一种绵羊鲜精保存稀释液及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种家畜精液稀释液及其应用。
【背景技术】
[0002] 人工授精是绵羊优良种群高效扩繁的有力手段，精液品质的优劣决定了人工授精 技术的成败；高效的精液保存技术在品种繁育和选择中发挥重要的作用。
[0003]目前，由于绵羊精液冷冻技术不成熟，以及特殊的生殖系统结构，国内大部分羊场 采用4°C液态保存的方法短时间储存精液，精液的有效保存时间也仅仅有1天~2天。随着 保存时间的延长，液态保存会导致精液活力降低、质膜完整性破坏、在母畜生殖道的存活时 间缩短，进而降低受精率和增加胚胎的死亡率。其中氧化应激是导致精液质量降低的主要 原因之一。
[0004] 早在1943年，MacLeod就发现精子能够产生ROS。由于精子质膜富含多不饱和脂 肪酸，因此精子对氧化应激异常敏感。另外，精子作为一种独特类型的细胞，在成熟发育的 过程中失去了大部分细胞质，并且DNA高度浓缩，这大大降低了其内源性抗氧化能力。因 此，精子抵御氧化应激依赖外源性抗氧化系统。为了提高精液的保存质量，这需要改善精液 的保存环境，通过添加抗氧化剂来保护质膜完整性、运动性以及受精能力是有效的手段。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是要解决现有绵羊的精液保存方法存在保存绵羊精液的时间短，保 存的精力活力降低，质膜的完整性被破坏，受精率低和胚胎死亡率高的问题，而提供一种绵 羊鲜精保存稀释液及其应用。
[0006] 一种绵羊鲜精保存稀释液由基础液、卵黄和虾青素制备的；所述的绵羊鲜精保存 稀释液中基础液与卵黄的体积比为8:2;所述的绵羊鲜精保存稀释液中虾青素的浓度为 0? 5ymol/L~4ymol/L〇
[0007] -种绵羊鲜精保存稀释液在绵羊鲜精保存中的应用方法，是按以下步骤完成的：
[0008] 一、制备绵羊鲜精保存稀释液：将基础液、卵黄和虾青素混合，得到绵羊鲜精保存 稀释液；
[0009] 步骤一中所述的绵羊鲜精保存稀释液中基础液与卵黄的体积比为8:2 ;
[0010] 步骤一中所述的绵羊鲜精保存稀释液中虾青素的浓度为〇. 5ymol/L~4ymol/ L；
[0011] 二、稀释绵羊精液：
[0012] 利用假阴道方法收集绵羊精液，然后向收集的绵羊精液中加入温度为35°C~ 4〇°C的绵羊鲜精保存稀释液，得到稀释后的绵羊精液；
[0013] 步骤二中所述的收集的绵羊精液与温度为35°C~40°C的绵羊鲜精保存稀释液的 体积比为1:5 ;
[0014] 三、保存精液：使用8层~10层纱布将步骤二得到的稀释后的绵羊精液进行包裹， 在放置到4°C冰箱中70h~72h，即完成一种绵羊鲜精保存稀释液在绵羊鲜精保存中的应用 方法。
[0015] 本发明的优点：
[0016]-、本发明使用的虾青素是一种高效的抗氧化剂，它是一种类胡萝卜素，普遍存 在于鱼类、虾类、海藻类动植物体内；虾青素可以有效清除氧自由基；其抗氧化能力是黏黄 素、叶黄素、角黄素、胡萝卜素等抗氧化剂的的十倍，是维生素E的一百倍；本发明在绵羊鲜 精保存稀释液中加入虾青素，可以提高精液的保存效果，延长精液的保存时间；
[0017]二、本发明具有效率高、成本低、操作简单和适用范围广等特点，为提高绵羊精液 保存效果提供了新的途径；
[0018]三、本发明在绵羊鲜精保存稀释液中加入虾青素，精液保存3天后活力高达74%， 与未添加虾青素的普通的鲜精保存稀释液相比，精液保存3天后活力提高了 10% ;
[0019]四、本发明延长精液的有效保存时间从1~2天至3天，甚至更长；
[0020] 五、本发明可以提高公羊大于30%的繁殖效率；
[0021] 六、本发明可显著提高优良公畜的利用率、减少饲养量、节约成本、提高产羔率，可 直接帮助农牧民增产增收，具有广阔的应用前景；
[0022] 本发明可获得一种绵羊鲜精保存稀释液。
【附图说明】
[0023] 图1为精子活力随时间变化的曲线图；图1中1为使用对照试验方法保存的绵羊 精子活力随时间变化的曲线图；图1中2为使用试验一方法保存的绵羊精子活力随时间变 化的曲线图；图1中3为使用试验二方法保存的绵羊精子活力随时间变化的曲线图；图1中 4为使用试验三方法保存的绵羊精子活力随时间变化的曲线图；图1中5为使用试验四方 法保存的绵羊精子活力随时间变化的曲线图；
