预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的包括富含血小板的血浆的药物组合物及其使用方法与流程

本申请要求在韩国知识产权局于2015年8月27日提交的韩国专利申请No.10-2015-0121038以及于2016年5月11日提交的韩国专利申请No.10-2016-0057806的权益，其公开内容通过引用全部并入本文。

技术领域

本公开涉及用于预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的包括富含血小板的血浆的药物组合物，以及富含含血小板的血浆用于制造预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的药物的用途。

背景技术：

耳朵分成外耳、中耳和内耳。外耳包括耳廓和外耳道。中耳由耳膜、鼓室、听觉鼓膜和咽鼓管组成，并且内耳由前庭器官、三个半规管和耳蜗管组成。由于声音是声能，所以声音通过外耳道从耳廓传播从而震动耳鼓。耳鼓的震动经由机械能传播到由三个小骨组成的与耳鼓相连的听骨。镫骨(听骨的远端骨)与耳蜗管相连，从而向耳蜗管中的淋巴传输能量。所传输的能量在淋巴中引起刺激耳蜗管内的毛细胞的波。毛细胞的运动引起离子变化，并因此神经传导物质被转移到附着于毛细胞的听觉神经，在所述听觉神经中，声音作为电能被传播到大脑。

耳聋通常可以分为传导性耳聋和感音神经性耳聋。传导性耳聋是由声音传播器官诸如外耳、耳鼓和中耳等的损伤引起的，并且感音神经性耳聋是由耳蜗管的声音感知功能的失调或听觉神经或中枢神经系统(其将听觉刺激传输到大脑)的功能紊乱引起的。可以对传导性耳聋进行外科治疗。感音神经性耳聋受到辅助装置诸如助听器或人造耳耳蜗植入的帮助。然而，如果耳聋程度严重，则由于与正常的听力能力的巨大差距，有效性低，并因此在日常生活中仍有诸多不便。同时，耳鸣是指没有外部听觉刺激的听觉知觉，而且没有可用于治疗耳鸣的疗法。

因此，需要有效用于预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的组合物，以及使用所述组合物预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的方法。

技术实现要素：

本发明的一方面提供用于预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的药物组合物。

本发明的另一方面提供富含含血小板的血浆用于制造预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的的药物的用途。

附图说明

这些和/或其他方面将从以下对实施方式的描述(结合附图)中变得明显并更容易被理解，其中：

图1是示出左耳在各频率(KHz)下的纯音听力测试结果的图；和

图2是示出右耳在各频率(KHz)下的纯音听力测试结果的图。

具体实施方式

一方面提供用于预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的药物组合物，所述药物组合物包括富含血小板的血浆。

术语“富含血小板的血浆(PRP)”是指与从实验对象(或对象)得到的血液相比包含浓缩血小板的血浆。PRP可以是从实验对象的血液中分离后即刻的PRP、从实验对象的血液中分离后在室温下培养大约1分钟至大约40分钟的PRP、或其组合。PRP从实验对象的血液中分离后可以在室温下培养大约1分钟至大约40分钟、大约3分钟至大约35分钟、大约5分钟至大约30分钟、大约8分钟至大约25分钟、大约10分钟至大约25分钟或大约15分钟至大约25分钟。从实验对象的血液中分离后即刻的PRP和从实验对象的血液中分离后在室温下培养大约1分钟至大约40分钟的PRP可以是单独的组合物。在室温下培养大约1分钟至大约40分钟的PRP可具有从实验对象的血液中分离后即刻的PRP的大约1.1倍或更高、大约1.5倍或更高、大约2倍或更高、或大约5倍或更高的粘度。例如，从实验对象的血液中分离后即刻的PRP可具有大约1miliPascal-second(mPa.s或centi Poise(cP))至大约5mPa.s、大约2mPa.s至大约4mPa.s、或大约2mPa.s至大约3mPa.s的粘度。在室温下培养大约1分钟至大约40分钟的PRP可具有大约5mPa.s至大约20mPa.s、大约8mPa.s至大约18mPa.s、大约10mPa.s至大约15mPa.s、或大约12mPa.s至大约14mPa.s的粘度。由于从实验对象的血液中分离后即刻的PRP具有低粘度，所以当向鼓室给药时PRP可以迅速地经过咽鼓管排出。由于从实验对象的血液中分离后在室温下培养大约1分钟至大约40分钟的PRP具有高粘度，所以当向鼓室给药时PRP可以缓慢地经过咽鼓管排出。由于具有高粘度的PRP缓慢地从耳朵排出，所以PRP可以长时间地接触内耳中的神经细胞。内耳中的神经细胞可以通过PRP再生。

