本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是一种具有祛除面部痘印作用的化妆品用药物组合物及其制备方法，适用添加于膏类、霜类、乳类、液类（香水除外）的化妆品。
背景技术：
痘印是由于面部皮肤毛囊口受堵，分泌的皮脂排不出来，加之细菌感染，而造成皮下血管扩张、表皮和真皮都受损，导致皮肤发炎产生色素沉淀。当痘痘消除后，血管和真皮、表皮尚未能即时恢复原态，于是皮肤上就留下暗红色印。痘印和痘疤是很多青春痘患者心头永远的痛。虽然通过一段时期的治疗，脸上的青春痘已经痊愈了，但是由于太晚就医或是之前痘痘长得太厉害，脸上本来长痘痘的地方留下了一大堆颜色深浅不一黑黑红红的痕迹。痘印分为红痘印和黑痘印。红痘印是因为原本长痘痘处，细胞发炎引起血管扩张。但是痘痘消下去后血管并不会马上缩下去，就形成了一个一个平平红红的暂时性红斑。它会在皮肤温度上升或运动时更红，这种红斑并不算是疤痕，会在4到6个月内渐渐退去。而黑痘印则是起于痘痘发炎后的色素沉淀，使长过红痘痘的地方留下黑黑脏脏的颜色，使皮肤暗沉。痘印的问题所涵盖的问题包括了皮肤的表皮、真皮层以及更为下方的皮下组织，所产生的后果包括了皮肤的破坏、组织的缺损及疤痕的生成，不仅仅造成了皮肤外观的缺陷，更是影响了皮肤的正常组织结构，这使得想改善痘印问题成为研究者关注的热点。如专利201310322068.7，该专利公开了一种祛疤痕、痘印的中药软膏及其制备方法，该软膏由玫瑰果油、茶树精油、白芷、大黄、芦荟、艾叶、白鲜皮、土茯苓、玄参、亚麻子、黄柏、马勃、浙贝、僵蚕、滑石和轻粉组成，有效率达90%以上。如专利201310335111.3，该专利公开了一种中药祛痘印美白面膜及其制备方法，该面膜由白芷、白鲜皮、白芍、白附子、薏苡仁、当归、黄芩、丹参组成。如专利201310690835.X，该专利公开了一种天然祛痘印去黑头美白嫩肤温和洗面膏及其制备方法，该洗面膏由白糖、月桂酸单甘油酯、表面活性剂、水组成。如专利201310417930.2，该专利公开了一种具有祛痘印功效的护肤组合物、制剂及其制备方法。该护肤组合物含有如下重量分数的功效成分：碳酸锌氢氧化物、硼砂、琥珀粉、珍珠粉、尿囊素、牛油果树果脂、当归根提取物、白术根提取物、积雪草提取物、冰片。虽然这些产品对祛除痘印有一定作用，但效果不尽如人意，人们需要效果更好的产品。基于这一点，发明者对大量中草药进行筛选和评价，以期开发疗效更显著、安全性更高的天然祛痘印药物。
技术实现要素：
本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种祛除面部痘印的药物提取物的组合物及其制备方法。
本发明所述的祛除面部痘印的药物提取物的组合物，是以黄花倒水莲、青天葵、飞扬草、铁木刀、荔枝草、牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤和蛇附子为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的10%；
优选的，所述祛除面部痘印的药物提取物的组合物，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲1～40份
青天葵1～40份
飞扬草1～40份
铁木刀1～40份
荔枝草1～40份
牛至1～40份
伸筋草1～40份
石柑子1～40份
锡叶藤1～40份
蛇附子1～40份
优选的，所述祛除面部痘印的药物提取物的组合物，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲2～35份
青天葵2～35份
飞扬草2～35份
铁木刀2～35份
荔枝草2～35份
牛至2～35份
伸筋草2～35份
石柑子2～35份
锡叶藤2～35份
蛇附子2～35份
优选的，所述具祛除面部痘印的药物提取物的组合物，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲8～30份
青天葵8～30份
飞扬草8～30份
铁木刀8～30份
荔枝草10～30份
牛至10～30份
伸筋草10～30份
石柑子10～30份
锡叶藤10～30份
蛇附子10～30份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲10份
青天葵10份、
飞扬草10份
铁木刀10份
荔枝草10份
牛至10份
伸筋草10份
石柑子10份
锡叶藤10份
蛇附子10份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲8份
青天葵8份
飞扬草8份
铁木刀12份
荔枝草12份
牛至12份
伸筋草12份
石柑子12份
锡叶藤12份
蛇附子12份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲8份
青天葵8份
飞扬草15份
铁木刀15份
荔枝草15份
牛至15份
伸筋草15份
石柑子15份
锡叶藤15份
