凌霄花有效部位的制备及其抗抑郁用途
【专利摘要】本发明涉及凌霄花有效部位及其抗抑郁用途，可有效解决抑郁症的临床治疗问题，其解决的技术方案是：将凌霄花加10倍重量质量浓度为50%~90%的乙醇浸泡30min，超声提取1h，过滤得滤液；药渣再加入8倍、质量浓度为50%~90%的乙醇，超声提取1 h，过滤得滤液；合并两次药液，通过旋转蒸发仪减压浓缩至无醇味，加纯净水溶解呈悬浮液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中将乙酸乙酯萃取液减压浓缩和真空冷冻干燥，获得凌霄花有效部位，本发明凌霄花有效部位制备简单，成本低，环保无污染，是治疗抑郁症药物上的创新。
【专利说明】凌霄花有效部位的制备及其抗抑郁用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，特别是一种凌霄花提取物在制备抗抑郁药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 凌霄花为紫葳科植物凌霄Campsis grandifIora(Thunb. )K. sehum.和美洲凌霄 C. radicans (L) Seem.的干燥花，为我国传统使用的具有行血去癖功效的中药。具有凉血、化 瘀、祛风的功效，主治月经不调、经闭症瘕、产后乳肿、皮肤瘙痒、痤疮等症。目前已知凌霄花 在改善血液循环、抑制血栓、抗氧化、抗炎等方面作用明显，主要应用于心脑血管疾病、妇科 疾病的治疗方面。专利申请号为201010576491. 6公开了一种凌霄花提取物在制备治疗抗 脑缺血药物中的应用。专利申请号为201010214780. 1提供了凌霄花有效组分的制备方法 及其在制备治疗、预防肿瘤药物中的应用，该方法采用加热回流提取、硅胶柱分离洗脱获得 有效组分。提取温度较高和步骤复杂可能影响有效组分的质量和药效的稳定性。现代研宄 表明，凌霄花的主要化学成分为三萜类、苯丙醇类、黄酮类、花色素和挥发油等。凌霄花乙酸 乙酯提取物对致敏小鼠血流量有显著改善作用。
[0003] 抑郁症是一种常见的情感性精神障碍，是一种以显著而持久的、与处境不相称的 心境低落为主要特征的综合征，属于中医学"郁证"范畴。而目前市场上各类抗抑郁药物， 根据化学结构的不同，大致分为三大类：单胺氧化酶抑制剂、三环类抗抑郁剂杂环类抗抑郁 剂，它们的神经药理作用存在差异，治疗效果也不令人满意，不良反应较多，如引起失眠、精 神紊乱、心肌损害、血象异常、肝肾损伤等，因此在临床用药上受到一定的限制。花类药物来 源于植物的花蕾、花朵，大多具有质轻气香性升的特点。我国著名老中医周绍华教授常将花 类药用于治疗精神系统疾病。其中凌霄花有轻肝热、平肝风的功效，用于组方治疗抑郁障 碍，取得较好的效果，无任何副作用。但至今未见采用凌霄花有效部位制备治疗抑郁症的相 关报道。
【发明内容】
[0004] 针对目前人们对凌霄花的研宄现状和临床用途，为克服现有技术的不足，本发明 目的就是提供一种凌霄花提取物在制备治疗抑郁障碍药物中的应用，可有效解决抑郁障碍 的治疗问题，其解决的技术方案是：将干燥的凌霄花用10倍重量、质量浓度为50%?90% 的乙醇浸渍30min，超声提取lh，过滤得提取液；药渣再加入8倍、质量浓度为50%?90% 的乙醇超声提取lh，过滤得滤液；合并两次药液，减压浓缩至无醇味，加纯净水溶解呈悬浮 液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中将乙酸乙酯萃取液减压浓缩和真空冷冻干 燥，获得凌霄花有效部位，具有抗抑郁功效，可用于制备抗抑郁药物，本发明凌霄花有效部 位制备过程简单，成本低，是治疗抗抑郁药物上的创新。
【专利附图】
【附图说明】
[0005] 图IA不同浓度H2O2损伤对PC12细胞存活率的影响 图IB EFCG对150 μ mol/LH202损伤PC12细胞的保护作用 图2A EFCG对小鼠强迫游泳不动时间的影响 图2B EFCG对小鼠悬尾不动时间的影响
【具体实施方式】
[0006] 本发明凌霄花有效部位是称取凌霄花干燥花朵3. OKg，加10倍重量质量浓度为 50%(或60%、80%、90%均可）的乙醇30.0敁（或30.01^)，浸泡301^11，超声提取111，过滤 得滤液；药渣再加入8倍、质量浓度为50% (或60%、80%、90%均可）的乙醇24. OKg(或 24. 0L)，超声提取lh，过滤得滤液；合并两次药液，通过旋转蒸发仪减压浓缩至无醇味，加 纯净水溶解呈悬浮液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中将乙酸乙酯萃取液减压 浓缩和真空冷冻干燥，获得凌霄花有效部位，该有效部位经体外神经细胞保护评价实验、多 种动物实验。充分证明具有神经保护作用和抗抑郁的功效，可用于制备抗抑郁药物。
