用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的治疗剂或预防剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供了对角膜上皮病变和/或结膜上皮病变有效且安全的预防和治疗药品或补充剂。具体而言，本发明提供了一种用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的治疗剂或预防剂，其特征在于包含如下物质作为活性成分：二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸、含有所述脂肪酸作为组成脂肪酸的甘油酯或磷脂，或所述脂肪酸的低级醇酯。优选的是，治疗剂或预防剂以精制鱼油或精制磷虾油的形式包含EPA和/或DHA。当以EPA和/或DHA或其酯的总量计，每日摄取约50mg至5,000mg剂量的所述治疗剂或预防剂时，可减轻角膜上皮病变和/或结膜上皮病变，或者可以恢复眼泪量。
【专利说明】
用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的治疗剂或预防剂
技术领域
[0001] 本发明涉及诸如角膜上皮病变和/或结膜上皮病变等眼病的治疗和预防，所述角 膜上皮病变和/或结膜上皮病变是由下列因素引起的：由于干眼、隐形眼镜和眼睑内倒长睫 毛产生的刺激、结膜结石、病毒性结膜炎和过敏性结膜炎。
【背景技术】
[0002] 随着个人电脑、手机等的普及，患眼疲劳或感觉眼睛有某种不适的人数正在增加。 特别是，对于隐形眼镜的使用者，因凝视屏幕而造成不适（如眼干和砂砾感）的主诉病例越 来越多。眼干(也就是干眼病)作为所述症状的原因引起了人们的关注。
[0003] 干眼病是由于泪液减少或性质改变而在眼睛表面上产生病变的疾病，因此由于泪 量的降低而造成眼睛发干并容易损伤，并且使得隐形眼镜使用困难。
[0004] 根据2006年干眼病协会(Dry Eye Society)对于干眼病的诊断标准，当确认存在 如下全部三项症状时，则诊断为干眼病：自觉症状(通过VAS测试对疼痛和干燥进行评价）； 泪液异常(通过泪液膜破坏时间或SchirmeH式验进行评价）；以及角膜和结膜病变(通过荧 光素染色或孟加拉玫瑰红染色进行评价），当确认存在其中两项症状时，则怀疑为干眼病。
[0005] 生理盐水滴眼液和粘性滴眼液（例如硫酸软骨素）被用作干眼病的对症治疗。此 外，一种治疗涉及到封闭泪液排出口，以便让泪液尽可能长时间地留在眼睛表面上。
[0006] 除了干眼病之外，由于隐形眼镜和眼睑内倒长睫毛产生的刺激、结膜结石、病毒性 结膜炎、过敏性结膜炎等还可能会导致在角膜上皮和/或结膜上皮上产生细小的伤痕。
[0007] 专利文献1中描述了用于干眼病的营养补充剂，其包括合并使用富含GLA的亚麻籽 油、二十碳五烯酸（以下称为EPA)和/或二十二碳六烯酸（以下称为DHA)。非专利文献1描述 了必需脂肪酸对于干眼病的效果。
【背景技术】 [0008] 文献
[0009] 专利文献
[0010] 专利文献1:日本未审查专利申请公开(PCT申请的翻译)No.2005-535733
[0011] 非专利文献
[0012] 非专利文献1: "干眼病治疗中的必需脂肪酸（Essential Fatty Acids in the Treatment of Dry Eye)"，The Ocular Surface，8(l)，18_28页，2010。
【发明内容】
[0013] 本发明要解决的问题
[0014] 干眼病即使在不严重时也会损害日常生活的舒适度。本发明的目标是研究导致干 眼病的原因并提供一种安全的治疗方法，而不用担心不是对症治疗的副作用。
[0015] 解决问题的手段
