一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液，隔日注射一次，共注射2～4次使豚鼠致敏；(2)在步骤(1)末次致敏后第12～15天，使豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐水溶液，从而激发气道过敏性哮喘，即得。与现有方法比，本发明所述制备方法模拟雾化吸入给药，模拟鼻腔给药的吸入制剂，靶器官唯一，针对性强，而普通豚鼠静脉注射激发过敏试验无法预测呼吸道吸入药物是否引起过敏。实验证明该制备方法致敏效果良好，以仅经口鼻吸入雾化的OVA生理盐水溶液为途径进行致敏激发，成功地建立了豚鼠气道过敏性哮喘模型。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明属生物医学领域，具体涉及一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法。 一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法
【背景技术】
[0002] 目前，随着对肺疾病和呼吸功能的了解愈发深入，鼻腔给药的应用范围逐渐扩大， 各类吸入制剂作为行之有效的治疗手段也越来越受重视。定量吸入气雾剂因具有靶向和局 部给药的特点，已成为哮喘和慢性阻塞性肺病最有效的维持治疗方式。而哮喘本身对呼吸 道过敏及其敏感，判断吸入药物是否对患者具有过敏性非常重要。
[0003] 通常采用低剂量卵白蛋白（0VA)构建豚鼠过敏性哮喘模型，致敏阶段：哮喘模型 组在腹腔注射3mg/mL卵白蛋白生理盐水加氢氧化铝（粉剂）作为免疫佐剂致敏，分3次反 复致敏；末次致敏后14天通过静脉注射卵白蛋白，激发后即刻起至少观察30分钟，观察豚 鼠过敏征状。该方法可出现过敏反应征状，但无法模拟鼻部吸入给药时，靶器官为呼吸道的 过敏性哮喘，具有局限性。
【发明内容】
[0004] 本发明针对目前缺乏豚鼠气道过敏性哮喘模型这一临床上常见疾病的疾病动物 模型的现状，提供用于一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种豚鼠气道过敏性哮喘 模型的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0006] (1)向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液，隔日注射一次，共注射2?4次使豚 鼠致敏；
[0007] (2)在步骤⑴末次致敏后第12?15天，使豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生 理盐水溶液，从而激发气道过敏性哮喘，即得。
[0008] 其中步骤（1)所述的注射为本领域常规的注射方法，较佳地为腹腔注射。其中所 述卵白蛋白生理盐水溶液的浓度较佳地为2?5mg/ml，优选地为3mg/ml。
[0009] 其中步骤（1)所述的卵白蛋白生理盐水溶液的注射的剂量较佳地为2?5ml/kg， 优选地为3ml/kg。
[0010] 其中步骤（1)所述向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液，隔日注射一次的方法 较佳地为：在豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液的第一天，第三天和第五天，共注射三次 卵白蛋白生理盐水溶液。
[0011] 其中步骤⑵所述的雾化的卵白蛋白生理盐水溶液浓度较佳地为4?7mg/ml，优 选地为5mg/ml。
[0012] 其中步骤（2)所述的雾化的卵白蛋白生理盐水溶液的流速较佳地为2. 0?3. 0升 /分，优选地为2. 5升/分。
[0013] 其中步骤⑵所述使豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐水溶液的方法为 本领域常规方法，较佳地是利用ΙΝ-Τ0Χ小动物鼻式暴露系统使豚鼠经由口鼻吸入雾化的 卵白蛋白生理盐水溶液。
[0014] 其中步骤（2)所述的豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐水溶液的时间较 佳地为15?25分钟，优选地为20分钟。
[0015] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发
[0016] 明各较佳实例。
[0017] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0018] 本发明的积极进步效果在于：与现有方法比，本方法模拟雾化吸入给药，模拟鼻腔 给药的吸入制剂，靶器官唯一，针对性强，选择性强、重复性好。而且普通豚鼠静脉注射激发 过敏试验无法预测呼吸道吸入药物是否引起过敏。实验证明致敏效果良好，以仅经鼻雾化 吸入0VA为途径进行致敏激发，成功地诱发了气道过敏性哮喘，成功建立了豚鼠气道过敏 性哮喘模型。
【具体实施方式】
[0019] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0020] 实施例1制备豚鼠气道过敏性哮喘模型
