含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法与流程

文档序号:13628277阅读:292来源:国知局
本发明涉及一种含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法。特别地,本发明涉及一种含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法,其中,从被喂食浆果的蜗牛获得的蜗牛黏液利用蜗牛黏液中所含有的黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白而增强皮肤再生、皮肤弹性和保湿能力,使得可以利用浆果中所含有的多酚来减少皮肤中的活性氧和防止皮肤老化。本发明的化妆品组合物中的被喂食浆果的蜗牛的黏液作为天然原料对人体是无害的,且通过减轻由外部环境造成的皮肤压力来防止皮肤问题。
背景技术
:人体皮肤在老化的过程中会发生各种物理和化学变化,并且经过积极的研究发现,原因主要分为内因性老化和光老化。皮肤老化可能是由因紫外线而导致的自由基激活、压力、疾病状况、环境因素、创伤和年龄所引起的。随着这些状态逐渐加强,体内的抗氧化防御网会受到破坏,并且细胞和组织会受到损伤,从而刺激皮肤老化。换言之,诸如脂质、蛋白质、多糖和核酸等皮肤的主要成分被氧化,使得皮肤细胞和组织受到破坏,并最终出现皮肤老化现象。特别地,蛋白质氧化会引起作为皮肤结缔组织的胶原蛋白、透明质酸、弹性蛋白、蛋白多糖、纤连蛋白等等的裂解,因此,皮肤的弹性会降低。因此,当通过清除身体新陈代谢过程中所产生的自由基或由紫外线辐射介导的自由基来保护细胞膜并且通过活性代谢使已经损伤的细胞再生而使细胞增殖时,皮肤可以快速恢复,并且可以保持健康的皮肤。关于最近经常使用的且具有防止皮肤老化的效果的现有技术,韩国注册专利公开no.10-1315325公开了一种用于改善皮肤皱纹和皮肤美白的含有抗氧化成分的皮肤外用组合物。上述的皮肤外用组合物含有选自硫辛酸、生育酚、辅酶q10、硒和维生素c的至少两种抗氧化成分,以便清除自由基或增大与抗氧化相关的皮内保护因子的活性,从而具有改善皮肤皱纹和皮肤美白的优异效果。现有技术的皮肤外用组合物是具有清除自由基效果的物质,并且已经通过将该组合物与化妆品或药物混合而用于防止皱纹和其他皮肤疾病。然而,现有技术的该组合物是昂贵的,并且因为低稳定性,所以当该混合物被混合时,其会被氧化,因此使得可能难以获得实质的效果。换言之,为了减少由各种压力源而引起的皮肤刺激并减小由于使用化妆品而引起的副作用,迫切地需要开发出一种具有抗氧化效果并减轻皮肤刺激的物质。此外,还需要一种能够通过使用对人体具有较小副作用的天然产物的活性成分来制造这种物质的方法。因此,为了改善由自由基引起的皮肤老化和问题,必要的是,开发一种改善抗氧化效果并没有副作用的优异的天然产物,以便开发含有天然产物的化妆品并开发最佳的制造方法。关于用来改善配方的稳定性并使用天然材料来解决上述常规问题的现有技术,韩国注册专利公开no.10-1208012公开了一种含有被喂食红参的蜗牛的黏液的化妆品组合物。更特别地,该公开涉及一种含有从被喂食红参的蜗牛得到的蜗牛黏液的化妆品组合物。上述现有技术可以通过使用廉价的天然材料代替昂贵的原材料而降低制造成本,并且因为使用了天然材料,所以可以制造对人体无害的化妆品组合物。然而,根据上述现有技术,当使用红参粉末喂养蜗牛时,因为红参的气味和味道太强烈,所以蜗牛会嫌弃饲料。当强行喂食红参粉末时,蜗牛会感受到压力,并无法摄取饲料,从而减少了蜗牛黏液。此外,上述的蜗牛吸收了少量的红参,所以在蜗牛黏液中会检测到少量的作为红参成分的皂角甙。少量的皂角甙无法发挥其功能,使得不适合添加到化妆品组合物中。技术实现要素:技术问题为了解决上述问题,本发明的目的在于提供一种含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法,其中,从被喂食浆果的蜗牛获得蜗牛黏液,以便通过使用浆果中所含有的多酚来减少皮肤中的活性氧和防止皮肤老化,而且通过使用蜗牛黏液中所含有的黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白来增强皮肤再生、皮肤弹性和保湿能力。此外,本发明的目的在于提供一种含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法,其中,本发明的化妆品组合物中的被喂食浆果的蜗牛的黏液作为天然原料对人体是无害的并且通过减轻由外部环境引起的皮肤压力来防止皮肤问题。技术方案根据本发明,在20℃至35℃的温度和60%至80%的湿度下在浆果树苗上养殖蜗牛。浆果选自蓝莓、野樱莓和巴西莓。