[0024]图2为绵羊精子质膜完整性随时间的变化曲线；图2中1为使用对照试验方法保 存的绵羊精子质膜完整性随时间的变化曲线，2为使用试验一方法保存的绵羊精子质膜完 整性随时间的变化曲线，3为使用试验二方法保存的绵羊精子质膜完整性随时间的变化曲 线，4为使用试验三方法保存的绵羊精子质膜完整性随时间的变化曲线，5为使用试验四方 法保存的绵羊精子质膜完整性随时间的变化曲线；
[0025] 图3为精子MDA随时间的变化曲线；图3中1为使用对照试验方法保存的绵羊精 子MDA随时间变化的曲线图；图3中2为使用试验一方法保存的绵羊精子MDA随时间变化 的曲线图；图3中3为使用试验二方法保存的绵羊精子MDA随时间变化的曲线图；图3中4 为使用试验三方法保存的绵羊精子MDA随时间变化的曲线图；图3中5为使用试验四方法 保存的绵羊精子MDA随时间变化的曲线图；
[0026] 图4为精子ROS随时间的变化曲线；图4中1为使用对照试验方法保存的绵羊精 子ROS随时间变化的曲线图；图4中2为使用试验一方法保存的绵羊精子ROS随时间变化 的曲线图；图4中3为使用试验二方法保存的绵羊精子ROS随时间变化的曲线图；图4中4 为使用试验三方法保存的绵羊精子ROS随时间变化的曲线图；图4中5为使用试验四方法 保存的绵羊精子ROS随时间变化的曲线图。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0027] 一：本实施方式是一种绵羊鲜精保存稀释液由基础液、卵黄和虾青 素制备的；所述的绵羊鲜精保存稀释液中基础液与卵黄的体积比为8:2;所述的绵羊鲜精 保存稀释液中奸青素的浓度为〇? 5ymol/L~4ymol/L〇
[0028]本实施方式的优点：
[0029] -、本实施方式使用的虾青素是一种高效的抗氧化剂，它是一种类胡萝卜素，普遍 存在于鱼类、虾类、海藻类动植物体内；虾青素可以有效清除氧自由基；其抗氧化能力是黏 黄素、叶黄素、角黄素、胡萝卜素等抗氧化剂的的十倍，是维生素E的一百倍；本实施方式在 绵羊鲜精保存稀释液中加入虾青素，可以提高精液的保存效果，延长精液的保存时间；
[0030] 二、本实施方式具有效率高、成本低、操作简单和适用范围广等特点，为提高绵羊 精液保存效果提供了新的途径；
[0031] 三、本实施方式在绵羊鲜精保存稀释液中加入虾青素，精液保存3天后活力高达 74%，与未添加虾青素的普通的鲜精保存稀释液相比，精液保存3天后活力提高了 10%;
[0032] 四、本实施方式延长精液的有效保存时间从1~2天至3天，甚至更长；
[0033] 五、本实施方式可以提高公羊大于30%的繁殖效率；
[0034]六、本实施方式可显著提高优良公畜的利用率、减少饲养量、节约成本、提高产羔 率，可直接帮助农牧民增产增收，具有广阔的应用前景。
[0035]本实施方式可获得一种绵羊鲜精保存稀释液。
【具体实施方式】 [0036] 二：本实施方式与一的不同点是：所述的基础液是按 以下方法制备的：将3. 2g葡萄糖、3. 2g柠檬酸钠、青霉素10万IU和链霉素10万IU溶解 到100mL超纯水中，得到基础液。其他与一相同。
【具体实施方式】 [0037] 三：本实施方式与一或二的不同点是：所述的绵羊鲜 精保存稀释液中虾青素的浓度为〇. 5ymol/L~1ymol/L。其他与一或二相 同。
【具体实施方式】 [0038] 四：本实施方式与一至三的不同点是：所述的绵羊鲜 精保存稀释液中虾青素的浓度为1umol/L~2ymol/L。其他与一至三相同。
【具体实施方式】 [0039] 五：本实施方式与一至四的不同点是：所述的绵羊鲜 精保存稀释液中虾青素的浓度为2ymol/L~4ymol/L。其他与一至四相同。
【具体实施方式】 [0040] 六：本实施方式是一种绵羊鲜精保存稀释液在绵羊鲜精保存中的应 用方法是按以下步骤完成的：
[0041] 一、制备绵羊鲜精保存稀释液：将基础液、卵黄和虾青素混合，得到绵羊鲜精保存 稀释液；
[0042] 步骤一中所述的绵羊鲜精保存稀释液中基础液与卵黄的体积比为8:2;
[0043] 步骤一中所述的绵羊鲜精保存稀释液中虾青素的浓度为0.5ymol/L~4ymol/ L；
[0044] 二、稀释绵羊精液：
[0045]利用假阴道方法收集绵羊精液，然后向收集的绵羊精液中加入温度为35°C~ 4〇°C的绵羊鲜精保存稀释液，得到稀释后的绵羊精液；
[0046] 步骤二中所述的收集的绵羊精液与温度为35°C~40°C的绵羊鲜精保存稀释液的 体积比为1:5;
[0047] 三、保存精液：使用8层~10层纱布将步骤二得到的稀释后的绵羊精液进行包裹， 在放置到4°C冰箱中70h~72h，即完成一种绵