PRP可以用于自体血液给药。例如，PRP由采自实验对象的血液制备，之后所制备的PRP可以再给予实验对象。

药物组合物还可以包括第二药物组合物，已知所述第二药物组合物对感音神经性耳聋或耳鸣有效。第二药物组合物与上述药物组合物可以同时或分开给予。第二药物组合物可以是用于鼓室给药或用于静脉内给药的组合物。第二药物组合物可以是地塞米松、维生素B1、维生素B6、维生素B12、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酰胺、D-泛醇、氰钴维生素、核黄素、生物素、Pan-B-Comp注射剂、或其组合。

药物组合物可以还包括凝血促进剂。凝血促进剂可以是与凝血相关的要素。凝血促进剂可以凝固PRP。例如，凝血促进剂可以是凝血酶、氯化钙、葡萄糖酸钙、或其组合。凝血促进剂与上述药物组合物可以同时或分开给予。凝血促进剂可以用于向鼓室给药。

药物组合物可以用于向鼓室给药。鼓室是指中耳的一部分，所述中耳为外耳与内耳之间的空间。药物组合物可以通过鼓膜来向鼓室给药。

术语“耳聋”，被称为听觉损伤，是部分或完全失听。

术语“感音神经性耳聋”是指由耳蜗管的声音感知功能的失调或听觉神经或中枢神经系统(其将听觉刺激传输到大脑)的功能紊乱引起的耳聋。

感音神经性耳聋可以是老年性耳聋、噪声性耳聋、突发性耳聋、梅尼埃病、自身免疫性耳聋、缺血性耳聋、头部损伤关联的耳聋、耳毒性药品关联的耳聋、遗传性耳聋、由病毒或细菌感染引起的对柯蒂氏器官的损害、或由其他原因或由不明原因造成的柯蒂氏器官的功能失调、或其组合。感音神经性耳聋可以由以下引起：炎症性疾病诸如内耳炎、脑膜炎等；噪声性耳聋；耳毒性药品；创伤诸如颞骨骨折等；老年性耳聋；梅尼埃病；突发感音神经性耳聋；代谢紊乱诸如甲状腺功能减退等；缺血性脑血管疾病；血液病诸如白血病等；神经失调诸如多发性硬化等；免疫失调；肿瘤性疾病诸如听神经瘤等；骨疾病；和遗传病诸如华尔登布尔氏综合征、亚瑟综合征等。老年性耳聋是增龄性耳聋并且其是正常衰老过程的一部分。老年性耳聋可以由内耳中螺旋形科蒂氏器官中的受体细胞的退化引起。噪音性耳聋可以由长期暴露于噪声例如嘈杂的音乐、重型设备或机械设备、飞机、轰炸、或由其他人引起的噪声引起。

术语“耳鸣”是指没有外部听觉刺激的听觉知觉。耳鸣可以时常或偶发地在一耳或两耳中发生，并通常形容为铃声。

术语“预防”意指通过给予组合物来抑制或阻碍感音神经性耳聋或耳鸣发生的所有行为，且术语“治疗”意指通过给予组合物来使感音神经性耳聋或耳鸣的症状已经好转或已经有利地减轻的所有行动。

药物组合物可以包括有效量的PRP。有效量可以根据实验对象而恰当地选择并根据疾病的严重度、病人的年龄、体重、健康状况、性别和药物过敏性、给药时间、给药途径、排出率、治疗期和与本发明的组合物混合或共同给予的药品以及在医学领域中公知的其他因素来确定。有效量可以是每ml药物组合物大约0.01ml至大约1ml、大约0.1ml至大约1ml、或大约0.5ml至大约1ml。

药物组合物可以还包括载体、赋形剂、或稀释剂。载体、赋形剂和稀释剂可以包括例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、金合欢胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油或其组合。

药物组合物可以是可注射的制剂。

药物组合物的给药剂量可以是例如每个成人大约0.01ml至大约5ml、大约0.1ml至大约4ml、大约0.5ml至大约3ml、大约0.5ml至大约2ml、或大约1ml。可以给予药物组合物例如一天一次、一天或每隔一天两次或十次到一年一次。可以给予药物组合物例如每两天、每三天、每四天、每五天、每三十天、每两个月、每四个月、或每六个月两次、三次、四次、五次、六次、八次、十次、十二次、或十五次或更多次。

还提供富含含血小板的血浆用于制造预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的药物的用途，其中所述PRP用于给予实验对象的鼓室。

另一方面提供预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的方法，所述方法包括将富含血小板的血浆给予实验对象的鼓室。

