引入任何优先权申请作为参考本申请要求于2015年5月1日提交的美国临时申请号62/156,126的优先权。该相关申请的内容在此特别整体引入作为参考。领域本公开内容涉及在有此需要的对象中治疗、抑制或改善严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法，以及递送包含从骨髓获得的活细胞群体的组合物的方法，所述组合物还可以包括抗凝剂、红细胞和自体血浆。背景严重肢体缺血（criticallimbischemia，cli）是在老年人群中更常见的显著病态疾病。关于cli的危险因素可与动脉粥样硬化的风险因素类似，所述动脉粥样硬化是由于脂肪沉积物的积累的动脉硬化和变窄。这些因素可以包括但不限于年龄、吸烟、糖尿病、超重或具有严重肥胖、久坐的生活方式、高胆固醇、高血压和/或动脉粥样硬化家族史或跛行。由于与这种使人衰弱的疾病牵涉的复杂性，存在对患有cli的患者的许多管理方法。在内科管理相对于外科管理例如血管形成术（revascularization）或截肢（amputation）之间的决策过程中存在窄的界线（thinline）。评分系统例如可以是有帮助的，并且可以用于预测经历血管形成术或截肢的cli患者中的后果。然而，需要用于解决患有cli的人的需要的新疗法。严重肢体缺血是包括在休息时发生的肢体疼痛、或可以由于对患肢的血流的严重损害引起的即将发生的肢体丧失的术语。周围动脉闭塞性疾病的标志是血流不足以供应肢体所需的重要氧。cli在长期缺乏血液供应之后发生，并且随着时间过去，这种血液供应缺乏可以引发一系列病理生理事件，其最终导致腿部的休息痛或营养性损伤或两者。因此，cli通常视为外周动脉疾病（pad）的“末期”。本领域的许多人理解cli涵盖具有可归因于客观证实的动脉闭塞性疾病的慢性缺血性休息痛、溃疡或坏疽的任何患者。cli可以视为这样的疾病过程，其在数月至数年的长期背景下发生，并且如果不治疗，则最终可以导致缺乏通过远端肢体的足够血流和氧合继发的肢体丧失。鉴于cli是pad的严重表现，患者可以在fontaine分类法的更严重末端中分类为iii期或iv期，所述fontaine分类法是通过其将外周动脉疾病临床分类的方法。如果没有积极的或适当的管理，cli可以导致截肢，然而，血管形成术中也存在近期进展。虽然截肢率已下降，但由于在cli过程中晚期转诊至血管外科医生或专科医生，截肢仍然存在。另外，还没有不可挽救的肢体的一致定义。cli的治疗取决于cli的阶段，其中诊断是非常重要的。治疗可以是非手术管理或手术管理。非手术管理可包括但不限于疼痛缓解、局部溃疡护理和压力缓解、感染治疗、脊髓刺激以及动脉粥样硬化危险因素的改变。手术管理可以包括血管形成术或早期截肢。细胞疗法例如辅助干细胞疗法可以潜在地是用于cli的有希望的治疗。辅助疗法是其中在增强治疗结果的努力中，同时、或紧在主要疗法之后给予次要治疗的程序。辅助干细胞疗法可以有效地修复和再生由于缺血性损伤而受损的组织，但需要利用干细胞治疗的更多方法。概述本文公开了用于将包含干细胞、祖细胞、红细胞和血浆的组合物递送至有此需要的对象的新方法。在一些实施方案中，用于递送这种组合物的方法利用了使对细胞的剪切力降到最低的技术，其减少了在递送至对象期间对组合物中细胞的损害。本文公开的一些实施方案提供了改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法，由此这种方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的对象；并且对所述对象肌内施用包含下述的组合物：细胞群体，其中所述细胞群体包含骨髓总有核细胞和红细胞、抗凝剂和自体血浆，其中所述组合物具有在37℃下测量的1.5至5.0厘泊（cp）的粘度，其中所述组合物包含活细胞剂量，并且其中所述组合物通过标准的末端开口的套管针（astandardterminally-portedcannulaneedle）、或者包括多个端口和封闭端的套管侧开口的针或导管（acannulaside-portedneedleorcathetercomprisingapluralityofportsandaclosedend）施用。在一些实施方案中，所述细胞群体包含2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的组合物的压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或组合物的红细胞级分、或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的总细胞或红细胞的量。在一些实施方案中，可以通过微量红细胞压积离心或其他间接方法测定这样的压紧细胞级分（总细胞体积）或红细胞级分（%红细胞压积）。在一些实施方案中，细胞群体包含至少1×108个总有核细胞（tnc），并且细胞群体从120-180ml骨髓抽吸物进行加工，并且浓缩为最终20ml体积，如在手术中使用快速诊断器械计数的，以引导至少120ml但不超过180ml自体骨髓的抽吸，其中所述细胞包含：细胞活力≥70%和白细胞回收≥80%。在一些实施方案中，细胞群体包含cd34+和cd34-骨髓干细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含基质细胞。在一些实施方案中，细胞群体是谱系阴性/dim、cd45阴性/dim和cd73阳性细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含间充质干细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含造血干细胞、内皮祖细胞和cxcr4阳性细胞。在一些实施方案中，如在骨髓抽吸之后和在床边加工之后但在现场注射之前（priortoinjectionatthepointofcare）测量的，给予对象的活细胞剂量在1.75×107至7.67×107个白细胞/ml的范围内。在一些实施方案中，活细胞剂量为下列剂量、为约下列剂量或为至少下列剂量：1.75×107、2.0×107、3.0×107、4.0×107、5.0×107、6.0×107、7.0×107或7.67×107个白细胞/ml，或者在由上文列出的值中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，活细胞剂量为4.0×107个白细胞/ml。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工后测量的活细胞剂量为下列剂量、为约下列剂量或为至少下列剂量：3.65×106、4.0×106、5.0×106、6.0×106、7.0×106、8.0×106、9.0×106、1.0×107、2.0×107或2.15×107个单核细胞/ml，或者在由上文列出的值中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工后测量的活细胞剂量为1.08×107个单核细胞/ml。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工后测量的活细胞剂量为下列剂量、为约下列剂量或为至少下列剂量：5.0×103、6.0×103、7.0×103、8.0×103、9.0×103、1.0×104、2.0×104、3.01.0×104、4.0×104、5.0×104、6.0×104、7.0×104、8.0×104、9.0×104、1.0×105或2.0×105个集落形成单位（cfu-h）/ml，或者在由上文列出的值中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工后测量的活细胞剂量为5.0×103至20.0×103个集落形成单位（cfu-h）/ml。在一些实施方案中，所述标准的末端开口的套管针或者套管侧开口的针或导管具有0.33mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，所述标准的末端开口的套管针或者套管侧开口的针或导管具有0.51mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，所述标准的末端开口的套管针或者套管侧开口的针或导管具有0.69mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，所述套管侧开口的针或导管包括10-24个侧端口。在一些实施方案中，所述套管侧开口的针或导管包括、包括约、包括小于、或包括多于10、12、14、16、18、20、22或24个侧端口，或者由上述值中的任何两个限定的任何数目的侧端口。在一些实施方案中，所述侧端口具有0.46mm至0.56mm的直径。在一些实施方案中，所述侧端口具有为下列、约下列、小于下列或多于下列的直径：0.46mm、0.48mm、0.50mm、0.52mm、0.54mm或0.56mm，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的任何直径。在一些实施方案中，所述组合物以0.1ml至0.5ml/秒的速率施用于所述对象。在一些实施方案中，所述组合物以下列、约下列、小于下列的速率施用于所述对象：0.1ml/秒、0.2ml/秒、0.3ml/秒、至0.4ml/秒、0.5ml/秒，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的任何速率。在一些实施方案中，所述组合物以0.25ml/秒的速率施用于所述对象。在一些实施方案中，所述施用的组合物具有4-6cm2的肌肉分布面积。在一些实施方案中，所述施用的组合物具有为下列、约下列、小于下列、多于下列的肌肉分布面积：4cm2、5cm2或6cm2，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的任何肌肉分布面积。在一些实施方案中，所述组合物在3-5psi的压力下施用。在一些实施方案中，所述组合物在下列、约下列、小于下列的压力下施用：3psi、4psi或5psi，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的压力。在一些实施方案中，所述组合物在小于或等于400pa的剪切应力下肌内施用于所述对象。在一些实施方案中，所述组合物在小于或等于300pa的剪切应力下肌内施用于所述对象。在一些实施方案中，所述组合物在小于或等于200pa的剪切应力下肌内施用于所述对象。在一些实施方案中，所述组合物在小于或等于150pa的剪切应力下肌内施用于所述对象。在一些实施方案中，所述组合物在小于或等于100pa的剪切应力下肌内施用于所述对象。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量血流增加、灌注增加、经皮氧增加、血管生成增加、血管供应增加、肢体救助增加或无截肢存活率增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，使用经皮血氧定量法在所述对象中测定灌注的增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量肢体救助的增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量无截肢存活率的增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述对象中测量指数肢体伤口愈合或闭合的改善。本文公开的一些实施方案提供了用于改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法，其中所述方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的对象；并且对所述对象肌内或皮内施用包含细胞群体的组合物，所述细胞群体包含自体骨髓单核细胞和红细胞（例如，按体积计2%-20%的红细胞级分或按体积计2%-20%的总细胞级分），其中所述组合物使用标准的末端开口的套管针、或者包括多个端口和封闭端的套管侧开口的针或导管抽吸、浓缩且施用于所述对象。在一些实施方案中，可以通过微量红细胞压积离心或其他间接方法测定这样的压紧细胞级分（总细胞体积）或红细胞级分（%红细胞压积）。在一些实施方案中，套管侧开口的针或导管具有0.33mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，套管侧开口的针或导管具有0.51mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，套管侧开口的针或导管具有0.69mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，所述套管针或导管包括10-24个侧端口。在一些实施方案中，所述套管侧开口的针或导管包括、包括约、包括小于、包括多于10、12、14、16、18、20、22或24个侧端口，或者由上述值中的任何两个限定的任何量的侧端口。在一些实施方案中，所述侧端口具有0.46mm至0.56mm的直径。在一些实施方案中，所述侧端口具有为下列、约下列、小于下列的直径：0.46mm、0.48mm、0.50mm、0.52mm、0.54mm或0.56mm，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的任何直径。在一些实施方案中，所述组合物以为下列、约下列、小于下列、多于下列的剂量施用于所述对象：0.25ml至0.5ml/剂量。