[0016] 在对n-3脂肪酸缺乏小鼠的深入研究中，本发明的发明人发现n-3脂肪酸缺乏小鼠 的眼泪量减少，推测n-3脂肪酸与眼泪量有关。此外，本发明的发明人还发现，通过给n-3月旨 肪酸缺乏小鼠施用具有高含量EPA和DHA(其为n-3脂肪酸）的精制鱼油，可以使眼泪量恢复 到正常水平，从而完成了本发明。
[0017] 本发明概括为（1)至（7)所述的用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的治疗剂 和/或预防剂以及(8)至（13)所述的眼泪量恢复剂。
[0018] (1)一种用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的治疗剂和/或预防剂，包含EPA 和/或DHA或其酯作为活性成分。
[0019] (2)(1)所述的治疗剂和/或预防剂，其中所述角膜上皮病变和/或结膜上皮病变是 由以下因素构成的组中的任意一者所引起的病变：由于干眼病、隐形眼镜和眼睑内倒长睫 毛产生的刺激、结膜结石、病毒性结膜炎和过敏性结膜炎。
[0020] (3)(1)或(2)所述的治疗剂和/或预防剂，其中以甘油酯、低级醇酯、磷酸酯或精制 鱼油的形式包含EPA和/或DHA的酯。
[0021] (4)(1)至(3)中的任一项所述的治疗剂和/或预防剂，其目的为每日摄取总计至少 约50mg至5，OOOmg的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸或其酯。
[0022] (5)(1)至(3)中任一项所述的治疗剂和/或预防剂，其目的为每日摄取总计至少约 300mg至3，OOOmg的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸或其酯。
[0023] (6)(1)至(3)中任一项所述的治疗剂和/或预防剂，其目的为每日摄取总计至少约 1，OOOrng至2，OOOrng的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸或其酯。
[0024] (7)(1)至(6)中任一项所述的治疗剂和/或预防剂，还包含生育酚作为抗氧化剂。
[0025] (8)-种眼泪量恢复剂，包含EPA和/或DHA或其酯作为活性成分。
[0026] (9)(8)所述的眼泪量恢复剂，其中以甘油酯、低级醇酯、磷酸酯或精制鱼油的形式 包含EPA和/或DHA的酯。
[0027] (10) (8)或（9)所述的眼泪量恢复剂，其目的为每日摄取总计至少约50mg至5， OOOrng的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸或其酯。
[0028] (11) (8)或（9)所述的眼泪量恢复剂，其目的为每日摄取总计至少约300mg至3， OOOrng的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸或其酯。
[0029] (12) (8)或(9)所述的眼泪量恢复剂，其目的为每日摄取总计至少约l，000mg至2， 100mg的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸或其酯。
[0030] (13)(8)至(12)中任一项所述的眼泪量恢复剂，还包含生育酚作为抗氧化剂。
[0031]本发明的优点
[0032]可以通过施用EPA和DHA(其为n-3脂肪酸)来治疗或预防由下列因素引起的角膜上 皮病变和/或结膜上皮病变：由于干眼、隐形眼镜和眼睑内倒长睫毛产生的刺激、结膜结石、 病毒性结膜炎和过敏性结膜炎。EPA和DHA能够增加眼泪量，从而缓解所述症状。因此，可以 提供能够减轻上述症状(如干眼病)的、为精制鱼油形式的药剂、补充剂等，这种精制鱼油形 式的药剂、增补剂等食用历史长并且不用担心其副作用。
