抑制性寡核苷酸对tlr9的调控对急性胰腺炎的改善作用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了抑制性寡核苷酸对TLR9的调控对急性胰腺炎的改善作用。本发明根据CpG0DN的序列特点构建多条抑制性的寡核苷酸序列，以小鼠巨噬细胞作为抑制性寡核苷酸的筛选平台，筛选出最具有抑制活性的寡核苷酸序列，运用寡核苷酸抑制TLR9受体，并根据相关指标评估寡核苷酸的安全性和作用机制，为SAP的治疗提供新方法，同时也为Toll受体介导的其他自身免疫性疾病的治疗提供新思路。
【专利说明】抑制性寡核苷酸对TLR9的调控对急性胰腺炎的改善作用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制备【技术领域】，涉及抑制性寡核苷酸对TLR9的调控对急性胰腺 炎的改善作用。
【背景技术】
[0002] 重症急性胰腺炎（SAP)属于急性胰腺炎的特殊类型，是一种病情险恶、并发症多、 病死率较高的急腹症，占整个急性胰腺炎的10%?20%。20世纪80年代，多数病例死于疾 病早期，直至近10年来，随着SAP外科治疗的进展，治愈率有所提高，但总体死亡率仍高达 17 %左右，仍是本世纪的医学难题。
[0003] SAP的发病机制主要是胰液对胰腺及其周围组织自身消化的结果与获得性免疫失 调有关。过去研究认为，白细胞的过度激活以及炎性细胞因子在重症胰腺炎导致的全身性 炎症中起重要作用，在SAP中这些炎性细胞因子互相关联和累积作用，可导致血管渗漏、低 血容量、多系统器官衰竭等危象的发生。最近，国外的研究发现Toll样受体9在SAP的发 生进展中起着重要的作用，TLR9识别CpG DNA激活细胞内信号转导，活化转录因子从而引 起炎症因子的大量释放，引起急性胰腺炎从局部病变。
【发明内容】
[0004] 抑制性寡核苷酸对TLR9的调控对急性胰腺炎的改善作用。
[0005] CpG 0DN与TLR9结合以后，诱导TLR9二聚化的形成，TLR9通过TIR结构域募 集Myd-88。Myd-88含2个蛋白反应结构域，即羧基末端的TIR结构域和氨基末端的死亡 结构域（death domain, DD)，所以，Myd88又可以吸引具有相同DD的IL-1受体相关激酶 (IL-lreceptor associated kinase，IRAK)至受体复合物。IRAK自动憐酸化后从受体复合 物上解离，与接转蛋白了即受体相关因子6(1即-代06口1：01'-3880(^3七6(1€3(31：016，1狀?6)相 互作用，TRAF6能够活化NF- κ B诱导激酶，诱导I- κ B的降解，从而使NF- κ B得以游离并 迁移到细胞核中，启动下游基因的转录。有研究表明，树突状细胞在CpG-ODN刺激的最初6h 可以观察到IFN调节因子7基因表达的上调和IFN-α的分泌。目前认为CpG 0DN的这一 作用是P38MAPK和STAT1依赖的。P38MAPK信号途径是MAPK家族中的重要组成部分，又称 为MAPK应急信号通路，在炎性反应中具有十分重要的作用。Myd88依赖的信号途径中活化 的TRAF6可通过接转蛋白ECSIT作用于MAPK-1，经p38MAPK进一步活化c-Jun/Fos，最终均 可激活免疫应答基因。另有研究发现TRAF6还可激活TGF-β活化激酶-1，继而刺激MAPK， 激活JNK，表明CpG 0DN可通过激活不同的MAPK途径而发挥作用。为临床防治感染性疾病、 变态反应性疾病，特别是恶性肿瘤这一人类难题提供了有益疗效。
[0006] Toll样受体9在SAP的发生进展中起着重要的作用，TLR9识别CpG DNA激活细胞 内信号转导，活化转录因子引起炎症因子的大量释放，引起急性胰腺炎从局部病变迅速进 展为全身炎症。TLR9受体的过强激活，给机体产生过强的免疫反应从而带来内毒素性的休 克以及自身免疫性疾病等。因此以TLR9为靶点，可能成为重症急性胰腺炎新治疗途径。抑 制性ODN是一种靶向性、特异性的治疗手段，可以针对TLR9进行特异性的抑制，但其抑制性 强弱与0DN骨架的硫代修饰、0DN的长度和核苷酸序列特异性等相关。
【专利附图】
【附图说明】
[0007] 图1所示为免疫荧光染色显示TLR9主要表达在Panc-Ι细胞胞浆中（x200)。
[0008] 图2为TLR9蛋白在胰腺癌组织（A)、癌旁胰腺组织（B)及正常胰腺组织（C)中的 表达（x200)。
[0009] 图3为不同浓度CPG 0DN2216对胰腺癌细胞株Panc-Ι增殖的影响。
[0010] 图4为0h、48h各组Panc-Ι细胞划痕实验（x400)。
[0011] 图5为小室测定Panc-Ι细胞侵袭力（x200)。其中A.对照组较多Panc-Ι细胞穿过 滤膜；B. CPG 0DN1 μ g/ml 组过膜 Panc-Ι 细胞显著减少。C. CPG 0DN10 μ g/ml 组过膜 Panc-1 细胞进一步减少。
【具体实施方式】
[0012] 下面进行的实验结果结合附图对本发明进行详细说明。
[0013] 抑制性寡核苷酸对TLR9的调控对急性胰腺炎的改善作用；
[0014] 实验结果如表1所示为各组Panc-Ι细胞不同时间点划痕的宽度(?士幻。
[0015] 表 1
[0016]
【权利要求】
1.抑制性寡核苷酸对TLR9的调控对急性胰腺炎的改善作用。
【文档编号】A61K48/00GK104208722SQ201410445774
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】吴汉青 申请人:吴汉青