一种棕榈酰抗坏血酸酯和多西紫杉醇的组合物纳米粒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于注射给药治疗肿瘤的组合物纳米制剂，尤其涉及一种复方棕榈酰抗坏血酸酯和多西紫杉醇的组合物纳米粒及其制备方法。通过将棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇组合，体内外实验均发现其可以显著增强多西紫杉醇的抗肿瘤药效，使多西紫杉醇在极低的剂量下就能发挥药效，经静脉、动脉、肌肉、皮下、腹腔等方式给药，特别是用于静脉注射或瘤内注射等介入给药，提高了多西紫杉醇临床应用的有效性和安全性。本发明采用的制备方法工艺简单、成本低廉，制备得到的纳米粒粒径均匀，包封率高，释药性能良好，与棕榈酰抗坏血酸酯及多西紫杉醇的单方纳米粒相比，该复合物的体外抑制肿瘤细胞生长和体内抗肿瘤增生作用得到显著增强。
【专利说明】
一种棕榈酰抗坏血酸酯和多西紫杉醇的组合物纳米粒
技术领域
[0001] 本发明涉及一种用于注射给药治疗肿瘤的组合物纳米制剂，尤其涉及一种复方棕 榈酰抗坏血酸酯和多西紫杉醇的组合物纳米粒及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 多西紫杉醇是目前临床使用最为有效的紫杉烷类抗肿瘤药物。多西紫杉醇的作用 机制与紫杉醇类似，但抗肿瘤活性是紫杉醇的1.3-12倍，临床用于乳腺癌、前列腺癌、肺癌、 胃癌、卵巢癌、宫颈癌、头颈癌、胰腺癌、非小细胞肺癌等。由于多西紫杉醇水溶性差，目前临 床使用的主要有冻干粉针和水针注射剂，该注射剂先将药物溶解于吐温80中，临床使用前， 用13 %乙醇水溶液稀释至lmg/mL，而在给药时，进一步用5%葡萄糖溶液稀释，使最终药物 浓度达到0.3~0.9mg/L，稀释后的注射液应在4小时内使用，否则将可能会有沉淀产生。研 究发现，Tween-80会诱导短暂适中的超敏反应，因此在使用前均须使用抗组胺类药物和菲 甾体抗炎药物进行预处理，但药物的临床应用表明，即使是经过预处理的患者，在临床应用 紫杉烷类药物后，仍有3%左右的患者会出现不同程度的过敏反应。此外Tween-80还具有轻 微的溶血性，而且黏度大。多西紫杉醇作为细胞毒性抗肿瘤药物，其全身毒性，特别是造成 中性粒细胞减少症等免疫系统毒性，给患者的身心造成了极大的损害，使其临床应用也因 此受到了一定局限。因此，如何减轻多西紫杉醇注射液的毒性，成为人们所十分关注的热点 之一。
[0003] 棕榈酰抗坏血酸酯是抗坏血酸的一种脂溶性衍生物，与抗坏血酸相比，其稳定性 更强，具备更好的理化性质。脂溶性增强后，棕榈酰抗坏血酸与抗坏血酸相比进入细胞的能 力增强，药效增强。前期研究已经表明抗坏血酸可以增强多西紫杉醇的抗肿瘤作用及安全 性。因此其与抗坏血酸、多西紫杉醇或它们的组合物比较，经静脉、动脉、肌肉、皮下、腹腔等 给药，特别是瘤内注射、介入给药等给药方式可以更加显著的增强多西紫杉醇的抗肿瘤作 用及安全性。而与抗坏血酸相似的是，棕榈酰抗坏血酸可以选择性的在肿瘤细胞内发挥药 效，对正常细胞毒性小，因此毒副作用较小。
[0004] 抗肿瘤药物在发挥抗肿瘤细胞作用的同时，亦可损伤正常细胞药物。治疗的一个 关键问题是如何把药物定向输送到癌症细胞而又不损伤正常细胞。纳米粒因其超微小体 积，日益受到人们的关注。载药纳米控释系统用于抗肿瘤药物的转运有望通过延缓药物释 放速度，减慢其转化为代谢物，从而减轻其毒性作用，是一种很有前途的抗肿瘤药物载体。 纳米技术是将宏观物体细分成超微颗粒，在纳米尺寸范围内，通过直接操纵单个原子、分子 束组装和创造具有特定功能的新物质，使其物理、化学及生物活性产生意想不到的巨变。可 生物降解聚合物制成的纳米级微粒的研究日益受到生物医药学领域的重视，这种聚合物包 括天然和合成类聚合物，前者主要有葡聚糖、白蛋白、甲壳素及其衍生物、卵磷脂、胆固醇 等，后者主要有聚酯类如聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)、聚乳酸羟基乙酸(PLGA)、聚酸酐 类、半固态聚原酸酯类等。近年来，将可生物降解的聚合物制成纳米粒，这种聚合物的纳米 粒可控释药物，避免药物降解或泄漏，改变可降解单体的比例和聚合反应条件来调节聚合 物在体内降解，提高疗效，降低不良反应;将这种聚合物进行表面修饰可以使药物在体内靶 向分布。PLGA是美国FDA批准用于临床试验的可生物降解高分子聚合物，由两种单体一乳酸 和羟基乙酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容 性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领 域。在体内代谢终产物为〇) 2和出0,对人体无毒副作用。所形成的两亲多糖衍生物可有效避 免药物载体本身可能的毒副作用，可用作医用手术防粘连膜，注射用微胶囊、微球、纳米粒 及埋植剂等缓释制剂的辅料，同时可用作组织工程细胞培养的多孔支架。
