一种百合知母冲剂的制备方法与流程

本发明涉及中药领域，具体涉及一种百合知母冲剂的制备方法。

背景技术：

随着社会竞争的不断加剧，生活节奏的加快，失眠的发病率呈上升的趋势。长期的睡眠不足可造成一系列的机体损害，在我国有45.4％的人存在睡眠问题(其中28％失眠，17.4％可疑失眠)。失眠不仅妨碍人的正常生活，而且影响着人的健康。百合知母汤是张仲景《金匮要略》中治疗百合病的重要方剂，百合病与现代医学的失眠多梦有很多的关联性。百合知母汤临床上常用于治疗失眠症。现代药理研究表明，百合具有镇静安神、止咳祛痰等药理作用，其主要活性成分是百合皂苷。知母具有改善睡眠、改善记忆力等多种药理活性，其主要活性成分为知母皂苷。可见，百合和知母二药配伍使用后，药理作用和临床应用更广泛。

现有的百合知母剂型为汤剂，该种剂型没有规范的提取制备方法，有效成分不能很好的检测，临床疗效得不到有效保证。

技术实现要素：

发明目的：本发明的目的在于克服上述技术不足，提供了一种百合知母冲剂的制备方法，该方法处方中的植物药的水溶性成分改善睡眠作用的效果显著，并且采用正交优化提取出处方中具有改善睡眠作用的水溶性成分，相对于溶剂提取法，回流提取更加经济和节约时间，提取效率高，并且可以对其有效成分进行控制，可保证临床疗效。

技术方案：为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

一种百合知母冲剂的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：

步骤一：水提取：取百合和知母，加水煎煮提取2～3次，每次提取时间是1～1.5h，合并提取液过200目筛过滤，得滤液；

步骤二：收膏：将步骤一得到的滤液，减压浓缩至60℃相对密度为1.2-1.25的浸膏；

步骤三：含量检测：以芒果苷和总多糖为检测指标对百合知母提取液进行含量测定；

步骤四：制备浸膏粉：使用喷雾干燥方法干燥浸膏，干燥后灭菌处理，并过80目以上筛，得到干浸膏粉；

步骤五：制粒：取步骤四得到的干浸膏粉，加入微晶纤维素和5‰羧甲基淀粉钠和蔗糖，将混合物加入混合机中进行混合均匀后，在混合物中添加95％乙醇作为润湿剂制作软材，将软材放入颗粒机制粒，制得后的颗粒干燥处理。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，步骤一中取百合和知母，加水煎煮提取3次，每次提取时间是1～1.5h。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，步骤一中的原料由重量份数10～40份百合和1～30份知母组成。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，其特征在于，步骤一中浸提的温度是65-75℃。

1提取工艺最佳方法筛选与结果

1.1水提取液样品的制备

根据预实验单因素考察的结果，采用正交试验法对百合知母药材的提取工艺进行优选。以提取时间(A)、提取次数(B)、加水倍数(C)为考察因素，每个因素选取3个水平，以百合知母中的两个活性成分芒果苷和总多糖的含量作为评价指标，结果见表1。

表1百合知母汤提取因素水平表

2.2水提取液中芒果苷的含量测定

2.2.1色谱条件

YMC-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5um)，流动相：乙腈-0.2％甲酸水溶液，流速：1.0ml/min，检测波长：258nm，进样量：10ul，柱温：35℃，理论板数按芒果苷峰计算应不低于6000。梯度条件：等度洗脱10％乙腈，采用时间35min；

2.2.2溶液的制备

对照品溶液的制备：取芒果苷对照品适量，精密称定0.48mg，置10ml的容量瓶中，加乙醇定容至刻度线，制成浓度0.048mg/ml备用。

供试品溶液的制备：分别将1到9号提取液浓缩定容到100ml的容量瓶中，取其中1ml，用乙醇定容到10ml的容量瓶中，热溶解30min，取上清液，用0.45um微孔滤膜过滤，即得。

2.2.3芒果苷的标准曲线的制备

精密吸取质量浓度为0.048mg/ml芒果苷对照品溶液，用乙醇稀释，分别制成质量浓度为0.0096mg/ml、0.024mg/ml、0.048mg/ml、0.072mg/ml、0.096mg/ml对照品溶液，按照“2.2.1”的色谱条件进行测定，以峰面积(A)和对照品质量浓度(ρ)进行回归，计算回归方程得：A＝3×10⁷ρ+23647，R＝0.9999。说明芒果苷在0.096-0.96ug内与峰面积成良好的线性关系，(见表2)。