[0021] 实验动物：采用豚鼠12只，雌雄各半。Hartley-Dunkin，SPF级，体重300?360g, 购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
[0022] 实验用卵白蛋白（0VA)购买自SIGMA公司。
[0023] 饲养环境为：温度：20?26°C;湿度：40%?70%;换气次数：每小时换气次数不小 于15次，使用100%的全新风（无空气循环）。光照：自动光照，每12小时明暗交替，7:00ΡΜ 关灯，次日7:00AM开灯。
[0024] 豚鼠气道过敏性哮喘模型制备方法主要分为致敏期和激发期两个阶段。
[0025] 致敏期为：豚鼠腹腔注射3mg/ml 0VA生理盐水溶液3ml/kg致敏，隔日注射1次， 给药时间为Dl、D3和D5天，共给药3次。
[0026] 激发期为：上述末次致敏后第14天（D19)，单次雾化给药激发：将豚鼠置入 ΙΝ-Τ0Χ小动物鼻式暴露系统的动物试管，将动物试管插入暴露舱内。吸入雾化的0VA生理 盐水溶液（0VA生理盐水溶液的浓度为5mg/ml)进行攻击，吸入雾化的0VA生理盐水溶液的 时间为20min。
[0027] 激发途径为吸入雾化的OVA生理盐水溶液。设定雾化生理盐水溶液的流速：按照 豚鼠的最小呼吸量，一次暴露6只动物，设定流速为2. 5升/分。运用ΙΝ-Τ0Χ鼻式暴露系统， 动物在暴露试管内，仅有口鼻接触药物，能最大程度上模拟临床上吸入药物的给药途径。将 实验动物分为两组，其中组1为阴性对照组，组2为0VA激发组。
[0028] 所得结果为：致敏期各组豚鼠均无异常表现。激发期：激发后立即观察动物表现， 观察有无出现颤抖、坚毛、呼吸困难、步态不稳、痉挛、休克以及死亡等反应征状，按表1的 标准对过敏反应的强度进行判断。致敏期间每日2次进行动物的一般观察，上、下午各1次 (致敏给药当天给药前、后各1次）；激发后即刻起至少观察30分钟，观察以下征状，征状 0-20为：0、正常；1、躁动；2、坚毛；3、颤抖；4、搔鼻；5、喷嚏；6、咳嗽；7、呼吸急促；8、排尿； 9、排粪；10、流泪；11、呼吸困难；12、哮鸣音；13、紫癜；14、步态不稳；15、跳跃；16、喘息； 17、痉挛；18、横转；19、潮式呼吸；20、死亡。若出现以上症状，记录出现及消失时间，观察最 长不超过3小时。根据表1判断过敏反应发生程度。
[0029] 表1豚鼠全身致敏性标准
[0030]
【权利要求】
1. 一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步 骤： (1) 向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液，隔日注射一次，共注射2?4次使豚鼠致 敏； (2) 在步骤（1)末次致敏后第12?15天，使豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐 水溶液，从而激发气道过敏性哮喘，即得。
2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述卵白蛋白生理盐水溶液的 浓度为2?5mg/ml。
3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述卵白蛋白生理盐水溶液的 浓度为3mg/ml。
4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述卵白蛋白生理盐水溶液的 注射的剂量为2?5ml/kg。
5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述卵白蛋白生理盐水溶液的 注射的剂量为3ml/kg。
6. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述的雾化的卵白蛋白生理盐 水溶液的浓度为4?7mg/ml。
7. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述的雾化的卵白蛋白生理盐 水溶液的流速为2. 0?3. 0升/分。
8. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述的使豚鼠经由口鼻吸入雾 化的卵白蛋白生理盐水溶液的方法是利用IN-TOX小动物鼻式暴露系统给予豚鼠雾化的卵 白蛋白生理盐水溶液。
9. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述的豚鼠经由口鼻吸入雾化 的卵白蛋白生理盐水溶液的时间为15?25分钟。
10. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述的豚鼠经由口鼻吸入雾 化的卵白蛋白生理盐水溶液的时间为20分钟。
【文档编号】A61K38/38GK104096220SQ201410328516
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年7月10日 优先权日:2014年7月10日
【发明者】马璟, 李华, 胡天羽, 史民华, 刘毅, 黄欢夏, 南雅萍 申请人:上海益诺思生物技术有限公司