[0033]附图简要说明
[0034] 图1示出了利用VAS测试评价的眼睛疼痛的自觉评估的结果。在该图中，根据Mann-Whitney U检验，*Ρ〈0 · 05、#Ρ〈0 · 1表明存在显著差异。
[0035] 图2为示出了利用VAS测试评价眼睛干燥的结果的图。
[0036]图3为示出了测量泪液膜破坏时间的结果的图。η = 24或30。在该图中，根据Mann- Whitney U检验，*P〈0 · 05、#P〈0 · 1表明存在显著差异。
[0037]图4为示出了利用荧光素染色评价眼睛伤痕的结果的图。n = 24或30。
[0038]图5为示出了图4的变化量的图。
[0039]图6为示出了利用孟加拉玫瑰红染色评价眼睛伤痕的结果的图。n = 24或30。
[0040] 图7为示出了图6的变化量的图。在该图中，根据Mann-Whitney U检验，*P〈0.05表 明存在显著差异。在该图中，根据双因素4从^4，*扑〈0.05表明存在显著差异。
[0041 ]图8为示出了利用Schirmer试验评价眼泪量的结果的图。n = 24或30。
[0042]本发明的实施方式
[0043]本发明涉及用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的预防剂和/或治疗剂，包含 EPA和/或DHA或其酯作为活性成分。虽然有几项报告中将亚麻籽油等n-6型脂肪酸用作干眼 病的治疗，但是单独摄入n-3脂肪酸(尤其是EPA和DHA)会如何影响角膜上皮病变和/或结膜 上皮病变仍是未知的。
[0044]本发明的发明人发现，缺乏n-3脂肪酸会使眼泪量显著减少，并证实通过摄入包含 EPA和DHA的精制鱼油会使所述的眼泪量恢复。
[0045]用于本发明中的EPA和/或DHA优选为与甘油的酯，即甘油三酯、甘油二酯、单甘油 酯；或磷脂，即磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、心磷 月旨、磷脂酸(全部包含溶菌酶体）；或与低级醇(碳数：1至5)的酯，即甲酯、乙酯，等等。优选以 诸如EPA和DHA等n-3脂肪酸为主要成分并且基本上不含n-6型脂肪酸。特别是，n-6型脂肪酸 的总量优选为10重量％以下，更优选为5重量％以下。
[0046]具体而言，可将精制鱼油、浓缩油(通过酶反应或化学反应将精制鱼油中的EPA和 DHA浓缩的油）等用作甘油三酯。此外，可将磷虾油等用作磷脂。包含EPA和DHA的n-3多不饱 和脂肪酸的来源包括:鱼或贝类提取物、动物提取物、蛋黄提取物、植物提取物、菌类提取物 等等，优选磷虾油、鱼油、鱼提取物、鱿鱼提取物、鲣鱼卵巢提取物、基因修饰植物提取物、网 黏菌类(labyrinthulea)提取物等等。磷虾油、鱿鱼提取物和鲣鱼卵巢提取物是具有高磷脂 含量的物质。利用包括浓缩、提取和/或精制、混合等技术领域中常规已知的技术，可以根据 需要调节所述物质的磷脂浓度和纯度。
[0047]已知EPA和/或DHA对于高脂血症和过敏症状是有效的，很多的药剂和各种补充剂 已是可商购的。可将与这些药剂和补充剂类似的胶囊形式用于本发明的目的。另外，可通过 将其添加到各种饮料和食品中来进行摄取。
[0048] 具体而言，通常使用的是由油脂加工得到的胶囊，其中精制鱼油中添加有抗氧化 剂。
[0049] 精制鱼油可以是来自于任何鱼的鱼油，只要所述鱼油包含EPA和DHA即可。EPA含量 高的鱼油的例子包括沙丁鱼油、鳕鱼肝油等，而DHA含量高的鱼油的例子包括金枪鱼油、鲣 鱼油等。
[0050] 浓缩EPA/DHA油是指这样的脂肪或油，其中通过使用脂肪酶等，由于位置选择性和 脂肪酸选择性使得精制鱼油的甘油三酯中EPA/DHA的浓度增加（参见日本审查的专利申请 公开 Νο·Η4-16519)。