蛇附子15份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲10份
青天葵10份
飞扬草10份
铁木刀12份
荔枝草12份
牛至12份
伸筋草12份
石柑子12份
锡叶藤12份
蛇附子12份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
黄花倒水莲8份
青天葵8份
飞扬草8份
铁木刀10份
荔枝草10份
牛至10份
伸筋草10份
石柑子10份
锡叶藤10份
蛇附子15份
本发明所述的祛除面部痘印的药物提取物的组合物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将上述的各个原料置于体积浓度为20%～80%的乙醇中浸泡2～48小时，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10～200倍，过滤，得浸泡液；
优选的，过滤残渣再用体积浓度为20%～80%的乙醇浸泡2～48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。
（2）浸泡液浓缩至原重量的2～5%，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度5～95%的乙醇多次洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有祛除面部痘印作用的药物组合物；
优选的，乙醇的体积浓度为40%～95%；
所述大孔树脂采用日本三菱化学公司以聚苯乙烯—二乙烯基苯为基体的HP20型大孔树脂；浸泡液浓缩的方法为常规的减压浓缩。
试验证明，本发明的药物组合物祛除面部痘印的作用效果显著，能够用于制备面部痘印皮肤保养的化妆品和皮肤的治疗性药物；
本发明还涉及一种皮肤保养化妆品，包括所述具有祛除面部痘印作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料；
本发明还涉及一种皮肤的治疗性药物，包括权利要求所述的具有祛除面部痘印作用的药物组合物和医学上可接受的载体。
尤其可以用于制备皮肤护理化妆品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂搽剂或洗剂；
制备皮肤护理化妆品时，可将制得的提取液组合物，经减压浓缩至原重量的10%～50%，得到组合物浓缩液，与已知的化妆品以及药品的基质或者辅料、载体、添加剂相混合，按照常规的方法进行制备，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的5%～10%。
本发明根据中药理论，从大量的天然药物中，选用了为原料，制备获得了所述的具有祛除面部痘印作用的组合物，其中，所述的黄花倒水莲选用远志科植物Polygala fallax Hemsl. [P. aureocauda Dumn]的根；青天葵选用兰科植物芋兰属中的Nervilia fordii (Hance) Schltr.的全草；铁木刀选用豆科苏木亚科决明属植物铁刀木Cassia siamea Lam.的枝条；荔枝草选用唇形科鼠尾草属Salvia L.植物荔枝草Salvia plebeia R. Br. 的全草地上干燥部分；牛至选用唇形科牛至属多年生草本植物牛至Origanum vulgare L.的干燥全草；伸筋草选用石松科植物石松Lycopodium japonicum Thunb.的干燥全草；石柑子选用为天南星科石柑属附生藤本植物石柑子Pothos chinensis (Raf.) Merr.的干燥全草；锡叶藤选用五桠果科锡叶藤属植物Tetracera asiatica (Lour.) Hoogland的地上部分；蛇附子选用三叶崖爬藤Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg的干燥块根。以上药材均经广州中医药大学第二附属医院黄志海主任中药师鉴定达到药用标准。
根据相关文献记载：
黄花倒水莲为远志科远志属植物Polygala aureocauda Dunn. (PAD)，又名黄花远志.是一种使用悠久的民间草药。主产福建、江西、湖南、广西和云南等省区，生于海拔1150～1650m的山谷林下，水旁阴湿处。黄花倒水莲味甘，微苦，性平，微温；具补益气血、健脾祛湿、活血化瘀、调经等功效，是广西民间少数民族常用药，其根能滋补、强壮、祛风湿、舒经络，治疗病后体虚、腰肌劳损、风湿关节痛、跌打损伤、急慢性肝炎、子宫下垂和月经不调。
青天葵为兰科植物芋兰属中的Nervilia fordii (Hance) Schltr.的全草，又名独叶莲、珍珠草、独脚莲、珍珠叶、坠千斤、铁帽子、山米子、天葵、入地珍珠、假天麻、独脚天葵、猪乸草、磨地沙、半边伞、小胖药、提心吊胆等，主要分布在广西、广东、云南、四川等地，在香港、泰国也有分布。青天葵主要生长在海拔400～600米的石山疏林下，石山山脚或密林阴湿处，田边或肥沃的地方，其味甘凉、性寒、无毒，可清热润肺、解毒消肿，主治肺痨咯血、肺热咳嗽、口疮、咽喉肿痛、瘰疠、疮疡肿痛、跌打损伤。在我国两广地区和东南亚地区，青天葵为民间习用的凉茶，是我国传统出口的名贵药材。