包含黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白成分的蜗牛黏液从所述蜗牛获得,且所述蜗牛黏液包含作为所述浆果成分的多酚。此外,根据本发明,在装备有多孔过滤器的过滤装置中对含有所述浆果成分的所述蜗牛黏液进行过滤,以获得蜗牛黏液滤液。此外,根据本发明,所述蜗牛黏液滤液还包含胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂。另外,本发明包括:步骤(s10):在20℃至35℃的温度和60%至80%的湿度下在浆果树苗上养殖蜗牛;步骤(s20):在使用纯净水冲洗所述蜗牛并将所述蜗牛放到网中之后,收集30分钟到8小时的蜗牛黏液;步骤(s30):通过在装备有多孔过滤器的过滤装置中对所述蜗牛黏液进行过滤来获得蜗牛黏液滤液;以及步骤(s50):通过将在步骤s30中制备的所述蜗牛黏液滤液与化妆品材料混合来制备化妆品组合物。在步骤(s30)之后,本发明还包括步骤(s40):将胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂添加到所述蜗牛黏液滤液中。有益效果根据如上所述的本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法,可以通过从被喂食浆果的蜗牛获得蜗牛黏液而利用浆果中所含有的多酚来减少皮肤中的活性氧和防止皮肤老化,而且可以通过使用蜗牛黏液中所含有的黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白来增强皮肤再生、皮肤弹性和保湿能力。此外,根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法,化妆品组合物中的被喂食浆果的蜗牛的黏液作为天然原料对人体是无害的并且可以通过减轻由外部环境引起的皮肤压力来防止皮肤问题。附图说明图1是说明根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物的制备方法的流程图。具体实施方式根据本发明,作为重复研究解决上述技术问题的结果,本发明的发明人开发了一种含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物的制备方法,并且已经通过确认使用上述方法制备的含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物可以通过使用浆果中所含的多酚来减少皮肤中的活性氧和防止皮肤老化、并且可以通过使用蜗牛黏液中所含的黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白来增强皮肤再生、皮肤弹性和保湿能力而完成本发明。在下文中,将详细地说明本发明。根据本发明,在20℃至35℃的温度和60%至80%的湿度范围内在浆果树苗上养殖蜗牛。浆果是选自蓝莓、野樱莓和巴西莓中的一种。含有黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白成分的蜗牛黏液从蜗牛获得,且蜗牛黏液含有作为浆果成分的多酚。在20℃至35℃的温度和60%至80%的湿度范围内在浆果树苗上养殖蜗牛,使得蜗牛能够很好地摄取浆果并且充分地排出蜗牛黏液。有问题的是,当养殖温度小于20℃且养殖湿度小于60%时,蜗牛会失去活力且不会摄取浆果,当养殖温度高于35℃时,蜗牛黏液会变干,并且当养殖湿度高于80%时,浆果会受到影响而快速枯萎。蜗牛黏液从被喂食浆果的蜗牛获得,且与传统的蜗牛黏液相比,从被喂食浆果的蜗牛获得的蜗牛黏液具有丰富的黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白,这使得可以通过改善不稳定的皮肤屏障并创造新的皮肤层来帮助改善健康皮肤,可以通过使对皮肤有害的异物失活来获得干净的皮肤,并且可以通过保持有助于保持湿润皮肤的皮肤保湿能力而使皮肤具有弹性。此外,还可以获得作为浆果成分的多酚,使得可以减少皮肤中的自由基且可以防止皮肤老化。根据本发明,在装备有多孔过滤器的过滤装置中对含有浆果成分的蜗牛黏液进行过滤,以获得蜗牛黏液滤液。通过使用超滤(uf:ultrafiltration)中空过滤膜去除当利用多孔过滤器获取蜗牛黏液时所残留的异物,使得过滤装置获得具有高纯度的蜗牛黏液滤液。多孔过滤器具有大约1000亿个细孔,每个细孔的尺寸为30至500纳米(nm),并且多孔过滤器去除了存在于蜗牛黏液中的污染物。因此,可以通过选择性过滤来获取蜗牛黏液滤液,原因是去除了杂质,而蜗牛黏液中的有益物质没有被过滤掉。根据本发明的从被喂食浆果的蜗牛获得的蜗牛黏液基于化妆品组合物的总重量的重量含量为0.001%至30%,且优选地为0.1%至15%。