[0051] 对患有干眼病症状的患者经口施用本发明的治疗剂和/或预防剂，其中EPA和/或 DHA或其酯的每日总剂量为大约50mg至5，000mg、优选为300mg至3，OOOmg、更优选为大约 900mg至2，100mg、并且最优选为1，100至l，900mg，所述剂量一次或分次服用。连续施用至少 4周后观察到效果。
[0052] EPA和/或DHA在其他施用方法中使用历史悠久，因此相信没有安全性问题。
[0053]可将已经确定为对恢复眼疲劳有利的花青素、叶黄素、小米草、毛果槭、维生素等 添加至本发明的用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的治疗剂和/或预防剂或眼泪量恢 复剂中。
[0054]现在利用实施例对本发明更详细地说明，但是本发明决不局限于这些实施例。
[0055] 实施例1
[0056] 产生n-3脂肪酸缺乏动物
[0057]实验动物用饲料一般包含具有适当DHA含量的n-3脂肪酸；因此，为了产生n-3脂肪 酸缺乏动物，必须使用不包含n-3脂肪酸的特殊饲料。此外，正常饲养的动物从出生之前到 断奶期会从胎盘和母兽乳汁中接受到充分的DHA摄入，因此仅在一代之内便产生目标n-3月旨 肪酸缺乏动物并不是容易的。考虑到这些事实，以AIN93G(美国营养研究所(American Institute of Nutrition)发表的用于小鼠和大鼠营养研究的标准精制饲料组成)作为基 础饲料来制备包含7%的脂肪和油的n-3脂肪酸缺乏饲料(n-3Def，亚麻酸：14.4% ;α-亚麻 酸:0.1 % )。将含有α-亚麻酸（18:3，η_3)的n-3脂肪酸(n_3Adq，亚麻酸：14.3 % ;α-亚麻酸： 2.6%)用作正常饲料。雌性小鼠断奶之后(3周龄)立即喂食这些饲料，然后饲养;接下来，使 所述小鼠在成熟之后进行交配，得到第二代小鼠，所述第二代雄性小鼠长到11月龄时用于 实验。另外，为了在实验进行时避免来自母兽的任何影响，这样设定试验，使得各组中的样 本均具有不同的母兽。
[0058] 制备测试药
[0059] 将鱼油（日本水产株式会社生产的精制鱼油ΕΡΑ-28(含有28%以上的ΕΡΑ和12%以 上的DHA))用作测试药，并且调节剂量，使得DHA含量为5mg/头，ΕΡΑ含量为llmg/头。对照组 中使用棕榈油，这样制备所述棕榈油，使得其脂肪酸含量与鱼油组相当。鱼油的主要脂肪酸 组成显示在表1中（18:2的n-6型脂肪酸含量为1.1 %，20:4的n-6型脂肪酸含量为1.3% )。
[0060] 表 1
[0061]
[0062] 操作过程
[0063] 使用用以检查泪液量的酚红棉线（Zone-Quick，得自SH0WAYAKUHIN ΚΑΚΟ株式会 社)来测量n_3Def和n_3Adq小鼠在30秒内分泌的眼泪量(棉线显示为红色处的长度）。将这 些小鼠分成两组，每组经口施用鱼油或棕榈油混合饲料7天；随后，在第8天再次测量泪液 量，在第9天对与视力相关的视网膜和与泪液分泌相关的泪腺和睑板腺取样，并测量脂肪酸 组成。
[0064] 实验结果和讨论
[0065]泪液依次由睑板腺分泌的脂质层、泪腺分泌的水层和结膜分泌的粘液层构成，其 中与外部接触的层为第一层。干眼病也称为角膜干燥病，是由于眼球表面干燥而产生伤痕 和病变的眼病，伴有眼睛不适和视觉功能损害;其中，泪腺分泌的水层泪液减少的泪液缺乏 型干眼病和由睑板腺分泌的脂质层不足造成的蒸发型干眼病是已知的。
[0066] 在大龄的n-3脂肪酸缺乏小鼠中表现出泪液量明显减少，这表明出现了干眼病症 状(表2)。与对照组相比，鱼油组(其中，对所述n-3脂肪酸缺乏小鼠施用了7天鱼油)观察到 表现出眼泪量的显著增加(眼泪量恢复）（表3)。另外，因为所述眼泪量几乎与正常小鼠的眼 泪量相同，因此认为眼泪量几乎完全恢复。从与眼泪量有关的器官中EPA和DHA的脂肪酸组 成结果来看，观察到由于施用鱼油而在泪腺和睑板腺中都发生EPA和DHA增加(表4)。