飞扬草属大戟科大戟属一年生草本植物Euphorbia hirta L.，以全草入药，全草长20～50厘米。具有清热解毒，利湿止痒等功效。可用于细菌性痢疾，阿米巴痢疾，肠炎，肠道滴虫，消化不良，支气管炎，肾盂肾炎；外用治湿疹、皮炎、皮肤瘙痒等。
铁刀木是豆科苏木亚科决明属Cassia L. 木本植物Cassia siamea Lam.，又称铁路木、挨刀树、黑心树等，在我国云南、广西、广东、海南及台湾等地广有分布，在印度、缅甸、泰国等国也有广泛分布。成年铁刀木树高可达20米，树皮深灰色，偶数羽状复叶，花为伞房状总状花序，花瓣5，黄色，雄蕊10枚。花期6～12月，果期1～5月。铁刀木喜光、不耐荫蔽，又喜温，凡有霜冻、寒害的地方均不能生长。民间常用其治疗风湿性关节炎、痞满腹涨、肠胃病、脚扭伤等疾病。最新的研究发现铁刀木还具有抗焦虑和抗肿瘤活性。关于铁刀木化学成分的研究结果显示，铁刀木中含有色酮类、黄酮类、萜类、甾体类、生物碱类等化合物。
荔枝草为唇形科鼠尾草属Salvia L.植物荔枝草Salvia plebeia R. Br. 的全草，又名雪见草、蛤蟆草、皱皮草等。其主产于我国江苏、安徽、福建、山东、河南等地。《本草纲目》记载荔枝草味苦辛、性凉，具有清热解毒、利尿消肿、凉血止血等功能，主要用于治疗扁桃体炎、肺结核咯血、支气管炎、腹水肿胀、肾炎水肿、崩漏、便血、血小板减少性紫癜；外用治痈肿、痔疮肿痛、乳腺炎、阴道炎等。荔枝草中主要含有二萜类、三萜类、黄酮类等成分，具有抗氧化、抗癌、抗菌、抗炎等生物活性。
牛至为唇形科牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤属多年生草本植物Origanum vulgare L.，又名白花茵陈、止痢草、土香薷等，主要分布于地中海地区及我国的湖北、江西、湖南、河南、江苏、安徽等省，为民间常用中药，曾被收载于《中国药典》1977年版，其具有清热解毒、利水消肿、理气化湿之功效。现代药理研究表明，牛至具有抗菌、消炎、镇痛以及调节免疫功能等多方面作用，临床用于预防流感，治疗中暑、发热、呕吐、急性胃肠炎、腹痛、痢疾等病症。有文献报道在牛至根、茎中含有大量脂肪酸类化合物（棕榈酸、亚油酸、亚麻酸），该类化合物有较强的抗氧化作用，甚至亚油酸还具有调节血脂、软化血管、降低血压、促进微循环等效果。
伸筋草为石松科植物石松Lycopodium japonicum Thunb. 的干燥全草，据《湖南药物志》记载伸筋草又名石松、伸筋灵、狮子草、伸筋草、石柑子、锡叶藤。其味微苦、温、辛，归于肝、肾、脾经，具有祛风除湿、舒筋活络、止咳、解毒、消肿等功效。临床上多用于治疗关节屈伸不利、风寒温痹、关节肿痛、筋脉拘急、跌打损伤。现代药理研究表明伸筋草具有抗炎、镇痛、免疫调节、清除自由基、治疗矽肺等作用，其中生物碱类化合物还对心血管系统、神经肌肉、胆碱酯酶抑制等有一定作用。
石柑子又名石蒲藤，为天南星科石柑属附生藤本植物石柑子Pothos chinensis (Raf.) Merr.，在我国主要分布于四川、湖北、贵州、云南、广东、广西及台湾等地海拔2400米以下的阴湿密林中，常匍匐于岩石上或附生于树干上。全草入药，其主要功效有行气止痛、消积、祛风湿、散瘀解毒等，是传统民间瑶药“葫芦钻”的原植物，长于治疗毒蛇咬伤、肿瘤等症。现代研究表明石柑子具有抗肿瘤、抗氧化、降血糖等药理活性。但迄今为止，国内外对石柑属植物化学成分的研究甚少。
锡叶藤为五桠果科锡叶藤属植物Tetracera asiatica (Lour.) Hoogland，属常绿木质藤本，在我国主要分布于广东、广西、海南、云南等热带及亚热带地区。其主要以根、叶为药用部位。锡叶藤有收敛止泻、固精、消肿止痛等功能，用于腹泻、便血、痢疾、肝脾肿大、子宫脱垂、白带、遗精、风湿性关节炎。锡叶藤的乙醇提取物经活性筛选，有较强抗心血管疾病和抗病毒活性。
蛇附子为葡萄科崖爬藤属TetrastigmaPlanch. 植物三叶崖爬藤（又名三叶青）Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg的块根，是福建、浙江地区传统习用草药，习称“一粒珠”。蛇附子具有活血散瘀、解毒、化痰的作用，临床上用于治疗病毒性脑膜炎、乙型脑炎、病毒性肺炎、黄胆性肝炎等，特别是对小儿高热有特效。蛇附子中的化学成分研究已有报道，从中分离鉴定的成分多为黄酮类、三萜甾醇和脂肪酸类。
目前，国内外尚未见将黄花倒水莲、青天葵、飞扬草、铁木刀、荔枝草、牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤和蛇附子提取物的组合物用于祛除面部痘印的相关报道。
综上所述，目前面部痘印缺乏有效的治疗手段，本发明的有益效果在于根据面部痘印的病因和病理机制，查阅了大量专著和文献，先后筛选多种中草药，终于筛选出能够有效祛除面部痘印的药物组合物。本发明的药物组合物经临床试验证实效果显著，安全性好。所涉及的成分具有效果明确、安全性好、无任何副作用和在化妆品配方中稳定的特点；与现有同类产品相比，具有效果显著的特点，是一种新型祛除面部痘印的有效天然药物提取物的组合物。