表2芒果苷标准曲线

2.2.4溶液中芒果苷的含量测定

分别精密吸取对照品和样品溶液各10ul，按照“2.2.1”的色谱条件进行测定，根据标准曲线的方程计算样品的芒果苷的含量，结果见表4。

2.3水提取液中总多糖的含量测定

2.3.1D-无水葡萄糖标准曲线的制备

精密量取D-无水葡萄糖对照品溶液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml分别置于50ml容量瓶中，加水定容至刻度线，摇匀，精密量取上述溶液2ml，置具塞试管中，分别加入4％苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入硫酸7.0ml，摇匀，于40℃水溶液中保温30min，取出，置冰水浴中5min，取出，以相应试剂为空白，照紫外可见分光光度法，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标(A)，浓度(x)为横坐标计算回归方程A＝47.845x-0.0833，R＝0.9997，绘制标准曲线(见表3)。

表3葡萄糖标准曲线表

2.3.2溶液的制备

对照品溶液的制备：取D-无水葡萄糖对照品精密称定，加水完全溶解，制备成每1ml含有D-无水葡萄糖0.61mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：分别取1到9号提取液定容到100ml样品溶液，精密量取2ml，加乙醇10ml，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置50ml容量瓶中，并稀释到刻度线，摇匀，精密量取2ml，参照“2.3.1D-无水葡萄糖标准曲线”的制备项下的方法，自“4％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的重量，计算，即得，结果见表4。

2.4正交实验结果

经过查阅文献和预实验确定影响百合知母颗粒剂提取工艺的因素主要包括提取时间、加水倍数、提取次数，综合评分假设设定为100分，根据药效成分确定芒果苷和总多糖权重分别为50、50。在此基础上进行总加权评分，利用综合的评分值(W)对实验的结果进行分析：以各指标的最大值(A_max)作为参照对同一指标的各数据进行标准化处理，D表示实验中该指标成分测定值的标准化数据(D＝A/A_max)，综合评分：W＝D_芒果苷×50+D_多糖×50。结果见表4和表5。

表4正交实验表

表5方差分析表

2.5正交实验结果分析

选择L₉(₃⁴)表，实验的结果见表4和表5。本次实验用正交设计的方法，采用多指标成分进行分析，运用实验中各指标综合的加权评分的方法^[9]进行数据处理和评价。以正交实验测定的芒果苷和总多糖的含量两种指标成分为考察指标，实验结果选择综合加权评分法进行方差分析。表4直观分析来表明：影响百合知母颗粒剂提取工艺的因素依次是B＞A＞C，即提取次数＞提取时间＞加水倍数，且提取次数是提取过程中显著性的影响因素；进一步分析：提取次数因素各水平影响大小顺序为B₃＞B₂＞C₁；提取时间因素各水平影响大小顺序为A₃＞A₁＞A₂；加水倍数因素各水平影响大小顺序为C₁＞C₂＞C₃；通过方差对比分析A、C对正交实验结果几乎没有显著性的影响，所以以芒果苷的含量和多糖的含量综合评价得最佳的提取工艺为A₃B₃C₁，在预实验中单因素考察中发现，水量越多，旋蒸浓缩完之后的芒果苷的含量反而降低，从考虑节省时间和保证疗效，综合分析后选择A₃B₂C₁为最佳提取方案，即提取时间3h，提取次数2次，加水倍数10倍为最佳。

作为优选方案，以上所述的百合知母冲剂的制备方法，芒果苷含量测定采用高效液相色谱方法，色谱条件为：规格为4.6mm×250mm，5um YMC-C18的色谱柱，流动相：乙腈和体积浓度0.2％甲酸水溶液，流速：1.0ml/min，检测波长：258nm，进样量：10ul，柱温：35℃，理论板数按芒果苷峰计算应不低于6000，梯度条件：等度洗脱10％乙腈，90％体积浓度0.2％甲酸水溶液。

作为优选方案，以上所述的芒果苷检测方法，样品处理方法为：对照品溶液的制备：取芒果苷对照品适量，精密称定0.48mg，置10ml的容量瓶中，加乙醇定容至刻度线，制成浓度0.048mg/ml备用。

作为优选方案，以上所述的芒果苷检测方法，供试品溶液的制备：取百合知母提取液浓缩定容到100ml的容量瓶中，取其中1ml，用乙醇定容到10ml的容量瓶中，热溶解30min，取上清液，用0.45um微孔滤膜过滤，即得。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，步骤二中减压浓缩的条件是：真空度是-0.06～0.08MPa，蒸汽压力不大于0.04MPa，温度是70～80℃。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，步骤四中喷雾干燥使用的机器型号是G-5高速离心喷雾干燥机。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，所述的G-5高速离心喷雾干燥机的条件是：喷雾的相对密度是1.2～1.25，进料速度是25～30ml/min，进风温度160～170℃，出风温度80～90℃。