[0005] PLGA-磷脂-PEG-biotin纳米粒具备极其显著的优势，磷脂的加入可以增加PLGA纳 米粒的包封率和载药量，并且磷脂上丰富的活性基团可用于各种小分子靶头的键合，用于 主动靶向；本组合物可加入DSPE-PEG-BIOTIN(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物 素），是一种新型的靶头，其不仅可以通过BIOTIN靶向于肿瘤细胞上的SMVT(Na+依赖的多维 生素转运体)通道，还可以通过PEG的加入起到在体内长循环的作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种复方棕榈酰抗坏血酸酯和多西紫杉醇的组合物纳米 粒及其制备方法。本发明的复方棕榈酰抗坏血酸酯和多西紫杉醇的组合物纳米粒具有良好 的包封率、载药量和稳定性;粒径分布集中，大小分布均匀:粒径为80-200nm，包封率为70% 以上，多西紫杉醇的载药量为0.03 %~1.67 %，棕榈酰抗坏血酸酯的载药量为3.57 %~ 25.37%〇
[0007] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0008] 本发明涉及一种复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，包括各组 分和组分之间的质量百分比如下：
[0009] 多西紫杉醇:棕榈酰抗坏血酸酯：高分子材料:表面活性剂:磷脂类物质=3~30: 0.024~2.4:30~120:0~600:0~144
[0010] 本发明所述高分子材料可为天然高分子材料和生物可降解合成高分子材料中的 一种或几种材料混合。
[0011]优选的天然高分子材料选自明胶、海藻酸盐、壳聚糖、葡聚糖、甲壳素、白蛋白；
[0012] 最优选的天然高分子材料选自白蛋白。
[0013] 优选的白蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羊血清白蛋白、驴血清白蛋白、 马血清白蛋白、兔血清白蛋白、猪血清白蛋白、酪蛋白。
[0014] 优选的生物可降解合成高分子材料选自PLA(聚乳酸）、PGA(聚羟基乙酸）、PLGA(聚 乳酸羟基乙酸）、PCL(聚己内酯酸）、PVA(聚乙烯醇）、。
[0015] 最优选的生物可降解合成高分子材料选自PLA(聚乳酸）、PGA(聚羟基乙酸）、PLGA (聚乳酸羟基乙酸）。
[0016] 优选的PLGA分子量为500~100000长链高分子，其乳酸与羟基乙酸的比例为15:85 ~85:15中的一种或几种材料混合。
[0017] 本发明所述磷脂类物质可为磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘 油、憐脂酉支、
[0018] 二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷 脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰、二棕榈酰磷脂酸、二油酰磷脂酰胆碱、二 油酰磷脂酰乙醇胺、
[0019] 卵磷脂、大豆磷脂、心磷脂、天然或合成的脑磷脂及其混合物。
[0020] 优选为卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂、心磷脂。
[0021] 优选为卵磷脂、大豆磷脂、
[0022]所述的表面活性剂选自聚乙二醇-十二羟基硬脂酸锂、泊洛沙姆、吐温、司盘、脱氧 胆酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸、胆酸、牛黄胆酸盐中的一种或几种材料混合。
[0023] 优选的泊洛沙姆选自泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338、泊 洛沙姆407;
[0024] 优选的吐温选自吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80、吐温-85;
[0025] 优选的司盘选自司盘-80;
[0026] 最优选的选自聚乙二醇-十二羟基硬脂酸锂、泊洛沙姆188、吐温-80、脱氧胆酸盐。
[0027] 本发明所述冻干保护剂可为乳糖、海藻糖、甘露醇、葡萄糖、蔗糖中的一种或几种 材料混合。更优选的冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇。
