酸枣仁皂苷b在制备保护心血管药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了酸枣仁皂苷B(Jujubosides B)在制备保护心血管药物中的应用，属于医药【技术领域】。在本发明中，具体公开了酸枣仁皂苷B通过舒张主动脉血管、保护血管内皮、抗冠状动脉收缩，进而保护心血管的药理作用。本发明中，酸枣仁皂苷或其药用组合物可以与药学上可接受的载体制成片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂、口服液、软膏剂、贴剂、注射剂，用于外用、口服或注射。可以通过单独给药或者联合治疗的方式用于舒张主动脉血管、保护血管内皮及抗冠状动脉收缩所致心肌缺血，进而达到保护心血管的目的。
【专利说明】酸枣仁皂苷B在制备保护心血管药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及酸枣仁皂苷B在制备保护心血管药物中的应用，具体涉及酸枣仁皂苷B通过舒张主动脉血管、保护血管内皮、抗冠状动脉收缩，进而保护心血管的药理作用，本发明属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]酸率仁(Ziziphusjujube Mill var spinosa(Bunge)Huex X F)为鼠李科(Rhamnaceae)率属(Ziziphus Mill)植物酸率的干燥成熟种仁,多分布于西北、东北、华北许多省区及南方的一些地区。酸枣仁含有的多种活性成分具有丰富的药理作用，如生物碱、皂苷和黄酮等。酸枣仁具有补肝、宁心、敛汗、生津之功效，主要用于治疗虚烦不眠，惊悸多梦，体虚多汗和津伤口渴。酸枣仁皂苷(Jujuboside)为酸枣仁中的具有镇静催眠作用的重要药理活性成分，主要存在于其子叶中。酸枣仁皂苷为三萜类化合物，在结构上与人参、三七等的皂苷类有效成分较为接近。王健等人采用薄层扫描法，选择了合适的展开剂(正丁醇:冰醋酸:水=4:1:5，上层)及显色剂(2%香草醛硫酸乙醇溶液)，在薄层板上测定酸枣仁皂苷B的含量及其结构，并经卫生部药典委员会审定，作为对照品收载于中国药典1985、1990年版。且对不同产地的酸枣仁中皂苷类成分的研究表明，酸枣仁皂苷中以酸枣仁皂苷A的含量明显居多。刘沁舡等人以色谱方法分离鉴定出了新化合物酸枣仁皂苷D。近年来，酸枣仁皂苷的药理活性得到了广泛研究。郭胜民等研究发现，酸枣仁总皂苷能显著抑制小鼠的自发活动，降低大鼠的协调运动；具有协同戊巴比妥钠的中枢抑制作用，明显延长戊巴比妥钠所致睡眠时间；同时能拮抗苯丙胺的中枢兴奋作用，降低戊四氮引起的惊厥发生率；且以上作用成剂量依赖性(酸枣仁总皂苷中枢抑制作用的研究，西北药学杂志，1996，11(4):166-168 ;酸枣仁总皂苷的镇静催眠作用，中药材，2002，25(6):429-430 ;酸枣仁皂苷的镇静催眠作用研究，大连大学学报，2002，23(4):90-92)。张典等研究发现，酸枣仁总皂苷能明显降低原发性高血压大鼠的血压，但降压作用不及硝苯地平(酸枣仁总皂苷对原发性高血压大鼠的降压作用，西安交通大学学报(医学版)，2003，24 (I): 59-60)。此夕卜，酸枣仁总皂苷还具有明显的抗脂质过氧化、抗心肌缺氧作用和良好的调理血脂的作用，有可能成为既具有稳定降压作用，又具有心肌保护作用的降压药物。陈兴坚等研究发现酸枣仁总皂苷能明显减少有害刺激所致心肌细胞释放的乳酸脱氢酶含量的增加，改善心肌细胞超微结构，减少心肌细胞内氧自由基的生成，减轻Ca2+超载损伤等(酸枣仁总皂苷对培养大鼠心肌细胞的保护作用，中国药理学报，1990，11(2): 153)。张玮等研究发现酸枣仁总皂苷能显著降低LAD结扎引起的ST段和T波抬高的幅度，缩小LAD结扎后所致大鼠心肌梗死面积，具有保护心肌缺血损伤的作用(酸枣仁总皂苷抗心肌细胞缺氧-抚养损伤作用及其机理，中国病理生理杂志，1997，13(5):522-526)。袁秉祥等研究发现，酸枣仁总皂苷能明显降低大鼠TC，升高HDL-c，对血脂和血脂蛋白胆固醇有良好的调理作用，抑制动脉粥样硬化的形成和发展(酸枣仁总皂苷对大鼠血脂和血脂蛋白胆固醇的影响，中国药理学报，1990，6(1):34-36)。张玮等研究发现，酸枣仁总皂苷可显著减低血浆粘度，减少纤维蛋白原含量，具有活血化瘀的功效(酸枣仁总皂苷对大鼠血液流变学及体外血栓的影响，陕西中医，2005，26(7):723-725)。另外，研究发现，酸枣仁总皂苷能升高缺血脑组织中SOD、CK及LDH活性，减轻神经细胞损伤，具有保护缺血性脑损伤的作用(酸枣仁总皂苷对大鼠脑缺血损害及脑组织生化指标的影响，中国中药杂志，1996，21 (2): 110-113)。