[0007] 下面是有关实验数据： 1、实验材料 1. 1试剂、试剂盒和细胞株 无水乙醇（天津风船化学试剂科技有限公司）、95%乙醇（天津天力化学试剂有限 公司）、石油醚（天津市德恩化学试剂有限公司）、乙酸乙酯（天津市东丽区天大化学试 剂厂）、正丁醇（天津市瑞金特化学品有限公司）等分析纯试剂；丙二醛（MDA)、过氧化物 歧化酶（SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px)试剂盒购自中国碧云天生物科技研宄所； SH-SY5Y细胞购自中科院上海细胞所细胞库；DMEM培养基（美国GIBC0)，胰蛋白酶（北京拜 尔迪生物公司），MTT，四甲基偶氮挫盐（美国Amresco)，无支原体胎牛脑组织（HycLone)， 二甲基亚楓（北京化学试剂公司），PBS缓存液。
[0008] 1. 2凌霄花有效部位的制备 凌霄花为紫葳科植物美洲凌霄c. radicans (L) Seem.的干燥花，称取凌霄花药材，加10 倍重量质量浓度为50%(或60%、80%、90%均可）的乙醇，浸泡3011^11，超声提取111，过滤 得滤液；药渣再加入8倍、质量浓度为50% (或60%、80%、90%均可）的乙醇，超声提取 lh，过滤得滤液；合并两次药液，通过旋转蒸发仪减压浓缩至无醇味，加纯净水溶解呈悬浮 液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中将乙酸乙酯萃取液减压浓缩和真空冷冻干 燥，即为凌霄花有效部位EFCG。
[0009] L 3实验动物 小白鼠由新乡医学院实验动物中心提供，18?22g，雄性。
[0010] 2实验方法与结果 2. IEFCG体外神经细胞氧化损伤的保护作用评价 采用MTT法检测细胞的存活率，以150 μ mol/L过氧化氢损伤PC12细胞，使其存活率下 降至50 %左右，建立体外模拟氧化应激损伤模型，以评价凌霄花有效部位EFCG对过氧化氢 损伤的PC12细胞的保护作用。结果见图1. 2. 2EFCG对小鼠强迫游泳不动时间的影响 取昆明种小鼠35只，雄性，体重19?22g，随机分为5组，每组7只，分别灌服EFCG低、 高剂量（4〇11^/1^/(1，8〇11^/1^/(1)，氟西汀（6〇11^/1^/(1)及同体积的生理盐水。连续给药3周。 末次给药1小时后，将各组小鼠进行强迫游泳实验。结果见图2A，表明高浓度EFCG(80mg/ Kg/d)和低浓度（40mg/Kg/d)均能明显减少CUMS抑郁模型组的不动时间。
[0011] 2. 3EFCG对小鼠悬尾不动时间的影响 取昆明种小鼠35只，雄性，体重19?22g，随机分为5组，每组7只，分别灌服EFCG低、 高剂量（4〇11^/1^/(1，8〇11^/1^/(1)，氟西汀（6〇11^/1^/(1)及同体积的生理盐水。连续给药3周。 末次给药1小时后，将各组小鼠进行强迫游泳实验。结果见图2B，表明高浓度EFCG(80mg/ Kg/d)和低浓度（40mg/Kg/d)均能明显减少CUMS抑郁模型组的不动时间。
[0012] 2. 4EFCG对各组小鼠脑组织中MDA含量和SOD，GSH-Px活性的影响 实验完成后，将各组小鼠断头取血，静置30min后，3000r/min离心，取脑组织，按照试 剂盒的要求及方法测定脑组织MDA含量及CAT、SOD活性。结果见表1，表明与模型组比， EFCG组和氟西汀组能有效逆转由CUMS所致的变化，明显减少小鼠脑组织中MDA的含量，增 加 SOD，GSH-Px的活性。
[0013] 表IEFCG对小鼠脑组织中MDA含量和CAT、SOD活性的影响
【权利要求】
1. 凌霄花有效部位的制备及其抗抑郁用途，所述的凌霄花有效部位是将凌霄花加10 倍重量质量浓度为50?90 %的乙醇，浸泡30min，超声提取lh，过滤得滤液；药渣再加入8 倍、质量浓度为50%?90%的乙醇，超声提取lh，过滤得滤液；合并两次药液，通过旋转蒸 发仪减压浓缩至无醇味，加纯净水溶解呈悬浮液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取， 其中将乙酸乙酯萃取液减压浓缩和真空冷冻干燥，即为凌霄花有效部位EFCG。
2. 凌霄花有效部位的制备及其抗抑郁用途，所述的凌霄花有效部位是将凌霄花加10 倍重量质量浓度为50%的乙醇，浸泡30min，超声提取lh，过滤得滤液；药渣再加入8倍、质 量浓度为50 % %的乙醇，超声提取lh，过滤得滤液；合并两次药液，通过旋转蒸发仪减压浓 缩至无醇味，加纯净水溶解呈悬浮液，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中将乙酸 乙酯萃取液减压浓缩和真空冷冻干燥，即为凌霄花有效部位EFCG。
3. 根据权利要求1方法制备获得的凌霄花有效部位在制备治疗、预防抑郁症药物中的 用途。
【文档编号】A61P25/24GK104490952SQ201410763754
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】于海川, 吴娇, 隋娟, 翟鹏飞, 张轶, 王侠, 段巨洪 申请人:新乡医学院