[0067] 从以上结果明确看出，n-3脂肪酸缺乏动物表现出明显的干眼病症状，并且所述症 状因摄取鱼油而恢复。另外，从施用鱼油之后脂肪酸组成的反应结果来看，认为n-3脂肪酸 缺乏动物的干眼病症状是由于泪腺和睑板腺这二者或者其中任一者的功能降低导致泪液 分泌量减少所造成的。
[0068] 表 2
[0069]
[0070] (**:P〈0.01，t 检验）
[0071] 表3
[0072]
[0073] (*: P〈0 · 05，与对照组相比，t检验）
[0074] 表 4
[0075] 主要器官的脂肪酸组成(相对于总脂肪酸的百分比，％ )
[0076]
[0077] (#: P〈0 · 01，与对照组相比，t检验）
[0078] 实施例2
[0079]使用与实施例1相同的鱼油（日本水产株式会社生产的精制鱼油EPA_28(含有28% 以上的EPA和12 %以上的DHA))，证实对人角膜上皮病变的效果。
[0080] 试验方案概要
[0081] 针对根据干眼病诊断标准（2006,干眼病协会(Dry Eye Society))确诊干眼病的 27例受试者，利用双盲试验来评价EPA和DHA的效力。服用活性补充剂或安慰补充剂12周，同 时使用滴眼剂等继续正常的干眼病治疗。活性剂组施用精制鱼油胶囊（15个胶囊），以每日 摄取l，245mg的EPA和540mg的DHA。安慰剂组施用中链甘油三酯(MCT)胶囊（15个胶囊）。测定 总共5个时间的效力:施用之前;施用后第4周、第8周和第12周;和施用后随访期的第4周。 [0082] 对以下6项进行评价：
[0083] ?利用VAS测试的眼睛疼痛的主观评价:使用视觉模拟评分法对疼痛度进行视觉 评价。
[0084] ?利用VAS测试的眼睛干燥的主观评价:使用视觉模拟评分法对干燥度进行视觉 评价。
[0085] #泪液膜破坏时间（BUT，Tear film breakup time):干眼病的诊断标准之一。在 该测试中，要求受试者在滴入荧光素后停止眨眼，测量这之后直到角膜表面泪液膜破坏的 时间。测量泪液保持力。10秒以上评为正常，5秒以下评为疑似干眼病。
[0086] ?利用荧光素染色法的眼睛伤痕的评价:滴入被称为荧光素的黄色染色液，以染 色眼睛表面上的伤痕，从而评价干眼病的严重程度。所述荧光素还会将结膜染色，但是其主 要使得能够对角膜上伤痕加以评价。
[0087] ?利用孟加拉玫瑰红染色对眼睛伤痕的评价:滴入被称为孟加拉玫瑰红的红色染 色液，以染色眼睛表面上的伤痕，从而评价干眼病的严重程度。玫瑰红主要使得能够对粘液 层受损的结膜加以评价。
[0088] ?利用Schirmer试验的眼泪量评价:Schirmer试验是测量泪液分泌量的测试，包 括将细长的滤纸夹在下眼睑上5分钟，测量被泪液润湿的长度。5_以下评为异常值。
[0089]题
[0090]活性组中的受试者数量为12人，安慰剂组中为15人。
[0091]各评价项的结果显示在图1至8中。
[0092]关于利用VAS测试的眼睛疼痛的评价、泪液膜破坏时间和孟加拉玫瑰红染色测试， 发现与安慰剂组相比存在具有统计差异的影响。同样在其他的评价中，也观察到活性组与 安慰剂组相比更有利的趋势。
[0093] 实施例3
[0094] 以有眼疲劳症状的患者为对象，利用双盲随机对照试验来比较活性组与安慰剂组 之间的效果，其中活性组以胶囊形式每日服用162mg的EPA、784mg的DHA、59mg的花色素和 17mg的叶黄素，安慰剂组服用包含中链甘油三酯的胶囊。
[0095] 莖里
[0096] 活性组中的受试者数量为11人，安慰剂组中为9人。在开始施用之后4周进行主观 症状评价，此时与安慰剂组相比，在活性组中，在眼睛症状中的干燥方面存在统计学上显著 的改善。另外，在活性组中，与施用之前相比，在施用开始之后4周，在眼睛症状中的疲劳感、 眨眼、眼充血和视力模糊方面观察到显著改善。
