本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种基于三味檀香散总挥发油的制备方法及其应用。
背景技术：
三味檀香散，又名赞旦松汤，原载于藏医学经典著作《四部医典》，由檀香、肉豆蔻、广枣三味药物组成。方中檀香清心热、凉肺、除烦，广枣清心、强心，肉豆蔻益心、补心，是藏医临床治疗“心热病”的经典常用藏医药方。
肺动脉高压(pulmonaryarterialhypertension，pah)是不同病因导致的以肺动脉压力和肺血管阻力升高为特点的一组疾病或临床综合征，发病率为12–50人/百万人，其发病机制包括血管收缩、血管重构和血栓形成。国际原发性肺动脉高压专题研讨会提出的分类系统将肺动脉高压分成5种类型:1)与呼吸系统疾病和/或低氧血症有关的肺动脉高压；2)肺静脉高压；3)慢性血栓和/或栓塞性疾病；4)肺小动脉高压；5)直接影响肺血管组织疾病所致的肺动脉高压。如果pah不加治疗，最终可导致右心衰竭、容量负荷增加而至死亡。目前，治疗肺动脉高压的药物主要是血管扩张剂，如α受体阻滞剂、钙拮抗剂血管紧张素转换酶抑制剂、磷酸二酯酶抑制剂、前列腺素类(pg)药物、硝基类血管扩张剂等。这些药物虽然具有改善患者呼吸困难、6分钟步行距离(6mwd)和肺血液动力学等方面的作用，但在治疗效果、制备和用药成本、治疗便利性方面均存在不同缺陷。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种制备成本更低、药材来源广泛的三味檀香散总挥发油的制备方法；
本发明的另一目的是提供该三味檀香散总挥发油在制备治疗和/或预防肺动脉高压药物中的应用；
本发明第三个目的是提供该三味檀香散总挥发油在制备治疗和/或预防肺动脉高压的保健品中的应用；
本发明第四个目的是提供该三味檀香散总挥发油在制备促进内皮细胞释放no的药物的应用；
本发明第五个目的是提供该三味檀香散总挥发油在制备开放电压门控钾通道、钙激活钾通道、内向整流钾离子通道的药物的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种三味檀香散总挥发油的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
1)将檀香、肉豆蔻、广枣药材粉碎，然后按比例混合均匀；
2)将药材混合物加水浸泡60-240分钟，再以水蒸汽蒸馏法提取获得挥发油；
3)经无水硫酸钠干燥得三味檀香散总挥发油。
进一步地，步骤1)中三种药材的比例为按重量比1：0.1-5：0-5。
进一步地，步骤1)中的檀香为紫檀香和/或白檀香。
进一步地，步骤2)中采用水蒸气蒸馏法的提取时间为4-12小时，所需水量为药材重量的5-10倍，提取1-3次。
一种基于前述三味檀香散总挥发油的药物组合物，该药物组合物是所述三味檀香散总挥发油和药物可接受的载体混合制备成的药物制剂。含有作为活性成份的三味檀香散总挥发油以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物，通常三味檀香散总挥发油占药物组合物总重量的0.01-99％。
给药途径可为经胃肠道或非经胃肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺、皮肤、阴道、腹膜、直肠等，优选口服给药；
给药途径还可为注射给药，注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、腹腔注射和穴位注射等；
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括水包油型、油包水型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等。固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其他材料。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的三味檀香散总挥发油或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明的药物组合物的给药剂量取决于多种因素，例如患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，预防或治疗疾病的性质和严重程度，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的，可以根据本发明药物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明的三味檀香散总挥发油每天的合适剂量范围：用量为0.1～1000mg/kg体重，上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这取决于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。每一种治疗所需总剂量可分成多次或按一次剂量给药。本发明的化合物或药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用并调整剂量。
本发明采用三味檀香散，即檀香、肉豆蔻、广枣作为原料制备三味檀香散总挥发油，根据三味檀香散总挥发油的特性用于制备治疗和/或预防肺动脉高压药物、治疗和/或预防肺动脉高压的保健品、促进内皮细胞释放no的药物，以及开放电压门控钾通道、钙激活钾通道、内向整流钾离子通道的药物等，其原料供应稳定，成本低，制备成本低，药效可靠。
附图说明
图1为三味檀香散总挥发油gc-ms总离子流图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