具体实施方式
实施例1
在室温下，取黄花倒水莲、青天葵、飞扬草、铁木刀、荔枝草、牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤和蛇附子各10公斤（共100公斤），用体积浓度70%的乙醇600公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度70%的乙醇600公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩20倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50%的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例2
在室温下，取黄花倒水莲、青天葵、飞扬草、铁木刀、荔枝草、牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤和蛇附子各9公斤（共90公斤），用体积浓度50%的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度50%的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩40倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度40%的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例3
在室温下，取黄花倒水莲、青天葵、飞扬草、铁木刀、荔枝草、牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤和蛇附子各11公斤（共110公斤），用体积浓度80%的乙醇1000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度80%的乙醇1000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩25倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度60%的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例4
在室温下，取黄花倒水莲、青天葵、飞扬草、铁木刀、荔枝草、牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤和蛇附子各12公斤（共120公斤），用体积浓度10%的乙醇2000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度10%的乙醇2000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩50倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50%的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例5
在室温下，取黄花倒水莲、青天葵、飞扬草、铁木刀、荔枝草、牛至、伸筋草、石柑子、锡叶藤和蛇附子各13公斤（共130公斤），用体积浓度60%的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度60%的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩30倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度80%的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例6
将实施例1所获得的液体采用减压浓缩，浓缩至原重量的10%～50%，得药物组合物浓缩液，用于制备祛除面部痘印的祛印膏，组分的重量百分比如下：
原料 比例（%） 供应商
A相
甲基葡糖倍半硬脂酸脂 1 路博润
PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸脂 1 路博润
甘油硬脂酸 2 无明化工
鲸蜡硬脂醇 2 广州天赐
26号白矿油 12 广州华化
肉豆蔻酸异丙酯 4 浙江物美
聚二甲基硅氧烷 2 韩国KCC株式会社
尼泊尔金甲酯 0.1 锐谷生物科技
尼泊尔金丙酯 0.1 锐谷生物科技
精炼巴巴苏籽油 2 法国CRM国际有限公司
B相
甘油 5 无明化工
卡波940 5 路博润
药物组合物浓缩液 5 自制
去离子水 余量 自制
C相
三乙醇胺 0.1 立南化工
生产工艺：
1.将卡波940用去离子水配制成2%的溶液待用；
