本发明涉及动物生物制品领域，具体而言，涉及一种疫苗稀释液及其制备方法与应用。
背景技术：
：目前针对常见的畜禽病毒性疾病均无特异性的治疗药物，因此疫苗免疫是最佳的防控手段。在临床上常见的畜禽病毒类活疫苗主要有猪瘟活疫苗、猪伪狂犬病活疫苗、猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、猪流行性腹泻活疫苗、猪传染性胃肠炎活疫苗、猪轮状病毒病活疫苗、鸡痘活疫苗、鸡新城疫活疫苗等。活疫苗中除个别特殊品种外均采用冻干工艺生产，因此在使用时均需要使用疫苗稀释液溶解后使用。各类活疫苗的稀释液主要有生理盐水和磷酸盐缓冲液。目前广泛使用的疫苗稀释液结合相应疫苗免疫后抗体产生时间长、整体度差，接种后猪群群体免疫抗体水平离散度大，影响了疫苗的免疫效果。以伪狂犬病毒为例，研究表明使用当前流行毒株制备的基因缺失疫苗免疫后28天对我国新流行毒株和传统流行株均能完全保护。但PRV需要在免疫后28天左右才能提供100％的免疫保护力，而免疫后1、2、3周免疫保护率分别为5％、67％和92％。临床上通常采用1～3日龄滴鼻进行初次免疫或在6～10周龄进行肌肉注射免疫，因此按照这两种免疫方式，仔猪在29～31日龄或10～14周龄才完全避免PRV的感染。目前的免疫方案存在着长时间的免疫空白期，而此免疫空白期是PRV感染和发病的高峰期。除此之外，临床上部分猪场按照现有免疫程序免疫后出栏期育肥猪gE抗体阳性率显著升高，由此表明现有部分疫苗免疫持续期较短，不能为育肥猪提供长时期的免疫保护。鉴于优秀的疫苗稀释液在稀释疫苗的同时还对疫苗效价有保护和维持作用，从而可以保证疫苗的免疫效果。因此，为解决现有疫苗所存在的种种问题，提供一种新型疫苗稀释液非常有必要。有鉴于此，特提出本发明。技术实现要素：本发明的第一目的在于提供一种疫苗稀释液，所述的疫苗稀释液可以解决疫苗免疫后中和抗体效价低、产生时间长、抗体维持时间短的问题，可配合猪瘟疫苗、猪伪狂犬病疫苗、猪繁殖与呼吸综合症疫苗、猪流行性腹泻病疫苗、猪传染性胃肠炎疫苗或猪轮状病毒病疫苗等进行使用。本发明的第二目的在于提供一种所述的疫苗稀释液的制备方法，该方法简单易于操作。为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：一种疫苗稀释液，包括以下组份：卡波姆0.1～100g/L以及左旋咪唑0.1～200g/L；所用溶剂为水、生理盐水或磷酸盐缓冲液中的任一种。进一步优选的，如上所述的疫苗稀释液，包括以下组份：卡波姆0.1～50g/L以及左旋咪唑0.1～100g/L。进一步优选的，如上所述的疫苗稀释液，包括以下组份：卡波姆0.1～10g/L以及左旋咪唑0.1～20g/L。本发明中主要成分为卡波姆和左旋咪唑，其中左旋咪唑具有增强免疫的作用，卡波姆是一种多聚物，在水溶液中形成凝胶，可能具有缓释的功能，该物质还可以与疫苗形成复合物阻止动物体液内的抗体中和疫苗的作用。优选的，如上所述的疫苗稀释液，所述疫苗稀释液所用溶剂为含有如下组份的磷酸盐缓冲液：100～150mM氯化钠、0.5～4mM氯化钾、1～100mM磷酸氢二钠以及0.1～10mM磷酸二氢钾。优选的，如上所述的疫苗稀释液，所述疫苗稀释液所用溶剂为含有如下组份的磷酸盐缓冲液：130～140mM氯化钠、2～3mM氯化钾、1～30mM磷酸氢二钠以及1～5mM磷酸二氢钾。由于疫苗，特别是活疫苗中含有大量的生物活性物质，因而在缓冲体系下进行稀释效果最好。