在一些实施方案中，所述组合物以0.25ml、0.30ml、0.40ml或0.5ml/剂量或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的任何体积施用于所述对象。在一些实施方案中，所述组合物以单一剂量施用。在一些实施方案中，所述组合物以至少30个剂量施用。在一些实施方案中，所述组合物以至少40个剂量施用。在一些实施方案中，所述组合物在多天中的每一天以单一剂量/天施用。在一些实施方案中，所述组合物在多天中的每一天以至少两个剂量/每天施用。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量血流增加、灌注增加、经皮氧增加、血管生成增加、血管供应增加、肢体救助增加或无截肢存活率增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，使用经皮血氧定量法在所述对象中测定灌注的增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量肢体救助的增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量无截肢存活率的增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述对象中测量指数肢体伤口愈合或闭合的改善。附图简述图1显示了示例性标准套管针的示意图。图2显示了示例性套管侧开口针的示意图。图3显示了在稳定状态下携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口的针的计算机生成视图，其中剪切应力和速度通过针的平面进行测量。粘度跨越在腔长度、近端到远侧尖端和侧端口之外的流动剖面变化。图4a和4b显示了在（a）q1（0.25ml/秒）和（b）q2（0.5ml/秒）的两种不同流速下，携带非牛顿混合材料模型的示例性标准套管针中的计算机生成的速度幅度。图5显示了在q1（0.25ml/秒）和q2（0.5ml/秒）两种速率下，在示例性标准套管针中显示出的计算机生成的壁剪切应力。图6显示了在q1（0.25ml/秒）和q2（0.5ml/秒）两种速率下，携带非牛顿混合材料模型的示例性标准套管针的计算机生成的剪切应变率，其中显示了针的尖端的横截面。图7显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-21-5.0）中的计算机生成的速度矢量，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图8显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-21-5.0）中的计算机生成的壁剪切应力的检查，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图9显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-21-5.0）中的计算机生成的剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图10显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-7.5）中的计算机生成的速度矢量测量，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图11显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-7.5）中的计算机生成的壁剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图12显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-7.5）中的计算机生成的剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图13显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-10.0）中的计算机生成的速度矢量，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图14显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-10.0）中的计算机生成的壁剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图15显示了以q1（0.25ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-10.0）中的计算机生成的剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图16显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-21-5.0）中的计算机生成的速度矢量，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图17显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-21-5.0）中的计算机生成的壁剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图18显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-21-5.0）中的计算机生成的剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图19显示了在不同端口编号处使用示例性套管侧开口针，在q1和q2的流速之间的计算机生成的体积流速。tin-21-5.0用作实例。图20显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-7.5）中的计算机生成的速度矢量，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图21显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-7.5）中的计算机生成的壁剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图22显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-7.5）中的计算机生成的剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图23显示了在不同端口编号处使用示例性套管侧开口针（tin-19-7.5），在q1和q2的流速之间的计算机生成的体积流速，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图24显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-10）中的计算机生成的速度矢量，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图25显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-10）中的计算机生成的壁剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图26显示了以q2（0.50ml/秒）的速率携带非牛顿混合材料模型的示例性套管侧开口针（tin-19-10）中的计算机生成的剪切应变率，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图27显示了在不同端口编号处使用示例性套管侧开口针（tin-19-10），在q1和q2的流速之间的计算机生成的体积流速，其中端口1是从近端到远侧尖端的第一端口，并且端口22是最后一个端口。图28显示了使用示例性套管侧开口针在q1和q2的流速下，经过侧端口的计算机生成的平均壁剪切应力。tin-19-10用作实例。图29显示了在q1下的计算机生成的速度分布图（velocitycontours）的比较。图30显示了在q2下的计算机生成的速度分布图的比较。图31显示了在q1下的计算机生成的剪切壁应力的比较。图32显示在q2下的计算机生成的剪切壁应力的比较。图33显示了使用基于计算机的建模，在q1和q2的流速下，不同腔尺寸、直径和长度的侧开口套管针中的体积流速分布的相似性。图34显示了以图形表示的wbc数据。数据指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对amcmc样品没有作用。图35显示了以图形表示的cfu-h数据。数据指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对amcmc样品没有作用。图36显示了以图形表示的活力数据。数据指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对amcmc样品没有作用。图37显示了以图形表示的cd45+细胞活力数据。数据指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对amcmc样品没有作用。图38显示了以单因素方差（oneanova）统计分析的图形表示的cd45+细胞活力数据，指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对amcmc样品没有作用。图39a、39b和39c显示了如通过elisa评价的abmc血浆针前、tin和shn针后中的细胞因子水平。在通过针之前和之后的abmc血浆细胞因子水平中未观察到差异。图39a、39b和39c分别显示了vegf、sdf-1和内皮抑素的针前和针后血浆水平。图40显示了在用从通过套管侧开口针（tin）的abmc获得的血浆刺激后，人脐静脉内皮细胞（huvec）迁移。图41显示了在abmc细胞条件化培养基中的vegf水平。在未浓缩和浓缩（仅在5个样品-bm0008至bm00012中测量）的条件化培养基中vegf的基于elisa的检测。shn和tin：在使培养基条件化之前，分别通过标准皮下套管针（shn）或套管侧开口针（tin）的vxp加工的abmc。图42显示了在用从通过套管侧开口针的abmc获得的条件化培养基刺激后的huvec迁移。具有0.1%bsa的ebm-2充当基础（阴性）对照，egm-2充当完全内皮培养基（阳性）对照。图43显示了在用tin后的abmc血浆刺激后的huvec管形成。所示的是示例性图像（使用adobephotoshopelements，版本13对比增强）。作为测定输入，来自tin后的abmc的血浆用补充有0.1%bsa的ebm-2进行1:5稀释。基础培养基（具有0.1%bsa的ebm-2）充当阴性对照，完全内皮培养基（egm-2）充当阳性对照。图44显示了来自documentationtoangiogenesisanalyzerforimagej可视化血管生成分析参数的图示。图45a和45b显示了在用tin后的abmc血浆刺激后的huvec管形成。作为测定输入，来自tin后的abmc的血浆用补充有0.1%bsa的ebm-2进行1:5稀释。基础培养基（具有0.1%bsa的ebm-2）充当阴性对照，完全内皮培养基（egm-2）充当阳性对照。用来自imagej（nih）的angiogenesisanalyzer定量3-4个图像/样品。为了使面积选择偏差降到最低，将中值用于比较评价。显示下述angiogenesisanalyzer输出参数：“总长”（a），“nb连接点”（b）。单样本t-检验显示与阴性对照样品（具有0.1%bsa的ebm-2）相比，总管长度（a）和连接点数目（b）两者在abmc样品组中显著更高。图46a、46b和46c显示了通过加入2%tin后的abmc血浆来预防通过ccm的细胞聚集。图46a显示了在温育16小时后获取的bm0011和bm0013的实例图像。图46b显示了与仅2%abmc血浆相比，用ccm+2%abmc血浆刺激时，总管长度在统计学上显著更高（p<0.05）。图46c显示了与仅2%abmc血浆相比，用ccm+2%abmc血浆刺激时，连接点数目在统计学上显著更高（p<0.05）。图47显示了在用自体骨髓浓缩物（abmc）治疗后，患者中的休息痛的改善。通过视觉模拟量表（vas）测试评价休息痛，使用评分在0至10之间的心理测验（自我报告）反应量表（0=无疼痛/伤害，2=轻微伤害/轻微疼痛，4=伤害更多一些/疼痛引起不适，6=伤害甚至更多/疼痛令人痛苦，8=伤害很大/疼痛可怕，10=疼痛严重/疼痛极其痛苦）。在基线时的平均休息痛评分为7.67，指示大多数患者在休息时具有严重疼痛。在治疗后的6个月随访中，所有可找到的患者都显示显著改善，其中平均休息痛评分为0.67，其中六个患者中的四个在休息时未经历疼痛。图48显示了在用自体骨髓浓缩物（abmc）治疗的患者中，关于溃疡覆盖物中的改善。在基线时，6个患者中的5个患有足部溃疡或开放性伤口。在6个月随访时，患者无一呈现溃疡或坏疽或开放性伤口。详述如本文所述的，“严重肢体缺血”（cli）指外周动脉疾病的晚期阶段。