2.分别称好A和B相原料，并加热到75～80℃；
3.适当搅拌速度下将A部分加入到B中乳化；
4.加料完毕后转均质机均质1～2分钟乳化充分；
5.用搅拌机低速搅拌降至45℃下并加入C部分，搅拌均匀即可。
实施例7
药物组合物祛除面部痘印的临床试验研究报告：下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例6的化妆品配方制备的祛除面部痘印的祛印膏。
1.材料与方法
1.1 面部痘印患者的病例选择
收集 2014年5月～2015 年3月的面部痘印患者共158 例，均为女性，年龄23～67岁，平均37.12岁。适应证：①面部存在痘印； ②皮肤无过敏、无炎性反应及其他明显不适症状。禁忌证：①治疗部位有损伤、炎性反应等局部病灶； ②1个月内接受过或有可能在治疗后接受阳光暴晒的求美者；③瘢痕体质者；④癫痫病患者、糖尿病患者及有出血倾向的求美者；⑤孕妇。随机分为治疗组76例和对照组82例，两组患者性别、年龄、病程等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。
1.2 治疗方法
治疗组使用的含有本发明药物组合物的祛印膏由广州收获化妆品科技有限公司提供，按常规方法将祛印膏涂抹于痘印部位，3次/天，对照组使用的空白药膏，不含本发明药物组合物亦由广州收获化妆品科技有限公司提供，按常规方法外搽痘印部位，3次/天，治疗14天后观察疗效，进行疗效评价。
1.3. 观察指标及疗效判定
治疗14天后根据治疗前后照片对比及患者主诉，对痘印的面积和颜色进行疗效评估。疗效标准：基本治愈：肉眼观察痘印面积消退 90% 以上，颜色基本消失；明显消退：肉眼视痘印面积消退60～90%，颜色明显变淡；好转：肉眼视痘印面积消退30～60%，颜色变淡；无效：痘印面积消退小于10%，颜色变化不明显。
1.4.统计学处理
采用SPSS19.0统计软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（ ±s）表示，行均数t检验；计数资料以率表示，行卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结 果
2.1 两组治疗效果比较 两组患者治疗14天后，治疗组总有效率明显高于对照组（P＜0.01），差异具有统计学意义。
表1 两组治疗效果比较
2.2产品安全性评估 治疗前后均未发生不良反应，无1例患者脱落。整个研究过程未发生与含有本发明药物组合物的祛印膏相关的不良反应事件。
综上所述，本发明的药物组合物治疗面部痘印疗效显著，对皮肤无损伤，是一种高效、安全的治疗新方法，值得临床应用与推广。
采用其它实施例的具有祛除面部痘印作用的药物组合物进行临床试验，结果也证明具有相同的作用。这说明本发明的药物组合物是目前祛除面部痘印皮炎理想的外用药物，其安全性好、不良反应小、适应性强，值得推广应用。
实施例8
祛除面部痘印的药物组合物的皮肤刺激性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的祛除面部痘印药物组合物对家兔皮肤的刺激性。下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例2的药物组合物。
1 动物
16只普通级成年健康新西兰兔，雌雄各半，2.5kg~3.5kg，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK（粤）2008-0002，动物合格证号：粤2015A015。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房（实验动物房合格证号：0060590。），试验期间，室温20℃～22℃，湿度40%～67%，照明12h/12h昼夜明暗交替。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为1.0g生药/mL。
2 方法
依据中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范（2007年版）》，采用同体自身左右侧对比法，左侧给予空白基质（生理盐水），右侧给予1.0g/mL的药物组合物。给药前准备：给药前24h，采用剃毛法去除家兔背部脊柱两侧被毛，去毛范围左、右各约3cm×3cm，涂抹面积2.5cm×2.5cm，勿损伤皮肤。给药：取受试物约0.5mL涂抹在右侧皮肤上，左侧涂生理盐水作为对照，每天涂抹1次，连续14d。从第二天开始，每次涂抹前要被毛。将药液0.5mL浸透2.5cm×2.5cm的双层医用纱布片，覆盖于已去毛的皮肤，覆盖一层硫酸纸，再用无刺激性胶布和固定带固定。固定约4h后去除受试物，用温水清除残留受试物。一小时后观察结果。
3 结果
在本实验条件下，连续涂抹1.0g/mL的药物组合物14天对家兔皮肤无刺激性反应（具体见表2）。
表2 1.0.g/mL药物组合物对家兔多次皮肤刺激性试验结果
实施例9