上述蜗牛黏液滤液基于化妆品组合物的总重量的0.001%和30%的重量含量分别是用于实现皮肤抗老化、皮肤再生、皮肤弹性和保湿效果的最小和最大阈值。当重量含量小于0.001%时,作为浆果成分的多酚的含量以及作为蜗牛黏液成分的黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白的含量太少,所以对皮肤再生、皮肤弹性、保湿和皮肤抗老化几乎没有效果。当重量含量大于30%时,皮肤再生、皮肤弹性、保湿能力和皮肤抗老化的效果会降低一半。此外,如实验例4所示,蜗牛黏液滤液基于化妆品组合物的总重量的0.1%至15%的重量含量是用于实现防止皮肤老化、皮肤再生、皮肤弹性和保湿效果的最佳阈值。根据本发明,蜗牛黏液滤液还包含胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂。蜗牛黏液滤液还包含胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂,从而抑制胶原蛋白和弹性蛋白的分解。此外,当将使用含有胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂的蜗牛黏液滤液制备的化妆品材料涂到皮肤上时,胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂被皮肤吸收,并且作为胶原酶的基质金属蛋白酶(mmp:metalloproteinase)的活性和作为弹性蛋白分解酶的弹性蛋白酶的活性被抑制,因此可以防止皮肤弹性纤维受到破坏,而且可以减小因暴露在紫外线下而引起的皮肤损伤,从而帮助改善皮肤弹性。此外,蜗牛黏液滤液中所含有的胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂与作为浆果成分的多酚一起发挥作用,从而用来使皮肤抗老化的效果最大化。胶原蛋白分解抑制剂是金属蛋白酶组织抑制剂(timp:tissueinhibitorofmetalloproteinase)蛋白质,其中优选的是,timp是通过从视黄醇、绿茶提取物、植物雌激素、维生素e和欧米伽-3脂肪酸中选择至少一种而获得的。优选地,弹性蛋白分解抑制剂是大豆蛋白。除了从被喂食浆果的蜗牛获得的蜗牛黏液以外,根据本发明的化妆品组合物还可以包含能够在不降低本发明的主要效果的情况下提高主要效果的其它成分。根据本发明的组合物可以包含诸如亲水或亲油性胶凝剂、亲水或亲油性活性剂、防腐剂、抗氧化剂、溶剂、香料、填料、阻断剂、颜料、吸收剂和染料等在化妆品领域中通常使用的佐剂。上述的各种佐剂的量为本领域中通常使用的量,例如,基于组合物的总重量的0.001%至30%的重量含量。然而,在任何情况下,佐剂及其比例都可以选择为不会对根据本发明的化妆品组合物的优选性能产生不利影响。此外,优选的是,根据本发明的化妆品组合物的配方从包括爽肤水、凝胶、水溶性液体、霜、精华、水包油(o/w:oil-in-water)或油包水(w/o:water-in-oil)型乳液和软膏在内的基础化妆品配方以及包括水包油或油包水型隔离霜、粉底、防晒霜(skincover)、唇膏、唇彩、扑面粉、两用粉饼、眼影、腮红和眉笔在内的彩妆配方中进行选择。而且,本发明可以以喷雾的形式或以诸如棒等固体的形式涂到皮肤上,且本发明可以用于护肤产品和/或彩妆产品。以下参照附图说明根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物的制备方法。图1是说明根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物的制备方法的流程图。在下文中,参照附图说明本发明的优选实施方案。根据本发明的方法优选地包括下列步骤,但是不限于下列步骤。本发明包括:步骤(s10),在20℃至35℃的温度和60%至80%的湿度范围内在浆果树苗上养殖蜗牛;步骤(s20),在使用纯净水冲洗蜗牛并将蜗牛放到网中之后,收集30分钟到8小时的蜗牛黏液;步骤(s30),通过在装备有多孔过滤器的过滤装置中对蜗牛黏液进行过滤来获得蜗牛黏液滤液;以及步骤(s50),通过将在步骤s30中制备的蜗牛黏液滤液与化妆品材料混合来制备化妆品组合物。此外,在步骤s30之后,本发明还包括步骤(s40):将胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂注入到蜗牛黏液滤液中。以下单独地针对各个步骤来说明本发明的制造方法。执行步骤s10:在20℃至35℃的温度和60%至80%的湿度范围内在浆果树苗上养殖蜗牛。上述温度和湿度是使蜗牛能够活动的最佳状态。当温度和湿度超出上述范围时,蜗牛不能正常地活动,且不会摄取诸如蓝莓、野樱莓和巴西莓等水果,从而会降低蜗牛黏液中的作为蓝莓、野樱莓和巴西莓的成分的多酚的含量。