它包括缺血性休息痛、动脉供血不足性溃疡（arterialinsufficiencyulcers）和坏疽。后面两种状况共同被称为组织损失，反映了由于最严重的缺血阶段的肢体组织表面损害的发展。cli在初步诊断后一年内具有负面预后，其中1年截肢率大约12%并且死亡率在5年时为50%且在10年时为70%。cli可以引起下肢动脉中的严重阻塞，这显著降低血流量。它是严重形式的外周动脉疾病，或pad。pad由动脉粥样硬化引起，由于称为斑块的脂肪沉积物的积累，随着时间过去动脉硬化和变窄。cli可以导致足部或脚趾或四肢中的严重疼痛，即使在休息时也是如此。循环不良的并发症可以包括在腿部和足部不能愈合的溃疡和伤口。如果不治疗，则cli的并发症将导致患肢截肢。为了保存肢体，立即治疗以重新建立对受影响区域的血流是必要的。存在微创血管内治疗，其依赖于堵塞的位置以及严重性。治疗的例子可以包括血管成形术（切割球囊、冷球囊（cryoplasty））和支架（球囊扩张的、自扩张）、激光atherostomy和定向动脉粥样硬化斑块切除术（directionalatherectomy）。在本文所述的一些实施方案中，提供了改善有此需要的对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法。如本文所述，“外周血管疾病”指外周动脉疾病（pad），其是通过心脏和脑外的动脉粥样硬化斑块的狭窄或闭塞。关于外周动脉疾病的危险因素包括血液胆固醇升高、糖尿病、吸烟、高血压、不活动和超重/肥胖。外周动脉疾病的症状取决于阻塞的动脉的位置和程度。外周动脉疾病的最常见症状是间歇性跛行，表现为在步行时发生并在休息时消失的疼痛（通常在小腿中）。为了诊断，在怀疑pad和/或cli时，可以执行的第一项研究是踝肱压力指数，以读取脚踝和手臂中的血压，以便进行比较。当脚踝的血压读数低于手臂的血压读数时，怀疑从心脏向脚踝提供血液的动脉阻塞。正常abi范围为1.00至1.40。当abi≤0.90时，患者被诊断有pad。0.91至0.99的abi值视为“临界”，而>1.40的值指示不可压缩的动脉。如果abi介于0.41和0.90之间，则pad分级为轻度至中度，并且小于0.40的abi提示严重pad。这些相对分类具有预后价值。如果获得异常高的abi，则可以执行下肢多普勒超声检查，以查看动脉粥样硬化的部位和程度。其他成像可以通过血管造影术执行，例如，将导管插入股总动脉内并且选择性地引导至所讨论的动脉。在注射不透射线的造影剂的同时获取x射线。在x射线中发现的任何限流狭窄都可以通过动脉粥样硬化斑块切除术、血管成形术或支架置入术进行鉴别且治疗。对比血管造影术是最容易获得和广泛使用的成像技术。其他技术可以包括图像例如多层螺旋计算机断层扫描（ct）扫描仪，其提供动脉系统的直接成像作为血管造影术的替代方案。另一种替代方案是使用磁共振血管造影术（mra），这是非侵袭性诊断程序，其使用大型磁体、射频和计算机的组合来产生详细的图像，以提供体内血管的图像。mra的优势包括其安全性以及一次性提供整个腹部、骨盆和下肢的高分辨率三维（3d）成像的能力。在一些实施方案中，用于改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的对象。在一些实施方案中，该鉴定步骤通过踝肱压力指数（abpi/abi）、下肢多普勒超声检查、血管造影术、多层螺旋计算机断层扫描或通过磁共振血管造影术（mra）执行。在一些实施方案中，用于改善或抑制严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的所述方法对具有肥胖、高胆固醇、高血压和/或动脉粥样硬化的对象执行。如本文所述的，“骨髓总有核细胞”指含有造血干细胞（"hsc"）、间充质干细胞（"msc"）、内皮祖细胞（"epc"）、cxcr4阳性细胞、白细胞（"wbc"）和/或基质细胞的骨髓衍生细胞的异质混合物。在优选实施方案中，骨髓衍生细胞的这种异质混合物包含cd34+和cd34-骨髓干细胞。在一些实施方案中，基质细胞可以是谱系阴性/dim、cd45阴性/dim和/或cd73阳性细胞。如本文所述的，“基质细胞”指来自器官的结缔组织细胞。不受限制，基质细胞可以来自例如子宫内膜、骨髓和卵巢。基质细胞支持实质细胞的功能。基质细胞可以是谱系阴性的，其中细胞（lin-）是异质的并且含有小百分比的真实干细胞和更大部分的祖细胞。谱系阴性细胞可以富集造血干细胞。cd34是i型跨膜蛋白，其可以存在于除了红细胞之外的造血细胞中，并且可以帮助细胞活化。一些基质细胞是cd45阴性/dim。cd73是一种蛋白质，也被称为5'核苷酸酶或外切-5'-核苷酸酶，其为可以将amp转换为腺苷的酶。一些基质细胞可以是cd73阳性细胞。在一些实施方案中，改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的患者，并且对所述鉴定的对象提供包含细胞群体的组合物，其中所述细胞群体包含骨髓总有核细胞和红细胞。在这些方法的一些实施方案中，细胞群体包含基质细胞。在一些实施方案中，基质细胞是谱系阴性/dim、cd45阴性/dim和/或cd73阳性细胞。如本文所述的，“间充质细胞”或“间充质干细胞”指可以分化成各种细胞类型的多潜能基质细胞，其可以包括但不限于成骨细胞（骨细胞）、软骨细胞（chondrocyte）（软骨细胞（cartilagecell））、肌细胞和/或脂细胞（脂肪细胞）。在本文提供的方法的一些实施方案中，包含细胞群体的组合物进一步包含间充质干细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含至少1×108个总有核细胞（tnc），细胞群体从120-180ml骨髓抽吸物进行加工，并且浓缩为最终20ml体积，如在手术中使用快速诊断器械计数的，以引导至少120ml但不超过180ml自体骨髓的抽吸，其中所述细胞包含：细胞活力≥70%和白细胞回收≥80%。在一些实施方案中，细胞包含其为、为约、多于、至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%的细胞活力，或者是在由上述值中的任何两个限定的范围内的细胞活力。在一些实施方案中，细胞包含其为、为约、多于、至少80%、85%、90%、95%、99%的白细胞回收率，或者是在由上述值中的任何两个限定的范围内的白细胞回收率。在一些实施方案中，细胞群体从其为、为约、小于、多于120ml、130ml、140ml、150ml、160ml、170ml或180ml的骨髓抽吸物，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的任何体积进行加工。如本文所述的，“造血干细胞（hsc）”指产生所有其他血细胞且衍生自中胚层的血细胞。hsc位于红骨髓中。hsc可以产生许多细胞。不受限制地，这可以包括骨髓谱系（单核细胞和巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、红细胞、巨核细胞/血小板、树突细胞）和淋巴谱系（t细胞、b细胞、nk细胞）。在一些实施方案中，对有此需要的对象提供或施用的组合物包含骨髓衍生的细胞群体，其包含造血干细胞和红细胞（例如2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或按体积计的组合物的红细胞级分（也称为%红细胞压积（%hct）、或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的总细胞或红细胞的量）。可以通过微量红细胞压积离心来测定这种压紧细胞级分（总细胞体积）或红细胞级分（%红细胞压积）。如本文所述的，“内皮祖细胞”指在血液中循环的细胞群体，其具有分化成内皮细胞的能力，所述内皮细胞是构成血管衬里的细胞。在一些实施方案中，对有此需要的对象提供或施用的组合物包含含有内皮祖细胞的骨髓衍生的细胞群体。如本文所述的，“cxcr4”指c-x-c趋化因子受体4型，并且也称为融合素或cd128，其是蛋白质，充当对于基质衍生因子1特异性的α趋化因子受体。在一些实施方案中，对有此需要的对象提供或施用的组合物包含骨髓来源的细胞群体，其包含造血干细胞、内皮祖细胞和cxcr4阳性细胞。如本文所述的，“抗凝剂”指用于预防血液凝固（凝血）的一类药物。例如，称为抗凝剂的一组药物可以用作人类内的注射剂，作为用于血栓性病症的药剂。一些抗凝剂用于医疗设备，例如试管、输血袋和肾透析设备中。抗凝剂减少凝血，其可帮助预防深静脉血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞和缺血性中风。抗凝剂的治疗用途包括心房颤动、肺栓塞、深静脉血栓形成、静脉血栓栓塞、充血性心力衰竭、中风、心肌梗塞和遗传或获得性高凝状态。抗凝剂的实例可以包括但不限于阿替普酶、阿地肝素钠、达肝素、达那肝素、依诺肝素、磺达肝素、来匹卢定、尿激酶、香豆素、维生素k拮抗剂、间接凝血酶抑制剂、肝素、因子xa抑制剂、直接凝血酶抑制剂、巴曲酶、hemetin、纯化的植物提取物、edta、柠檬酸盐、草酸盐、nitrophorin和比伐卢定。在一些实施方案中，改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与患有严重肢体缺血相关的状况的方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的对象，并且对所述对象施用包含细胞群体的组合物，所述细胞群体包含骨髓总有核细胞和红细胞、抗凝剂和自体血浆。在一些实施方案中，所述组合物包含抗凝剂，其中所述抗凝剂是阿替普酶、阿地肝素钠、达肝素、达那肝素、依诺肝素、磺达肝素、来匹卢定、尿激酶、香豆素、维生素k拮抗剂、间接凝血酶抑制剂、肝素、因子xa抑制剂、直接凝血酶抑制剂、巴曲酶、hemetin、纯化的植物提取物、edta、柠檬酸盐、草酸盐、nitrophorin或比伐卢定。在一些实施方案中，抗凝剂是肝素，骨髓抽吸物中的最终肝素浓度是约100iu/ml。如本文所述，“皮下针”指可以与注射器一起使用以将物质注射到体内或从其中提取流体的空心针。它们也可以用于从人体中取出液体样品，例如在静脉穿刺术中从静脉取血。大口径皮下干预在灾难性失血或休克中尤其有用。如本文所述，标准的“套管针”指可以插入体内的针或管，通常用于输送或去除流体或者用于收集流体用于数据。简而言之，套管也可以包围套针的内表面或外表面，因此使针接近延伸到静脉为插管器的一半或更多长度。如图1所示，是示例性的标准套管针。如本文所述，“侧开口”或侧端口针或套管针可以指提供沿着针轴到远侧尖端的多个端口的针，用于物质的受控递送。如图2所示，是示例性的套管侧开口针。用于输送细胞的侧端口针可以具有导致细胞在施用后的更大分布的优点。如本文所述，“导管”指可以插入体内以治疗疾病或执行医疗程序的细管。导管还可以具有沿者导管长度的多个侧端口。如本文所述，“粘度”描述了流体的量度及其对通过剪切应力的逐渐变形的抵抗力。“剪切应力”是与材料横截面共面的应力分量。剪切应力可以起于与横截面平行的力矢量分量。剪切应力和剪切诱导的对细胞的损害是需要解决的迫切问题，以便有效地输送有效量的活细胞用于治疗疾病，诸如例如cli。在一些实施方案中，改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的患者，并且对所述对象提供包含下述的组合物：细胞群体，其中所述细胞群体包含骨髓总有核细胞和红细胞（例如2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的组合物的压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或组合物的红细胞级分、或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的组合物中的总细胞或红细胞的量，抗凝剂和自体血浆，其中所述组合物具有在37℃下测量的1.5至5.0厘泊（cp）的粘度，其中所述组合物包含活细胞剂量，并且其中所述组合物通过标准的末端开口的套管针、或者包括多个端口和封闭端的套管侧开口的针或导管肌内施用于所述对象。可以通过微量红细胞压积离心或其他间接方法测定这样的压紧细胞级分（总细胞体积）或红细胞级分（%红细胞压积）。在一些实施方案中，针或导管具有0.33mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，针或导管具有0.51mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，针或导管具有0.69mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，针或导管包括10-24个侧端口。在一些实施方案中，侧端口具有46mm、0.48mm、0.50mm、0.52mm、0.54mm或0.56mm的直径，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的直径。在一些实施方案中，所述组合物以其为、为约、小于0.1ml/s、0.2ml/s、0.3ml/s、0.4ml/s、0.5ml/s的流速，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的速率施用。在一些实施方案中，组合物以0.25ml/秒的速率施用。在一些实施方案中，通过利用本文所述的方法，所施用的组合物具有使用二维图像代表体积分布的肌肉分布区域，其为、为约、至少3cm2、4cm2、5cm2、6cm2、7cm2、8cm2、9cm2或10cm2，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的分布面积。