祛除面部痘印的药物组合物的皮肤致敏性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的祛除面部痘印药物组合物对Hartley豚鼠皮肤的致敏性。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例2的药物组合物。
1 动物
选用普通级Hartley豚鼠50只，雌雄各半，体重范围180～250g，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK（粤）2008-0002，动物合格证号：粤2015A052。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房（实验动物房合格证号：0060590。），试验期间，室温20℃～22℃，湿度40%～67%，照明12h/12h昼夜明暗交替。按编号对豚鼠进行皮肤染色，用饱和苦味酸溶液（黄色）染色标记个位数，用2%硝酸银溶液（咖啡色）染色标记十位数；按性别分开饲养，每一笼盒放5只豚鼠，笼盒外贴上标签，标示专题编号、动物类别、组别、性别、给药途径、笼号、动物编号及预计试验起止日期等信息。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为1.0g生药/mL。
2 方法
依据国家《药品注册管理办法》、《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》。随机分为阴性对照组、阳性对照组、药物组合物组，其中阴性对照组10只豚鼠，其余各组20只豚鼠。各组豚鼠雌雄各半。先后进行诱导致敏和激发接触实验，两个实验之间相隔10天的洗脱期。诱导接触实验方法为前24 h备皮，剪去豚鼠脊柱两侧各2 cm×2 cm区域的被毛。阳性对照组：取2.5% 2,4—二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，分别用两层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层保鲜薄膜覆盖，以无刺激纱布覆盖6h，移去覆盖物，用温水清除残留受试样品，第7天和第14天，以同样方法重复一次；在阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水0.4ml，药物组合物组涂0.5ml。按同样的步骤进行诱导接触。激发接触则是在末次给受试物致敏接触后14天（即实验第28天），在实验组和阴性对照组豚鼠背部备皮处涂敷0.5ml，封包和固定，6h后去掉受试物，立刻观察，然后于24h、48h、72h再次观察皮肤过敏反应情况。阳性对照组用2.5% 2,4—二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水0.4ml。在致敏后1h、24h及激发后24h和48h观察给药局部皮肤红斑、水肿和其他异常反应。按皮肤过敏反应评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分，并计算各组的过敏反应发生率，按皮肤过敏性评价标准判断过敏反应发生程度。过敏反应发生率=（组内出现皮肤红斑、水肿或全身过敏反应的动物数/该组动物总数）×100%。
3 结果
激发接触实验后24、48h，由不知道实验内容的专业人员根据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》评判是否出现皮肤致敏反应（表3.7），致敏反应评分≥2分时，判定该动物皮肤致敏反应阳性，计算致敏率（≥2分动物数/该组动物总数×100%），并按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》中皮肤致敏反应试验分级标准判定本发明的药物组合物对豚鼠皮肤的致敏强度（表3）。
表3 皮肤致敏反应程度评分标准
最高总分值 8
首先计算每一观察时间点各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物积分均值，按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》进行评价。按下列公式计算每天每只动物平均积分。
表4 皮肤致敏反应程度分级标准
激发后24h、48h，阴性对照组、药物组合物组的豚鼠激发部位皮肤均未出现红斑、水肿情况，也未出现其它异常反应，过敏反应发生率均为0，过敏反应评价均为未见皮肤过敏反应。
激发后24h，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤全部出现红斑，过敏反应发生率为100%，过敏反应评价为极强致敏。激发后48h，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤仍全部有红斑，过敏反应发生率为100%，过敏反应评价仍为极强致敏。
4 结论
在本实验条件下，药物组合物对Hartley豚鼠皮肤进行3次致敏和1次激发后未见皮肤过敏反应。