[0003]心血管疾病，又成为循环系统疾病，是指人体内运送血液的器官和组织(主要包括心脏和血管)发生病理变化而引起的疾病。常见病种为:冠心病、高血压、急性心肌梗死、高血脂等。目前，心血管疾病已成为世界范围内的一个“现代流行病”，其发病率和死亡率升高的趋势日益明显，提高心血管疾病的防治水平也势在必行。随着现代医学的发展，心血管疾病的预防、诊断和治疗等方面均取得了一定的进展。但由于心血管疾病发病率高、治愈率低、并发症多，给心血管疾病的防治工作带来了一定的困难。传统医学和现代药理学表明，很多天然药物中所含有的皂苷类活性成分均具有多种药理活性，如抗肿瘤、抗炎、降血糖、防治心血管疾病的作用等，其疗效好、活性强、副作用小的特点，引起了医药界的关注，同时也给心血管疾病患者带来了希望。具有心血管保护作用的药物的开发对于心血管疾病的预防和治疗具有极其重要的意义(天然药物治疗心血管疾病研究进展，中国民族民间医药，2009，3:10-13 ;中药皂苷治疗心血管疾病的研究进展，2009，28(9):547-548)。
[0004]动脉血管收缩与舒张的正常进行是保证机体组织和器官正常血液灌注的基本条件。然而，在机体处于病理条件下或动脉血管发生功能性病变时，血管壁感受到血液动力学信号的异常刺激，引起动脉血管舒张不良或异常收缩，使血管中血流量减少，引起组织和器官灌流不足而导致一系列疾病的发生，如:高血压、心绞痛及心肌缺血等心血管疾病。因此，保护动脉血管活性，舒张动脉血管，防止或逆转动脉硬化及狭窄，对于缓解高血压、心肌缺血和心绞痛等心血管疾病的症状及相关心血管疾病的治疗具有重要意义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供酸枣仁皂苷B的一种新的医药用途，即酸枣仁皂苷B在制备保护心血管药物中的应用，具体涉及酸枣仁皂苷B在制备通过舒张主动脉血管、保护血管内皮及抗冠状动脉收缩所致心肌缺血进而保护心血管的药物中的应用。
[0006]其中，酸枣仁皂苷B为鼠李科枣属植物酸枣的干燥成熟种仁中提取的一类三萜类化合物。
[0007]本发明中，优选的，酸枣仁皂苷B舒张动脉血管的有效给药剂量为10_5M ;保护动脉内皮细胞的有效给药剂量为1-5M ;抗冠状动脉收缩的有效给药剂量为15mg/kg。
[0008]以酸枣仁皂苷B或其药用组合物作为主要成分的药物可以制备成多种剂型，如片齐?、散剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂、口服液、软膏剂、贴剂、注射剂，给药途径包括外用、口服和注射。可以单独给药或者联合治疗，用于舒张主动脉血管、保护血管内皮细胞、延缓动脉血管舒张障碍和收缩异常及动脉硬化的发生，缓解高血压、心肌缺血和心绞痛等心血管疾病的症状，进而发挥心血管保护作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1为酸枣仁皂苷B (JuB)对垂体后叶素致心肌缺血保护作用图(#:与空白对照组相比，Ρ〈0.05:与模型组相比，Ρ〈0.05)；
[0010]图2为酸枣仁皂苷B (JuB)对垂体后叶素致心肌缺血保护作用心电图；
[0011]图3为酸枣仁皂苷B (JuB)对主动脉血管的舒张作用图(*:与空白对照组相比，Ρ〈0.05)；
[0012]图4为酸枣仁皂苷B(JuB)对H2O2诱导内皮细胞凋亡的保护作用图(*:与模型组相比，Ρ〈0.05)，其中，对照组为不加H2O2空白对照组，O μ M组为不加JuB的H2O2模型组，0.1 μ Μ，I μ Μ，10 μ Μ，100 μ M JuB 组为 H2O2 处理的 JuB 给药组。
【具体实施方式】
[0013]下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。
[0014]实施例1酸枣仁皂苷B (JuB，检测纯度大于98% )在体抗冠状动脉收缩所致心肌缺血的药效学研究
[0015]1.先将鼠以1%戊巴比妥麻醉，连接BL-420F生物机能实验系统，选择心电图选项；
[0016]2.腹腔注射垂体后叶素，剂量为30U/kg ;立即腹腔注射JuB，剂量为分别为15mg/kg 和 45mg/kg ；