作为优选方案，以上根据权利要求1所述的一种百合知母冲剂的制备方法，其特征在于，步骤五中制得的颗粒水分控制在4—8％，颗粒干燥处理后加入旋涡式振荡筛中过16目筛，未通过筛的，重新返回颗粒机制粒。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，步骤五中微晶纤维素的添加按照每3Kg干浸膏粉添加1.25Kg微晶纤维素。

作为优选方案，以上所述的一种百合知母冲剂的制备方法，步骤五中蔗糖的添加按照每20Kg干浸膏粉添加1-10kg蔗糖。

有益效果：本发明提供的百合知母冲剂的制备方法与现有技术相比，具有如下优点：

1、本发明提供的一种百合知母冲剂的制备方法，采用正交工艺优选出最佳的提取方法，采用该提取方法，可以最大程度的将活性成分，如芒果苷、知母皂苷等提取出来，具有很好的改善睡眠作用的效果。

2、本发明优选的浸提的温度是65-75℃，这是由于芒果苷在较高温度下不稳定，根据本申请的大量实验证明，在该范围内得到提取液中的芒果苷的峰面积最大。

3、本发明一种百合知母冲剂的制备方法,滤液减压浓缩至相对密度为1.2-1.25的浸膏，在该相对密度条件下喷雾得到的浸膏粉较好，无结块易于制粒，相对密度过大时喷雾制得的浸膏粉易结块，不易制粒。

4、步骤二中减压浓缩的条件是：真空度是-0.06—-0.08MPa，蒸汽压力不大于0.04MPa，温度是70-80℃，通过本申请的大量实验证明，在该减压浓缩条件下浓缩，可以大大缩短浓缩时间，提高浓缩速度快。

5、本发明一种百合知母冲剂的制备方法步骤四中采用80目以上的筛的目的是将得到的干浸膏粉进行过筛处理，得到较细的干浸膏粉，易于制粒。

6、本发明步骤三：以芒果苷和总多糖为检测指标对百合知母提取液进行含量测定，可以对有效成分进行有效检测，保证临床疗效。

7、本发明步骤四中喷雾干燥使用的机器型号是G-5高速离心喷雾干燥机，条件是：喷雾的相对密度是1.2—1.25，进料速度25—30ml/min，进风温度160—170℃，出风温度80—90℃，通过本申请的大量实验证明，使用高速离心喷雾干燥的优点是：干燥速度快、可直接干燥成粉末等优点，而该在该条件下制得的干浸膏粉无黏壁现象，且得到的粉末细而均匀。

8、本发明一种百合知母冲剂的制备方法步骤五中的润湿剂选用的是乙醇，而没有选用水作为润湿剂，这是由于水适用于药物本身具有一定粘性的浸膏粉进行制粒，且用水作润湿剂时，所用的干燥温度过高，对于不耐热，遇水易变质或溶于水的药物不宜应用。而本申请中的药物本身必须保持干燥无粘性，凡针对具有较强粘性的药物，如某些中药浸膏粉等遇水或淀粉浆后，易结块，不易制成颗粒；或在加热干燥时易引起变质的药物；或药物在水中溶解度大，使制粒操作困难；或颗粒干燥后太硬，压片产生花斑，崩解超时限等，因此针对以上药物均应采用乙醇作润湿剂，经本实验研究表明用水作为润湿剂时，得到的软材易结块，而用乙醇作为润湿剂时可以得到较好质量的软材，易于制粒。在经过大量实验得出，若采用90％及其90％以下的乙醇进行制软材进行压片时，得到的软材易结块，不易制粒，且制得的冲剂表面不光滑，而采用100％乙醇制粒时，得到产品易松散，因此本发明中采用95％乙醇作为润湿剂。

步骤五中制得的颗粒水分控制在4—8％，结合本申请中选择的原料以及制备的方法，最终发现如果得到的颗粒中水分含量过高，在产品易结块、粘冲；而得到的颗粒水分含量过低，则制得的产品易出现松散、不成形现象；但是将颗粒水分控制在该范围内制得的产品表面光滑，硬度适中。

步骤五中颗粒干燥处理后加入旋涡式振荡筛中过16目筛，未通过筛的，重新返回颗粒机制粒，这是由于在压片过程中对制得颗粒的粒径有一定的要求，如果制得颗粒粒径过大，则片剂表面易出现花斑，如果在制粒过程中严格把控颗粒大小，将颗粒过16目筛处理，不仅能够节约原料成本，也能大大降低压片中的不合格率，同时保证制得的产品表面均匀光滑，无松散现象。