富含血小板的血浆、鼓室、感音神经性耳聋、耳鸣、预防、和治疗与上述相同。

实验对象可以是有感音神经性耳聋或耳鸣或存在有感音神经性耳聋或耳鸣的危险的实验对象。实验对象可以是哺乳动物，例如人、牛、马、猪、狗、绵羊、山羊、或猫。

所述方法可以还包括给予第二药物组合物，已知所述第二药物组合物对感音神经性耳聋或耳鸣有效。所述方法可以还包括给予地塞米松、维生素B1、维生素B6、维生素B12、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酰胺、D-泛醇、氰钴维生素、核黄素、生物素、Pan-B-Comp注射剂、或其组合。第二药物组合物与PRP可以同时或按次序给予实验对象的鼓室或通过静脉给予。

所述方法可以还包括给予凝血促进剂。所述方法可以还包括给予凝血酶、氯化钙、葡萄糖酸钙、或其组合。凝血促进剂与PRP可以同时或按次序给予鼓室。

所述方法可以包括从实验对象的血液中得到PRP；以及将得到的PRP给予实验对象的鼓室。实验对象的血液可以是不含抗凝血剂的血液。抗凝血剂可以是例如乙二胺四乙酸盐(EDTA)、草酸盐、柠檬酸盐和肝素。当实验对象的血液可以是包含抗凝血剂的血液时，凝血促进剂可以与PRP一起给予。从实验对象的血液中得到PRP可以通过例如离心分离进行。离心分离可以在大约4℃至大约37℃下、大约10℃至大约37℃下、或在室温下进行。离心分离可以在大约3500rpm至大约5000rpm、大约4000rpm至大约4500rpm、或大约4200rpm的速度下进行。离心分离可以进行大约1分钟至大约20分钟、大约1分钟至大约10分钟、大约1分钟至大约5分钟、或大约5分钟。由于从实验对象得到的PRP被再次给予实验对象，所以给药可以是自体血液给药。给药可以包括将从实验对象的血液中分离后即刻的PRP给予鼓室，以及将从实验对象的血液中分离后在室温下培养大约1分钟至大约40分钟的PRP给予鼓室。由于从实验对象的血液中分离后即刻的PRP具有低粘度，所以当向鼓室给药时PRP可以快速地经过咽鼓管排出。由于从实验对象的血液中分离后在室温下培养大约1分钟至大约40分钟的PRP具有高粘度，所以当向鼓室给药时PRP可以缓慢地经过咽鼓管排出。由于具有高粘度的PRP被缓慢地从耳朵中排出，所以PRP可以长时间地接触内耳中的神经细胞。内耳中的神经细胞可以通过PRP再生。

PRP可以以例如每个成人大约0.01ml至大约5ml、大约0.1ml至大约4ml、大约0.5ml至大约3ml、大约0.5ml至大约2ml、或大约1ml的量给药。可以给予PRP例如一天一次、一天或每隔一天两次或十次到一年一次。可以给予PRP例如每两天、每三天、每四天、每五天、每三十天、每两个月、每四个月、或每六个月两次、三次、四次、五次、六次、八次、十次、十二次、或十五次或更多次。

根据一方面的用于预防或治疗感音神经性耳聋或耳鸣的包括富含血小板的血浆的药物组合物以及使用所述药物组合物的方法，实验对象的感音神经性耳聋或耳鸣可以以容易且有效的方式预防或治疗。

现在将详细参照示例性实施方式，所述实施方式的例子在附图中示出，其中附图中相同的附图标记始终指代相同的要素。在这一点上，本发明的示例性实施方式可以具有不同的形式并且不应该被解释为受限于本文中提供的描述。因此，通过参照附图仅在下面描述例示性实施方式，以说明本发明的各方面。本文中所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的列出项的任何和全部的组合。

在下文中，将参照实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例仅用于说明目的，并且本发明的范围并非旨在受限于这些实施例。

实施例1.富含血小板的血浆对耳聋或耳鸣的预防或治疗效果的验证

为了考查富含血小板的血浆是否对耳聋或耳鸣表现出预防或治疗效果，评价了其临床疗效。

1.选择实验对象以及进行纯音听力测试

通过纯音听力测试进行实验对象的听力测试。内窥镜被引入实验对象的外耳道以观察实验对象的鼓膜。对有感音神经性耳聋而没有外耳和中耳损伤的实验对象进行纯音听力测试。

纯音听力测试是一种在各音调频率下测量纯音听阈值的方法，并且所述听阈值在0.5KHz、1KHz、2KHz、3kHz、4kHz、6kHz和8kHz的频率下测量。

在纯音听力测试中，正常健康的年轻人听得见的音调的平均强度被确定为0分贝(dB)，并且以此为基础，音调的强度以5dB的阶跃增加。测量了在各频率下能够被实验对象最初听到的音调强度，也就是阈值。在各频率下测试等级越低，耳朵可能越敏感，表示听力好。例如，可以确定的是如果测试等级是40dB或更低，则在日常生活中没有问题，且如果测试等级是5dB至10dB，则实验对象是没有听力问题的正常人。