[0028] 本发明还涉及一种上述复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒的制 备方法，可以采用下述不同方法制备：
[0029] 方法一：
[0030] A、将生物可降解合成高分子材料溶解于有机溶剂中形成高分子材料有机溶液；
[0031] B、棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇加入高分子材料有机溶液中涡旋形成的溶液 作为油相；
[0032] C、将磷脂类物质溶于4%的有机水溶液中，加入表面活性剂，水浴除去有机溶剂， 作为水相；
[0033] D、将油相滴加入磁力恒温搅拌着的水相中；
[0034] E、滴加完后继续搅拌2小时以除去有机溶剂；
[0035] F、将除去有机溶剂的纳米粒溶液加入透析袋中透析过夜后，加入冻干保护剂冷冻 干燥，即得。
[0036] 步骤A中，所述生物可降解合成高分子材料浓度优选为2.5mg/mL~20mg/mL;
[0037]有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇；
[0038]步骤B中，棕榈酰抗坏血酸与生物可降解合成高分子材料的质量比为0.024~2.4: 30~120,棕榈酰抗坏血酸与多西紫杉醇的质量比为0.024~2.4:3~30;
[0039] 步骤C中，所使用的有机溶剂选自二氯甲烷、丙酮、乙醇、异丙醇；
[0040] 表面活性剂其浓度为Omg/mL~30mg/mL;
[0041] 磷脂类物质与生物可降解合成高分子材料的质量比为0~144:30~120;
[0042] 水浴温度设定为35 °C~80 °C;
[0043] 步骤D中，油相与水相的体积比为1: 2~1:15，油相滴加速度为0.5mL/min~4mL/ min;磁力搅拌时搅拌速度为200rpm~4000rpm，温度设定为15°C~70°C。
[0044] 方法二：
[0045] A、将处方量的棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇溶解于有机溶剂中，形成的溶液作 为油相；
[0046] B、将处方量的天然高分子材料溶解于蒸馏水中，恒温水浴后得到的溶液作为水 相；
[0047] C、将油相滴加入恒温并搅拌着的水相中；
[0048] D、加入戊二醛水溶液，继续搅拌固化；
[0049] E、旋转蒸发除去有机溶剂；
[0050] F、过0.22μπι微孔滤膜，加入冻干保护剂冷冻干燥，即得。
[0051]没有用到磷脂类物质和表面活性剂。
[0052]方法二的步骤Α中棕榈酰抗坏血酸与多西紫杉醇的质量比为0.024~2.4: 3~30; 优选的有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇；
[0053] 方法二的步骤B中，天然高分子材料浓度为0.5mg/mL~5mg/mL;水浴温度设定为35 。(:~100。。；
[0054] 方法二的步骤C中，油相与水相的体积比为1:2~15;油相滴加速度为0.5mL~5mL/ min;搅拌时搅拌速度为200rpm~5000rpm，恒温的温度设定为15°C~80°C ;
[0055] 方法二的步骤D中，戊二醛水溶液中戊二醛的浓度优选是2%。
[0056]方法二的步骤E中，旋转蒸发温度设定为25°C~80°C。
[0057]有益技术效果
[0058]本发明的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒具有良好的包封 率、载药量和稳定性。
[0059]本发明的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒与棕榈酰抗坏血酸 酯单方纳米粒及多西紫杉醇的单方纳米粒相比，药效明显增强，可以显著提高多西紫杉醇 的抗肿瘤效果，且毒性降低，安全性高。提高了多西紫杉醇临床用药的安全性及有效性，具 有重要的实际应用前景。
[0060]本发明的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒制备方法具有工艺 简便、制备成本低、工艺重现性好、实验处方和工艺可放大到生产应用等特点，因而对产业 化的应用具有指导意义。
【附图说明】
[0061 ]图1为静注2mg/kg给药后多西紫杉醇溶液组与纳米粒组在大鼠体内的血药浓度-时间曲线
【具体实施方式】
[0062]纳米粒评价方法：
[0063 ]纳米粒的粒径的测定:采用激光粒度测定仪测定。
