基于切片式去细胞支架构建的人工神经移植物及制备方法与流程

文档序号:12344540阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种组织工程神经移植物,其特征在于,所述神经移植物基于切片式去细胞支架构建而成。

2.根据权利要求1所述的一种组织工程神经移植物,其特征在于,所述神经移植物由切片式去细胞支架和京尼平交联细胞因子,负载自体干细胞构建而成。

3.根据权利要求2所述的一种组织工程神经移植物,其特征在于,所述自体干细胞来源于鼻腔呼吸部粘膜细胞的外胚间充质干细胞。

4.一种组织工程神经移植物的制备方法,其特征在于,按照如下步骤进行:以固定液固定组织,冰冻切片后进行去细胞处理,以京尼平交联细胞因子,制备京尼平交联支架上;培养患者自体外胚间充质干细胞,种植于所述京尼平交联的支架上,以纤维蛋白原和凝血酶粘合载细胞切片支架构建神经移植物。

5.根据权利要求4所述的一种组织工程神经移植物的制备方法,其特征在于,所述组织来源为哺乳动物的脊髓、骨骼肌或肌腱;所述固定液为4%多聚甲醛;所述冰冻切片要求为纵向切片,切片厚度为600μm。

6. 根据权利要求4所述的一种组织工程神经移植物的制备方法,其特征在于,所述去细胞处理具体操作为:用3%(wt.%)Triton X-100、1M氢氧化钠、10%(wt.%)十二烷基磺酸钠及4%(wt.%)脱氧胆酸钠依次浸泡去除切片内细胞成分。

7.根据权利要求4所述的一种组织工程神经移植物的制备方法,其特征在于,所述京尼平交联细胞因子的具体操作为:去细胞处理后得到的去细胞支架按体积比1:20浸泡于DMEM/F-12培养液中,培养液中预混表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、神经营养因子及神经营养素3,随后加入预灭菌的磷酸缓冲液配制的京尼平溶液,于细胞培养箱内37℃培养12h,出现呈色反应,溶液呈深蓝色,切片从白色变为蓝色。

8.根据权利要求4所述的一种组织工程神经移植物的制备方法,其特征在于,所述患者自体外胚间充质干细胞来源于鼻腔呼吸部粘膜细胞。

9. 根据权利要求4所述的一种组织工程神经移植物的制备方法,其特征在于,所述纤维蛋白原浓度8-10 mg/mL;所述凝血酶浓度50-100 IU/mL。

10.根据权利要求4所述的一种组织工程神经移植物的制备方法,其特征在于,以纤维蛋白原和凝血酶粘合载细胞切片支架构建神经移植物的具体操作为:制备出含截面为弧形凹槽的载体;将载细胞切片支架层叠在弧形凹槽内,或者卷曲后置于槽内,加入纤维蛋白原与凝血酶,构建人工神经移植物。

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