在一些实施方案中，组合物在其为、为约、小于1、2、3、4、5、6、7、8、9或10psi或者在由上述压力中的任何两个限定的范围内的压力下施用。在一些实施方案中，所述组合物在小于或等于400pa的剪切应力下肌内施用于所述对象。在一些实施方案中，在所述组合物递送时的剪切应力为、为约、小于25pa、50pa、75pa、100pa、125pa、150pa、175pa、200pa、225pa、250pa、275pa、300pa、325pa、350pa、375pa或400pa，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的剪切应力。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量血流增加、灌注增加、经皮氧增加、血管生成增加、血管供应增加或无截肢存活率增加。如本文所述，“活细胞剂量”指在给定的面积和/或体积中，其为存活的，例如活且能够生长的细胞数目的量度。细胞活力可以通过各种测定来评价，例如用于排除碘化丙啶、台盼蓝或7-氨基放线菌素d的测定。活细胞计数可以通过例如扣除不能存活的细胞或死亡细胞计数的总细胞计数进行测定。在一些实施方案中，如在骨髓抽吸之后和在床边加工之后但在现场注射之前测量的，给予对象的活细胞剂量在1.75×107至7.67×107个白细胞/ml的范围内。在一些实施方案中，活细胞剂量为、为约、小于、多于1.75×107个白细胞/ml、2.0×107个白细胞/ml、3.0×107个白细胞/ml、4.0×107个白细胞/ml、5.0×107个白细胞/ml、6.0×107个白细胞/ml、7.0×107个白细胞/ml或7.67×107个白细胞/ml，或者在由上述量中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，递送给有此需要的对象的活细胞剂量是4.0×107个白细胞/ml。在一些实施方案中，如在床边加工之后测量的，给予有此需要的对象的活细胞剂量为、为约、小于、多于3.65×106个单核细胞/ml、4.0×106个单核细胞/ml、5.0×106个单核细胞/ml、6.0×106个单核细胞/ml、7.0×106个单核细胞/ml、8.0×106个单核细胞/ml、9.0×106个单核细胞/ml、1.0×107个单核细胞/ml、2.0×107个单核细胞/ml或2.15×107个单核细胞/ml，或者在由上述量中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，如在床边加工之后测量的，给予对象的活细胞剂量是1.08×107个单核细胞/ml。在一些实施方案中，如在床边加工后测量的，给予对象的活细胞剂量为、为约、小于、多于5×103个集落形成单位（cfu-h）/ml、6.0×103个集落形成单位（cfu-h）/ml、7.0×103个集落形成单位（cfu-h）/ml、8.0×103个集落形成单位（cfu-h）/ml、9.0×103个集落形成单位（cfu-h）/ml、1.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、2.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、3.01.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、4.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、5.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、6.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、7.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、8.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、9.0×104个集落形成单位（cfu-h）/ml、1.0×105个集落形成单位（cfu-h）/ml、或2.0×105个集落形成单位（cfu-h）/ml，或者在由上述量中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，如在床边加工之后测量的，给予对象的活细胞剂量为5.0×103个集落形成单位（cfu-h）/ml。如本文所述，“红细胞压积（hct）”指组合物的压紧总细胞体积或组合物的红细胞体积分数（evf）。可以通过微量红细胞压积离心法测定这样的压紧细胞级分（总细胞体积）或红细胞级分（%红细胞压积），或者可以通过自动分析仪计算红细胞压积，使得它不被直接测量。例如，通过自动化过程，通过将红细胞计数乘以平均细胞体积来确定hct。红细胞压积可以稍微更精确，因为压紧细胞体积（packedcellvolume，pcv）可以包括少量红细胞之间截留的血浆。作为百分比估计的红细胞压积可以通过将以g/dl计的血红蛋白浓度增加三倍并放弃单位来得到。例如，可以通过在毛细管（微量红细胞压积管）中以10,000rpm将肝素化的血液/骨髓组合物离心5分钟至10分钟来测定压紧细胞体积（pcv）。这可以允许将血液/骨髓组合物分离成层。压紧红细胞的体积除以血/骨髓组合物的总体积给出pcv。因为使用管，所以这可以通过测量层的长度来计算。在一些实施方案中，可以确定包括所有细胞类型的压紧总细胞级分（总细胞体积），包括血液/骨髓组合物中的红细胞和有核细胞。测量红细胞压积水平的另一种方式可以例如通过光学方法如分光光度法来执行。通过差示分光光度法，对于脱氧血红蛋白和氧合血红蛋白在等吸收波长下流过小口径玻璃管的血液样品/骨髓组合物的光密度中的差异以及管腔直径和红细胞压积的乘积产生线性关系，其用于测量红细胞压积水平是血液/骨髓组合物中红细胞的体积百分比。在一些实施方案中，通过差示分光光度法测定红细胞压积水平。在一些实施方案中，改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的患者，并且对所述对象提供包含细胞群体的组合物，所述细胞群体包含骨髓总有核细胞和红细胞（例如2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的组合物的压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或组合物的红细胞级分、或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的总细胞或红细胞的量，抗凝剂和自体血浆，其中所述组合物具有在37℃下测量的1.5至5.0厘泊（cp）的粘度，其中所述组合物包含活细胞剂量，并且其中所述组合物通过标准的末端开口的套管针、或者包括多个端口和封闭端的套管侧开口的针或导管肌内施用于所述对象。所述组合物的优选粘度为1.6cp-5.0cp，并且最优选的粘度为1.8cp-3.0cp，并且最优选的粘度为2.0cp-2.5cp。在一些实施方案中，所述组合物的粘度为、为约、小于1.5cp、1.6cp、1.7cp、1.8cp、1.9cp、2.0cp、2.1cp、2.2cp、2.3cp、2.4cp、2.5cp、2.6cp、2.72.8cp、2.9cp、3.0cp、3.1cp、3.2cp、3.3cp、3.4cp、3.5cp、3.6cp、3.7cp、3.8cp、3.9cp、4.0cp、4.1cp、4.2cp、4.3cp、4.4cp、4.5cp、4.6cp、4.7cp、4.8cp、4.9cp或5.0cp，或者在由上述粘度中的任何两个限定的范围内的粘度。在一些实施方案中，所述细胞群体包含所述组合物的压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）或所述组合物的红细胞级分，其为、为约、小于、多于2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%，或本文限定的任何两个值之间的组合物的压紧总细胞级分或组合物的红细胞级分的任何百分比（也称为%红细胞压积（%hct））。在一些实施方案中，所述细胞群体包含组合物的2-20%压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或组合物的红细胞级分（也称为%红细胞压积（%hct））。“细胞回收”指在初始样品和最终样品中存在的细胞总数目的基础上，在经历浓缩过程之后可以回收的样品中细胞的百分比。在本文提供的方法的一些实施方案中，抽吸的骨髓具有≥80%的白细胞回收。在一些实施方案中，组合物包含骨髓总有核细胞和红细胞（例如2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的组合物的压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或组合物的红细胞级分、或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的总细胞或红细胞的量），以及cd34+和cd34-骨髓干细胞，cd34是位于细胞表面的蛋白质，其可以在细胞-细胞粘附中起作用。它还可以介导干细胞与骨髓细胞外基质的粘附或者直接与基质细胞的粘附。cd34的水平是重要的，因为它与供体骨髓移植后改善的生存关联，并且可以在例如生存和移植物抗宿主病的结果中起作用。如本文所述，“灌注”指其中机体将血液递送至其生物组织中的毛细血管床的过程。可以执行测试，以验证在由医疗或急救人员执行的患者评价过程期间存在充足和增加的灌注。最常见的方法包括评估机体的肤色、温度、状况和毛细血管再充盈。还可以执行测试，以验证在由医疗或急救人员执行的患者评价过程期间存在充足和增加的皮肤灌注。最常见的方法包括评估经皮氧分压（tcpo2）或皮肤灌注压（spp）。测量灌注可以通过许多技术来执行，不受限制地，实例可以包括磁共振成像（mri）和ct（对比增强的体层摄影术）。如本文所述，“血管生成”指通过其新血管由预先存在的血管形成的生理过程。如本文所述，“血管形成（vascularity）”指具有许多循环血管。在一些实施方案中，改善对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法包括鉴定患有外周血管疾病、外周动脉疾病、严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的患者，并且对所述对象提供包含细胞群体的组合物，其中所述细胞群体包含骨髓总有核细胞和红细胞（例如2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的组合物的压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或组合物的红细胞级分、或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的总细胞或红细胞的量，抗凝剂和自体血浆，其中所述组合物具有在37℃下测量的1.5至5.0厘泊（cp）的粘度，其中所述组合物包含活细胞剂量，并且其中所述组合物通过标准的末端开口的套管针、或者包括多个端口和封闭端的套管侧开口的针或导管肌内施用于所述对象。治疗严重肢体缺血的方法由于可导致对细胞的损害的条件，用于施用于对象的细胞必须在递送过程中有效和小心地处理。细胞可以暴露于切向机械力，称为剪切应力，例如，其导致细胞死亡并且来自待递送的细胞群体中的存活细胞的炎性分子释放。由于许多因素，例如细胞与腔壁的接近、注射速度、腔的半径以及流体的粘度，剪切应力发生。这些剪切力可以导致从轻微的形态变化到细胞裂解的损害。相应地，当将本文所述的组合物递送至有此需要的对象时，减少对细胞的剪切应力损害是考虑的重要方面。本文公开的一些实施方案提供了改善或抑制对象中的严重肢体缺血或与严重肢体缺血相关的状况的方法，其中所述方法涉及施用包含骨髓衍生的细胞群体的组合物。在一些实施方案中，所述细胞群体包含骨髓总有核细胞和红细胞（例如2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%的组合物的压紧总细胞级分（组合物的总细胞体积）、或组合物的红细胞级分、或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的总细胞或红细胞的量）。在一些实施方案中，红细胞可以用于调整组合物的粘度。骨髓衍生的细胞群体可以包括但不限于遵循用于cd34阳性细胞计数的ishage指南鉴定的造血干细胞（hsc）和/或造血祖细胞（hpc）和/或cd34阳性细胞；被鉴定为至少谱系阴性/dim、cd45阴性/dim和cd73阳性细胞的间充质干细胞（msc）和/或基质细胞；被鉴定为至少cd45阴性/dim、cd34阳性和血管内皮生长因子受体2（vegfr2）阳性细胞的内皮祖细胞（epc）；被鉴定为至少谱系阴性/dim、cd45阴性/dim和cd184（cxcr4）阳性细胞的cxcr4祖细胞。所述祖细胞混合物还应具有集落形成能力，如通过关于hsc/hpc、msc/基质细胞和epc的集落形成单位测定评价的。上述细胞群体包含各种细胞类型，其在受损组织的整体愈合中协同作用。在一些实施方案中，细胞群体包含cd34+和cd34-骨髓干细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含基质细胞。