藿香油抗卵巢癌新用途
【专利摘要】本发明公开了藿香油在制备预防、治疗或辅助治疗卵巢癌的保健食品、食品、药品中的用途。本发明藿香油具有抗肿瘤的作用，尤其是对卵巢癌的抑制作用显著，具有良好的临床应用前景。
【专利说明】藿香油抗卵巢癌新用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及藿香油的新用途，特别涉及藿香油在制备抗卵巢癌保健食品、食品、药 品中的用途。
【背景技术】
[0002] 卵巢恶性肿瘤（卵巢癌）是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子 宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。由于卵巢的胚胎发育、组织解剖及内分泌功能较复杂，早 期症状不典型，术前鉴别卵巢肿瘤的组织类型及良恶性相当困难。卵巢恶性肿瘤中以上皮 癌最多见，其次是恶性生殖细胞肿瘤。卵巢上皮癌患者手术中发现肿瘤局限于卵巢的仅占 30%，大多数已扩散到子宫，双侧附件，大网膜及盆腔各器官，所以在早期诊断上是一大难 题。卵巢上皮癌（即上皮性卵巢癌）死亡率却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严 重威胁。
[0003] 目前卵巢癌的治疗手段主要是以手术治疗联合化疗，副作用明显。因此，寻找一种 高效、安全、副作用少的抗肿瘤药物的研宄势在必行。
[0004] 我国的中药资源极为丰富，应用历史悠久，在长期的实践中积累了很多资料和经 验。中药防治肿瘤具有疗效显著、副作用小、费用少等优势，长期被广大临床工作者所沿用。 一些中药可阻断或抑制肿瘤细胞DNA、RNA和蛋白质的合成，从而使癌细胞的增殖受到抑 制，并干扰肿瘤细胞能量代谢或具有直接抑杀癌细胞作用。如冬凌草、重楼、三七、山豆根、 天南星、天门冬、百合、莪术、瓜萎、薏苡仁、龙葵、郁金、女贞子等。一些中药可通过影响癌基 因和抑癌基因的表达、诱生和促使机体细胞产生细胞因子等促进肿瘤细胞的凋亡，如黄芪、 当归、枸杞子等可通过诱导白细胞介素-2 (IL-2)、干扰素等细胞因子，诱导LAK细胞凋亡或 增加TNF诱导凋亡的能力。另外，银杏外种皮多糖、白藜芦醇、苦参碱、天花粉蛋白、灵芝醇 提取物、人参皂苷、当归的丙酮提取物均有调控凋亡基因bcl-2和抑凋亡基因Bax表达的作 用，从而实现对肿瘤细胞凋亡的调节，达到抑制肿瘤作用。黄芪、人参、党参、麦冬、白术、甘 草、女贞子、枸杞子、生地、当归等能改善或恢复肿瘤患者紊乱的T细胞免疫功能状态，升高 ⑶3 +、⑶4+以及⑶4 7⑶8+比值。还有不少中药可以提高机体应激能力，减轻化疗、放疗毒副 作用，如黄精、黄芪、鸡血藤、地龙、五味子、何首乌、薏苡仁、仙茅、淫羊藿、天冬、麦冬、天花 粉、石斛、石韦等。因此中药抗肿瘤有着潜在优势和广阔的前景。
[0005] 广藿香为唇形科（Labiatae)多年生刺蕊草本植物广藿香（Pogostemon Cablin(Blanco)Benth.)，又名枝香，原产菲律宾等热带亚洲，现广泛分布在中国、印度、日 本、印度尼西亚、马来西亚、马达加斯加、巴西、巴拉圭和俄罗斯等。目前广蕾香在广东的广 州、肇庆、湛江以及海南、广西、四川等省（区）均有栽培，是"十大南药"之一，其药材商品按 产地不同分为牌香（广州产）、枝香（肇庆产）、湛香（湛江产）和南香（海南产）4种。其 味辛，性微温，归脾、胃、肺经，以全草入药，具有芳香化浊、开胃止呕、发表解暑之功效。常用 于湿浊中阻、脘痞呕吐，暑湿倦怠、胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛、外感风寒。广 藿香的挥发油具有抗炎、镇痛和抗菌活性。
[0006] 藿香为唇形科植物藿香Agastache rugosa(Fisch. Et Mey. )0? Ktze?的干燥地上 部分，含有挥发油，功效同广藿香。现代药理表明，广藿香具有抗病原微生物、抗炎、解热、镇 痛等作用，是藿香正气水、抗病毒口服液等治疗流感、感冒常用中成药的主要成分，但其药 效物质基础尚不明确且未见有其体内抗流感病毒作用报道。藿香的挥发油具有抗菌作用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供藿香油的新用途，以及以藿香油为活性成分的保健食品、 食品、药品。
[0008] 本发明具体是提供了藿香油在制备预防、治疗或辅助治疗卵巢癌的保健食品、食 品、药品中的用途中的用途。
[0009] 进一步地，所述卵巢癌为上皮性卵巢癌。
[0010] 其中，所述的藿香油来源于广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.或藿香 Agastache rugosa(Fisch. Et Mey.) 0? Ktze?提取的挥发油。
[0011] 进一步地，所述源于广藿香Pogostemon Cablin(Blanco)Benth?的挥发油，百秋李 醇含量不低于26% w/w。
[0012] 更进一步地，所述源于广藿香Pogostemon Cablin(Blanco)Benth?的挥发油，百秋 李醇含量为26?40% w/w。
[0013] 本发明的一个【具体实施方式】中，使用的广藿香挥发油中，白秋李醇含量约为40% /w/w〇
[0014] 更进一步地，所述的藿香油是按照如下方法制备：取广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.或藿香Agastache rugosa(Fisch. Et Mey. )0? Ktze.的全草，粉碎成 粗粉，加水，浸泡，采用水蒸气蒸馏法提取，即得。
[0015] 本发明一个【具体实施方式】中，所使用的藿香油来源于广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth. 〇
[0016] 其中，它是以藿香油为活性成分，加上保健食品、食品、药品上可接受的辅料或辅 助性成分制备而成的制剂。