步骤五中微晶纤维素的添加按照每3Kg干浸膏粉添加1.25Kg微晶纤维素，实验证明，加入微晶纤维素可以改善干浸膏粉的吸湿性，而添加微晶纤维素的量是经过加入不同量的实验结果得出，结果显示按照该比例添加使得干浸膏粉具有较强的吸湿性，稳定性好。

附图说明

图1是对照品芒果苷的液相色谱图。

图2是供试品的液相色谱图。

具体实施方式

为进一步了解本发明的内容，结合附图和实施例对本发明作详细描述。

实施例1

一种百合知母冲剂的制备方法，包括步骤如下：

步骤一：原料准备：百合30kg、知母10kg；

步骤二：醇提取：将步骤一中的原料混合并加入10倍量的纯化水，提取3次，每次浸提时间是1.5h，浸提的温度是75℃，浸提完成后将提取液过200目筛过滤，弃滤渣；

步骤三：收膏：将步骤二得到的滤液减压浓缩至相对密度为1.25的浸膏，减压浓缩的条件是：真空度是-0.08MPa，蒸汽压力不大于0.04MPa，温度是80℃；

步骤四：含量检测：以芒果苷和总多糖为检测指标对百合知母提取液进行含量测定；

步骤五：制备浸膏粉：使用喷雾干燥浸膏，干燥后灭菌处理，并过80目以上筛，得到干浸膏粉；喷雾干燥使用的机器型号是G-5高速离心喷雾干燥机，喷雾的相对密度是1.25，进料速度30ml/min，进风温度170℃，出风温度90℃；

步骤六：制粒：向干浸膏粉中加入微晶纤维素和5‰羧甲基淀粉钠，微晶纤维素按照每3Kg干浸膏粉添加1.25Kg微晶纤维素的比例添加，再将混合物加入混合机中进行混合均匀后，在混合物中添加95％乙醇作为润湿剂制作软材，将软材放入颗粒机制粒，制得后的颗粒干燥处理；制得的颗粒水分控制在8％，颗粒干燥处理后加入旋涡式振荡筛中过16目筛，未通过筛的，重新返回颗粒机制粒。

以上所述的百合知母冲剂的制备方法，步骤四中，芒果苷含量测定的色谱条件为：规格为4.6mm×250mm，5um YMC-C18的色谱柱，流动相：乙腈和体积浓度0.2％甲酸水溶液，流速：1.0ml/min，检测波长：258nm，进样量：10ul，柱温：35℃，理论板数按芒果苷峰计算应不低于6000，梯度条件：等度洗脱10％乙腈，90％体积浓度0.2％甲酸水溶液。

对照品溶液的制备：取芒果苷对照品适量，精密称定0.48mg，置10ml的容量瓶中，加乙醇定容至刻度线，制成浓度0.048mg/ml备用。对照品检测结果如图1所示。

供试品溶液的制备：取百合知母提取液浓缩定容到100ml的容量瓶中，取其中1ml，用乙醇定容到10ml的容量瓶中，热溶解30min，取上清液，用0.45um微孔滤膜过滤，即得。供试品检测结果如图2所示。

采用以上标准曲线(A＝3×10⁷ρ+23647，R＝0.9999)计算，检测结果百合知母提取液中芒果苷和总多糖的含量测定为0.782mg/mL；多糖含量42.5mg/mL

2、制剂的稳定性实验结果表明：制剂连续检测6个月，试验结果均稳定。

实施例2

1、一种百合知母冲剂的制备方法，包括步骤如下：

步骤一：原料准备：百合20斤、知母5斤；

步骤二：醇提取：将步骤一中的原料混合并加入10倍量的纯化水，提取3次，每次浸提时间是1h，浸提的温度是65℃，浸提完成后将提取液过200目筛过滤，弃滤渣；

步骤三：收膏：将步骤二得到的滤液减压浓缩至相对密度为1.2的浸膏，减压浓缩的条件是：真空度是-0.06MPa，蒸汽压力不大于0.04MPa，温度是75℃；

步骤四：含量检测：以芒果苷和总多糖为检测指标对百合知母提取液进行含量测定；

步骤五：制备浸膏粉：使用喷雾干燥浸膏，干燥后灭菌处理，并过80目以上筛，得到干浸膏粉；喷雾干燥使用的机器型号是G-5高速离心喷雾干燥机，喷雾的相对密度是1.2，进料速度25ml/min，进风温度160℃，出风温度80℃；