在一些实施方案中，基质细胞是谱系阴性/dim、cd45阴性/dim和cd73阳性细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含间充质干细胞。在一些实施方案中，细胞群体包含造血干细胞、内皮祖细胞和cxcr4阳性细胞。在一些实施方案中，骨髓可以使用装置例如一次性离心细胞分层装置进行分层，所述装置可以具有能够响应马达驱动的开启和停止定位的受控阀门，并且可以具有密度功能分离装置，使得可以收获高于或低于装置的骨髓衍生的细胞群体，尽管也考虑了关于与上述参数一致的装置的每个参数的变化，以及包括使用替代装置或者对于其细胞不使用如本文公开的装置分层的替代方案。一些实施方案包括任选的主板上的固件（on-boardfirmware），用于控制由响应于预定光单元的光源透射值的差异、或其密度等于靶细胞密度质量比的等价密度分离装置、验证某些细胞群体或细胞剂量和某些群体的粘度的快速分析器械中的差异驱动的多分层区带内的某些细胞群体的询问和收获。在一些实施方案中，可以从约100ml、110ml、120ml、130ml、140ml、150ml、160ml、170ml、180ml、190ml、200ml或更多的自体骨髓抽吸物加工骨髓衍生的细胞群体。在一些实施方案中，骨髓抽出物可以被浓缩至其为、为约、小于、多于5ml、10ml、15ml、20ml、25ml、30ml、35ml、40ml、45ml、50ml、或者在上述值的任何两个之间的范围内的最终体积。在一些实施方案中，骨髓衍生的细胞群体可以具有其为至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、或者在上述值的任何两个之间的范围内的细胞活力。在一些实施方案中，骨髓衍生的细胞群体可以具有其为至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、或者在上述值的任何两个之间的范围内的白细胞回收。在一些实施方案中，组合物包含自体血浆。在一些实施方案中，自体血浆可以用于调节组合物的粘度。在一些实施方案中，组合物具有在37℃下测量的1.5至5.0厘泊（cp）的粘度。粘度计（可能包括但不是必需的辅助软件）可以用于以单位测定组合物粘度（例如厘泊（cp）），并且计算在98.6华氏度或37摄氏度下得到在1.8–5cp的优选范围内的最终组合物所需的血浆体积。在一些实施方案中，组合物粘度小于或等于1.8cp、1.9cp、2.0cp、2.1cp、2.2cp、2.3cp、2.4cp、2.5cp、2.6cp、2.72.8cp、2.9cp、3.0cp、3.1cp、3.2cp、3.3cp、3.4cp、3.5cp、3.6cp、3.7cp、3.8cp、3.9cp、4.0cp、4.1cp、4.2cp、4.3cp、4.4cp、4.5cp、4.6cp、4.7cp、4.8cp、4.9cp或5.0cp或为在它们之间的任何数目。在一些实施方案中，组合物包含活细胞剂量。在一些实施方案中，如在骨髓抽吸之后和在床边加工之后但在现场注射之前测量的，给予对象的活细胞剂量是4.0×107白细胞/ml。在一些实施方案中，活细胞剂量是1.75×107、2.0×107、3.0×107、4.0×107、5.0×107、6.0×107、7.0×107或7.67×107个白细胞/ml，或者在由上述量中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，活细胞剂量为4.0×107个白细胞/ml。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工之后测量的活细胞剂量为3.65×106、4.0×106、5.0×106、6.0×106、7.0×106、8.0×106、9.0×106、1.0×107、2.0×107或2.15×107个单核细胞/ml，或者在由上述量中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工之后测量的活细胞剂量为1.08×107个单核细胞/ml。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工之后测量的活细胞剂量为5×103、6.0×103、7.0×103、8.0×103、9.0×103、1.0×104、2.0×104、3.01.0×104、4.0×104、5.0×104、6.0×104、7.0×104、8.0×104、9.0×104、1.0×105、2.0×105个集落形成单位（cfu-h）/ml，或者在由上述量中的任何两个限定的范围内的量。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工之后测量的活细胞剂量为1.08×107（范围3.65×106至2.15×107）个单核细胞/ml。在一些实施方案中，给予对象且如在床边加工之后测量的活细胞剂量为5.0×103（范围5.0×10至200×103）个集落形成单位（cfu-h）/ml。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述对象中测量指数肢体伤口愈合和/或闭合和/或两者中的改善。在一些实施方案中，组合物包含抗凝剂。考虑了许多抗凝剂源，例如香豆素、维生素k拮抗剂、间接凝血酶抑制剂、肝素、因子xa抑制剂、直接凝血酶抑制剂、巴曲酶、hemetin、纯化的植物提取物、edta、柠檬酸盐、草酸盐和nitrophorin。优选的抗凝剂是比伐卢定。比伐卢定具有许多有益的性质，例如短的（20分钟）半衰期和独立于许多其他抗凝剂例如肝素的作用方式，其可以根据手术干预独立施用于患者，通过其获得干细胞源例如骨髓源。在一些实施方案中，待使用的抗凝剂例如比伐卢定的浓度为0.9mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml、21mg/ml、22mg/ml、23mg/ml、24mg/ml、25mg/ml、26mg/ml、27mg/ml、28mg/ml、29mg/ml、30mg/ml、31mg/ml、32mg/ml、33mg/ml、34mg/ml、35mg/ml、36mg/ml、37mg/ml、38mg/ml、39mg/ml、40mg/ml、41mg/ml、42mg/ml、43mg/ml、44mg/ml、45mg/ml、46mg/ml、47mg/ml、48mg/ml、49mg/ml、50mg/ml、51mg/ml、52mg/ml、53mg/ml、54mg/ml或55mg/ml。在一些实施方案中，待使用的抗凝剂例如比伐卢定的浓度落入1mg/ml至50mg/ml的范围内，优选5mg/ml至35mg/ml，更优选10mg/ml至25mg/ml，最优选20mg/ml。举例说明性地，每个小瓶可以含有250mg比伐卢定，向其中加入5ml无菌水用于注射。可以用水轻轻涡旋抗凝剂例如比伐卢定，例如直到所有材料溶解，并且溶液看起来透明。然后可以将溶液抽吸到无菌注射器如20ml无菌注射器内。然后可以用0.9%无菌氯化钠填充注射器，例如用于注射直到12.5ml标记，以得到20mg/ml的最终浓度。然后可以采取三个无菌20ml注射器，并且填充2ml20mg/ml比伐卢定溶液。然后可以在每个注射器中抽吸18ml的干细胞源，以制备20ml的最终体积。在每个注射器中抗凝剂如比伐卢定连同抽吸的骨髓一起的最终浓度可以是2mg/ml。骨髓抽吸领域的技术人员已知所使用的抽吸针是7、8、9、10、11、12、13、14或15号针，例如在8至14号针的范围内，例如在9至12号针的范围内，优选地，针/套针是11号针。将干细胞和/或祖细胞源例如骨髓在预填充有抗凝剂溶液的一个或多个注射器或注射器中抽吸，例如在120ml至180ml之间的最终累积体积。使用的抽吸注射器可以具有4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、11ml、12ml、13ml、14ml、15ml、16ml、17ml、18ml、19ml、20ml、21ml、22ml、23ml、24ml、25ml、26ml、27ml、28ml、29ml、30ml、31ml、32ml、33ml、34ml、35ml、36ml、37ml、38ml、39ml、40ml、41ml、42ml、43ml、44ml、45ml、46ml、47ml、48ml、49ml、50ml、51ml、52ml、53ml、54ml、55ml、56ml、57ml、58ml、59ml、60ml、61ml、62ml、63ml、64ml、65ml、66ml、67ml、68ml、69ml、70ml、71ml、72ml、73ml、74ml、75ml、76ml、77ml、78ml、79ml、80ml、81ml、82ml、83ml、84ml、85ml、86ml、87ml、88ml、89ml、90ml、91ml、92ml、93ml、94ml、95ml、96ml、97ml、98ml、99ml、100ml、101ml、102ml、103ml、104ml、105ml、106ml、107ml、108ml、109ml或110ml的体积，优选可以落入5ml至100ml的范围内，优选10至60ml，更优选20至50ml，最优选20ml。在一些实施方案中，所述组合物通过标准的末端开口的套管针、或者包括多个端口和封闭端的套管侧开口的针或导管肌内或皮内施用于所述对象。在一些实施方案中，使用标准的末端开口的套管针、包括多个端口和封闭端的套管侧开口的针或导管，将所述组合物抽吸、浓缩并且肌内或皮内施用于所述对象。在一些实施方案中，组合物可以在多于1个，例如2、3、4、5个或更多个对象部位处施用。在一些实施方案中，套管侧开口的针或导管具有0.33mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，套管侧开口的针或导管具有0.51mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，套管侧开口的针或导管具有0.69mm的腔尺寸（直径）。在一些实施方案中，所述套管侧开口的针或导管包括10-24个侧端口。在一些实施方案中，所述套管侧开口的针或导管包括10、12、14、16、18、20或24个侧端口。在一些实施方案中，辅助侧端口具有约0.46mm至约0.56mm的直径。该方法的方面还包括施用组合物的速率。相应地，组合物以0.1ml至0.5ml/秒的速率提供给对象。在一些实施方案中，所述组合物以0.25ml至0.5ml/剂量施用于所述对象。在一些实施方案中，组合物以0.1ml/秒、0.2ml/秒、0.3ml/秒、0.4ml/秒、0.5ml/秒的速率，或以在由上述值中的任何两个限定的范围内的速率施用于对象。在一些实施方案中，所述组合物以其为、为约、小于1psi、2psi、3psi、4psi、5psi、6psi、7psi、8psi、9psi、10psi或者在上述值中的任何两个之间的范围的压力施用。在一些实施方案中，所述组合物以其为、为约、小于100pa、200pa、300pa、400pa、500pa、600pa、700pa、800pa、900pa、1,000pa或者在上述值中的任何两个之间的范围的剪切应力肌内施用于所述对象。在一些实施方案中，所施用的组合物具有使用二维图像代表体积分布的肌肉分布区域，其为、为约、大于1cm2、2cm2、3cm2、4cm2、5cm2、6cm2、7cm2、8cm2、9cm2、10cm2、11cm2、12cm2、13cm2、14cm2、15cm2、16cm2、17cm2、18cm2、19cm2、20cm2或者在上述值中的任何两个之间的范围内。在一些实施方案中，所述组合物以单一剂量施用。在一些实施方案中，所述组合物以至少30个剂量施用。在一些实施方案中，所述组合物以至少40个剂量施用。在一些实施方案中，所述组合物在多天中的每一天以单一剂量/天施用。在一些实施方案中，所述组合物在多天中的每一天以至少两个剂量/每天施用。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量血流增加、血管生成增加、血管供应增加、灌注增加、经皮氧增加、伤口愈合改善、肢体救助增加或无截肢存活率增加。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在所述组合物施用后，在所述对象中测量无截肢存活率增加。实施例实施例1.基于设计的流场特性的鉴定。基于标准套管针和套管侧开口针的质量流速、速度和壁剪切应力来确定流场特性。（图1和2）。考虑的是针的性质，例如如下表1所示且如图1和2所示的长度、直径、壁厚度和端口直径。在表1中，针的号数（直径ga）指其外径。括号中的第二尺寸是流体流过其的内径/腔尺寸。表1：针的性质。使用称为ansyscfd的程序，非牛顿混合材料（10%红细胞压积血液模型，90%carreauyasuda血液模型，具有3.5cp的平均粘度），其中材料的流动以0.25ml/秒（q1）和0.50ml/秒（q2）的流速进行评价。如所示，在图3中，是使用套管侧开口针在稳态下的工作流体性质，使用非牛顿混合材料模型（10%红细胞压积血液模型，90%carreauyasuda血液模型，具有3.5cp的平均粘度）。图片显示了通过针切面的典型粘度值。如图4a和4b所示，分别是以q1（0.25ml/秒）和q2（0.5ml/秒）在标准套管针中的速度量级。如所指出的，在流体上的压力增加表现为增加的流速，这进而可以由于剪切应力而导致细胞损害。如图5所示，壁剪切应力随流速而增加。在q2（0.5ml/秒）下，与q1的低流速（0.25ml/秒）相比，流体经历更高的剪切应力。