[0017] 本发明所述药学上可接受的辅料，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质，包 括但不仅限于填充剂（稀释剂）、润滑剂（助流剂或抗粘着剂）、分散剂、湿润剂、粘合剂、调 节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨 醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物（如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基 纤维素等）、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉 及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐（如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等）、 山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、 聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物（如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、 改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等）、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二 烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑 菌剂包含〇. 5%苯酚、0. 3%甲酚、0. 5%三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾 (钠）、枸橼酸钠及缓冲剂（包括磷酸二氢钠和磷酸氢二钠）等；乳化剂包含聚山梨酯-80、 脂肪酸山梨坦、普流罗尼克F-68,卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
[0018] 所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改 变上述化合物或衍生物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功 效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成 分与本发明化合物配合使用，仍然应属于本发明保护的范围。
[0019] 进一步地，所述的制剂为液体制剂、气体制剂、固体制剂、半固体制剂。
[0020] 更进一步地，所述制剂中藿香油的含量为0. 1 %?100% (w/w)。
[0021] 本发明藿香油具有抗肿瘤的作用，尤其是对卵巢癌的抑制作用显著，具有良好的 临床应用前景。
[0022] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0023] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【具体实施方式】
[0024] 本发明使用的广藿香油可购买市售产品，亦可通过水蒸气蒸馏法提取，其中，广藿 香油的质量必须符合《中国药典》一部中的相关规定，百秋李醇含量不低于26% w/w。
[0025] 实施例1本发明藿香油的制备
[0026]取广藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth?全草，粉碎过 20-40 目筛，加入 10-14倍重量的蒸馏水，浸泡1-5小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时，即得本发明藿香 油，又称广藿香油。
[0027] 经检测，本发明方法制备的广藿香油中，含百秋李醇（C15H 26O)约40% w/w。
[0028] 实施例2本发明藿香油的制备
[0029]取藿香 Agastacherugosa(Fisch.EtMey. )0?Ktze?全草，粉碎过20-40目筛，加 入10-14倍重量的蒸馏水，浸泡P 5小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时，即得本发明 藿香油。
[0030] 本发明藿香油也可按照药典（2005年版）附录XD挥发油测定法提取，还可采用有 机溶剂提取、超临界CO 2萃取等现有技术进行提取，或者通过购买市售产品获得。
[0031] 实施例3本发明食品
[0032] 取实施例1或实施例2制备的藿香油与杨梅，加适量橘皮粉、桂皮粉、砂糖、公丁香 粉、甘草粉、小茴香粉、食盐及明矾，制备杨梅蜜饯。
[0033] 取杨梅备妥后先放一层约20cm厚的杨梅，再放一层混合的食盐、明矾、百秋李醇， 马上压紧。以后同样相间放杨梅和食盐明矾百秋李醇混合物，经压紧腌制后即成杨梅坯。取 杨梅还需加砂糖、香料粉、橘皮粉、桂皮粉、公丁香粉、甘草粉、小茴香粉后，再经浸水、晚晒、 拌料、包装，即得杨梅蜜饯。
[0034] 实施例4本发明保健食品
[0035] 取实施例1或实施例2制备的藿香油，加适量羧甲基纤维素钠，与适量经萎凋槽萎 凋、双锅杀青机杀青、揉捻机揉捻后的茵陈、砂仁、枸杞、佛手、大青叶鲜茶、菊花、决明子、金 银花、白术、山萸肉、白芍、桑叶、五味子、小茴香、山药混合均匀，制备养肝茶。
[0036] 实施例5本发明药品
[0037] 取实施例1或实施例2制备的藿香油，加适量羧甲基纤维素钠，与适量经萎凋槽萎 凋、双锅杀青机杀青、揉捻机揉捻后的茵陈、砂仁、枸杞、佛手、大青叶鲜茶、菊花、决明子、金 银花、白术、山萸肉、白芍、桑叶、五味子、小茴香、山药混合均匀，制备养肝茶。
[0038] 以下通过药理试验证明本发明的有益效果：