[0064]包封率以及载药量的测定:0.3mL的复方纳米粒过葡聚糖凝胶柱，用生理盐水为洗 脱液，分开游离的药物和纳米粒后，收集纳米粒组分，用甲醇破乳定容后用HPLC进行测定， 计算得复方纳米粒浓度Ci。另取0.3mL复方纳米粒用甲醇定容到与上柱后纳米粒组分相同 体积，然后进样并计算得复方纳米粒破乳后总浓度Co。根据以下公式计算包封率 (Encapsulation Efficiency，EE%)以及载药量(Drug Loading Efficiency ,DLE% )：
[0065]
[0066]
[0067] 实施例1: 一种复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒配方及其制备 如下：
[0068] 所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒制备工艺为：
[0069] A、将PLA溶解于6mL丙酮中形成PLA丙酮溶液；
[0070] B、将棕榈酰抗坏血酸酯与多烯紫杉醇加入PLA丙酮溶液中涡旋形成溶液，作为油 相；
[0071] C、将卵磷脂溶于10%的乙醇溶液中，加入泊洛沙姆188和DSPE-PEG-BI0TIN(DPB) 后，其中卵磷脂:〇?8 = 10:1，（《/?)，30°(：水浴除去乙醇作为水相；
[0072] D、将油相以lmL/min的速度滴加入1000rpm，30°C恒温搅拌着的水相中；
[0073] E、滴加完后继续搅拌2小时以除去丙酮；
[0074] F、将除去丙酮的纳米粒溶液加入透析袋中透析过夜后，加入500g甘露醇冷冻干 燥，即得。
[0075]实验结果：
[0076]表1.实施例1的实验结果
[0077]
[0078]
[0079] 多烯紫杉醇:D0C，棕榈酰抗坏血酸酯：PA，DSPE-PEG-BIOTIN:DPB，卵磷脂:DPB=10 :1，（w/w)·
[0080] 制剂评价标准:粒径：100~200nm，包封率：>80%，PA载药量：1 %~20 %为合格制 剂
[0081] 实施例2:-种复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒配方及其制备 如下：
[0082] 所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒制备工艺为：
[0083] A、将PGA溶解于4L丙酮中形成PGA丙酮溶液；
[0084] B、将棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇加入PGA丙酮溶液中涡旋形成溶液，作为油 相；
[0085] C、将卵磷脂溶于20%的二氯甲烷溶液中，加入聚乙二醇-十二羟基硬脂酸锂后，30 °c水浴除去二氯甲烷作为水相；
[0086] D、将油相以lmL/min的速度滴加入100rpm，30°C恒温搅拌着的水相中；
[0087] E、滴加完后继续搅拌2小时以除去丙酮；
[0088] F、将除去丙酮的纳米粒溶液加入透析袋中透析过夜后，加入100g海藻糖冷冻干 燥，即得。
[0089]实验结果：
[0090]表2.实施例2的实验结果
[0091]
[0092] _____
[0093]多烯紫杉醇:D0C，棕榈酰抗坏血酸酯:PA，聚乙二醇-十二羟基硬脂酸锂:PEG-12-OH-Li
[0094] 制剂评价标准:粒径：100~200nm，包封率：>80%，PA载药量：1 %~20 %为合格制 剂
[0095] 实施例3:-种复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒配方及其制备 如下：
[0096]所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒制备工艺为：
[0097] A、将PLGA溶解于5L丙酮中形成PLGA丙酮溶液；
[0098] B、将棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇加入PLGA丙酮溶液中涡旋形成溶液，作为油 相；
[0099] C、将大豆磷脂溶于20%的二氯甲烷溶液中，加入吐温-80后，30°C水浴除去二氯甲 烷作为水相；
[0100] D、将油相以lmL/min的速度滴加入500rpm，30°C恒温搅拌着的水相中；
[0101] E、滴加完后继续搅拌2小时以除去丙酮；
[0102] F、将除去丙酮的纳米粒溶液加入透析袋中透析过夜后，加入100g海藻糖冷冻干 燥，即得。
[0103] 实验结果：
[0104] 表3.实施例3的实验结果
[0105]
[0106] 夕师系t夕0?: uul ,你個剛:饥外皿阪閉：。
[0107] 制剂评价标准:粒径：100~200nm，包封率：>80%，PA载药量：1 %~20 %为合格制 剂
[0108] 实施例4: 一种复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒配方及其制备 如下：