此外,因为蜗牛没有被强迫地用饲料喂养,而是在树苗上自由养殖和放养,所以蜗牛可以在没有压力的情况下产生含有多酚的蜗牛黏液。执行步骤s20:在使用纯净水冲洗蜗牛并将蜗牛放到网中之后,收集30分钟到8小时的蜗牛黏液。当蜗牛处于危险的形势或恶劣的环境中时,蜗牛会试图通过排出黏液来覆盖和保护它们的身体,所以在将蜗牛大量地放到网中之后,蜗牛会感测到危险,并在30分钟之后开始排出黏液。因此,当收集时间小于30分钟时,不能获得蜗牛黏液,且当收集时间超过8小时时,蜗牛会过度地承受压力而死亡。执行步骤s30:通过在装备有多孔过滤器的过滤装置中对蜗牛黏液进行过滤来获得蜗牛黏液滤液。过滤装置是装备有孔隙尺寸为30至500纳米(nm)的多孔过滤器的超滤(uf)中空过滤膜,并且过滤装置通过去除在使用过滤装置获取蜗牛黏液时所残留的异物而获得具有高纯度的蜗牛黏液滤液。执行步骤s50:通过将在步骤s30中制备的蜗牛黏液滤液与化妆品材料混合来制备化妆品组合物。可以通过使用蜗牛黏液滤液制备化妆品组合物来制造用于增强皮肤抗老化、皮肤再生以及皮肤弹性和保湿能力的化妆品。在步骤s30之后,执行步骤s40:进一步将胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂注入到蜗牛黏液滤液中。通过放入胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂来抑制蜗牛黏液滤液和皮肤中的胶原蛋白和弹性蛋白的分解。此外,蜗牛黏液滤液中所含有的胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂与作为浆果成分的多酚一起发挥作用,从而用来使皮肤抗老化的效果最大化。胶原蛋白分解抑制剂是金属蛋白酶组织抑制剂(timp)蛋白质,其中优选的是,timp通过从视黄醇、绿茶提取物、植物雌激素、维生素e和欧米伽-3脂肪酸中选择出至少一种来获得。优选地,弹性蛋白分解抑制剂是大豆蛋白。将参照实施例、比较例、实验例和配方例详细地说明本发明。然而,本发明的下列实施例、比较例、实验例和配方例仅是说明性的,本发明不限于下列实施例、比较例、实验例和配方例。<实施例1>从被喂食浆果的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的实施例1根据本发明的从被喂食浆果的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的实施例1通过下列制备步骤来制备。(s10):在25℃的温度和65%的湿度下在浆果树苗上养殖蜗牛。(s20):在使用纯净水冲洗蜗牛并将蜗牛放入网中之后,收集5小时的蜗牛黏液。(s30):通过装备有孔隙尺寸为250纳米(nm)的多孔过滤器的过滤装置对蜗牛黏液进行过滤来获得蜗牛黏液滤液,且将蜗牛黏液滤液储存于保持在5℃的低温冷藏库中,以防止蜗牛黏液滤液变质。<实施例2>从被喂食浆果的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的实施例2根据本发明的从被喂食浆果的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的实施例2通过下列制备步骤来制备。(s10):在25℃的温度和65%的湿度下在浆果树苗上养殖蜗牛。(s20):在使用纯净水冲洗蜗牛并将蜗牛放入网中之后,收集5小时的蜗牛黏液。(s30):通过装备有孔隙尺寸为250纳米(nm)的多孔过滤器的过滤装置对蜗牛黏液进行过滤来获得蜗牛黏液滤液。(s40):在将胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂注入到蜗牛黏液滤液中之后,将制备完成的蜗牛黏液滤液储存于保持在5℃的低温冷藏库中。<比较例1>从没有被喂食浆果的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的比较例1从没有被喂食浆果的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的比较例1通过下列生产步骤来制备。(s10):在25℃的温度和65%的湿度下养殖蜗牛。(s20):在使用纯净水冲洗蜗牛并将蜗牛放入网中之后,收集5小时的蜗牛黏液。(s30):通过装备有孔隙尺寸为250纳米(nm)的多孔过滤器的过滤装置对蜗牛黏液进行过滤来获得蜗牛黏液滤液,且将蜗牛黏液滤液储存于保持在5℃的低温冷藏库中,以防止蜗牛黏液滤液变质。<比较例2>从被喂食红参的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的比较例2从被喂食红参的蜗牛制备蜗牛黏液滤液的比较例2通过下列生产步骤来制备。