一、三味檀香散总挥发油的制备
实施例1
采用檀香、肉豆蔻、广枣为原生药材，分别粉碎后按1:1:1的重量比混合，取混合药材100g置于烧瓶中，加入水500g，浸泡4小时，采用水蒸汽蒸馏法提取8h，得挥发油，经无水硫酸钠除水得三味檀香散的总挥发油。
实施例2
采用檀香、肉豆蔻、广枣为原生药材，分别粉碎后按1:0.1:5的重量比混合，取混合药材100g置于烧瓶中，加入水800g，浸泡4小时，采用水蒸汽蒸馏法提取10h，得挥发油，经无水硫酸钠除水得三味檀香散的总挥发油。
实施例3
采用檀香、肉豆蔻为原生药材，分别粉碎后按1:0.1的重量比混合，取混合药材100g置于烧瓶中，加入水500g，浸泡1小时，采用水蒸汽蒸馏法提取4h，得挥发油，经无水硫酸钠除水得三味檀香散的总挥发油。
实施例4
采用檀香、肉豆蔻为原生药材，分别粉碎后按1:5的重量比混合，取混合药材100g置于烧瓶中，加入水600g，浸泡3小时，采用水蒸汽蒸馏法提取6h，得挥发油，经无水硫酸钠除水得三味檀香散的总挥发油。
实施例5
采用檀香、肉豆蔻为原生药材，分别粉碎后按1:2的重量比混合，取混合药材100g置于烧瓶中，加入水500g，浸泡2小时，采用水蒸汽蒸馏法提取5h，得挥发油，经无水硫酸钠除水得三味檀香散的总挥发油。
实施例6
采用檀香、肉豆蔻、广枣为原生药材，分别粉碎后按1:5:5的重量比混合，取混合药材100g置于烧瓶中，加入水1000g，浸泡4小时，采用水蒸汽蒸馏法提取12h，得挥发油，经无水硫酸钠除水得三味檀香散的总挥发油。
实施例7
采用檀香、肉豆蔻、广枣为原生药材，分别粉碎后按1:3:3的重量比混合，取混合药材100g置于烧瓶中，加入水700g，浸泡3小时，采用水蒸汽蒸馏法提取10h，得挥发油，经无水硫酸钠除水得三味檀香散的总挥发油。
二、三味檀香散总挥发油的lc-ms分析
lc-ms分析条件：gc-ms：赛默飞世尔isq(单四极杆气质)；色谱柱：db-1701；载气流速：1ml/min；程序升温：初始温度40℃，以3℃/min的速率升温至200℃，再以8℃/min的速率升温至280℃，保持5min。进样口温度：250℃。离子传输管温度：280℃。离子源温度：250℃。进样量：1μl。扫描方式：全扫描，质量范围35m/z～250m/z。溶剂延迟：0min。
质谱条件采用ei模式，电子能量为70ev；离子源浓度为200℃；间隔为0.5s。总离子流图如图1所示。
下表中为总挥发油中的组分：
三、药理活性实验
试验例，三味檀香散提取物扩张ne预收缩肺小动脉血管环的作用
实验方法：
大鼠肺小动脉血管环的分离及离体血管环灌流实验：用20％乌拉坦腹腔注射(0.5ml/0.1kg)麻醉大鼠，仰卧固定，打开胸腔，将心肺快速取出，置于氧饱和的、冰浴的kh液中。剪下肺叶(左肺上叶)，用大头针固定肺叶于冰浴的kh液中。快速钝性分离2～3级肺动脉，分离过程中避免牵拉肺动脉，保持动脉环的完整。随后将分离的肺小动脉剪成平均长度为2mm的血管环。将肺动脉环固定在上下两根三角形挂钩上，其中一个挂钩连接张力传感器，另外一个挂钩固定在通气杆上。实验期间，血管环被浸泡在含有10mlkh液的组织浴槽内，期间持续通入混合气体(95％o2+5％co2)，并保持37℃恒温。
给予血管环300-400mg基础张力，并在此环境下平衡约120min后进行实验。平衡期间每隔15min将组织浴槽内的kh液更换为新鲜的氧饱和的37℃kh液。血管的张力变化通过张力传感器输入信号采集系统，最后呈现并记录在计算机上。舒张率＝(药物引发的张力)/1μmol·l-1ne或60mmol·l-1kcl引发的张力)×100％。
肺动脉环调至基础张力后，平衡至最佳状态。在基础状态下，向浴槽内加入ne(1μmol·l-1)，待肺动脉收缩达到最大值并进入平台期后，向浴槽内累积加入三味檀香散总挥发油(2.5×10-3～7.5×10-3)，对照组累积加入相同体积的kh液，观察总挥发油对ne预收缩肺动脉张力的影响。
阻断剂对三味檀香散舒张ne预收缩大鼠离体肺动脉影响的实验方法如下:将肺动脉调整至基础张力，并平衡至最佳状态，向组织浴槽内加入ne(1μmol/l)，待血管环收缩至最大值，并且出现平台期之后，分别加入enos抑制剂l-name(100μmol·l-1)、imt(10μmol·l-1)、4-ap(1mmol·l-1)、bacl2(1mmol·l-1)、tea(1mmol·l-1)，对照组加入相同体积的kh液，待新的平台期出现后，再向各个组织浴槽内累积加入三味檀香散总挥发油至2.5×10-3μg/ml、5.0×10-3、7.5×10-3μg/ml，观察张力的变化。
实验结果：
lname、imt预处理对三味檀香散挥发油不同浓度下舒张ne预收缩肺小动脉舒张率％的影响结果：
l-name作为内皮一氧化氮合酶(enos)抑制剂，可有效的抑制no的生成。结果表明，三味檀香散总挥发油可以促进肺动脉内皮细胞no的释放，继而产生舒张平滑肌的作用；而三味檀香散总挥发油对肺动脉的pgi2-camp通路可能产生影响。
4-ap、bacl2和tea预处理对三味檀香散挥发油不同浓度下舒张ne预收缩肺小动脉舒张率％的影响结果：
4-ap(电压依赖性钾离子通道)、bacl2(内向整流钾离子通道抑制剂)和tea(大电导钙激活性钾离子通道抑制剂)能够不同程度地抑制三味檀香散总挥发油对大鼠离体肺动脉的舒张作用。说明kca和kir可能参与到了三味檀香散总挥发油舒张ne预收缩的大鼠离体肺动脉的作用当中。
以上已将本发明做一详细说明，以上所述，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能限定本发明实施范围，即凡依本申请范围所作均等变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖范围内。