步骤六：制粒：向干浸膏粉中加入微晶纤维素和5‰羧甲基淀粉钠，微晶纤维素按照每3Kg干浸膏粉添加1.25Kg微晶纤维素的比例添加，再将混合物加入混合机中进行混合均匀后，在混合物中添加95％乙醇作为润湿剂制作软材，将软材放入颗粒机制粒，制得后的颗粒干燥处理；制得的颗粒水分控制在4％，颗粒干燥处理后加入旋涡式振荡筛中过16目筛，未通过筛的，重新返回颗粒机制粒。

以上所述的百合知母冲剂的制备方法，步骤四中，芒果苷含量测定的色谱条件为：规格为4.6mm×250mm，5um YMC-C18的色谱柱，流动相：乙腈和体积浓度0.2％甲酸水溶液，流速：1.0ml/min，检测波长：258nm，进样量：10ul，柱温：35℃，理论板数按芒果苷峰计算应不低于6000，梯度条件：等度洗脱10％乙腈，90％体积浓度0.2％甲酸水溶液。

对照品溶液的制备：取芒果苷对照品适量，精密称定0.48mg，置10ml的容量瓶中，加乙醇定容至刻度线，制成浓度0.048mg/ml备用。对照品检测结果如图1所示。

供试品溶液的制备：取百合知母提取液浓缩定容到100ml的容量瓶中，取其中1ml，用乙醇定容到10ml的容量瓶中，热溶解30min，取上清液，用0.45um微孔滤膜过滤，即得。供试品检测结果如图2所示。

采用以上标准曲线(A＝3×107ρ+23647，R＝0.9999)计算，检测结果百合知母提取液中芒果苷和总多糖的含量测定为0.405mg/mL；多糖含量28.1mg/mL

2、制剂的稳定性实验结果表明：制剂连续检测6个月，试验结果均稳定。

实施例3

1、一种百合知母冲剂的制备方法，包括步骤如下：

步骤一：原料准备：百合40份、知母2份；；

步骤二：醇提取：将步骤一中的原料混合并加入10倍量的纯化水，提取3次，每次乙醇浸提时间是1.25h，浸提的温度是70℃，浸提完成后将提取液过200目筛过滤，弃滤渣；

步骤三：收膏：将步骤二得到的滤液减压浓缩至相对密度为1.23的浸膏，减压浓缩的条件是：真空度是-0.07MPa，蒸汽压力不大于0.04MPa，温度是70℃；

步骤四：含量检测：以芒果苷和总多糖为检测指标对百合知母提取液进行含量测定；

步骤五：制备浸膏粉：使用喷雾干燥浸膏，干燥后灭菌处理，并过80目以上筛，得到干浸膏粉；喷雾干燥使用的机器型号是G-5高速离心喷雾干燥机，喷雾的相对密度是1.23，进料速度27ml/min，进风温度165℃，出风温度85℃；

步骤六：制粒：向干浸膏粉中加入微晶纤维素和5‰羧甲基淀粉钠，微晶纤维素按照每3Kg干浸膏粉添加1.25Kg微晶纤维素的比例添加，再将混合物加入混合机中进行混合均匀后，在混合物中添加95％乙醇作为润湿剂制作软材，将软材放入颗粒机制粒，制得后的颗粒干燥处理；制得的颗粒水分控制在6％，颗粒干燥处理后加入旋涡式振荡筛中过16目筛，未通过筛的，重新返回颗粒机制粒；

以上所述的百合知母冲剂的制备方法，步骤四中，芒果苷含量测定的色谱条件为：规格为4.6mm×250mm，5um YMC-C18的色谱柱，流动相：乙腈和体积浓度0.2％甲酸水溶液，流速：1.0ml/min，检测波长：258nm，进样量：10ul，柱温：35℃，理论板数按芒果苷峰计算应不低于6000，梯度条件：等度洗脱10％乙腈，90％体积浓度0.2％甲酸水溶液。

对照品溶液的制备：取芒果苷对照品适量，精密称定0.48mg，置10ml的容量瓶中，加乙醇定容至刻度线，制成浓度0.048mg/ml备用。对照品检测结果如图1所示。

供试品溶液的制备：取百合知母提取液浓缩定容到100ml的容量瓶中，取其中1ml，用乙醇定容到10ml的容量瓶中，热溶解30min，取上清液，用0.45um微孔滤膜过滤，即得。供试品检测结果如图2所示。

采用标准曲线(A＝3×107ρ+23647，R＝0.9999)计算，检测结果百合知母提取液中芒果苷和总多糖的含量测定为0.195mg/mL；多糖含量52.6mg/mL

2、制剂的稳定性实验结果表明制剂连续检测6个月，试验结果均稳定。