本发明涉及一种采用超临界萃取从滇橄榄中提取具有提高滋味能力功效的生物活性成分滇橄榄多酚的方法，属于天然活性成分提取技术领域。
背景技术：
滇橄榄（Fructusphyllanthi），又名余甘子，为大戟科叶下珠属植物滇橄榄（Phyllanthusemblica L）的果实，其果鲜食酸甜酥脆而微涩，回味甘甜；我国野生滇橄榄分布在云南、广西、福建、海南等地；作为一种常用藏药，与诃子，毛诃子三者在藏药中常被称为“三大果”使用频率很高，在《藏药标准》所载的 290 种藏药成药中，含滇橄榄的有72种，占总数的25%，卫生部药品标准1995年版藏药标准所载200种成药中，有59种含滇橄榄，占29%，滇橄榄被载入《中国药典》1977年版一部；大量的研究证实，滇橄榄具有清咽润喉、开胃消食、解酒、调节血脂、美容、抗衰老等功效。
从已有的文献分析，可以发现比较明确的橄榄和滇橄榄解酒护肝的药效成分中至少含有部分的黄酮类物质、醇类物质、多酚类物质，但其具体的成分的鉴别及配比的系统研究还未开展。国内对滇橄榄的开发利用极为重视，我国主要对滇橄榄提取物做了大量研究工作，并且已经开发出众多功能性产品，在食品保健、香精香料及医药临床上巳得到广泛应用（《一种口腔护理制剂及其制备方法》，申请号：201110291992.4；《以滇橄榄、梅子、苦丁茶和烟草制备的烟用香料及其应用》，申请号：201410520369.5；《滇橄榄复方茶及其制备方法》，申请号：201310593498.2）。滇橄榄中含有较多的多酚，目前对滇橄榄多酚提取分离纯化研究较少且多酚的得率不高。而且，最新的研究趋势中，对于多酚在提高滋味能力方面的功效的投入越来越大。因而，开展有针对性的滇橄榄多酚提取新技术的研究及在提高滋味能力功效方面的应用效果研究，可以提高滇橄榄的应用价值。
滇橄榄果肉多酚是一类重要的活性成分，具有多种药理活性及提高滋味能力方面的应用越来越普遍。目前国内对多酚的提取方法主要有传统的热水浸提与发酵法等，所得产品得率不高，并还存在诸如回收率低、杂质多、高温引起热敏性成分的破坏、溶剂残留等方面的缺陷（ 如《一种余甘子多酚的提取方法》，申请号：201410007922.5；《余甘子提取物及其制备方法与应用》，申请号：200710027398.8）。新兴的超临界、亚临界萃取技术等成为解决提取方面问题的解决方案之一。传统方法普遍存在着各自的缺点，如回收率低、杂质多、高温引起热敏性成分的破坏、溶剂残留等等。
作为近十几年国内外迅速发展起来的超临界CO2萃取技术，是一种较新的不使用或少使用有机溶剂的绿色萃取技术，应用于滇橄榄果肉多酚的提取，对滇橄榄果肉多酚生产现代化具有重要意义。以提高滇橄榄果肉多酚提高滋味能力功效为目的的超临界辅助提取法，能够克服常规回流法、有机溶剂萃取对活性物质带来的不利影响；超临界萃取是利用超临界能加热与样品相接触的溶剂，将所需化合物从样品基体中分离，进入溶剂中的一个过程。本方法具有无环境污染，工艺简单，且具有高效、省时、成本低及易于规模化工业生产等优点，从而提供了一种绿色环保、前景广阔的多酚提取技术。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种提高滇橄榄多酚滋味能力的超临界萃取方法，其克服了现有技术的不足之处，得到滇橄榄果肉多酚具有更好的滋味能力，并可在食品、化妆品、烟草及医药领域中应用。该提取方法对目标成分的回收率高，提取时间少，溶剂量少，得率高，成本低等特点；而且原料处理简单，简化了样品预处理，无环境污染，工艺简单，且具有高效，省时和成本低等优点，从而提供了一种绿色环保、前景广阔的植物叶中多酚提取技术。
按照本发明提供的技术方案：一种提高滇橄榄多酚滋味能力的超临界萃取方法，步骤如下：
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按80~200目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的滇橄榄果肉粒度的粉末样品10.0~15.0 g，置于萃取器中，选择温度40~60℃和压力40~100MPa，将含100~200mL、质量浓度50%~80%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质滇橄榄果肉粉末中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行动态萃取0.2~1.8h；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得收集产物静置冷却后，进行浓缩、干燥得到滇橄榄多酚最终产品。
步骤（4）所述浓缩，选择条件为0.01MPa下减压蒸馏2~4h。
步骤（4）所述干燥，选择条件为真空干燥或者冷冻干燥。
本发明的有益效果：本发明制备得到的滇橄榄果肉多酚具有提高滋味能力功效，通过本方法所制备的滇橄榄多酚，适宜于工业化生产，所得滇橄榄果肉多酚得率比传统回流提取法提高14.29%~34.68%；所得滇橄榄果肉多酚滋味能力效果比传统回流提取法滋味能力效果提高12.31%~98.46%，具有明显的提高滋味能力效果。
具体实施方式
以下给出实施例，对本发明作进一步说明。
实施例1
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按100目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的100目滇橄榄果肉粒度的粉末样品12.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为50℃和萃取压力为90MPa，将含150mL的60%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行1h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏3h、冷冻干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为83.96±0.25 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为1.29。
实施例2
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按200目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的200目滇橄榄果肉粒度的粉末样品15.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为50℃和萃取压力为80MPa，将含150mL的60%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行1h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏3h、冷冻干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为79.20±0.13 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为1.26。
实施例3