低剪切或相关的术语低流速可以是有益的，以避免对用于转移的细胞的损害。剪切应变率指材料的应变（变形）就时间而言的变化。如图6所示，是在q1（0.25ml/秒）和q2（0.5ml/秒）的两个速率下，使用携带非牛顿混合材料模型的标准套管针的剪切应变率，其中显示了针尖端的横截面。如可见的，剪切应变率（1/s）随着流体施用的速率而增加。实施例2.当使用侧开口的针型号时的流体流速及其效应。使用ansyscfd进行套管侧开口针的计算评价。对于测试流体，非牛顿混合材料（10%红细胞压积血液模型，90%carreauyasuda血液模型，具有3.5cp的平均粘度）用于样品，并且使用的针模型为以0.25ml/秒（q1）的流速的tin-21-5.0。表1中显示了侧开口的针型号tin-21-5.0的性质。观察到在0.25ml/秒（q1）的流速下，与最后一个端口相比，剪切应力在第一端口处更高。然而，总体来说，通过使用套管侧开口的针显示出的剪切应力小于标准套管针的剪切应力。壁剪切应力的检查还如图8所示执行。如所观察到的，在端口1处的壁剪切应力为138.4pa，并且实质上小于对于标准套管针见到的剪切应力（396.3pa）。如图9所示的剪切应力率也显示了使用以0.25ml/秒流速的套管侧开口针的优点，因为当使用标准套管针（89,762.1（1/s））时，与图6所示的剪切应变率相比，最大剪切应变率为44.122.4（1/秒）。以0.25ml/秒的速率通过针tin-21-5.0和tin-19-7.5建模流体流动，并且计算测量速度矢量。当与使用以相同流速的tin-21-5.0针时显示出的壁剪切应力相比时，图11所示的用tin-19-7.5观察到的壁剪切应力的测量实质上更小。剪切应变率的测量也如图12所示执行，并且当与使用tin-21-5.0针以相同流速运行的最大剪切速率相比时，实质上更小（在第一端口处的最大剪切应变率，tin-19-7.5=19,130.9（1/s）；tin-21-5.0=44,122.4（1/s（参见图9））。如预期的，对于侧开口设计，直径较大的较长针影响剪切速率或应力小于较窄的针。对于给定的流速，较长的腔长度可以具有对细胞的较长暴露，这可通过由于较宽的流体路径的较低剪切速率和应力而抵消。以0.25ml/秒的速率通过针对流体流动进行建模，其中计算测量速度矢量。壁剪切应力在58.3pa下测量，图14所示，并且当与使用tin-21-5.0针（参见图8）在相同流速下的壁剪切应力相比时，实质上更低，但与tin-19-7.5针的壁剪切应力相当（comparable）。还测量了剪切应变率并且显示了类似的结果，如图15所示。使用ansyscfd进行套管侧开口针的计算评价。对于测试流体，非牛顿混合材料（10%红细胞压积血液模型，90%carreauyasuda血液模型，具有3.5cp的平均粘度）用于样品，并且使用的针模型为以0.50ml/秒（q2）的流速的tin-21-5.0。表1中显示了侧开口的针型号tin-21-5.0的性质。如图16所示，是使用从套管侧开口针的第一端口到套管侧开口针上的第二十二个端口0.50ml/秒（q2）的流速的速度矢量。如所示，剪切应力在第一端口处更高，然而，通过使用套管侧开口的针显示出的剪切应力小于标准套管针的剪切应力。壁剪切应力的检查显示于图17中。如可见的，壁剪切应力为317.2pa，其实质上高于对于其中流速设为0.25ml/秒的相同针可见的那种（图8）。如图18所示的剪切应变率也显示了使用较低的q1流速（0.25ml/秒）的优点，因为与如图9所示的44,122.4（1/秒）相比，当流体流速为q2（0.5ml/秒）时，最大剪切应变率为93,622.5（1/s）。然后比较q1和q2的流速之间的体积流速分布。如图19所示，是在22个侧端口上的体积流速分布。如所示，在较高的流速下，流速在最末端的侧端口（侧端口22）处增加，而在0.25ml/秒（ql）的流速下，在侧端口22处的流速已减小。使用ansyscfd进行套管侧开口针的计算评价。对于测试流体，非牛顿混合材料（10%红细胞压积血液模型，90%carreauyasuda血液模型，具有3.5cp的平均粘度）用于样品，并且使用的针模型为以0.50ml/秒（q2）的流速的tin-19-7.5。表1中显示了侧开口的针型号tin-19-5.0的性质。如图20所示，是使用从套管侧开口针的第一端口到套管侧开口针上的第二十二个端口0.50ml/秒（q2）的流速的速度矢量。如所示，剪切应力在第一端口处更高，然而，通过使用套管侧开口的针显示出的剪切应力小于标准套管针的剪切应力。壁剪切应力的检查显示于图21中。如可见的，壁剪切应力为138.8pa，其类似于用tin-19-7.5针流速设为0.25ml/秒的壁剪切应力（图8）。如图22所示的剪切应变率也显示了使用较低的q1流速（0.25ml/秒）的优点，因为当流体流速为q2（0.5ml/秒）时，最大剪切应变率为44,193.1（1/s）。然后对于相同的针比较q1和q2的流速之间的体积流速分布。如图23所示，是在22个侧端口上的体积流速分布。如所示，在较高的流速下，流速在最末端的侧端口（侧端口22）处增加，而在0.25ml/秒（ql）的流速下，在侧端口22处的流速已减小。使用ansyscfd进行套管侧开口针的计算评价。对于测试流体，非牛顿混合材料（10%红细胞压积血液模型，90%carreauyasuda血液模型，具有3.5cp的平均粘度）用于样品，并且使用的针模型为以0.50ml/秒（q2）的流速的tin-19-7.5。表1中显示了侧开口的针型号tin-21-5.0的性质。如图24所示，是使用从套管侧开口针的第一端口到套管侧开口针上的第二十二个端口0.50ml/秒（q2）的流速的速度矢量。如所示，剪切应力在第一端口处更高，然而，通过使用套管侧开口的针显示出的剪切应力小于标准套管针的剪切应力。壁剪切应力的检查显示于图25中。如可见的，壁剪切应力为140.9pa，并且剪切应变率显示于图26中，为42,675.1（1/s）。然后对于相同的针比较q1和q2的流速之间的体积流速分布。如图27所示，是在22个侧端口上的体积流速分布。如所示，在较高的流速下，流速在最末端的侧端口（侧端口22）处增加，而在0.25ml/秒（ql）的流速下，在侧端口22处的流速已减小。如图28所示，尽管壁剪切应力朝向最末端侧端口减小，但当使用0.25ml/秒的流速时，壁剪切应力仍然低得多。总之，在q1（0.25ml/秒）和q2（0.50ml/秒）下检查非牛顿混合材料模型的不同流速的计算测试使用不同的套管针例如标准套管针和具有不同性质的套管侧端口针显示，如表1所示。如图29和30所示的分别是在q1和q2下的速度分布图的比较。如所指出的，对于所有侧开口套管针，速度朝向针的末端减小。在分别关于q1和q2，图31和32的壁剪切应力的比较中，在所有不同的针类型中，它在q2的速率下已急剧增加。体积流速的概括显示于图33中。如对于使用套管侧开口针（tin-21-5.0、tin-19-7.5、tin-19-10.0）所示，当流速设为0.25ml/秒（q1）时，体积流速朝向最远侧端口（侧端口22）减小。然而，在q2（0.5ml/秒）下，体积流速在末端侧端口处增加。这与在流速q2下见到的壁剪切应力增加相一致。实施例3.细胞组合物的针后表征。在距离骨髓抽吸36小时内执行细胞产物的针后表征。执行abmc、tin后（posttin）和shn后（postshn）样品中的cfu-h数据的统计分析。使用单因素方差分析abmc相对于posttin和abmcshn并未显示任何显著的差异，这指示当以0.25ml/秒的流速通过针时，剪切对abmc样品没有作用。为了实验，将3ml的样品通过各自的针。流速用校准的定时器手动执行。下表2中显示的是abmc、tin后和shn后样品中的wbc计数数据。测试距离骨髓抽吸<3小时执行。表2：abmc、tin后和shn后样品中的wbc计数数据。abmc、tin后和shn后样品中的wbc计数数据概括显示于下表3中。测试距离骨髓抽吸<3小时执行。表3abmc、tin后和shn后样品中的wbc计数数据概括。如图34所示，对于wbc数据，是单因素方差分析（dunnett's多重比较检验）的图形表示。abmc相对于tin后以及abmc相对于shn后并未显示显著差异，这指示当流速为0.25ml/s时，剪切对样品没有作用。还对cd34+细胞收集数据。如下所示的是来自10个样品的表4中的abmc、tin后和shn后样品中的cfu-h数据（cfu/50000wbc）。测试距离骨髓抽吸<36小时执行。表4：abmc、tin后和shn后样品中的cfu-h数据（cfu/50000wbc）下表5显示了abmc、tin后和shn后样品中的cfu-h数据（cfu/50000wbc）概括。测试距离骨髓抽吸<36小时执行。表5：abmc、tin后和shn后样品中的cfu-h数据（cfu/50000wbc）概括。如图35所示，对于cfu-h数据，是单因素方差分析（dunnett多重比较检验）的图形表示。abmc相对于tin后以及abmc相对于shn后并未显示任何显著差异，指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对abmc样品没有作用。如图36所示，对于%细胞活力数据，是单因素方差统计分析（dunnett多重比较检验）的图形表示。abmc相对于tin后以及abmc相对于shn后并未显示任何显著差异，指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对abmc样品没有作用。如图37所示，对于活cd45+细胞计数数据，是单因素方差统计分析（dunnett多重比较检验）的图形表示。abmc相对于tin后以及abmc相对于shn后并未显示任何显著差异，指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对abmc样品没有作用。如图38所示，对于活cd34+细胞计数数据，是单因素方差统计分析（dunnett多重比较检验）的图形表示。abmc相对于tin后以及abmc相对于shn后并未显示任何显著差异，指示当以0.25ml/s的流速通过针时，剪切对abmc样品没有作用。实施例4.示例性产物中的细胞组成。用于处理的组合物由120ml的人骨髓抽吸物生成，其浓缩至20毫升的最终体积。细胞类型显示于下表6中。如所示，组合物包含基质细胞、间充质细胞、造血干细胞和内皮祖细胞的混合物。另外，组合物包含红细胞和血浆。该组合物具有在4.3至10.9%的范围内的红细胞压积（参见下表7）。表6：输注的最终产物的剂量（20ml）表7：细胞样品组合物实施例5.用组合物中不同量的红细胞评估细胞活力。从对象中抽吸出一定量的骨髓（例如120-180ml）。通过使用无菌的一次性骨髓加工装置，对骨髓抽吸物进行加工并且浓缩以获得最终体积为20毫升的自体骨髓细胞浓缩物（abmc）组合物。abmc组合物优选缺少或基本上不含红细胞（rbc）。测量abmc的总有核细胞、总单核细胞和wbc的群体（例如，使用自动化血球计数器，使用库尔特原理）。将rbc加入abmc组合物中，以便达到3%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%或40%的组合物的最终红细胞压积或组合物的总细胞级分（组合物的总细胞体积），或者在由上述值中的任何两个限定的范围内组合物的总细胞级分（组合物的总细胞体积）或最终红细胞压积。将自体血浆加入abmc组合物中，以将在37℃下的粘度调节至1.5-5.0cp的最终值。然后将以1.5-5.0cp粘度的包含rbc和自体血浆的所得的abmc组合物以0.25ml/s通过tin侧开口针。在通过针递送细胞后的24小时内，测量溶血（通过测量血浆级分中的游离血红蛋白）和wbc、cd45+和cd34+细胞的细胞活力和/或细胞凋亡（例如，通过使用台盼蓝排除测定、膜联蛋白-v测定或7aad/pi测定）。当组合物的最终红细胞压积在2-20%的范围内时，预期改善的和更好的细胞组成。实施例6.用不同流速评估细胞活力。从对象中抽吸出一定量的骨髓（例如120-180ml）。通过使用无菌的一次性骨髓加工装置，对骨髓抽吸物进行加工并且浓缩以获得最终体积为20毫升的自体骨髓细胞浓缩物（abmc）组合物。abmc组合物优选缺少或基本上不含红细胞（rbc）。测量abmc的总有核细胞、总单核细胞和wbc的群体（例如，使用自动化血球计数器，使用库尔特原理）。将rbc加入abmc组合物中，以便达到20%的组合物的总细胞级分（组合物的总细胞体积）。将自体血浆加入abmc组合物中，以将在37℃下的粘度调节至1.5-5.0cp的最终值。然后将所得的abmc组合物以0.1ml/s、0.15ml/s、ml/s、0.25ml/s、0.3ml/s、0.35ml/s、0.4ml/s、0.45ml/s和/或0.5ml/s的流速，或者在由上述值中的任何两个限定的范围内的流速通过tin侧开口针。在通过针递送细胞后的24小时内，测量溶血（通过测量血浆级分中的游离血红蛋白）和wbc、cd45+和cd34+细胞的细胞活力和/或细胞凋亡（例如，通过使用台盼蓝排除测定、膜联蛋白-v测定或7aad/pi测定）。当流速在0.1ml至0.5ml/秒的范围内时，预期改善的细胞组成。实施例7.为了测试骨髓浓缩物（bmc）诱导人脐静脉内皮细胞（huvec）的趋化迁移和“管形成”的能力而进行的调查研究的结果自体细胞疗法是患者（生物学）独特的，因为活性组分由具有混合药理学特性的活细胞组成，并且产生具有复杂的生物化学相互作用的可变量的生物活性分子。许多细胞类型展示通过响应当地环境线索而归巢到机体的特定区域的能力。例如，存在于骨髓（bm）和abmc中的内皮祖细胞（epc）预期响应由缺氧组织生成的归巢信号。