2.富含血小板的血浆和地塞米松的听力改善效果

将PRP给予在1中选择的有感音神经性耳聋的各实验对象的鼓室，之后考查听力恢复。

首先，为了考查给予PRP之前实验对象(n＝20)的听力，使用纯音听力测试器Earscan(Micro Audiometrics制造)对各个实验对象的左耳(“LT”)和右耳(“RT”)进行纯音听力测试。从将PRP给予他们的鼓室之前的实验对象得到纯音听力测试的结果。在实验对象中，给予一个实验对象地塞米松19次，但未观察到听力改善。

然后，用5％的丙胺卡因乳剂(Emla Cream 5％)(AstraZeneca，韩国)局部麻醉各个实验对象的鼓膜。

从实验对象的静脉采集大约10ml到大约20ml的血液。在血液采集期间，使用不含抗凝血剂的血液采集管。所采集的血液在室温下以大约4200rpm的速率离心分离大约5分钟。从离心分离的血液中得到大约3ml至大约4ml的具有高水平的血小板的中间层以制备PRP。制备的PRP的粘度是大约2mPa.s至大约3mPa.s(micro VISC，RHEOSENSE,INC.制造)。

得到PRP后立即将大约3ml至大约4ml的得到的PRP分到3或4个1ml注射器中，然后向实验对象两耳的鼓室中以30分钟间隔各注射1ml。

得到PRP之后在室温下培养PRP大约15分钟至大约25分钟。所培养的PRP的粘度是大约12mPa.s至大约14mPa.s。向实验对象两耳的鼓室中各注射大约0.5ml至大约1ml的培养的PRP。

在此方法中，一周给予两次PRP，一共六次。在总共的六次中，前三次给予PRP，而另三次给予地塞米松(Jeil Pharmaceutical Co.,Ltd.)，在所述另三次中，向实验对象两耳的鼓室中注射1ml地塞米松，然后向向实验对象两耳的鼓室中注射PRP。

在最初给予PRP后的大约2天至大约120天，如1中所述进行纯音听力测试。从得到的实验结果来看，为了考察在各频率下给药前和给药后之间的差别，使用SPSS WIN 18.0程序来进行t-测试。

在表1和表2中分别给出了左耳和右耳的纯音听力测试结果，并且分别在图1和图2中示出它们的图。

[表1]

在各频率(n＝40)下给药前和给药后左耳的纯音听力

(*:p<0.05；**:p<0.01；和***:p<0.001)

[表2]

在各频率(n＝40)下给药前和给药后右耳的纯音听力

(*:p<0.05；**:p<0.01；和***:p<0.001)

如表1和图1中所示，左耳的测试等级在大约0.5KHz到大约4KHz的频率下明显减小。进而，如表2和图2中所示，右耳的测试等级在大约0.5KHz到大约6KHz的频率下明显减少。通过向鼓室给予PRP和/或地塞米松而使实验对象的听力明显改善。因此，确认了地塞米松和PRP对感音神经性耳聋或耳鸣表现出预防或治疗效果。

3.高粘度富含血小板的血浆的听力改善效果

为了考察高粘度粘性PRP是否表现出听力改善效果，挑选有感音神经性耳聋而没有外耳和中耳损伤的实验对象。

如2所述，从所挑选的实验对象的血液得到PRP，并且所得到的PRP在室温下培养RRP大约15分钟至大约25分钟以得到粘度为大约12mPa.s至大约14mPa.s的PRP。使用注射器向实验对象两耳的鼓室中注射0.5ml得到的PRP。与2中不同，未在得到PRP之后立即给予地塞米松和PRP。

在表3中给出向实验对象的鼓室给予高粘度PRP之前和之后的纯音听力测试结果(“NRM”：通过纯音测听不易测定)

【表3】

在表3中，与给药之前的等级相比，当在向鼓室给予高粘度PRP之前和之后之间比较各频率下的等级时，发现向鼓室给予高粘度PRP之后的等级降低。只有通过给予高粘度PRP才改善实验对象的听力。因此，确认了PRP对感音神经性耳聋或耳鸣表现出预防或治疗效果。

应理解的是，在本文中描述的示例性实施方式应仅考虑描述性意义而不用于限制目的。每个示例性实施方式内的特征或方面的描述通常应该被认为是可用于其余示例性实施方式中其他类似的特征或方面。

当已经参照附图描述了一个或更多个示例性实施方式时，本领域技术人员将理解，在不脱离如权利要求所界定的本发明的精神和范围的情况下，可以作出形式和细节上的各种改变。