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按100目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的100目滇橄榄果肉粒度的粉末样品12.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为60℃和萃取压力为100MPa，将含100mL的70%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行0.6h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏2h、冷冻干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为76.97±0.21 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为1.18。
实施例4
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按80目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的80目滇橄榄果肉粒度的粉末样品10.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为60℃和萃取压力为80MPa，将含100mL的70%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行0.8h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏2h、真空干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为73.42±0.31 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为0.97。
实施例5
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按100目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的100目滇橄榄果肉粒度的粉末样品12.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为40℃和萃取压力为60MPa，将含120mL的80%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行0.8h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏4h、真空干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为78.33±0.24 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为1.09。
实施例6
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按80目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的80目滇橄榄果肉粒度的粉末样品10.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为60℃和萃取压力为50MPa，将含120mL的50%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行0.2h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏4h、真空干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为75.29±0.19 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为0.84。
实施例7
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按200目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的200目滇橄榄果肉粒度的粉末样品10.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为50℃和萃取压力为40MPa，将含200mL的50%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行1.8h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏3h、冷冻干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为73.14±0.27 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为0.88。
实施例8
（1）原料处理：称取清洁并干燥的滇橄榄果肉，置于60℃恒温恒湿干燥器内烘至恒重，使得滇橄榄果肉的含水率低于0.01%；然后将真空干燥箱温度调至105℃烘至恒重，并按120目粒度选择要求过筛后，备用；
（2）动态萃取：准确称取（1）得到的120目滇橄榄果肉粒度的粉末样品15.0g，置于萃取器中，选择萃取温度为40℃和萃取压力为40MPa，将含200mL的50%乙醇作为夹带剂随CO2通入萃取器中，被萃取物质中的有效成分溶解在液态或超临界状态的CO2中进行0.2h动态萃取；CO2流体经过分离器，通过降低压力和升高温度等途径将其转变成气态从分离器中分离出去，而被提取的萃取物就留在分离器中，分离出的CO2气体经冷凝后循环使用；
（3）多酚产品收集：在（2）动态萃取结束时，超临界萃取体系通过一个流量控制阀，以大气压力减压，并将多酚产品收集在一个500mL的收集瓶内；
（4）浓缩、干燥：将步骤（3）所得提取产物静置冷却后，进行0.01MPa下减压蒸馏2h、冷冻干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。
以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为71.25±0.18 mg GAE/100 g及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为0.73。
实施例9
传统回流提取对照组：称取粒度为100目的滇橄榄粉末5.0g，放置于500mL圆底烧瓶中，按料液质量比1︰60加入质量分数60%的乙醇溶液300mL，40℃水浴中回流提取6h后过滤，然后进行0.01MPa下减压蒸馏3h、冷冻干燥即可得到滇橄榄多酚最终产品。以Folin-Ciocalteu法测定并计算所得滇橄榄果肉多酚的得率为62.34±0.64 mg GAE/100 g，及以60%乙醇配制浓度为100μg/mL，采用Dot 值法即多酚类物质的浓度/各自的浓度阈值测定并计算滋味能力为0.65。