(s10):在25℃的温度和65%的湿度下对蜗牛喂食红参粉末来养殖蜗牛。(s20):在使用纯净水冲洗蜗牛并将蜗牛放入网中之后,收集5小时的蜗牛黏液。(s30):通过装备有孔隙尺寸为250纳米(nm)的多孔过滤器的过滤装置对蜗牛黏液进行过滤来获得蜗牛黏液滤液,且将蜗牛黏液滤液储存于保持在5℃的低温冷藏库中,以防止蜗牛黏液滤液变质。<实验例1>实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液的抗氧化效果的测量作为皮肤老化改善效果的验证试验,执行自由基清除试验和活性氧清除试验,以便确认实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液的抗氧化效果。通过在如下条件下的验证试验方案来进行自由基清除试验:稳定的dpph的吸光度在540nm处显示出最大吸光度,并且在上述波长为540nm处的吸光度随着自由基清除率增大而减小,即,随着自由基dpph被样本清除并变为紫色至透明而减小。使用甲醇将上述实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液稀释成预定浓度,且将1ml的稀释液与1ml、0.1mm的2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(dpph:2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazylradical,sigma)溶液混合。在37℃下将混合物静置15分钟之后,通过使用酶标仪(thermomax,usa)测量在540nm的波长处的吸光度。在上述的自由基清除试验中,通过放入1ml的dpph和1ml的甲醇以相同的方式测量对照组,并且通过放入1ml的甲醇和1ml的样本来获得针对样本和对照组中的各者的颜色校正值。sc50是清除50%的自由基所需要的样本浓度,并且越小的值表示越高的抗氧化活性。在活性氧清除试验中,利用在黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(sigma)的酶促反应时的活性氧产生而形成的活性氧对硝基蓝四氮唑(nbt:nitrobluetetrazolium)的氧化来测量吸光度的变化,因此可以确认活性氧的清除能力。添加2.4ml的碳酸钠(na2co3)、0.1ml的黄嘌呤(sigma)、0.1ml的乙二胺四乙酸(edta:ethylenediaminetetraaceticacid)、0.1ml的牛血清白蛋白(bsa:bovineserumalbumin,sigma)、0.1ml的nbt和1ml的实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液,通过使用涡旋混合器(type37600mixer,minimix,usa)来进行涡旋,在25℃下将混合物静置10分钟。在添加0.1ml的黄嘌呤氧化酶且在25℃下反应20分钟之后,通过放入6mm的cucl2使反应停止,并且通过使用酶标仪(uvt-06685,thermomax,usa)测量在540nm的波长处的吸光度。通过放入第三蒸馏水代替样本溶液而以相同的方式测量活性氧清除活性试验中的对照组。放入第三蒸馏水代替黄嘌呤氧化酶溶液,以获得针对提取样本和对照组的颜色校正值。is50是清除50%的活性氧所需要的样本浓度,并且越小的值表示越高的抗氧化活性。结果,如表1所示,实施例1和实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液显示了与强的合成抗氧化剂bht的抗氧化能力几乎类似的抗氧化能力。实施例1和实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液的针对50%的自由基清除率的浓度分别是134ppm和110ppm,且实施例1和实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液的针对50%的活性氧清除率的浓度分别是162ppm和136ppm,这表明在少量浓度下抗氧化活性是优异的。此外,发现,在实施例1和实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液中,作为蓝莓成分的多酚被充分地排出到蜗牛黏液中而足以发挥抗氧化效果。可以确认,作为蜗牛黏液成分的黏蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白被混合,使得抗氧化功效优于比较例1和比较例2的抗氧化功效。