一种由Anti‑CAⅨ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法与流程

文档序号:12207307阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种由Anti-CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法,其特征在于制备步骤如下:

第一步:将去甲斑蝥素、大豆卵磷脂和DSPE-PEG2000-MAL用乙醇超声溶解后,逐滴加入磁力搅拌的蒸馏水中,挥发30min,倒入透析袋中,所述透析袋的截留相对分子质量3500,在蒸馏水中透析后得到聚合物胶束溶液,所述聚合物胶束溶液中去甲斑蝥素、大豆卵磷脂和DSPE-PEG2000-MAL的重量比为1:190~240:20~21;

第二步:将聚合物胶束溶液在4000 r·min-1条件下离心30min,取上清液,即得去甲斑蝥素纳米胶束;

第三步:将DTT溶于PBS缓冲溶液中,制成浓度为800 mmol/L的DTT溶液,将EDTA溶于PBS缓冲溶液中,制成浓度为500 mmol/L的EDTA溶液;将Anti-CA Ⅸ溶于PBS缓冲溶液中制成浓度为0.5mg/mL的Anti-CA Ⅸ溶液;

第四步:将EDTA溶液和DTT溶液加入anti-CA Ⅸ溶液中,在室温下静置2h,接着加入乙酸乙酯萃取得到经过还原的Anti-CA Ⅸ溶液,其中EDTA溶液、DTT溶液和Anti-CA Ⅸ溶液的体积比为1:5:50,每次加入的乙酸乙酯的体积与anti-CA Ⅸ溶液的体积比为4:1;

第五步:将制得的去甲斑蝥素纳米胶束用PBS缓冲溶液稀释成浓度为(5~20)mg·mL-1的去甲斑蝥素纳米胶束溶液,取去甲斑蝥素纳米胶束溶液和经过还原的Anti-CA Ⅸ溶液置于一个试管中,室温条件下孵化12h,即得由Anti-CA Ⅸ修饰去甲斑蝥素胶束纳米粒,其中去甲斑蝥素纳米胶束溶液和经过还原的Anti-CA Ⅸ溶液的体积比为1:1。

2.根据权利要求1所述的一种由Anti-CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法,其特征在于:所述第一步中逐滴加入磁力搅拌的蒸馏水中的速度为每隔10s加入1滴。

3.根据权利要求1所述的一种由Anti-CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法,其特征在于:所述第一步中在蒸馏水中透析的具体步骤为在1000mL的蒸馏水中透析24h,每4h换一次水。

4.根据权利要求1所述的一种由Anti-CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法,其特征在于:所述第一步中去甲斑蝥素、大豆卵磷脂和DSPE-PEG2000-MAL的重量比为1:200:20。

5.根据权利要求1所述的一种由Anti-CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法,其特征在于:所述第四步中萃取的具体步骤是加入乙酸乙酯萃取5次,每次放置10min后用移液枪去除上层乙酸乙酯,同时除去游离DTT。

6.根据权利要求1所述的一种由Anti-CA Ⅸ修饰的去甲斑蝥素胶束纳米粒的制备方法,其特征在于:所述第五步中将制得的去甲斑蝥素纳米胶束用PBS缓冲溶液稀释成浓度为10 mg·mL-1的去甲斑蝥素纳米胶束溶液。

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