[0017]3.分别记录给予JuB后5s、10s、15s、30s、60s时的心电图变化，以J点(QRS波群终点与ST段交接处)移位(升高或降低0.1mV)、T波改变(高耸或双相倒置)或出现Q波作为阳性反应，进行统计分析；
[0018]结果见图1和图2，由图1和图2可知，JuB能显著抑制由垂体后叶素所致小鼠冠状动脉收缩而引发的心肌缺血症状，且该抑制作用成剂量依赖性(#:与空白对照组相比，Ρ〈0.05 ;*:与模型组相比，Ρ〈0.05)。
[0019]实施例2酸枣仁皂苷B (JuB，检测纯度大于98% )体外舒张主动脉血管的药效学研究
[0020]1.迅速游离Wistar (体重180_200g)大鼠胸主动脉，置于4°C含95% O2和5% CO2混合气体预饱和的K-H液中，剔除周围结缔组织，剪成3-4_长的血管环并将其悬挂于预置1mL K-H液的浴槽内，恒温于37°C并持续通入95% O2和5% CO2的混合气体；
[0021 ] 2.预给予每条血管2.0g张力，每15min换K-H液一次，平衡45min ;加入去氧肾上腺素(Phenylephrine，PE)使血管收缩；待血管收缩达到坪值后，加入卡巴胆碱(Carbachol, KB)使血管舒张。观察血管舒张情况以检验血管内皮活性，舒张百分比小于20%即可认为该血管失去内皮功能；
[0022]3.将血管环用K-H液清洗3次，每次15min至其恢复基础张力后，再次以PE诱导血管收缩；待血管张力达到坪值后，以累积加药法加入JuB使其浓度分别为10_5M、2X10_5M、4X 1(Γ5Μ、8Χ 1(Γ5Μ。观察JuB对血管的舒张作用；
[0023]结果见图3，由图3可知，JuB对PE预收缩的动脉血管具有显著的舒张作用，且该舒张作用呈剂量依赖性(*:与空白对照组相比，ρ〈0.05)。
[0024]实施例3酸枣仁皂苷B (JuB,检测纯度大于98% )体外保护动脉血管内皮的药效学研究
[0025]1.将人体脐静脉内皮细胞(HUVEC)置于96孔板中，调整细胞浓度为每孔I X 104，并在每孔加入200 μ L培养液，恒温37°C培养过夜；
[0026]2.将JuB以PBS溶解至不同浓度并加入至上述细胞培养液中培养12h ；
[0027]3.以H2O2处理细胞lh，诱导细胞氧化损伤；
[0028]4.将MTT储备液加入至上述细胞培养液中，于37°C在黑暗处培养4h ；
[0029]5.移去培养液并加入一定量的DMSO后，室温下震荡15min，并于490nm处测定各样品的吸收；
[0030]结果见图4，由图4可知，JuB可抑制由H2O2诱导的HUVEC凋亡而保护内皮细胞，且该保护作用在一定范围内成剂量依赖性，JuB保护HUVEC的有效剂量为10 μ M(*:与模型组相比，P〈0.05)。
[0031]以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。
【权利要求】
1.酸枣仁皂苷B在制备保护心血管的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述保护心血管的药物是通过舒张主动脉血管、保护血管内皮、抗冠状动脉收缩，进而达到保护心血管的目的。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酸枣仁皂苷B为鼠李科枣属植物酸枣(Ziziphus jujuba Spinosa)的干燥种子中提取的达玛烧型三職类化合物。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酸枣仁皂苷B舒张动脉血管的有效给药剂量为1-5M ;保护动脉内皮细胞的有效给药剂量为1-5M ;抗冠状动脉收缩的有效给药剂量为 15mg/kg。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，酸枣仁皂苷B或其药用组合物可以与药学上可接受的载体制成片剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂、口服液、软膏剂、贴剂或注射剂，用于外用、口服或注射。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，可以单独给药或者联合治疗。
【文档编号】A61P9/14GK104274479SQ201410508556
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】杨宝峰, 吕延杰, 杜志敏, 赵一秀, 张妍, 朴贤美, 朱久新, 吴立军 申请人:哈尔滨医科大学