Elisa检测试剂盒两种稀释液指示剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化ISA稀释液指示剂的发明，属于分析检测技术领域。
【背景技术】
[0002] ELISA检测技术广泛应用于人、动、植物疫病及体内多种目标成分检测；食品安全 监测中农药、兽药残留筛查等领域。由于其操作简单，所需设备价低量少，敏感性高、特异性 强，因此得W广泛应用。
[0003] 在化ISA检测技术领域，无论夹必法、间接法还是竞争法所用的稀释液主要有2 种。国外进口试剂盒中2种不同的稀释液中均加有不同的指示剂，W防止操作者混用。此 夕b每一反应步骤所用成分经稀释后，加入酶标板孔槽内因有明显颜色，操作者可有效防止 加样失误造成的跳孔或错加，从而保障检测结果的准确性和可重复性。我国各类化ISA试 剂盒在稀释液中未添加不同的指示剂，当样品数量多，在加样过程中容易出现跳孔或重复 加样问题，造成检测结果重复性及准确性差。因此开展此项发明研究。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是所选指示剂必须颜色鲜艳、水溶性好，不易让操作 者皮肤及所接触的材料着色，不易粘附在酶标反应孔内壁和试验台面上；对原有试剂盒的 检测结果判定没有影响。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明是通过W下技术方案实现：
[0006] (1)选择不同颜色、不同特性的染料，经溶解配制成浓缩液。将亮藍及碱性藍26 两种染料用纯净水充分溶解，均配制成0. 5mg/ml水溶液，分装于踪色塑料瓶内，4°C冰箱保 存。
[0007] (2)按不同浓度分别加入化ISA各反应步骤所用的稀释液中，比较对检测结果的 影响。将试剂盒中样品稀释液，按每6ml加入不同体积的碱性藍26水溶液（0. 5mg/ml)，分 别观察指示剂颜色、对酶标板孔壁的粘附性及对结果的影响，最终确定每6ml样品稀释液 加120ul碱性藍26水溶液（0. 5mg/ml)。将试剂盒中抗体-酶复合物稀释液，按每6ml加入 不同体积的亮藍水溶液（0. 5mg/ml)，分别观察指示剂颜色深浅、对酶标板孔壁的粘附性及 对结果的影响，最终确定每6ml抗体-酶复合物稀释液加120ul亮藍水溶液（0. 5mg/ml)。
【具体实施方式】
[0008] 通过与国内、外化ISA试剂盒系列试验验证，所用指示剂对检测结果的判定无影 响。按上述试验结果筛选的指示剂及使用浓度分别加入到已商品化的国、内外化ISA检测 试剂盒，与原试剂盒所用稀释液同时对相同样品进行验证试验，根据0D值及最终结果判定 为评判指标。
[0009] 实例1国外牛结核病Y干扰素化ISA检测试剂盒验证结果
[0010] 1.实验方法及步骤
[0011] (1)指示剂的配制：将亮藍及碱性藍26分别配制成0. 5mg/ml水溶液。
[0012] (2)稀释液的配制：将试剂盒中血浆稀释液，按每6ml加入120ul碱性藍26水溶液 (0. 5mg/ml);将试剂盒中抗体-酶复合物稀释液，按每6ml加入120ul亮藍水溶液（0. 5mg/ ml);
[0013] (3)分别用新配置的2种稀释液稀释样品及抗体-酶复合物，同时用试剂盒原对应 的稀释液同时对22份样品进行检测，测定样品0D值，按试剂盒标准判定结果。
[0014] 2.实验结果
[0015] 新配置的加亮藍及碱性藍26的2种稀释液化ISA检测结果与原化ISA检测结果 0D值基本无差异，所检样品结果判定完全一致。
[0016] 表1牛结核病Y干扰素化ISA检测试剂盒（国外产品）验证结果
[0017]
[001引实例2国内猪癌抗体ELISA检测试剂盒验证结果
[0019] 1.实验方法及步骤
[0020] (1)指示剂的配制：将亮藍及碱性藍26分别配制成0. 5mg/ml水溶液。
[0021] (2)稀释液的配制；将试剂盒中血清样品稀释液，按每6ml加入120ul碱性藍26 水溶液（0. 5mg/ml);将试剂盒中抗体-酶复合物稀释液，按每6ml加入120ul亮藍水溶液 (0. 5mg/ml)；
[0022] (3)分别用新配置的2种稀释液稀释样品及抗体-酶复合物，同时用试剂盒原对应 的稀释液同时对32份样品进行检测，测定样品0D值，按试剂盒标准判定结果。
[0023] 2.实验结果
[0024] 新配置的加亮藍及碱性藍26的2种稀释液化ISA检测结果与原化ISA检测结果 0D值基本无差异，所检样品结果判定完全一致。
[0025] 表2猪癌抗体ELISA检测试剂盒（国内产品）验证结果
[0026]
【主权项】
1. 一种染料指示剂用于ELISA检测稀释液，其特征在于，利用抗原抗体反应体外反应 特性，染料对生物组织的亲嗜性，染料对酶标板孔壁的物理吸附特性，进行系列试验筛选而 成。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，ELISA样品稀释液和抗体-酶复合物稀释 液所用指示剂为碱性蓝26和亮蓝。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述染料指示剂亮蓝和碱性蓝26均用纯 净水充分溶解，配制成〇. 5mg/ml水溶液作为浓缩液。4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，每6ml样品稀释液加120ul碱性蓝26浓 缩液。5. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，每6ml抗体-酶复合物稀释液加120ul亮 蓝浓缩液。
【专利摘要】本发明ELISA检测试剂盒两种稀释液指示剂属于分析检测技术领域。为酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒在研制过程中，针对每步实验步骤所用稀释液，加入对试验结果无干扰作用的染料指示剂，避免操作失误，确保最终检测结果可靠。其具体步骤为：(1)选择不同颜色、不同特性的染料，经溶解配制成浓缩液；(2)经试验优化确定指示剂在稀释液中含量；(3)通过与国内、外ELISA检测试剂盒的试验验证，证明所用指示剂对检测结果判定无影响。本发明填补了我国ELISA检测试剂盒所用不同稀释液无颜色区别，解决了ELISA操作过程中存在的加样跳孔或重复加样问题，避免检测过程出现差错。
【IPC分类】G01N33/536
【公开号】CN105277686
【申请号】CN201410289476
【发明人】赖平安, 刘鑫, 何悦, 柏亚铎, 张伟, 张朝晖, 汪琳, 高志强
【申请人】赖平安
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2014年6月26日