[0109] 所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒制备工艺为：
[0110] 将棕榈酰抗坏血酸酯和多西紫杉醇溶解于丙酮中，作为油相;将牛白蛋白溶解于 5L蒸馏水中，40°C水浴3h后得到的溶液作为水相;将油相以2mL/min的速度滴加入500rpm， 80 °C恒温搅拌着的水相中；加入2 %戊二醛水溶液，继续搅拌12h; 30 °C旋转蒸发除去有机溶 剂;过0.22μπι微孔滤膜，加入100g乳糖冷冻干燥，即得。
[0111] 实验结果：
[0112] 表4.实施例4的实验结果
[0113]
[0114] 多烯紫杉醇:D0C，棕榈酰抗坏血酸酯:PA。
[0115] 制剂评价标准:粒径：100~200nm，包封率：>80%，PA载药量：1 %~20%为合格制 剂。
[0116] 实验例1:棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇合用对肿瘤细胞的作用 [0117] MTT法测定肿瘤细胞活性
[0118] 对数生长期的细胞株经0.25 %胰酶消化后，用含10 %胎牛血清的RPMI1640培养液 配成单细胞悬液，以3 X103个/mL的密度接种于96孔板中，每孔加入100yL细胞悬液，置于37 °C、5%C02培养箱中无菌培养箱中培养24h，待细胞充分贴壁后，去除原有的培养液，每孔加 入用培养液配制的不同浓度的多西紫杉醇溶液50yL，再加入用用培养液配置的不同浓度棕 榈酰抗坏血酸酯50yL。对照组加入含0.1 %DMS0的培养液，37°C培养72h。培养结束后吸弃药 液，每孔加入roS 100yL洗去残留的药液，每孔加入含10 % 5mg/mL MTT工作液培养液100yL， 37 °C继续培养4h。吸弃上清液，每孔加入150yL DMS0，振荡1 Omin以充分溶解结晶物，在酶标 仪570nm下测定0D值，按下列公式计算给予多西紫杉醇后肿瘤细胞的抑制率，并采用SPSS数 据处理软件计算半数抑制浓度(IC 50)。
[0119]
[0120]根据各浓度药物的抑制率，应用SPSS统计分析软件计算半数抑制浓度IC5Q，并依据 IC50计算多西紫杉醇与不同浓度的棕榈酰抗坏血酸酯合用后IC5Q减少倍数。
[0121] PA提高了药物A的化疗作用的判断方法
[0122] IR(A+PA)>IR(A)，表示PA的存在提高了药物A的化疗作用，右上角标记为气
[0123] 协同作用判断方法
[0124] 用以下的计算方法对协同作用进行判断：
[0125] IR(A+B)>IR(A)+IR(B)-IR(A)XIR(B)，药物间存在协同作用；
[0126] IR(A+B) = IR(A)+IR(B)-IR(A)XIR(B)，药物间只是简单叠加作用；
[0127] IR(A+B)<IR(A)+IR(B)-IR(A)XIR(B)，药物间存在拮抗作用；
[0128] 其中11?以+8)，11?以），11?(8)分别对应药物48联用4单独作用及8单独作用时的生 长抑制率。
[0129] IR(A)+IR(B)-IR(A)XIR(B)的结果示为预测值，如AB联用的抑制率{IR(A+B)}大 于预测值，则表示合用具有协同作用。右上角标记^为具有协同作用。如抑制率为负值者记 为0〇
[0130] 上述细胞株选自：人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG-II、人肺癌细胞株 A549、人胃癌细胞株SGC-7901、人原位胰腺腺癌细胞株BxPC-3、人宫颈癌细胞株Hela。
[0131] PA合用多西紫杉醇对人乳腺癌细胞株MCF-7的作用结果见表1-1，表1-2。
[0132] PA合用多西紫杉醇对人肝癌细胞株HepG-II的作用结果见表2-1，表2-2。
[0133] PA合用多西紫杉醇对人肺癌细胞株A549的作用结果见表3-1，表3-2。
[0134] PA合用多西紫杉醇对人胃癌细胞株SGC-7901的作用结果见表4-1，表4-2。
[0135] PA合用多西紫杉醇对人原位胰腺腺癌细胞株BxPC-3的作用结果见表5-1，表5-2。
[0136] PA合用多西紫杉醇对人宫颈癌细胞株Hela的作用结果见表6-1，表6-2。
[0137] 表1-1.PA合用多西紫杉醇对MCF-7的作用结果
[0138]
[0139] 注："^"表示具有协同作用；"A"表示PA可以提高化疗药作用
[0140] 表1-2.多西紫杉醇单独作用MCF-7和与不同浓度PA合用后的IC5Q值及药效增加倍 数
[0141]
[0142] 注："A"表示PA可以提高化疗药作用
[0143] 表2-1.PA合用多西紫杉醇对HepG-II的作用结果