优选的，如上所述的疫苗稀释液，包括以下组份：卡波姆1g/L以及左旋咪唑5g/L；溶剂为含有如下组份的磷酸盐缓冲液：137mM氯化钠、2.7mM氯化钾、10mM磷酸氢二钠以及2mM磷酸二氢钾；pH＝6.8～7.4。如上所述的疫苗稀释液的制备方法，包括：将卡波姆以及左旋咪唑溶解于溶剂后灭菌即得。优选的，如上所述的疫苗稀释液的制备方法，所述灭菌的条件为：106℃～121℃高压灭菌15min～30min。如上所述的疫苗稀释液在稀释畜禽病毒性活疫苗中的应用；所述畜禽病毒性活疫苗包括以下疫苗中的一种或多种：猪瘟活疫苗、猪伪狂犬病活疫苗、猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、猪流行性腹泻病活疫苗、猪传染性胃肠炎活疫苗、猪轮状病毒病活疫苗、鸡痘活疫苗以及鸡新城疫活疫苗。优选的，如上所述的应用，按照疫苗标明的头份进行稀释，1～2ml/头份。具体实施方式下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1本实施例提供了一种疫苗稀释液，包括：将卡波姆以及左旋咪唑溶于生理盐水得到终浓度为卡波姆10g/L、左旋咪唑10g/L的疫苗稀释液，使用氢氧化纳调节pH至6.8～7.4。将疫苗稀释液按一定体积分装后于106～121℃高压灭菌15分钟后备用。实施例2本实施例提供了一种疫苗稀释液，包括：将卡波姆以及左旋咪唑溶于水得到终浓度为卡波姆1g/L、左旋咪唑10g/L的疫苗稀释液，使用氢氧化纳调节pH至6.8～7.4。将疫苗稀释液按一定体积分装后于106～121℃高压灭菌30分钟后备用。实施例3本实施例提供了一种疫苗稀释液，包括：每1L稀释液含有：100mM氯化钠、0.5mM氯化钾、100mM磷酸氢二钠、0.1mM磷酸二氢钾、1g卡波姆、20g左旋咪唑。该疫苗稀释液的制备方法为：将以上物质溶解于注射于水中，添加氢氧化纳调节pH至6.8～7.4，按一定体积分装后于106～121℃高压灭菌25分钟后备用。实施例4本实施例提供了一种疫苗稀释液，包括：每1L稀释液含有：150mM氯化钠、0.5mM氯化钾、1mM磷酸氢二钠、10M磷酸二氢钾、10g卡波姆、1g左旋咪唑。该疫苗稀释液的制备方法为：将以上物质溶解于注射于水中，添加氢氧化纳调节pH至6.8～7.4，按一定体积分装后于106～121℃高压灭菌25分钟后备用。实施例5本实施例提供了一种疫苗稀释液，包括：每1L稀释液含有：137mM氯化钠、2.7mM氯化钾、10mM磷酸氢二钠、2mM磷酸二氢钾、1g卡波姆、5g左旋咪唑。该疫苗稀释液的制备方法为：将以上物质溶解于注射于水中，添加氢氧化纳调节pH至6.8～7.4，按一定体积分装后于106～121℃高压灭菌25分钟后备用。实施例6实施例1～5所述的疫苗稀释液的使用方法：取制备的稀释液稀释冻干活疫苗，按照疫苗表明头份进行稀释，1～2ml/头份，稀释后滴鼻免疫或肌肉注射免疫。实验例1伪狂犬活疫苗免疫比对实验1、材料：1)、疫苗：猪伪狂犬病活疫苗SA215株，批号201510001，由四川华神兽用生物制品有限公司提供。2)、实验动物：21～28日龄断奶仔猪。3)、细胞培养相关材料与试剂：PK15细胞由四川华神兽用生物制品有限公司畜禽生物制品四川省重点实验室提供，胎牛血清及DMEM培养基购于ThermoFisherScientific。