液的用 量为5?10倍树脂体积，洗脱流速为1?3mL/min/g树脂。
[0011] 上述步骤（2)中所述大孔吸附树脂纯化优选条件为药材量与树脂比（g:g)为1:2， 树脂层析柱径高比1:9,上样流速0. lmL/min/g树脂，然后用去离子水3倍量和40wt%乙醇 8倍量洗脱，洗脱流速为2mL/min/g树脂。
[0012] 上述步骤（2)中干燥方法为减压千燥、喷雾干燥或冷冻干燥。
[0013] 采用高效液相进行检测，检测条件：色谱柱为0DS色谱柱；流动相为甲醇⑶-水 (A)，梯度洗脱（〇 ?2min，25%B ?35%B ;2 ?lOmin，35%B ?50%B ; 10 ?15min，50%B ?70%B ; 15 ?20min，70%B ?90%B)，检测波长为 254 或 280nm。
[0014] 本发明方法与现有技术相比具有以下有益效果：
[0015] 1)本发明方法为现代提取分离技术，分离效果好，操作性强，适合工业化生产。
[0016] 2)何首乌毒性成分蒽醌去除率可达80%以上。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1蒽醌对照品HPLC色谱图；
[0018] 图2为实施例1步骤（1)提取液HPLC色谱图；
[0019] 图3为实施例1去毒何首乌提取物HPLC色谱图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。
[0021] 实施例1
[0022] (1)将何首乌药材粉碎成粗粉，称取何首乌粗粉lOOOg，加入50%乙醇15倍量回流 提取2次，每次1. 5小时，合并滤液，减压回收乙醇至lOOOmL,加去离子水5000mL，混匀，备 用。
[0023] (2)取AB-S型大孔吸附树脂2000g，按照大孔吸附树脂预处理方法处理完毕后装 入层析柱，层析柱径高比1:9,将（1)中药液加入层析柱，上样流速为1. OmL/min/g树脂，同 时收集过柱液，待药液流干后，加入3倍量树脂体积的去离子水洗洗脱，洗脱流速为2mL/ min/g树脂，收集水洗脱液，然后再用30%乙醇8倍量洗脱，2mL/min/g树脂，收集30%乙醇 洗脱液。
[0024] (3)将过柱液、水洗液以及3〇%乙醇洗脱液合并，减压回收溶剂，得到浓缩液，浓缩 液经减压千燥，即得到去毒何首乌提取物183g。
[0025]将实施例1得到的提取物进行高效液相检测，以纯化前后蒽醌色谱峰总峰面积计 算，去毒何首乌提取物中蒽醌类化学成分含量为纯化前的15. 77%，去除率达到84. 23%。 [0026] 实施例2
[0027] (1)将何首乌药材粉碎成粗粉，称取何首乌粗粉100g，加入40%乙醇15倍量回流 提取2次，每次1小时，合并滤液，减压回收乙醇至lOOmL，加去离子水400mL，混匀，备用。 [0028] (2)取D101型大孔吸附树脂l〇〇g，按照大孔吸附树脂预处理方法处理完毕后装 入层析柱，层析柱径局比1:6,将（1)中药液加入层析柱，上样流速为〇. 5mL/min/g树脂，同 时收集过柱液，待药液流千后，加入2倍量树脂体积的去离子水洗洗脱，洗脱流速为2. 5mL/ min/g树脂，收集水洗脱液，然后再用5〇%乙醇8倍量洗脱，2. 5mL/min/g树脂，收集50%乙 醇洗脱液。
[0029] (3)将过柱液、水洗液以及50%乙醇洗脱液合并，减压回收溶剂，得到浓缩液，浓缩 液经减压千燥，即得到去毒何首乌提取物20. 08g。提取物进行高效液相检测，以纯化前后蒽 醌色谱峰总峰面积计算，蒽醌去除率不低于82%。
[0030] 下面试验进一步说明本发明：
[0031] 检测方法：高效液相色谱法
[0032] 检测条件：色谱柱为Hypersil 0DS (4. 6X250mm，5ym);流动相为甲醇（B)-水 (A)，梯度洗脱（0 ?2min，25%B ?35%B ;2 ?lOmin，35%B ?50%B ; 10 ?15min，50%B ?70%B ; 15 ?20min，7〇%B ?9〇%B)，检测波长为 280nm。
[0033] 蒽醌对照品：大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素。
【权利要求】
1. 一种去毒何首乌提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： ((1)将何首乌药材粉碎成粗粉，按照何首乌粗粉：溶剂=1:4?20 (重量）的比例，回 流提取2?3次，每次1?4小时，滤液回收溶剂，得到流浸膏，其中所述溶剂为甲醇或乙醇， 浓度为30?80% ; (2)将上述何首乌流浸膏加水稀释，何首乌流浸膏：水=1:4?1〇 (重量)，稀释液经大 孔吸附树脂柱富集，收集过柱液、水洗液以及乙醇洗脱液，合并以上溶液，减压回收溶剂，得 到浓缩液，浓缩液干燥，即得到去毒何首乌提取物。
2. 根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤（1)中所述何首乌药材为寥科植物首乌 (Polygonum multiflorum Thunb.)千燥块根。
3. 根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤（2冲所述大孔吸附树脂为非极性或弱极 性大孔吸附树脂。
4. 根据权利要求1的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂为D101或AB-8型大孔吸附 树脂。
5. 根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤（1)每lmL流浸膏相对于原药材lg。
6. 根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤（2)中大孔吸附树脂纯化条件为：药材量 与树脂比（g:g)为1:1?5,树脂层析柱径高比1:3?9,上样流速0· 1?lmL/min/g树脂， 然后分别用去离子水和20?60wt%乙醇水溶液洗脱，其中去离子水的用量为2?5倍体积 的树脂，乙醇水溶液的用量为5?10倍树脂体积，洗脱流速为1?3mL/min/g树脂。
7. 根据权利要求6的方法，其特征在于，步骤（2)中大孔吸附树脂纯化优选条件为：药 材量与树脂比（g:g)为I:2,树脂层析柱径高比1:9,上样流速0. lmL/min/g树脂，然后用去 离子水3倍量和40wt%乙醇8倍量洗脱，洗脱流速为2mL/min/g树脂。
8. 根据权利要求1的方法，其特征在于，步骤（2)中干燥方法为减压干燥、喷雾干燥或 冷冻干燥。
9. 按照权利要求1_8所述的任一方法得到的去毒何首乌提取物。
10. 按照权利要求1-8所述的任一方法得到的去毒何首乌提取物的检测方法，其特征 在于，采用高效液相法，检测条件：色谱柱为0DS色谱柱；流动相为甲醇（B)-水（a)，梯度 洗脱（0 ?2min，25%B ?35%B ;2 ?10min，35%B ~ 50%B ;10 ?15min,50%B ?70%B ;15 ? 2〇min，70%B ?90%B)，检测波长为 254 或 280nm。
【文档编号】A61K36/704GK104189103SQ201410115293
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年3月25日 优先权日:2014年3月25日
【发明者】李霄, 王小虎, 李泽琳, 邓振涛 申请人:北京工业大学