[0144]
[0145]
[0146] 注："Μ"表示具有协同作用；"A"表示PA可以提高化疗药作用
[0147] 表2-2.多西紫杉醇单独作用HepG-II和与不同浓度PA合用后的IC5Q值及药效增加 倍数
[0148]
[0149] 注："A"表示PA可以提高化疗药作用
[0150] 表3-1.PA合用多西紫杉醇对A549的作用结果
[0151]
[0152] 注："^"表示具有协同作用；"A"表示PA可以提高化疗药作用
[0153] 表3-2.多西紫杉醇单独作用A549和与不同浓度PA合用后的IC5Q值及药效增加倍数
[0154]
[0155] 汪：-衣不PA口」以捉咼化灯约忭用
[0156] 表4-1.PA合用多西紫杉醇对SGC-7901的作用结果
[0157]
[0158]
[0159] 注："μ"表示具有协同作用；"A"表示PA可以提高化疗药作用
[0160] 表4-2.多西紫杉醇单独作用SGC-7901和与不同浓度PA合用后的IC5Q值及药效增加 倍数
[0161]
[0162] 注："A"表示PA可以提高化疗药作用
[0163] 表5-1.PA合用多西紫杉醇对BxPC-3的作用结果
[0164]
[0165] 注："表示具有协同作用；"A"表示PA可以提高化疗药作用
[0166] 表5-2.多西紫杉醇单独作用BxPC-3和与不同浓度PA合用后的IC5Q值及药效增加倍 数
[0167]
[0168] 注："A，"表示PA可以提高化疗药作用
[0169] 表6-1.PA合用多西紫杉醇对Hela的作用结果
[0170]
[0171] 注："Μ"表示具有协同作用；"A"表示PA可以提高化疗药作用
[0172] 表6-2.多西紫杉醇单独作用Hela和与不同浓度PA合用后的IC5Q值及药效增加倍数
[0173]
[0174]注："A"表示PA可以提高化疗药作用
[0175] 药动学实验
[0176] 实验例1:复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒与多西紫杉醇溶液 的药动学性质比较
[0177] 取大鼠6只，按体重随机分成两组，每组三只大鼠，按2mg/kg剂量静注给予0.5mg/ mL多西紫杉醇溶液(大鼠编号为如.1、如.2、如.3)、复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇组 合物纳米粒(棕榈酰抗坏血酸酯:多西紫杉醇= 6:1，其中多西紫杉醇浓度为0.5mg/mL，大鼠 编号为No · 4、Νο · 5、No · 6)，分别于给药前约0 · 25h和给药后0 · 083h、0 · 25h、0 · 5h、lh、2h、4h、 8h、12h、24h、48h取血，约200yL至肝素化试管中，于8000rpm离心5min，分离出血衆，于-80 °C 保存供测试。
[0178]表7.大鼠静注给予2mg/kg多西紫杉醇溶液后的血药浓度(yg/L)
[0179]
[0180] 表8.大鼠静注给予2mg/kg多西紫杉醇溶液后大鼠体内的药代动力学参数
[0181]
[0182] 表9.大鼠静注给予2mg/kg复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇组合物纳米粒后的 血药浓度（yg/L)
[0183]
[0184] 表10.大鼠静注给予2mg/kg复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇纳米粒后大鼠体 内的药代动力学参数
[0185]
【主权项】
1. 一种复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征在于，各组分和组 分之间的质量百分比如下： 多烯紫杉醇:棕榈酰抗坏血酸酯:高分子材料:表面活性剂:磷脂类物质=3~30:0.024 ~2.4:30~120:0~600:0~144。2. 根据权利要求1所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征 在于，所述高分子材料可为天然高分子材料和生物可降解合成高分子材料中的一种或几种 材料混合。天然高分子材料可为明胶、海藻酸盐、壳聚糖、葡聚糖、甲壳素、白蛋白；生物可降 解合成高分子材料可为PLA(聚乳酸）、PCL(聚己内酯酸）、PLGA(聚乳酸羟基乙酸）、PVA(聚乙 烯醇）、PGA(聚羟基乙酸）。3. 根据权利要求1所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征 在于，所述高分子材料优选白蛋白和PLGA。