[0097] 工业实用性
[0098] 本发明可以提供用以缓解眼睛病变(尤其是角膜上皮病变和结膜上皮病变)并改 善不适感等的药剂和补充剂，其中所述角膜上皮病变和结膜上皮病变由各种原因引起，例 如由于干眼病、使用隐形眼镜和眼睑内倒长睫毛产生的刺激、结膜结石、病毒性结膜炎和过 敏性结膜炎。
【主权项】
1. 一种用于角膜上皮病变和/或结膜上皮病变的治疗剂或预防剂，包含下列物质作为 活性成分:二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸、含有所述脂肪酸作为组成脂肪酸的甘油酯 或磷脂、或所述脂肪酸的低级醇酯，其中所述治疗剂或预防剂不包含n-6型脂肪酸。2. 根据权利要求1所述的治疗剂或预防剂，其中所述角膜上皮病变和/或结膜上皮病变 是由以下因素构成的组中的任意一者所引起的病变：由于干眼病、隐形眼镜和眼睑内倒长 睫毛产生的刺激;结膜结石;病毒性结膜炎;和过敏性结膜炎。3. 根据权利要求1所述的治疗剂或预防剂，其中以精制鱼油或精制磷虾油的形式包含 所述的含有二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸作为组成脂肪酸的甘油酯或磷脂。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的治疗剂或预防剂，其目的为每日摄取总计50mg至 5，OOOmg的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸。5. 根据权利要求1至3中任一项所述的治疗剂或预防剂，其目的为每日摄取总计300mg 至3，OOOmg的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸。6. 根据权利要求1至3中任一项所述的治疗剂或预防剂，其目的为每日摄取总计900mg 至2, lOOmg的二十碳五稀酸和/或二十二碳六稀酸。7. 根据权利要求1至3中任一项所述的治疗剂或预防剂，还包含生育酚作为抗氧化剂。8. -种眼泪量恢复剂，包含如下物质作为活性成分:二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯 酸、含有所述脂肪酸作为组成脂肪酸的甘油酯或磷脂、或所述脂肪酸的低级醇酯，其中所述 眼泪量恢复剂不包含n-6型脂肪酸。9. 根据权利要求8所述的眼泪量恢复剂，其中以精制鱼油或精制磷虾油的形式包含所 述的含有二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸作为组成脂肪酸的甘油酯或磷脂。10. 根据权利要求8或9所述的眼泪量恢复剂，其目的为每日摄取总计50mg至5，OOOmg的 二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸。11. 根据权利要求8或9所述的眼泪量恢复剂，其目的为每日摄取总计300mg至3,000mg 的二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸。12. 根据权利要求8或9所述的眼泪量恢复剂，其目的为每日摄取总计900mg至2，100mg 的二十碳五烯酸和/或二十二碳六烯酸。13. 根据权利要求8或9所述的眼泪量恢复剂，还包含生育酚作为抗氧化剂。
【文档编号】A61P27/02GK105997973SQ201610474982
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2011年11月18日
【发明人】原马明子, 川端二功, 守口徹, 川北哲也, 坪田男, 坪田一男
【申请人】日本水产株式会社, 学校法人麻布兽医学园, 学校法人庆应义塾