骨髓-单核细胞（bm-mnc）的局部注射导致在临床前和临床研究两者中的新血管形成（lee和yoon，brjpharmacol.2013；169（2）：290-303）；整体引入本文作为参考）。关于这种效应的可能机制包括由注射细胞分泌且作用于宿主细胞的趋向性因子（tropicfactors），后者然后进行实际血管生成。另外，可以移入尤其是在自体环境中的一些注射细胞，从而为新血管提供结构支持。许多分泌因子已提出促成形成血管，包括vegf和sdf-1。尽管vegf支持血管形成的多个方面，但sdf-1主要视为促进定向细胞迁移的因素（ho等人，cardiolrespract.2012；2012：143209；整体引入本文作为参考）。另一方面，内皮抑素是血管生成抑制剂。abmc的细胞组分构成包括epc、间充质干细胞（msc）和造血细胞的总有核细胞（tnc）亚群的异源混合物。相比之下，已使用单一细胞类型的研究尚未达到效力终点。abmc的cd34+级分含有epc，并且因此预期促成clirstiii试验中的血管生成。然而，dubsky研究了用外周或骨髓衍生的cd34+细胞治疗的非选择性糖尿病cli患者，注意到在注射的cd34+细胞的数目（以及测试的血管生成细胞因子中的任一种的水平）和临床反应（tcpo2变化）之间没有发现关联（dubsky等人，celltransplant2014；23（12）：1517-23；整体引入本文作为参考）。msc已牵涉包括cli的各种状况的治疗。在双盲随机化安慰剂对照的i/ii期试验中，将bm-msc应用于缺血肢体的腓肠肌，并且证明是安全的。少数效力参数例如abi和踝关节压力（anklepressure）显示出阳性趋势（gupta等人，jtranslmed.2013jun10；11：143；整体引入本文作为参考），并且假设这并不出乎意料，鉴于它是冷冻保存的单细胞类型，可能在具有高活力丧失的不受控制的过程中解冻，并且以可能不受控制的方法注射。此外，表达tie2的单核细胞/巨噬细胞（tem）在肿瘤中是高度血管生成的。在cli患者中，发现循环tem水平10倍增加。去除缺氧将这些水平降低到正常水平。一致地，缺血性肌肉中的tem数目是来自同一患者的含氧量正常肌肉的两倍（patel等人，embomolmed.2013jun；5（6）：858-69；emanueli和krankeln.embomolmed.2013jun；5（6）：802-4；两者均整体引入本文作为参考）。鉴于多种细胞组分已显示积极影响血管形成，关于clirstiii的给药提议基于tncavbc计数而不是特定细胞亚群（例如cd34+）的水平。另外，假设关键试验数据可以显示更强的mnc功效关联，假设wbc替代物仍然是实际上合理的，因为在280个骨髓抽吸物的先前经验中，wbc计数与mnc关联（67.16%的r-sq'd）。使用这种策略的主要实际优势是wbc计数是快速、可靠和可移动的，因此不需要耗时的现场（point-of-care）流式细胞术。与在restore-cli（aarstrombiosciences）cli试验中注射的多细胞培养产物相反（powell等人，molther.2012jun；20（6）：1280-6；整体引入本文作为参考），clirstiii（cescatherapeutics）试验的abmc产物由细胞和血浆组分两者组成。体外生物活性测定、迁移和管形成可以指示细胞产物的机制有效性。下文证实存在了血浆级分的高生物活性，因此加强了我们产物的总体预期治疗组成。该研究的目的是评价使用该装置生产的生物产物的体外生物活性。另外，次要目标是使用体外实验评估在自体骨髓浓缩物（abmc；也指名为surgwerks-cli和vxp装置输出（“产物”））的不同组分中个别或组合对替代物的贡献（如果存在的话）。这个实例概括了从abmc获得的数据，具体是abmc血浆和abmc白细胞（wbc）级分。所呈现的数据包括来自先前文献的血管形成、bbmc血浆和wbc条件化培养基中牵涉的细胞因子水平，其各自的生物活性如通过使用bmc血浆和wbc条件化培养基作为刺激剂的迁移和管形成测定所测量的。本文报告的是使用由surgwerks-cli和vxp系统加工的从10个健康供体获得的abmc的调查研究结果。体外测定abmc促进朝向趋化刺激的huvec迁移和形成毛细血管样huvec网络（“管”）两者的能力。测定中使用的设备和材料-生物危害安全橱；具有湿度和气体控制的组织培养温箱；无菌过滤器；移液助剂和无菌移液管（5ml、10ml、25ml和50ml）；带无菌一次性塑料吸头的微量移液器；血球计数器；台盼蓝溶液（0.4%）（sigma，目录号：t8154）；具有ccd相机的常规光学显微镜和倒置显微镜；管（微管以及5ml、15ml和50ml）；dpbs（sigma，目录号：d8662）；乙醇和无菌水；来自人血浆的纤连蛋白-液体（millipore，目录号fc010）；t75烧瓶；ebm-2-内皮基础培养基-2（lonza，目录号cc-3156）；egm-2-内皮生长培养基-2bulletkit（lonza，目录号cc-3162）；胰蛋白酶-edta（coming，目录号：25-053-ci）；牛血清白蛋白，脱脂的（冻干的）（corning，目录号：354331）；合并供体的huvec，筛选血管生成标记物，并且测试enos、axl、tie-2和vegfr2表达阳性（lonza，目录号：c2519as）；3.0um孔径的transwell插入物和相应的多孔板（bdfalconhtsfluoroblok96-multiwellinsertplates，coming，目录号354148）；falconhts96-squarewell，平底板（corning，目录号353928）；matrigel®matrix，growthfactorreduced（gfr）（corning，目录号：354230）；96孔板（ttp，目录号：92096）；hank平衡盐溶液（hbss）（lifetechnologies，目录号：14025092）；calcein，am（ex/em=495/516nm）（molecularprobes/lifetechnologies，目录号：c3100mp）；synergy4器械-具有底部读数能力的荧光微板阅读器（biotek，序列号：217214）；xe-2100™automatedhematologysystem（sysmex，系统id＃476057）；具有ultracel-3膜的amiconultra-15centrifugalfilterunit（millipore，目录号：ufc900396）；人vegfquantikineelisa试剂盒（r＆dsystems，目录#dve00）；人cxcl12/sdf-1alphaquantikineelisa试剂盒（r＆dsystems，目录#dsa00）。体外管形成要求内皮细胞（通常是人脐静脉内皮细胞（huvec））在基质胶支持物上迁移，并且在相遇之后彼此附着。其后，细胞可以开始形成管状结构。最初的迁移最可能是化学运动性而不是趋化性形式，因为预期通过初期均匀接种的细胞不形成促进定向细胞迁移的相关浓度梯度。出乎意料的是，观察到与基础培养基相比，abmc细胞条件化培养基看起来促进化学运动性（chemokinesis）。就其在装置输出（“产物”）血浆和条件化培养基（cm）（由abmc细胞血液条件化的补充有0.1%bsa的基础培养基（ebm-2））中诱导/支持huvec迁移和/或管形成的潜力评价测试物品（“测试培养基”）。条件培养基（cm）的制备。通过在37℃、5%co2下将经rbc裂解的洗涤的wbc级分在基础培养基（ebm-2+0.1%bsa）中温育40-60小时来制备cm。通过以300×g（rcf）离心10分钟来收集cm。使用0.22微米过滤器（（millex®gp0.22微米，聚醚砜（pes）膜）过滤上清液。将过滤的cm样品等分并且贮存于负80℃（低于零）。浓缩条件化培养基。为了增加cm中潜在促血管生成因子的浓度，使用具有ultracel-3膜装置的amiconultra-15离心过滤器通过基于离心的过滤来浓缩cm样品。简言之，在使用之前，将膜用乙醇短暂洗涤以使下游应用中微生物污染的风险降到最低。为此，将70%乙醇加入膜中大约1-2分钟随后去除。其后，将膜用10ml无菌水洗涤一次（温育大约5分钟后去除过滤器上的水）。然后将装置以3740rpm（2.8k×g）旋转5分钟。最后，将大约4-5ml的cm加入每个洗涤的装置中，然后将装置以3740rpm（2.8k×g）在4℃下旋转40分钟。测量浓缩前和浓缩后的体积。在浓缩后，通过用相应量的补充有0.1%bsa的ebm-2补充较高浓缩的样品，将稀释因子调整至7。用于实验的bm样品显示于下表8中：表8.用于该生物活性测定的bm样品迁移测定。将基础培养基（ebm-2+0.1%bsa）中的huvec种植到具有多孔底部膜的插入孔内。在底部室中朝向化学引诱物（测试培养基）跨膜迁移后定量细胞。进行两种测定来研究迁移测定（方法1和2）。在方法1测定中，将膜底侧上的细胞固定且染色，然后计数。另外，通过离心收集测试测试培养基中的非贴壁细胞且计数。然后使用总细胞计数（贴壁+非贴壁细胞）来评价迁移效应的程度。在方法2测定中，迁移的细胞用钙黄绿素am染色，所述钙黄绿素是通过活细胞酶促致使发荧光的化合物，然后使用荧光板阅读器进行定量。非贴壁细胞未被定量。实施后一种方法以优化人力和操作，并且它以较低程度的技术可变性极大减少了动手时间。此外，新测定需要较少体积的测试培养基，因此与数量非常有限的测试物品更相容。下表9显示的是两种测定方法之间的主要功能差异。表9.两种测定之间主要功能差异的概述。方法1方法2形式24孔96孔孔径8微米3微米测试培养基体积650微升225微升定量的细胞在多孔膜的底部侧上的贴壁细胞和任选地在测试培养基中的非贴壁细胞。在多孔膜的底部侧上的贴壁细胞。易用性测定难以进行；众多步骤具有不相称的细胞丢失的重大潜能；仅小数目的样品能够可行地共同加工。测定易于进行；多达96个样品的整个板能够可行地加工。对于在检测阈值下的细胞数目预期的再现性弱，尤其是如果细胞计数包括通过离心收集的在储库（低于插入物）中漂浮的细胞计数，因为微乎其微的非粘性细胞团块的上清液去除可以去除大百分比的细胞。良好；测定不需要迁移后细胞操作（洗涤和钙黄绿素am的添加不要求细胞解离）检测阈值潜在更高，因为个别细胞在膜的底侧上计数。潜在更低，因为极小数目的细胞可不产生高于本底的荧光信号。新血管形成中牵涉的细胞因子。在未加工的（骨髓抽吸物）、vxp加工的abmc血浆和针（tin和shn）后样品、通过注射针的abmc和收集的注射液中测量下述分泌因子的水平：vegf、sdf-1和内皮抑素。vegf和sdf-1视为促血管生成因子，内皮抑素视为血管生成的负调节剂。如图39所示，vegf和sdf-1水平在vxp加工的abmc血浆（针前样品）和针后样品tin＆shn之间在统计学上并无不同，提示在0.25ml/s的限定流速下，细胞产物不受针通道的影响。由bmc（“产物”）血浆诱导的迁移效应。图40显示了来自用补充有0.1%bsa的ebm-21:10稀释的abmc（通过治疗性输注针（tin））的血浆有效诱导huvec迁移。具有0.1%bsa的ebm-2充当基础（阴性）对照，egm-2充当完全内皮培养基（阳性）对照。egm-2与具有0.1%bsa的ebm-2的各种稀释物的迁移水平证实了促迁移因子的水平之间的正相关。为了评价来自abmc细胞的分泌因子是否以及在何种程度上促进生物活性以及这些因子是否包括vegf和/或sdf-1，通过elisa测定abmc细胞条件化培养基（cm），并且在迁移和管形成测定中进行测试。图41证实了未浓缩的cm中低水平的vegf，其中在浓缩后大量富集。用具有%bsa的ebm-2（基础培养基）刺激huvec之后的迁移效应，所述ebm-2通过来自经过tin的abmc的细胞条件化。图42显示条件化培养基比具有0.1%bsa的基础ebm-2不更广泛地诱导huvec迁移。具有0.1%bsa的ebm-2充当基础（阴性）对照，egm-2充当完全内皮培养基（阳性）对照。由bmc血浆诱导的管形成。图43和45-46证实来自用补充有0.1%bsa的ebm-21:5稀释的abmc（通过治疗性输注针（tin））的血浆有效诱导huvec迁移。具有0.1%bsa的ebm-2充当基础（阴性）对照，egm-2充当完全内皮培养基（阳性）对照。使用图像j（nih）定量由图43表示的实验的管形成。"angiogenesisanalyzerforimagej"的"tuningfunctionsmenutool"用于测量与血管生成相关的各种分析参数。描述的是使用的这种主要参数的描述：（a）"findatree"返回以相差或荧光获得的天然huvec图像的二进制骨架（或树），（b）"find&removeloops"在大小标准上去除二叉树图像中的人工环，（c）"findextremities"检测二叉树中的末端。它将结果作为叠加和二值图返回，（d）"findnodesandjunctions"将节点（具有3个邻居的像素）检测为圆点和连接点，其对应于节点或熔合节点组，（e）"findnodesandbranches"执行相同的两个先例功能（检测末端、节点和连接点）加上分支的其他元素：（1）区段；由两个连接点划分的元素，（2）分支；由连接点和一个末端划分的元素，（3）小枝；小枝是其大小低于用户限定的阈值的分支，以及（4）孤立元素是没有分支的二元线，以及（f）"recordthestepsoflimbing"在专用储备中记录，获得对应于枝干的分析所需的每次迭代的结果，包括主区段、主连接点和网格检测：（1）主区段由两个连接点划分的树组成（mastersegmentsconsistinpeacesoftreedelimitedbytwojunctions），无一专一地牵涉一个分支，称为主连接点，（2）主连接点是连接至少三个主区段的连接点，并且任选地，两个关闭的主连接点可以融合成独特的主连接点，以及（3）网格是由区段或主区段包围的区域。