<方程式1>自由基清除率(%)=100-((样本的吸光度/对照组的吸光度)x100)<方程式2>活性氧清除率(%)=100-((样本的吸光度/对照组的吸光度)x100)[表1]抗氧化效果的测量结果<实验例2>实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液的皮肤改善效果的测量执行弹性蛋白分解活性的抑制试验,以验证实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液的皮肤改善效果。弹性蛋白是真皮中的基质层的成分,并且随着皮肤老化,弹性蛋白发生分解且真皮中的基质层破裂,因此产生皱纹。使用作为弹性蛋白酶基质的n-琥珀酰-(ala)3对硝基苯胺(n-succinyl-(ala)3p-nitroaniline,sigma),通过测量与由对硝基苯胺的分解导致的颜色变化相关的在405nm的波长处的吸光度而利用测量弹性蛋白酶活性的方案,以便基于上述原理测量弹性蛋白酶(其是使弹性蛋白发生分解的酶)的活性。通过放入第三蒸馏水代替样本而以相同的方式测量用于测量弹性蛋白酶的活性的对照组,且放入第三蒸馏水代替酶溶液,以获得针对各者的颜色校正值。关于样本,作为弹性蛋白酶特异性抑制剂的苯甲基磺酰氟(pmsf:phenylmethylsulfonylfluoride,sigma)被用作比较组,以便测定实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液对弹性蛋白酶活性的抑制效果。通过使用以下的方程式3计算弹性蛋白酶抑制率的数值。ic50是将弹性蛋白酶活性抑制50%所需要的样本浓度,并且越小的值表示抑制率越高。ph为8.0的0.267m的trizma-hcl(sigma)用作缓冲溶液,8.8mm的n-琥珀酰-(ala)3对硝基苯胺用作基质溶液,且使用含有浓度为10μg/μl的猪胰弹性蛋白酶的酶溶液(sigma)。在将60μl的缓冲溶液、20μl的基质溶液以及实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液与100μl的使用第三蒸馏水稀释过的各种浓度的样本溶液分别混合之后,放入20μl的酶溶液,并且在25℃下的恒温水浴中反应15分钟,以通过使用酶标仪(uvt-06685,thermomax,usa)测量在405nm的波长处对硝基苯胺的生成量。结果,如表2所示,实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液的弹性蛋白酶活性抑制率是1.10mg/μl,其低于弹性蛋白酶特异性抑制剂(pmsf)的0.07mg/μl,然而,在皮肤改善方面要比作为当前有效用作皮肤改善功能材料的视黄醇更有效。此外,可以确认,因为实施例1和实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液含有胶原蛋白分解抑制剂或弹性蛋白分解抑制剂,所以可以防止皮肤弹性纤维被破坏,因而皮肤改善效果优于比较例1和比较例2的皮肤改善效果。<方程式3>弹性蛋白酶活性抑制率(%)=100-((样本的吸光度/对照组的吸光度)x100)[表2]皮肤改善效果的测量结果<实验例3>实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液的保湿效果的测量通过使用油水分析仪(wsk-p500u,inforward.inc.,japan)的电容测量方案来进行实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中所制备的蜗牛黏液滤液的保湿效果的测量。将在实施例1和实施例2以及比较例1和比较例2中制备的蜗牛黏液滤液的1wt%的水溶液与透明质酸钠盐(sigma)的1wt%的水溶液进行比较,基于各种研究,已知透明质酸钠盐具有优异的皮肤保湿效果。将30名20多岁和30多岁的女性作为试验对象,在试验开始之前使前臂的屈肌面在恒温恒湿室(22℃和40-60%的相对湿度)中适应20分钟,且保持皮肤水分恒定。然后,在使用油水分析仪(wsk-p500u,inforward.inc.,japan)测量各个样本的涂抹位置的初始水分含量之后,将各个样本以2.0mg/cm2涂抹在各位受试者的不同位置处,以使根据前臂的屈肌面的误差最小化。首先,在涂抹之后以10分钟、30分钟、50分钟、90分钟和120分钟的时间间隔测量皮肤水分,且在2小时之后,再次测量皮肤水分。对各测量位置重复地测量三次,并计算皮肤水分的平均值。结果,如表3所示,可以确认,当与目前已知具有优异的保湿效果的透明质酸的1wt%的水溶液比较时,在实施例1和实施例2中制备的蜗牛黏液滤液的1wt%的水溶液的保湿效果更优异。此外,可以发现,被喂食蓝莓的蜗牛(实施例1和实施例2)排出在皮肤保湿方面比来自普通蜗牛(比较例1)的蜗牛黏液和来自被喂食红参的蜗牛(比较例2)的蜗牛黏液更有用的蜗牛黏液。