白蛋白可为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、羊血 清白蛋白、驴血清白蛋白、马血清白蛋白、兔血清白蛋白、猪血清白蛋白、酷蛋白；PLGA分子 量为500~100000长链高分子，其乳酸与羟基乙酸的比例为15:85~85:15中的一种或几种 材料混合。4. 根据权利要求1所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征 在于，所述表面活性剂可为聚乙二醇-十二羟基硬脂酸锂、泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛 沙姆237、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407、吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80、吐温-85、司盘-80、脱氧胆酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸、胆酸、牛黄胆酸盐中的一种或几种材料混合。5. 根据权利要求1所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征 在于，所述表面活性剂优选聚乙二醇-十二羟基硬脂酸锂、泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、脱氧 胆酸盐。6. 根据权利要求1所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征 在于，所述磷脂类物质可为磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、 二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆 碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰、二棕榈酰磷脂酸、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷 脂酰乙醇胺、卵磷脂、大豆磷脂、心磷脂、天然或合成的脑磷脂及其混合物。7. 根据权利要求1所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征 在于，所述磷脂类物质优选卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂、心磷脂。8. 根据权利要求1所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其特征 在于，所述冻干保护剂可为乳糖、海藻糖、甘露醇、葡萄糖、蔗糖中的一种或几种材料混合。9. 根据权利要求1所述的包载复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒，其 特征在于，可以采用下述不同方法制备： 方法一： A、 将生物可降解合成高分子材料溶解于有机溶剂中形成高分子材料有机溶液； B、 棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇加入高分子材料有机溶液中涡旋形成的溶液作为 油相； C、 将磷脂类物质溶于4%的有机水溶液中，加入表面活性剂，水浴除去有机溶剂，作为 水相； D、 将油相滴加入磁力恒温搅拌着的水相中； E、 滴加完后继续搅拌2小时以除去有机溶剂； F、 将除去有机溶剂的纳米粒溶液加入透析袋中透析过夜后，加入冻干保护剂冷冻干 燥，即得。 方法二： A、 将棕榈酰抗坏血酸酯与多西紫杉醇溶解于有机溶剂中，形成的溶液作为油相； B、 将天然高分子材料溶解于蒸馏水中，恒温水浴后得到的溶液作为水相； C、 将油相滴加入磁力恒温搅拌着的水相中； D、 加入2 %戊二醛水溶液，继续搅拌固化； E、 旋转蒸发除去有机溶剂； F、 过0.22μπι微孔滤膜，加入冻干保护剂冷冻干燥，即得。10.根据权利要求9中所述的复方棕榈酰抗坏血酸酯/多西紫杉醇的组合物纳米粒制备 方法一，其特征在于，步骤Α中，所述生物可降解合成高分子材料浓度为2.5mg/mL~20mg/ mL;有机溶剂可为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇、乙醚、异丙醇及其混合物。
【文档编号】A61K9/14GK105997982SQ201610294264
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年4月29日
【发明人】卢杨, 王子厚, 郭朝瑞, 陈西敬, 赵娣, 李宁, 陈琪, 马恩龙, 张玲
【申请人】陈西敬