网络的组成成分元素的检测。如图44所示，末端（箭头a-b）；鉴定为具有至少3个邻居的像素的节点对应于分叉（箭头a-b）；小枝（c1，d1），通过两个连接点（c3，d3）（注意这个指向连接点由几个节点组成）和分支（c4，d4）划分的区段（c2，d2）。e显示仅牵涉分支（e1）和主连接点如e2（划分主区段（e3））的连接点。f显示由通过划分网格的主连接点（f1）关联的主区段组成的主树。任选地，两个紧密的主连接点可以融合成独特的主连接点（f2）。注意下层区段（f3）。管形成的定量。使用来自imagej（nih）的angiogenesisanalyzer，定量上述实验（图43）的3-4个图像/样品。为了最小化面积选择偏差，将中值用于比较评价（图45）。比较每个样品的中值的平均值与ebm-2样品的中值的统计分析（单样本t-检验）指示，与ebm-2+0.1%bsa比较，总管长度和连接点的数目对于abmc血浆显著更高（p<0.001，图45）。用来自tin后abmc的细胞条件化的基础培养基（补充有0.1%bsa的ebm-2）刺激huvec后的管形成。cm样品使用amicon装置进行浓缩。图46a例示了浓缩的cm（ccm）诱导的huvec聚集，并且2%的自体产物血浆的添加防止了这种情况。另外，使用配对t检验的统计分析提示，与仅2%abmc血浆样品相比，总管长度（图46b）和连接点数目（图46c）在ccm+2%abmc血浆样品中在统计学上显著（p<0.05）更高。abmc注射液含有非细胞（血浆）和细胞（abmc细胞）生物级分。尽管对预期治疗效应的非细胞贡献可能导致驻留（干细胞）和abmc细胞的局部刺激（可能是短暂效应），但细胞组分本身涉及直接涉及缺血性损伤修复的细胞亚群，可能发挥比由血浆组分介导的更长持续时间的效应。主要涉及后一类效应的可以尤其是内皮祖细胞（epc）。一致地，在“效力”集落形成单位（cfu）测定中证实，surgwerks-cli和vxp加工的骨髓浓缩物穿过含有内皮祖细胞（epcs；cfu-hill测定）、加上间充质干细胞（msc；cfu-f测定）和造血祖细胞（hpc；cfu-h测定）的注射针（报告620000）。总之，该实验概述了关于下述参数和测试培养基的生物活性结果，诸如例如，abmc（“产物”）血浆促进了huvec迁移和管形成。与其在血管化中的作用一致，在预加工的骨髓抽吸物（bma）和abmc血浆中检测到以显著水平的vegf和sdf-1，并且在vegf的情况下，也在abmc细胞条件化培养基中检测到，尽管水平低得多。出乎意料的是，两种细胞因子的水平在abmc血浆中显著高于bma血浆中，提示vxpsystem加工的输出对sdf-1或vegf具有浓缩作用，或去除显著数量的rbc后有核细胞的紧密接近（即在小体积中更高数目的细胞）增强了细胞因子分泌。内皮抑素水平在bma和abmc之间并无显著不同。针通过对细胞因子或细胞没有作用。另外，abmc细胞条件化培养基（cm）不促进血管生成。然而，浓缩abmccm一致地看起来已促进了matrigel上的huvec细胞聚集，潜在地涉及化学运动性的程序。鉴于在管形成测定的静态环境中缺乏趋化因子的明显浓度梯度，huvec细胞聚集的促进可能是由于上调的化学运动性，即随机/非定向迁移。几种因子已牵涉促进化学运动性，包括sdf-1、vegf和fgf-2（bfgf）：虽然sdf-1发挥化学动力学（和趋化性）活性（hattori等人，blood.2001jun1；97（11）：3354-60；整体引入本文作为参考），vegf可以下调化学运动性（barkefors等人，jbiolchem.2008may16；283（20）：13905-12；整体引入本文作为参考），但显示上调化学运动性刺激因子fgf-2（masaki等人，circres.2002may17；90（9）：966-7；seghezzi等人，jcellbiol.1998jun29；141（7）：1659-73；两者均整体引入本文作为参考）。总之，提供了bmc细胞条件化培养基含有促进化学运动性的因子，并且因此可能是管形成过程中的第一步的证据，然而，潜在的机制仍然难以捉摸。对于这组实验呈现的数据与含有诱导细胞迁移的血浆级分的abmc注射液一致，并且支持下述初步作用机制。首先，产物血浆促进abmc细胞和组织驻留细胞如祖细胞（包括epc）或分化的内皮细胞两者的迁移。由于缺血区域中的血管系统受损，可以设想模型，其中例如具有对这些区域的天然归巢潜力的循环epc首先被募集到abmc注射位点附近，在其中它们接受通过abmc血浆的生长因子支持，使得它们能够复制并进一步朝向缺血区域的核心迁移。该体外研究的局限性在于与符合clirstiii的入选标准的对象相比，使用来自健康供体的骨髓样品。实施例8：为了测试自体骨髓浓缩物（abmc）在严重肢体缺血（外周动脉疾病，pad）患者中改善伤口愈合、休息痛和无截肢率的能力而进行的同情使用人临床研究的结果。如先前所讨论的，由于生物活性的细胞和无细胞组分，自体细胞疗法是患者特异性的。体外生物活性测定只能够指示细胞产物的有限的机制效力。无细胞和细胞产物，即abmc产物与低氧组织的复杂机械作用可以在患有外周动脉疾病的患者中得到最好地研究。在这组实验中，呈现了关于六（6）名“无选择”的严重肢体缺血（cli）患者的治疗数据，所述患者在基线时呈现有rutherford类别4、5和6，具有50.83岁的平均年龄，并且全都未通过先前的标准血管形成术疗法。这些“弱或“无选择”的患者在手术室中在外科医生的监督下用使用cesca的surgwerks系统制备的自体骨髓细胞浓缩物（"abmc"）进行治疗。患者随访6个月。测试装置细胞输出的无菌性、细胞性和细胞活力。每个患者具有包括抗凝剂在内的收获的120ml骨髓，其在手术室现场进行立即加工。将制备的abmc无菌地转移回无菌区，并且肌内注射到cli患者的患肢的多个部位。所有患者都良好地耐受手术。不利/严重不利事件（ae/sae）。不利事件是对患者的任何不利的治疗作用，包括在abmc收获和植入过程中的任何不利的和任何非故意的体征（包括异常的实验室发现）、症状或疾病，无论是否视为与其相关。在6个治疗的患者中，一（1）个患者在bmc治疗后4个月时经历大的肢体截肢，其由主治医师视为与治疗和疾病进展的自然过程无关。在治疗时和在abmc施用后6个月期间，关于患者群体并未报告其他不利事件或严重不利事件。无大截肢存活率。六（6）个患者中的五（5）个患者在6个月时存活，没有大的肢体截肢，提示83.3%的无大肢体截肢存活率。由于患肢中的疾病进展和坏疽发展，一（1）个患者在bmc治疗后4个月时经历大的肢体截肢（膝盖以上）。休息痛。在术中日/基线和6个月时通过视觉模拟量表（vas）测试执行休息痛评价，所述测试使用评分在0至10之间的心理测验（自我报告）反应量表（0=无疼痛/伤害，2=轻微伤害/轻微疼痛，4=伤害更多一些/疼痛引起不适，6=伤害甚至更多/疼痛令人痛苦，8=伤害很大/疼痛可怕，10=疼痛严重/疼痛极其痛苦）。在基线时的平均休息痛评分为7.67，指示大多数患者在休息时具有严重疼痛。在治疗后的6个月随访中，所有可找到的患者都显示显著改善，其中平均休息痛评分为0.67，其中六个患者中的四个在休息时未经历疼痛。与基线相比，在6个月随访时的休息痛和生活质量（qol）中的总体改善是统计学上显著的。图47显示了治疗前和6个月后随访的数据。溃疡、坏疽及其他皮肤变化。在abmc植入期间的术中日/基线时和在6个月时，执行患肢中的对于溃疡的覆盖物、坏疽及其他皮肤变化的评估。主治医师通过视觉临床检查评估患者患肢中的溃疡和坏疽。所有的发现都是临床相关的。在基线时，6个患者中的5个患有足部溃疡或开放性伤口。在6个月的随访时，患者无一呈现溃疡或坏疽或开放性伤口。因此，在用abmc治疗后6个月，所有的溃疡或开放性伤口已愈合，并且患者显示在疾病状况和生活质量方面的显著改善（伤口愈合）。图48显示了作为代表性例子的患者的治疗前和6个月后的随访图像。无菌性分析。收集骨髓浓缩物（abmc）的小等分试样，并且在vxp加工之后以及在穿过流体路径（包括输液针）后的多个步骤时测试无菌性。结果显示，按照usp<71>14天培养方法，所有6个样品抽吸物（套针后）和浓缩物（加工后）都是阴性的（无生长），并且在快速革兰氏染色涂片中未见到细菌或真菌元素。总之，呈现了显示clirstabmc在模拟血管生成的模型中含有具有生物活性的各种组分的初步证据，并且该证据可以在促进rutherford5cli对象中的缺血性、受损的组织修复的关键研究中加以验证。本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请为了所有目的引入本文作为参考，至如同每个个别的出版物、专利或专利申请被明确地和个别地指出引入作为参考的相同程度。在前述实施方案的至少一些中，在一个实施方案中使用的一个或多个元素可以可互换地用于另一个实施方案中，除非这样的替换是技术上不可行的。本领域技术人员将了解，可以对上述方法和结构作出各种其他的省略、添加和修改，而不背离所要求保护的主题的范围。所有这样的修改和改变预期落入如由所附权利要求限定的主题的范围内。就本文基本上任何复数和/或单数术语的使用而言，本领域技术人员可以将复数解释为单数和/或将单数解释为复数，如对于上下文和/或申请适当的。为了清楚起见，各种单数/复数置换可以在本文中明确地阐述。如在本说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文另外明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数所指物。除非另有说明，否则本文对“或”的任何提及预期涵盖“和/或”。本领域技术人员将理解，一般而言，本文且尤其是所附权利要求（例如，所附权利要求的主体）中应用的术语一般预期为“开放”术语（例如，术语“包括（including）”应解释为“包括但不限于”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包括（includes）”应解释为“包括但不限于”等）。本领域技术人员将进一步理解，如果预期特定数目的所引入的权利要求陈述，则这样的意图将在权利要求中明确地陈述，并且在不存在这样的陈述的情况下，不存在这样的意图。例如，作为对理解的帮助，下述所附权利要求可以含有介绍性短语“至少一个/种”和“一个或多个/一种或多种”的使用以引入权利要求陈述。然而，这种短语的使用不应视为暗示由不定冠词“一个”或“一种”引入的权利要求叙述将含有这样引入的权利要求叙述的任何特定权利要求限制为仅含有一个这样的叙述的实施方案，甚至当相同的权利要求包括介绍性短语“一个或多个/一种或多种”或“至少一个/种”，以及不定冠词例如“一个”或“一种”（例如，“一个”或“一种”应解释为意指“至少一个/种”或“一个或多个/一种或多种”）时；对于用于引入权利要求陈述的定冠词的使用也是如此。另外，即使明确叙述了具体数目的引入的权利要求叙述，本领域技术人员将认识到，这样的叙述也应该被解释为意指至少所叙述的数目（例如，没有其他修饰语的“两个叙述”的简单叙述，意指至少两个叙述、或者两个或更多个叙述）。此外，在其中使用类似于“a、b和c等中的至少一个”的惯例的那些情况下，一般而言，这样的构造预期为本领域技术人员将理解该惯例的意义（例如，“具有a、b和c中的至少一个的系统”将包括但不限于具有单独的a、单独的b、单独的c、a和b一起、a和c一起、b和c一起、和/或a、b和c一起等的系统）。在其中使用类似于“a、b或c等中的至少一个”的惯例的那些情况下，一般而言，这样的构造预期为本领域技术人员将理解该惯例的意义（例如，“具有a、b或c中的至少一个的系统”将包括但不限于具有单独的a、单独的b、单独的c、a和b一起、a和c一起、b和c一起、和/或a、b和c一起等的系统）。本领域技术人员将进一步理解，无论是在说明书、权利要求还是附图中，实际上呈现两个或更多个替代术语的任何分离词语和/或短语都应该被理解为考虑包括术语之一、术语中任一或两个术语的可能性。例如，短语“a或b”将理解为包括“a”或“b”或“a和b”的可能性。另外，当公开内容的特征或方面按照马库什（markush）组进行描述时，本领域技术人员将认识到公开内容因此也按照马库什组的任何个别成员或成员亚组进行描述。如本领域技术人员将理解的，为了任何和所有目的，例如在提供书面描述方面，本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围以及其子范围的组合。任何列出的范围都可以容易地识别为充分描述并且使得相同的范围被分解成至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性实例，本文讨论的每个范围可以容易地分解成下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员也将理解的，所有语言例如“高达”、“至少”、“大于”、“小于”等等包括所述的数目，并且指随后可以分解成如上所述的子范围的范围。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个个别的成员。因此，例如，具有1-3个物品的组指具有1、2或3个物品的组。类似地，具有1-5个物品的组指具有1、2、3、4或5个物品的组，等等。虽然本文已公开了各个方面和实施方案，但其他方面和实施方案对于本领域技术人员将是显而易见的。本文公开的各个方面和实施方案是为了举例说明的目的，而不预期是限制性的，其中真正的范围和精神由下述权利要求指出。当前第1页12