2、动物免疫实验21日龄断奶仔猪15头，随机分为3组，分别标记1、2、3组；免疫计量按照疫苗说明书使用，其中1组使用实施例5制备的疫苗稀释液，2组使用疫苗自带稀释液，3组只免疫疫苗稀释液(即不添加疫苗)，为阴性对照。免疫前及免疫后7、14、21、28天采集猪前腔静脉血，分离血清后进行中和抗体测定。免疫后每天观察所有猪的体温(连续测定7天)、采食、精神状况，记录相对于对照组正常的和异常的猪。3、中和抗体的测定按照常规方法传代PK15细胞，然后参照《中华人民共和国兽药典》2005版三部附录《中和实验法》中记录的固定病毒稀释血清法对所有样品进行中和抗体滴度的测定。以组为单位进行数据统计。4、实验结果1)、免疫后各组临床表现情况使用不同稀释剂免疫后，每天测定仔猪体温，连续测定7天期间所有仔猪体温均低于40.0℃，未见体温异常者。所有实验猪采食、饮水、精神状态均正常。统计结果表1所示。表1免疫后临床症状观察结果统计2)、免疫后中和抗体变化规律免疫前和免疫后均采集血清，按照《中华人民共和国兽药典》2005版要求进行中和抗体测定，结果表明使用实施例1中所述稀释液的实验猪中和抗体平均值在免疫后7、14、21、28天均不同程度的高于普通稀释液组，免疫后28天实施例1所述稀释液中和抗体比普通稀释液组高1倍。中和抗体测定结果如表2所示。表2免疫后中和抗体测定结果组别免疫前免疫后7天免疫后14天免疫后21天免疫后28天1<26.6±0.8936.6±7.5662±2.0122.33±8.892<25±1.3321.67±4.4433±5.3366±2.673<2<2<2<2<2实验例2猪瘟活疫苗免疫比对实验1、材料1)、疫苗：猪瘟耐热保护剂活疫苗(细胞源)，批号201506002，由四川华神兽用生物制品有限公司提供。2)、实验动物：21～28日龄断奶仔猪。3)、猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒购于IDEXXX公司。4)、疫苗稀释液：实施例5制备的疫苗稀释液；常规疫苗稀释液疫苗自带的生理盐水作为稀释液。2、动物免疫实验21日龄断奶仔猪15头，随机分为3组，分别标记1、2、3组；免疫计量按照疫苗说明书使用，其中1组使用实施例5中制备的稀释液，2组使用疫苗自带稀释液，3组只免疫疫苗稀释液对为阴性对照。免疫前及免疫后7、14、21、28天采集猪前腔静脉血，分离血清后进行中和抗体测定。免疫后每天观察所有猪的体温(连续测定7天)、采食、精神状况，记录相对于对照组正常的和异常的猪。3、抗体的测定按照猪瘟阻断ELISA抗体试剂盒说明书进行猪瘟抗体的测定。以组为单位进行数据统计。4、结果统计1)、免疫后各组临床表现情况使用不同稀释剂免疫后，每天测定仔猪体温，连续测定7天期间所有仔猪体温均低于40.0℃，未见体温异常者。所有实验猪采食、饮水、精神状态均正常。统计结果表3所示。表3免疫后临床症状观察结果统计2)、免疫后抗体变化规律免疫前和免疫后均采集血清，按照试剂盒说明书进行抗体效价测定，结果发现，免疫后7、14所有猪抗体均为阴性，使用实施例1稀释液组免疫后21天、28天均为阳性，抗体阻断率高于常规稀释液组，而对照组在免疫前、免疫后7、14、21、28天均为阴性。测定结果统计数据如表4所示。表4免疫后中和抗体测定结果(阻断率)最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。当前第1页1 2 3