[表3]保湿效果的测量结果<实验例4>根据蜗牛黏液滤液的含量的抗氧化、皮肤改善和皮肤保湿效果的测量根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物的实施例3,通过包含基于化妆品组合物的总重量的重量含量为0.0005%的实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液来制备含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物。根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物的实施例4,通过包含基于化妆品组合物的总重量的重量含量为0.001%的实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液来制备含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物。根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物的实施例5,通过包含基于化妆品组合物的总重量的重量含量为0.1%的实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液来制备含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物。根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物的实施例6,通过包含基于化妆品组合物的总重量的重量含量为15%的实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液来制备含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物。根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物的实施例7,通过包含基于化妆品组合物的总重量的重量含量为30%的实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液来制备含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物。根据本发明的含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物的实施例8,通过包含基于化妆品组合物的总重量的重量含量为40%的实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液来制备含有被喂食浆果的蜗牛的蜗牛黏液的化妆品组合物。通过实验例1至3的方案来评估根据蜗牛黏液滤液含量的抗氧化、皮肤改善和皮肤保湿效果,且表4示出了结果。(在将化妆品组合物涂到皮肤上之后的120分钟内测量皮肤水分含量。)[表4]根据蜗牛黏液滤液的含量的抗氧化、皮肤改善、皮肤保湿效果的测量结果如表4所示,当蜗牛黏液滤液的含量小于0.001wt%时,皮肤再生、皮肤弹性和保湿以及皮肤抗老化的效果几乎没有,并且蜗牛黏液滤液基于化妆品组合物的总重量的0.001wt%和30wt%分别是用于实现皮肤抗老化、皮肤再生、皮肤弹性和保湿效果的最小和最大阈值。此外,蜗牛黏液滤液基于化妆品组合物的总重量的0.1wt%至15wt%是用于实现皮肤抗老化、皮肤再生、皮肤弹性和保湿效果的最佳阈值。<配方例>含有实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液的化妆品组合物的组分通过使用实施例2中所制备的蜗牛黏液滤液来制备营养霜、柔肤水和营养爽肤水。本发明的化妆品仅是说明性的,并且本发明不限于此。[表5]营养霜[表6]柔肤水成分含量(wt%)1甘油5.0021,3-丁二醇3.003peg15001.004尿囊素0.105dl-泛醇0.306edta-2na0.027苯甲酮-90.048乙醇10.009辛基十二醇聚醚-160.2010聚山梨醇酯200.2011实施例2中的蜗牛黏液滤液13.0012防腐剂、香料、颜料少量13蒸馏水余量[表7]营养爽肤水在本文中,本发明的说明仅仅是含有被喂食浆果的蜗牛的黏液的化妆品组合物及其制备方法的实施方案。本发明不限于上述实施方案,并且本发明可以以各种形式被实施。实施方案是为了使得本发明的公开完整并清楚地向本发明的
技术领域
内的普通技术人员教导本发明的范围,且本发明仅由权利要求书的范围来限定。当前第1页12
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