[0039] 实验例1本发明藿香油体外抗肿瘤实验
[0040] 1、材料及仪器
[0041] 1.1细胞株
[0042] A2780肿瘤细胞，购自上海中科院细胞库。
[0043] 1. 2药物及对照药物
[0044] 试验药物：发明药物：实施例1制备的广藿香油。
[0045] 阳性药物：紫杉醇注射液：规格为6mg/ml，5ml/支。太极集团四川太极制药有限公 司生产。批准文号：国药准字H19994040,生产批号：12060014。
[0046] 2试验方法
[0047]2. 1药物及阳性对照的前处理
[0048] 取发明药物广藿香油2ml，加入0.2ml吐温-80助溶、在加37. 8ml纯水反复研磨为 乳白色液体制剂，其终浓度为5% (广藿香油密度是I. 012g/ml，浓度50. 6mg/ml);吐温-80 终浓度为〇. 5 %，过滤除菌后备用。
[0049] 将用于抗肿瘤的阳性对照药物紫杉醇注射液用无菌水做1/10稀释（即600 y g/ ml)以备用。
[0050] 2. 2广藿香油抑制A2780细胞增殖作用试验
[0051] 选用对数生长期细胞，用0. 25% EDTA-胰酶将细胞消化后制成细胞悬液，调整细 胞悬液浓度为6 X IO4Ail接种于96孔培养板，每孔反应体积100 y 1。置37°C，5% CO2培养 箱中培养24h，待细胞贴壁生长后，弃上清液，用PBS缓冲液洗细胞面1次并吸弃。
[0052] 移除培养液后分别加用含不同浓度广藿香油的细胞培养液，广藿香油从50. 6mg/ ml开始，先10倍次稀释，确定大致抑瘤范围后在该范围内做连续梯度稀释，每孔反应体积 100 y 1，继续置37°C，5% CO2培养箱中培养24,48,72h，每个浓度设3个复孔，同时设含细 胞不含药物含〇. 5%吐温-80的溶剂对照组、不含细胞和药物的空白对照组。为比较药物 效果，本实验同时设不同浓度紫杉醇作为阳性药物对照。采用MTT比色法测定积分光密度 (Integraloptical density，IOD)值，计算细胞存活率，由此计算细胞增殖抑制率，再计算 药物的IC5Q。
[0053] MTT法测定细胞活性：终止培养前96孔板弃去含药维持液，每孔加入MTT (5mg/ml) 溶液20 y 1，继续培养4h，终止培养，小心吸去上清液，用PBS清洗1次，每孔加入150 y 1 DMS0,置摇床上低速振荡5min，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪490nm波长处测量各 孔的吸光值（I0D值）。按照下列公式计算细胞增殖抑制率：
[0054] 细胞存活率（％) =(药物组平均IOD值一空白对照组平均IOD值/溶剂对照组 平均IOD值一空白对照组平均IOD值）X 100%细胞增殖抑制率（％)= 100%-细胞存活 率（％)半数抑制浓度IC5tl为是药物组IOD值比溶剂对照组IOD值降低50%的药物浓度。
[0055] IC5tl采用SPSS19. 0软件计算。采用SPSS19. 0统计学软件进行统计学分析，实验 数据以"平均数土标准差（)"表示，样本均数间的比较采用t检验，组间差异采用单 因素方差分析检验，P < 0. 05为差异有显著性
[0056] 3试验结果
[0057] 在试验过程中溶剂对照组细胞在光镜下形态保持基本正常，广藿香油实验组细胞 形态出现不同程度的凝缩、核凝集、胞质起泡、细胞脱落，细胞生长受到抑制。
[0058] 表1广藿香油对A2780肿瘤细胞生长抑制试验结果（X土 s，n = 18)
[0059]
【权利要求】
1. 藿香油在制备预防、治疗或辅助治疗卵巢癌的保健食品、食品、药品中的用途中的用 途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述卵巢癌为上皮性卵巢癌。
3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的藿香油来源于广藿香 Pogostemon cablin (Blanco) Benth.或藿香Agastache rugosa (Fisch. Et Mey. ) 0? Ktze?提 取的挥发油。
4. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述源于广藿香Pogostemon cablin (Blanco)Benth.的挥发油，百秋李醇含量不低于26% w/w。
5. 根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述源于广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.的挥发油，百秋李醇含量为26?40% w/w。
6. 根据权利要求1?5任意一项所述的用途，其特征在于：所述的藿香油是按 照如下方法制备：取广藿香Pogostemon cabl in (Blanco) Benth.或藿香Agastache rugosa (Fisch. Et Mey. )0. Ktze.的全草，粉碎成粗粉，加水，浸泡，采用水蒸气蒸馏法提取， 即得。
7. 根据权利要求1?6任意一项所述的用途，其特征在于：它是以藿香油为活性成分， 加上保健食品、食品、药品上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述的制剂为液体制剂、气体制剂、固体 制剂、半固体制剂。
9. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述制剂中藿香油的含量为0. 1 %? 100% (w/w) 〇
【文档编号】A61K36/532GK104474012SQ201410483348
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年9月19日 优先权日:2014年9月19日
【发明者】彭成, 蔡剑, 万峰 申请人:成都中医药大学, 成都中医药大学附属医院